肺结核患者t细胞亚群检测的临床意义

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分类号：R521单位代码：10719学号：12147010密级：论文题目：肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义论文作者：高琼瑶指导教师、职称：呼彩莲教授学科、专业名称：专业内科学提交论文日期：二○一五年六月 创新性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢中所罗列的内容以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果；也不包含为获得延安大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。本人签名：日期：关于论文使用授权的说明本人完全了解延安大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属延安大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为延安大学。学校有权保留送交论文的复印件，允许查阅和借阅论文；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。（保密的论文在解密后遵守此规定）本学位论文属于保密在年解密后适用本授权书。本人签名：日期：导师签名：日期： 缩略词表英文缩写英文全称中文全称APCantigenpresentingcell抗原呈递细胞CMIcell-mediatedimmunity细胞介导免疫CKCytokines细胞因子ITAMimmunoreceptortyrosine-basedactivationmotif免疫受体酪氨酸活化基序TCRTcellantigenreceptorT细胞抗原受体IFN-γinterferongamma干扰素γIL-2interleukin-2白介素2MHCmajorhistocompatibilitycomplex主要组织相容性复合体WHOWorldHealthOrganization世界卫生组织PBSphosphatebuffersolution磷酸缓冲液 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义专业内科学研究生高琼瑶指导老师呼彩莲教授摘要目的：肺结核病（pulmonarytuberculosis）是一种细菌性传染性疾病。其病程较长，病原体为结核杆菌（Mycobacteriumtuberculosiscomplex），在我国临床上发现绝大多数为结核分支杆菌（M.tuberculosis）。结核杆菌是一种胞内寄生菌，肺泡巨噬细胞是结核菌最常寄居的场所，在机体抵抗结核菌的免疫中，细胞介导免疫(CMI)发挥着重要的作用。既往研究结果表明细胞免疫在抗结核免疫中发挥着重要的作用。本研究通过检测肺结核患者外周血T淋巴细胞亚群，分析肺结核患者细胞免疫水平。方法：对我院2013.11-2014.2在呼吸内科二病区住院的肺结核患者50例进行T细胞亚群检测。对照组选择同期健康体检者30例。肺结核患者根据年龄分为青年组（＜30）、中年组（30-60）和老年组（＞60），根据病变范围分为病变广泛组和病变不广泛组。结果：与健康对照组相比，肺结核患者CD4+T细胞值、CD4/CD8比值降低，CD8+T细胞值升高（P＜0.05），CD3+T细胞值无显著差异。老年组肺结核患者CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+均低于青年组（P＜0.05），老年组与中年组相比，各项指标间无显著差异（P＞0.05），青年组与中年组相比各项指标间无显著差异。与病变不广泛组相比，病变广泛组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞值降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：肺结核患者的细胞免疫水平低下。与青年组、中年组相比，老年肺结核患者的细胞免疫水平低下，应得到进一步关注。与病变不广泛组相比，病变广泛组细胞免疫水平低下，值得临床关注。关键词：肺结核T细胞亚群 ClinicalsignificanceofT-lymphocytesubsetsdetectioninpulmonarytuberculosisAbstractObjective:PulmonarytuberculosisisonekindofchronicinfectiousdiseasewhichcausedbyMycobacteriumtuberculosiscomplex.ThemostpathogenswefoundinclinicalworkisM.tuberculosis.Mycobacteriumtuberculosisisonekindofintracellularbacteria.AlveolarmacrophagesisthecommenplacewhereM.tuberculosisparasiticon.cell-mediatedimmunityplaysanimportantroleinimmuneresponseagainstM.tuberculosis.Theresultsshowthatcellularimmunityplaysanimportantroleintheantituberculosisimmunity.ThisresearchanalysisthelevelofcellularimmunityinpulmonarytuberculosispatientsbythedetectionofT-lymphocytesubsets.Methods:FiftyPTBpatientswhoweredetectedinourhospitalofRespiratoryDepartmentwardtwoduringNovember2013toFebruary2014wereenrolledinthestudyasastudygroup,30healthypeoplewereenrolledasthecontrolgroup.Accordingtoage,thesepatientsweredividedintothreeguoups:⑴younggroup（＜30）;(2)adultgroup（30-60）;(3)oldgroup（＞60）.Accordingtothescopeoflesion,thesepatientsweredividedintoextensivelesiongroupandlesionlimitedgroup.Results:Comparedwiththecontrolguoup,TheCD4T-lymphocyteabsolutecounts,CD4/CD8ratioinstudygroupdropped,CD8T-lymphocyteabsolutecountsincreased(P＜0.05),buttherearenodifferencesinCD3T-lymphocyteabsolutecountsbetweenthecontrolgroupandstudygroup.Comparedwiththeyounggroup,TheabsolutecountsofCD3,CD4,CD8T-lymphocyteandCD4/CD8ratiodroppedinoldgroup(P＜0.05).Therearenosignificantlydifferencesinindexsbetweentheoldgroupandadoutgroup(P＞0.05).Therearenodifferencesinindexsbetweentheyounggroupandadultgroup.TheabsolutecountsofCD3,CD4,CD8T-lymphocytedroppedinextensivelesiongroup,ascomparedwithyounggroup(P＜0.05). Conclusions:ThelevelofcellularimmuneinPTBpatientsislow.Comparedwithyounggroupandadultgroup,thelevelofcellularimmuneineldlyPTBpatientsislow,weneedpaymoreattentiontothem.Comparedwiththelesionlimitedgroup,thelevelofcellularimmuneinextensivelesiongroupislow,it’sworthclinicalattention.Graduate:qiongyaogaoDirectedby:Prof.cailianhuKeywords:pulmonarytuberculosis,T-lymphocytesubsets, 目录引言...............................................................1研究对象和方法........................................................51.研究对象........................................................52.仪器和试剂......................................................53.检测方法：......................................................54.统计学分析......................................................6结果................................................................71、肺结核组与健康对照组之间的人口学特征...........................72、肺结核组与健康对照组间T淋巴细胞亚群数量的差异.................73、不同年龄段肺结核患者细胞免疫指标的变化.........................74、肺结核患者病变广泛与不广泛者T细胞亚群的比较...................8讨论...............................................................101.CD3+T细胞在抗结核细胞免疫功能中的作用及在患者中的水平..........102.CD4+T细胞在细胞免疫功能中的作用及在患者中的水平................113.CD8+T细胞在细胞免疫中的作用及在患者中的水平....................124.CD4+/CD8+在肺结核患者中的水平..................................13结论...............................................................14参考文献.............................................................15文献综述.............................................................17致谢...............................................................26攻读硕士期间研究成果.................................................27 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义引言结核病是人类最古老的疾病之一，人体各个器官均可能被结核杆菌感染，肺部是最常被感染的部位，因此肺结核的研究一直收到广泛关注。早在新石器时代（距今1.4万年-距今4000年左右），结核性病变在人类的骨化石上就出现了，但直到1882年，科学家RobertKoch才发现结核杆菌(Mycobacteriumtuberculosiscomplex）是结核病的致病细菌，基于其在细菌学及结核病研究方面的重大贡献，1905年，诺贝尔生理学或医学奖颁发给了这位伟大的德国科学家。此后，随着链霉素、异烟肼、利福平等化学药物的相继开发及应用，从1960年起，肺结核的治疗主要是化学药物的使用，以往的卫生营养疗法已被取代，随后联合化疗方法的相继问世，使新发肺结核的治愈率得到很大的提高，化学药物的疗效使人们得到振奋，是使人们错误的认为结核病的治疗问题已经得到解决，并且提出了要在2000年消灭结核菌的努力目标。但事实并不尽如人意，1980-2000年，在肺结核疫情较轻的一些西方国家，结核病不但没有被消灭，反而出现上升的趋势，可能与人们对结核病疫情的警惕性下降、人口流动、艾滋病的出现及其感染率的升高、耐药结核菌的出现等因素有关，使全球范围内肺结核的疫情出现严峻的形势，为此，世界卫生组织与1993年宣布“全球结核病紧急状态”，肺结核病依然是严重威胁着人类健康的疾病之一。结核病使人类健康受到严重威胁，其病死率很高。近20年来，结核病疫情仍在进一步恶化，在全世界范围内广泛的流行与传播。世界卫生组织（WHO）最近宣布，结核病是一个严重危及全球的公共卫生问题，同时影响着人类生存的各个方面，包[1,2]括社会、经济和政治方面的问题，受到各国政府及组织的广泛关注。我国是全球22个结核病高负担的国家之一，我国结核病病人数量占全球总负担量的14.3%，仅次于印度，位居第二位。我国的耐药情况也十分严重，是WHO认定的27个耐多药/广泛耐药结核病高负担国家之一。我国于2000年在全国范围内进行结核病的流行病学调查，这是我国针对结核病的第四次调查，结果显示，在每10万调查对象中，活-1- 引言动性肺结核病人有367例，痰培养结果为阳性患者有160例，痰涂片结果为阳性的患[3]者有122例。与1990年相比，下降27.6%，1979-2000年年递减率为3.2%。相隔10年后，我国于2010年进行第五次针对结核病的流行病学现场调查工作，此次调查涵盖31个省、自治区、直辖市。结果显示，与2000年肺结核患病率466/10万相比，2010年肺结核患病率降至459/10万，表明近10年来我国结核病的患病率下降速度极为缓慢[4]［5］经调查,大约有30%以上的人口被Mtb感染了。人体被结核杆菌感染后通常会有以下三种结果：大约5%的感染者自身能够将体内的结核杆菌清除彻底、5%-10%的感染者可进展为临床结核病患者、90%感染者成为潜伏感染者，长期携带病菌，不发病但无法彻底清除病菌，在机体免疫低下时可发病。结核菌发病人数仅仅占感［6］染人数的5%-10%，说明机体感染结核菌的数量及致病能力是影响结核病发病的一大因素，自身免疫状态也是另一大因素。结核杆菌进入机体后，首先是天然免疫发挥作用，机体对病原微生物感染的第一反应就是启动固有免疫，除了组织屏障、免疫分子在感染早期非特异性地清除病原体[7]，吞噬细胞、自然杀伤细胞、γδT细胞、NKT细胞等是固有免疫细胞在肺结核感染早期清除病原体方面发挥着重要作用的主力军。其抗结核机制如下：（1）吞噬细胞：吞噬细胞包括中性粒细胞和单核吞噬细胞系统（单核细胞、［8］巨噬细胞构成）。结核菌进入机体后，最先到达感染部位的是中性粒细胞，另一[9]名称为多形核中性粒细胞（PMN）。PMN可通过直接识别受体（TLR2、TLR4）[10-12]和调理作用吞噬结核菌，活化后能够产生ROS、抗菌肽，同时释放颗粒酶来杀伤结核菌，PMN还可通过分泌细胞因子（IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、巨噬细胞炎性蛋白1、单核细胞趋化蛋白1等）、释放细胞内容物（弹性蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶、抗菌肽、HNP等）、直接接触等机制参与固有免疫应答，发挥免疫调节作用。外周血中的单核细胞进入组织器官内称为巨噬细胞，进入肺内的单核细胞称之为肺泡巨噬细胞，具有强大的吞噬、杀菌能力。MTB进入人体后，巨噬细胞表面的天然受体（Toll样受体-TLR2、4、9等，NOD样受体）可识别MTB，将其吞噬，随后生成吞噬溶酶体，杀灭MTB。（2）NK细胞：机体感染结核菌之后，NK细胞能够识别结核菌、细菌产物并被-2- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义[13]激活，具有穿孔素/颗粒酶或Fas配体介导的细胞毒作用，杀伤结核菌。NK细胞内还具有颗粒溶素，可直接杀死结核菌。某些前炎性因子如IL-12、IFN-α可调节NK细胞活性，NK细胞活化后，其溶解结核菌感染靶细胞的功能增强病释放IFN-γ、TFN-α等细胞因子，参与免疫调节。（3）γδT细胞：γδT细胞是T细胞亚群中的一种特殊类型，根据δ链的不同可分为Vδ1和Vδ2两种亚型。Vδ1亚型主要分布于外周器官的粘膜和皮下，参与[14]呼吸道、肠道粘膜免疫，Vδ2主要分布于外周血中，其中Vγ2δ2亚型是主要的[15-16]循环细胞，在抗感染免疫，调节免疫应答及抗肿瘤免疫中发挥着重要作用。结核分枝杆菌表面表达2enyl焦磷酸（HMB-PP），能够被γδT细胞直接识别，γδT细胞活化后可分泌IFN-γ、TNF-α及IL-17等细胞因子发挥天然抗结核保护作用，γδT细胞也可通过穿孔素-颗粒酶途径直接裂解靶细胞，或由Fas-Fasl、IFN-γ途径诱导靶细胞凋亡。同时γδT细胞还可参与适应免疫应答，表现为自身呈递抗原，促进单核细胞分化为其他免疫细胞，和树突状细胞一起促进CD8+T细胞的诱导生成等方面。[17]（4）NKT细胞：NKT细胞可直接识别结核杆菌细胞壁的磷脂酰肌醇甘露糖，从而被活化，活化的NKT细胞具有NK细胞样作用，通过穿孔素、Fas配体等生物活[18]性分子溶解宿主细胞，发挥细胞毒作用，抵抗结核菌感染。同时还能分泌大量IFN-γ、IL-4、TNF-α等细胞因子，发挥免疫调节作用。天然免疫发挥作用后，获得性免疫发挥作用。结核杆菌为胞内寄生菌，结核病的免疫应答主要是细胞介导免疫反应（cell-mediatedimmunity,CMI）。逃脱天然免疫的结核杆菌主要寄生于肺泡巨噬细胞内，可在巨噬细胞内生长繁殖，此时，机体抗结核免疫主要是细胞免疫，T细胞亚群为细胞免疫的主力军，CD4+T细胞与CD8+T细胞在抗结核免疫中的作用如下：（1）CD4+T细胞抗结核免疫机制：结核菌被吞噬细胞、DCs等抗原呈递细胞（APC）识别并吞噬，形成吞噬小体，吞噬小体与APC内溶酶体结合，生成吞噬溶酶体，在吞噬溶酶体内，结核菌胞体成分被分解为多肽类物质，与内质网内合成的MCH-Ⅱ类分子结合成为抗原肽-MCHⅡ类分子抗原复合物，该抗原复合物表达于APC表面，只能被CD4+T细胞识别。CD4+T细胞根据分泌的细胞因子不同可分为Th1-3- 引言和Th2两类，Th1细胞能够产生IL-2、INF-γ等多种细胞因子发挥作用。Th1细胞所分泌的这些细胞因子,可促进吞噬小体活化，诱导自噬清除细胞内MTB，增强其杀[19]灭其细胞内的病原体的能力。Th2细胞分泌IL-4、IL-10等细胞因子，主要激活B[20]细胞产生抗体,并能够能够抑制巨噬细胞功能，拮抗Th1细胞反应。（2）CD8+T细胞抗结核免疫机制如下：部分被巨噬细胞吞噬的结核菌，通过形成抗溶酶体膜，使吞噬溶酶体不能成熟，减弱吞噬细胞的杀灭作用，还可通过生成转化生长因子β（TGF-β）抑制被感染的吞噬细胞凋亡，逃避宿主免疫识别。从而寄生于吞噬细胞体内，此时吞噬细胞丧失了杀灭结核菌的免疫活性，成为了结核菌的堡垒，帮助其逃避其他效应细胞的攻击。被结核菌感染失去免疫活性的吞噬细胞与体内结核菌相互作用，生成内源性抗原肽，与内质网生成的MCH-Ⅰ类分子结合后，抗原肽-MCHⅠ类分子复合物表达于靶细胞表面，只能被CD8+细胞识别。CD8+T细胞识别靶细胞抗原后,可分化增殖为抑制性T细胞（Ts）和杀伤性T细胞（Tc）。Tc细胞发挥细胞毒效应,生成穿孔素、颗粒酶及颗粒溶素等杀菌成分，溶解失去免疫活性的靶细胞，细胞内结核菌失去了保护，附近活化的吞噬细胞、杀伤T细胞可将其杀灭。结核病感染率高，而发病率仅有感染人群的5%-10%，说明机体免疫状态极其其重要。因此本研究将我院一年来呼吸内科二病区的50例结核病患者进行T细胞亚群检测，了解肺结核患者细胞免疫情况，希望能给临床工作带来一些帮助。-4- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义研究对象和方法1.研究对象选择2013年11月-2014年2月就诊于本院呼吸科2病区住院诊治的肺结核患者50名作为研究对象。根据年龄可将患者分为青年组（＜30）、中年组（30-60）、老年组（＞60），根据患者肺部病变程度分为病变广泛组(病变分布≥3个肺叶)和病变不广泛组（病变分布＜3个肺叶)。选取同年龄段的30名健康体检者作为健康对照组。纳入研究的对象，均经其同意后选录。（1）入选标准：肺结核的诊断以中华医学会2005年版《临床诊疗指南（结核病分册）》为标准。健康对照组30例均为本院体检中心体检者，X线胸片检查未见异常，无咳嗽、咳痰、咯血等呼吸道症状。（2）排除标准：所有病例均无合并糖尿病、艾滋病、甲状腺功能亢进及其他自身免疫性疾病，排除肝、肾疾病、恶性肿瘤及其他免疫性或感染性疾病，未使用免疫调节剂。2.仪器和试剂CD细胞检测玻片上海汇中细胞生物科技有限公司全自动可视化细胞检测仪上海汇中细胞生物科技有限公司3.检测方法：（1）样本收集：与患者空腹时采集静脉血2ml于血常规管中抗凝，2小时内送于检验科进行T细胞亚群检测。（2）测定方法：T细胞亚群检测用细胞免疫芯片检测。细胞免疫芯片是一种新型的细胞芯片技术,蛋白质芯片技术是细胞免疫芯片的技术基础，将细胞投入到事先包被有抗体的固相（载玻片）上，特异性固定细胞后再分析。基于抗体抗原之间的特异性反应原理，能够进行CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞的绝对值的检测。具体方法:（1）取样稀释：20ul全血反吸法取样，将20uL全血加入到380uL磷酸盐缓冲液（PBS）中混匀稀释,要求即刻充分混匀；（2）加样：从稀释好的全血标本中分别取出5uL加入到CD3、CD4和CD8抗体包被区,用反吸法加样，要求血样不-5- 研究对象和方法得溢出；（3）孵育：室温孵育40min，将玻片放入湿盒内水平放置，禁止挪动；（4）洗染：用磷酸盐缓冲液对玻片进行淋洗,接着用过氧化酶染色液通过细胞染色去除单核细胞等非特异性细胞，随后75%乙醇清洗，然后再用复染液对CD细胞进行染色，最后纯水清洗；（5）计数：录入样本编号，放置好玻片，操作自动计数仪对其进行计数即为每uL外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞的数值。本研究的所有操作均在我院检验科进行，由经验丰富的主管检验师白莉老师操作完成。4.统计学分析全部数据用SPSS17.0统计软件处理，计量资料以xs表示，两组间比较用t检验，多样本比较采用方差分析，多个样本间的两两比较，采用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。-6- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义结果1、肺结核组与健康对照组之间的人口学特征肺结核组男性患者26例，女性患者24例；患者年龄18岁-76岁，平均（43±19）岁。健康对照组男性17例，女性13例；年龄25岁-74岁，平均（45±20）岁。肺结核组和健康对照组在性别和年龄上差异无统计学意义。2、肺结核组与健康对照组间T淋巴细胞亚群数量的差异采用独立样本t检验，结果为，肺结核患者与正常人相比，CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+在两组之间有显著性意义（P值分别为0.017、0.029、0.005，P值均小于0.05），其余项目差异无统计学意义。见表1。表1肺结核组与正常对照组细胞免疫指标的比较Tab1comparisonofimmuneindexbetweenstudygroupandcontrolgroup组别CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+结核组1124±230526±194461±1321.2±0.6健康对照组1207±329753±247326±542.0±1.2P值＞0.05＜0.05＜0.05＜0.05从上表可看出，肺结核组患者细胞免疫指标中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+与正常对照组比较，结果具有显著性差异，其他各指标无显著差异，其中CD4+T细胞低于正常对照组，而CD8+T细胞高于正常对照组，且CD4+/CD8+低于正常对照组。结果显示肺结核患者的细胞免疫功能低下。3、不同年龄段肺结核患者细胞免疫指标的变化采用方差分析，结果为，青年组与中年组相比，各组免疫指标间差异无统计学意义，青年组与老年组相比CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+在两组之间有显著性意义(P＜0.05)。中年组与老年组相比CD3+T细胞、CD4+T细胞在两组之间有差异，差异无统计学意义。见表2-7- 结果表2不同年龄段肺结核患者细胞免疫指标的比较Tab2comparisionofimmuneindexbetweendifferentagegroups组别例数CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+青年组17942±164786±153328±1032.0±1.3中年组18724±213532±216315±1541.8±0.8△△△△△△△△老年组15423±128371±153215±1041.3±0.5△△注：与青年组比较，P＜0.05从上表可看出，老年肺结核组患者细胞免疫指标中的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+数值分别为942±164、786±153、328±103、2.0±1.3；中年肺结核患者细胞免疫指标中的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+数值分别为724±213、532±216、315±154、1.8±0.8；青年组肺结核患者各指标分别为423±128、371±153、215±104、1.3±0.5。青年组与中年组相比各指标无显著差异。老年组CD3+T细胞、CD4+T细胞数值低于中年组，差异无统计学意义、CD8+T细胞数值、CD4+/CD8+与中年组比较无差异。老年组与青年组比较，CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值均低于青年组，差异有统计学意义（P＜0.05）。说明与青年组、中年组相比，老年肺结核患者细胞免疫功能低下，值得临床关注。4、肺结核患者病变广泛与不广泛者T细胞亚群的比较采用独立样本t检验，结果为，病变广泛者与病变局限者相比，CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞在两组之间有显著性意义（P值分别为0.024、0.010、0.013，P值均小于0.05），其余项目差异无统计学意义。见表3从下表可看出，病变广泛组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+数值分别为579±142、358±67、274±142、1.9±0.8，病变不广泛组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+数值分别为842±241、661±152、371±193、2.1±1.2。病变广泛组免疫指标中的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞与病变不广泛组比较，结果具有显著性差异，均低于病变不广泛组，而CD4+/CD8+两组未见明显差异。表明与病变不广泛组相比，病变广泛组肺结核患者的细胞免疫功能低下。-8- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义表3不同病变程度的患者细胞免疫指标的比较Tab3comparisionofimmuneindexbetweenextensivelesiongroupandlesionlimitedgroups组别例数CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+病变广泛20579±142358±67274±1421.9±0.8病变不广泛30842±241661±152371±1932.1±1.2P值＜0.05＜0.05＜0.05＞0.05-9- 讨论讨论肺结核是一种细菌性传染性疾病，由结核杆菌感染引起。结核杆菌可通过呼吸道、消化道、皮肤接触等途径感染他人，呼吸道是结核病的主要传播途径，痰涂片阳性的开放性肺结核患者是主要的传染源，病人可通过大笑、咳嗽、喷嚏等方式排出结核分枝杆菌，进入空气中的结核菌可与细小粉尘结合，成为易被人体吸入的含结核菌的气溶胶颗粒，弥散于空气中，健康人吸入后可被感染。机体各个器官均可被结核杆菌感染，肺部是结核杆菌最常见感染的器官，因此，结核病中肺结核是最重要的一部分。人体被结核杆菌感染后，由于个体与个体之间自身免疫力及外界生活环境的不同，结核杆菌和宿主之间进行了一系列复杂的相互斗争，可有以下三种结果：机体耐受、感染或发病。当结核菌进入机体后，最初由吞噬细胞、树突状细胞、NK细胞等抗原呈递细胞（APC）对其进行识别及吞噬，同时完成抗原的加工并呈递抗原-MHC复合物于细胞表面，促进原始T细胞的活化并分化成为不同类型的功能型和调节型T细胞，发细胞免疫功能。结核菌是胞内寄生菌，针对结核菌的T细胞反应主要包括以下两大类：保护性免疫（即细胞介导的免疫反应）和免疫病理性损伤，两者均是结核病最重要的免疫反应，其中CD4+T细胞Th1途径的作用十分关键，同时CD8+T细胞的细胞毒途径也发挥着十分重要的作用。1.CD3+T细胞在抗结核细胞免疫功能中的作用及在患者中的水平CD3分子是T淋巴细胞表面的一种细胞因子，由5种肽链构成，具体分别为γ、δ、ε、ζ和η，这些肽链均为跨膜蛋白，在横跨细胞膜的部分含有带负电荷的氨基酸残基，与T细胞抗原受体（Tcellantignreceptor,TCR）跨膜区带有正电荷的氨基酸残基以非共价键的方式结合，形成TCR-CD3复合物。CD3分子存在于所有成熟的T淋巴细胞表面，功能是转导TCR识别抗原所产生的活化信号。CD3分子的胞浆区有免疫受体酪氨酸活化基序（immunoreceptortyrosine-basedactivationmotifLckITAM），CD4和CD8分子的胞浆区结合有酪氨酸蛋白激酶（p56），酪氨酸激酶Lck（p56）激活后，可催化CD3分子中ITAM基序的酪氨酸残基磷酸化，从而参与TCR活化信号的转导过程，激活T淋巴细胞，诱导机体产生细胞免疫，起信号转导-10- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义作用。本次研究结果显示，肺结核组的CD3+T细胞低于健康对照组，但无显著性差异，提示在结核菌感染初期，CD3+T细胞的水平是降低的，有研究结果表明结核病人经一定时间的抗结核治疗后，CD3+T细胞水平可恢复，并可恢复至正常水平。老年肺结核患者CD3+T细胞水平低于青年和中年肺结核患者，老年组与青年组相比，具有显著性差异，老年组与中年组差异无统计学意义。青年组与中年组CD3+T细胞水平无显著差异，说明与青年、中年肺结核患者相比，老年肺结核患者细胞免疫水平低下。病变广泛组CD3+T细胞水平明显低于病变不广泛组，具有显著性差异。2.CD4+T细胞在细胞免疫功能中的作用及在患者中的水平CD4分子为细胞膜表面的一种跨膜蛋白，有一条肽链组成，大部分出现于T淋巴细胞、胸腺细胞表面，还有一部分出现在一些单核吞噬细胞、B细胞的表面，只能与MCHⅡ类分子结合。CD4+T细胞属于辅助性T淋巴细胞亚群，能够分泌多种细胞因子，放大巨噬细胞等免疫反应。根据TCR的表达类型，CD4+T细胞主要表达αβT细胞受体（TCR），约占CD4+T细胞的60%-65%，αβCD4+T细胞占CD4+细胞亚群的大多数，可分泌多种细胞因子，如白细胞介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）等，促进巨噬细胞的激活，从而参与结核病免疫应答。此外，还有很少一部分CD4+T细胞发挥细胞毒功能，可直接清除结核菌。根据分泌的细胞因子的差异，CD4+T细胞可分为两种不同功能的亚群，分别称之为Th1亚群和Th2亚群。Th1细胞可分泌的细胞因子主要有白细胞介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）等，使巨噬细胞激活，增强其杀灭结核杆菌的能力，同时促进CD8+T的激活，从而促进细胞免疫，能够抗病毒及抵抗结核杆菌等胞内寄生菌的感染，还能够辅助IgG2类抗体的生成。Th2细胞分泌的细胞因子主要包括白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）、白细胞介素13（IL-13）等，能够促进B细胞的激活，促进肥大细胞和嗜酸细胞的活化与增殖，主要参与体液免疫应答，促进IgG1、IgE和IgA等抗体的生成，在抵抗胞外菌和寄生虫方面发挥着重要的作用。不同类型的细胞因子可引起不同类型的免疫应答反应，其中由白细胞介素-2、干扰素-γ等Th1细胞分泌的细胞因子所引起的免疫应答称之为Th1优势应答，由白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）、白细胞介素13（IL-13）等Th2细胞所分泌的细胞因子所引起的免疫应答-11- 讨论称为Th2优势应答。Th1优势应答主要是有效消除感染源，包括隐藏在宿主细胞内的病原体，但程度过于强烈可引起组织损伤，Th2优势应答在抗寄生虫感染中有保护作用，而在病情迁延中也会导致组织损伤。本次研究结果显示：肺结核患者CD4+T细胞水平低于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；老年组肺结核患者CD4+T细胞水平低于青年组，差异有统计学意义（P＜0.05）；老年组肺结核患者与中年组肺结核患者相比，CD4+T细胞水平较低，但无显著差异（P＞0.05）；青年组肺结核患者与中年组肺结核患者CD4+T细胞水平无显著差异；病变广泛组CD4+T细胞水平低于病变不广泛组，具有显著差异（P＜0.05）。说明肺结核患者存在细胞免疫低下，与青年组、中年组肺结核患者相比，老年组肺结核患者免疫状态差，病变广泛的结核病患者免疫功能低下。3.CD8+T细胞在细胞免疫中的作用及在患者中的水平对于抗结核免疫，人们最先研究集中在CD4+T细胞。发现了CD4+Th1型细胞在抗结核免疫中的重要作用，近年来CD8+T细胞在抗结核免疫方面的作用逐渐被人们重视。通过研究动物和人类模型的实验资料，Lewinsohn等学者提出，CD8+T细胞参与了机体抗结核保护性免疫应答，在控制结核杆菌感染的过程中发挥着重要的作用。进入机体的结核杆菌，部分可被固有免疫细胞识别并吞噬杀灭，还有部分被巨噬细胞吞噬的结核菌，可分泌超氧化物歧化酶来对抗活性氧中介物的杀伤作用，还可使三磷酸磷脂酰基醇水解失去生物学活性、抑制胞内神经鞘氨醇活性以及形成抗溶酶体膜，使吞噬溶酶体不能成熟，减弱吞噬细胞的杀灭结核杆菌的作用，使结核杆菌在吞噬细胞体内生存并繁殖，此时吞噬细胞已经不能杀灭胞内结核杆菌，并且成为了结核菌的堡垒，帮助其逃避其他效应细胞的攻击。被结核菌感染的吞噬细胞与体内结核菌相互作用，生成内源性抗原肽，与内质网生成的MCH-Ⅰ类分子结合后，抗原肽-MCHⅠ类分子复合物表达于靶细胞表面，只能被CD8+细胞识别。CD8+T细胞识别靶细胞抗原后,可分化增殖为抑制性T细胞（Ts）和杀伤性T细胞（Tc）。Tc细胞发挥细胞毒效应,生成穿孔素、颗粒酶及颗粒溶素等杀菌成分，溶解失去免疫活性的靶细胞，细胞内结核菌失去了保护，附近活化的吞噬细胞、杀伤T细胞可将其杀灭。CD8+T细胞与CD4+T细胞共同参与机体抗结核保护性免疫应答，均发挥着重要的作用，共同维持机体的免疫稳定。在慢性感染过程中，CD8+T-12- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义细胞主要识别细胞内感染，抑制胞内结核分枝杆菌生长。本研究结果显示，肺结核患者CD8+T细胞水平高于健康对照组，差异有统计学意义，与王志刚等研究结果相一致，提示结核菌感染可刺激机体细胞免疫的激活。病变广泛组CD8+T细胞水平低于病变不广泛组，差异有统计学意义，考虑可能为病灶附近聚集大量CD8+T[21]细胞所致，与瞿慧等研究结果相一致。老年肺结核患者CD8+T细胞水平低于青年组，差异有统计学意义，考虑可能与老年人自身免疫器官的衰老产生免疫效应细胞的能力减弱有关。4.CD4+/CD8+在肺结核患者中的水平CD4+/CD8+受CD4+T细胞数量及CD8+T细胞数量的影响，是一项反应机体免疫调节情况的指标，其比值的升高或降低，均能够反应机体免疫平衡的紊乱。本研究结果示：肺结核患者CD4+T细胞的降低以及CD8+T细胞的升高，与健康对照组相比，CD4+/CD8+的比值降低，提示肺结核患者细胞免疫水平紊乱，抗结核能力低下。既往有研究结果表明，在经过正规抗结核治疗后，肺结核患者的者CD4+T细胞能够升高甚至达到正常水平，CD8+T细胞可降低，CD4+/CD8+的比值能够升高，提示患者经治疗后细胞免疫水平得到提高。-13- 结论结论1、肺结核患者存在细胞免疫水平低下，主要表现在CD4+T细胞、CD4+/CD8+降低，CD8+T细胞升高。2、与青年组、中年组相比，老年肺结核患者细胞免疫水平低下，值得临床关注。3、与病变不广泛组相比，病变广泛的肺结核患者细胞免疫水平低下，值得临床关注。-14- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义参考文献[1]WHO.Globaltuberculosisreport2013.WHO/HTM/TB/2013.11.Geneva,Switzerland:WHO,2013[2]WHO.Globaltuberculosisreport2012.WHO/HTM/TB/2012.6.Geneva,Switzerland:WHO,2012[3]全国结核流行病学抽样调查技术指导组.第四次全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中华结核和呼吸杂志，2002,25（1）：3-7[4]全国第五次结核流行病学抽样调查技术指导组.2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2012,34（8）：485-508[5]赵辉，张荣波.T细胞在结核杆菌感染中的研究进展[J].医学综述.2010,16(18):55～58[6]Globaltuberculosisreport2013[M].WHO,2013.[7]刘昕訸，张彦洁，罗茂财等.固有免疫细胞及其模式识别受体与表观遗传学调控研究进展[J].生命科学.2014，26（8）:846-851[8]李凡，刘晶星.医学微生物学［M］.第七版.北京：人民卫生出版社，2009:77-84[9]HildaJN,SelvarajA,DasSD.MycobacteriumtuberculosisH37Rvismoreeffectivecomparedtovaccinestrainsinmodulatingneutrophilfunction:aninvitrostudy[J].FEMSImmunolMedMicrobiol,2012,66(3):372-381[10]LoweDM,RedfordPS,WilkinsonRJ,etal.neutrophilsintuberculosis:friendorfoe?[J]TrendsImmunol,2012,33(1):14-25.[11]ThomasCJ,SchroderK.Patternrecognitionreceptorfunctionineutrophils[J].TrendsImmunol,2013,34(7):317-328.[12]AnderssonM,LutayN,HallgrenN,etal.MycobacteriumbovisbacilliCalmette-GueriNregulatesleukocyterecruitmentbymodulatingalveolarinflammatoryresponse[J].InnateImmun,2012,18(3):531-540.[13]王慧宇，程齐俭，季萍等.活动期结核病患者外周血NK细胞免疫反应特征分析[J].现代免疫学.2014,34（4）:265-270.[14]KisielowJ,KopfM.TheoriginandfateofγδTcellsubsets[J].CurrOpinImmunoL,2013,25(2)-15- 参考文献:181-188.[15]尹建永,瞿洪平,刘嘉琳.γδT细胞在细菌感染中的免疫作用研究进展[J].中国免疫学杂志.2013,29（12）:1330-1338.[16]KubotaK.InnateIFN-γproductionbysubsetsofnaturalkillercells,naturalkillerTcellsandγδTcellsinresponsetodyingbacterial-in-fectedmacrophages[J].ScandJImmunol,2010;71:199-209[18]林娜，刘勇.自然杀伤T细胞抗感染作用的研究进展[J].微生物与感染.2014,9(1):61-64.[17]MattrenJ,DebordK,IsmailN,GoffR,ContuC,ZhouD,SaintMezardP，ＷangV,GaoY,YinN,HoebaK,SchneewindO,WalderD.ExogenousandendogenousglycolipidantigenactivateNKTcellsduringmicrobialinfections[J].Nature,2005,434(7032):525-529.[19]高智，蒋之，万轲.初肺结核患者强化治疗前后检测IL-2、SIL-2R及IL-4的临床意义[J].安徽医药.2012,16(2):215-216.[20]董兴高.Th1/Th2、Th17/Treg细胞的平衡与临床[J].湖北民族学院学报.2012,29（1）：67-69.[21]瞿慧，刘一典，唐神结etal.肺结核患者外周血NKT细胞、NK细胞、T淋巴细胞亚群的变及意义[J].同济大学学报（医学版），2010；31（5）：42-46-16- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义肺结核与机体免疫应答摘要：肺结核是由Mtb引起的慢性感染性疾病，近年来研究结果表明，肺结核与人体免疫水平密切相关，现就两者关系做一综述。关键词：肺结核机体免疫应答PulmonarytuberculosisandImmuneresponseAbstract：Tuberculosisisachronicinfectiousdiseasecausedbymycobacteriumtuberculosis,Inrecentyears,theresearchresultsshowthattuberculosisiscloselyrelatedtothehumanbodyimmunitylevels,now,wegiveareviewoftherelationship。Keywords:Pulmonarytuberculosis,Immuneresponse进入21世纪以来，全球结核病的患病率逐渐升高。经调查,大约有30%以上的［1］人口被Mtb感染了。人体被结核杆菌感染后通常会有以下三种结果：大约5%的感染者自身能够将体内的结核杆菌清除彻底、5%-10%的感染者可进展为临床结核病患者、90%感染者成为潜伏感染者，长期携带病菌，不发病但无法彻底清除病菌。结［2］核菌发病人数仅仅占感染人数的5%-10%，说明机体感染细菌的数量及毒力是影响结核发病的一大因素，自身免疫状态是另一大因素。结核菌进入人体后，首先是固[3]有免疫发挥作用，然后启动适应性免疫。现就机体免疫状态与结核病的关系综述如下：1.固有免疫机体对病原微生物入侵的第一反应就是启动固有免疫，由组织屏障、固有免疫[4]细胞和免疫分子构成，他们能在感染早期非特异性地清除病原体。吞噬细胞、自然杀伤细胞、γδT细胞、NKT细胞等是固有免疫细胞的主力军。对于组织屏障及固有免疫分子现不做细述，仅对固有免疫细胞做简单介绍：1.1吞噬细胞：［5］吞噬细胞包括中性粒细胞和单核吞噬细胞系统（单核细胞、巨噬细胞构成）。-17- 文献综述结核菌进入机体后，最先到达感染部位的是中性粒细胞，另一名称为多形核中性粒[6][7-9]细胞（PMN）。PMN可通过直接识别受体（TLR2、TLR4）和调理作用吞噬结核菌，活化后能够产生ROS、抗菌肽，同时释放颗粒酶来杀伤结核菌，但PMN对结核菌的杀伤作用还存在着不同的观点，有研究结果表明ROS可杀伤被巨噬细胞吞噬的Mtb,另一些研究结果表明，ROS不仅不能杀伤MTB，还会使PMN死亡。可能与研究过程中PMN[10][11]来源，遗传背景及所处环境的差异有关。Yang等学者的研究证实，在结核菌感染早期，PMN能够迅速吞噬并杀死结核菌，从而促进了结核菌的清除。但也有研究[12]提示PMN可能参与了免疫组织损伤和结核菌慢性感染的活化过程。PMN还可通过分泌细胞因子（IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、巨噬细胞炎性蛋白1、单核细胞趋化蛋白1等）、释放细胞内容物（弹性蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶、抗菌肽、HNP等）、直接接触等机制参与固有免疫应答，发挥免疫调节作用。外周血中的单核细胞进入组织器官内称为巨噬细胞，进入肺内的单核细胞称之为肺泡巨噬细胞，具有强大的吞噬、杀菌能力。MTB进入人体后，巨噬细胞表面的天然受体（Toll样受体-TLR2、4、9等，NOD样受体）可识别MTB，将其吞噬，随后生成吞噬溶酶体，杀灭MTB。进入肺泡的结核杆菌，若在细菌增殖和宿主细胞反应之前就被肺泡巨噬细胞［14］及中性粒细胞吞噬杀灭，就不会留下任何感染痕迹。因此，吞噬细胞在机体抗结核菌感染方面发挥着致关重要的作用。1.2NK细胞[15]NK细胞具有抗肿瘤和抗病毒功能，也参与抗结核免疫反应。机体感染结核菌之后，NK细胞能够识别结核菌、细菌产物以及被结核菌感染的巨噬细胞或DC细胞并[16]被激活，发挥细胞毒作用，杀伤结核菌。NK细胞可生成细胞因子如IFN-γ，IL-22，发挥免疫调节作用，参与适应性免疫应答。有研究成果证实，IFN-γ可能是NK细胞分泌的主要效应因子，能通过多种机制发挥抗结核作用，如提高CD8+T细胞对结核菌感染的靶细胞的杀伤活性等。IL-22能够促进结核杆菌感染巨噬细胞的吞噬溶酶[17]体融合，从而抑制结核菌的细胞内生长。1.2γδT细胞γδT细胞是T细胞亚群中的一种特殊类型，根据δ链的不同可分为Vδ1和Vδ2两种亚型。Vδ1亚型主要分布于外周器官的粘膜和皮下，参与呼吸道、肠道粘膜免-18- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义[18]疫，Vδ2主要分布于外周血中，其中Vγ2δ2亚型是主要的循环细胞，在抗感染[19-20]免疫，调节免疫应答及抗肿瘤免疫中发挥着重要作用。结核杆菌表面表达2enyl焦磷酸（HMB-PP），能够被γδT细胞直接识别，γδT细胞活化后可分泌IFN-γ、[21]TNF-α及IL-17等细胞因子发挥天然抗结核保护作用，γδT细胞也可通过穿孔素[22]-颗粒酶途径直接裂解靶细胞，或由Fas-Fasl、IFN-γ途径诱导靶细胞凋亡。同时γδT细胞还可参与适应免疫应答，表现为自身呈递抗原，促进单核细胞分化为其他免疫细胞，和树突状细胞一起促进CD8+T细胞的诱导生成等方面。1.4NKT细胞NKT细胞是一种特殊类型的细胞，同时具有NK细胞及T细胞功能,NKT细胞识别抗[23]原具有CD1d限制性。根据是否具有CD1d依赖性，可将NKT细胞分为Ⅰ型、Ⅱ型CD1d依赖性NKT细胞和Ⅲ型CD1d非依赖性NKT细胞,Ⅰ型、Ⅱ型NKT细胞在抗结核免疫中起[24]重要作用。NKT细胞可直接识别结核杆菌细胞壁的磷脂酰肌醇甘露糖，从而被活化，活化的NKT细胞具有NK细胞样作用，通过穿孔素、Fas配体等生物活性分子溶解[24]宿主细胞，发挥细胞毒作用，抵抗结核菌感染。同时还能分泌大量IFN-γ、IL-4、TNF-α等细胞因子，发挥免疫调节作用。1.5树突状细胞[26]树突状细胞是以类专职抗原提呈细胞，普遍存在于人体组织器官中。组织器官中的树突状细胞处于非成熟状态，具有较强的摄取抗原和加工处理抗原的能力，是病原体进入机体后最先遇到的细胞之一，受到抗原刺激后可分化成熟，促使初始[26]T细胞分化增殖，从而启动适应性免疫应答。2.适应性免疫2.1体液免疫体液免疫是一类特异性免疫应答，指机体受到抗原刺激后，B细胞分化增殖为[27]浆细胞，通过合成各类抗体并发挥生物学效应。既往认为体液免疫在抗结核免疫中发挥的作用是微不足道的，但19世纪末以来，抗体对结核菌的作用已引起越来越[27]3多的关注。目前已经发现多种结核抗原，如Ag85复合物、相对分子质量38×10蛋白、至阿拉伯甘露糖蛋白、热休克蛋白等，可刺激机体产生相应抗体。体外有关[28]体液免疫机制的研究证实，特异性的抗体能抑制病原微生物的复制，中和毒素，-19- 文献综述增强抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用，体内抗体能够增强巨噬细胞、中性粒细胞的杀菌作用，从而发挥抗结核作用。2.2细胞免疫细胞免疫是由T细胞介导的。根据表达CD分子的不同，T细胞可分为CD4+T细胞、CD8+T细胞。又根据分化类型、分泌细胞因子和免疫效应功能不同，CD4+T细胞可分[29]为Th1、Th2、Th17、Treg亚群等。下面就各个亚群的功能简述如下：2.2.1Th1细胞和Th2细胞结核菌进入机体后，可被吞噬细胞、DCs等抗原呈递细胞（APC）识别并吞噬，形成吞噬小体，吞噬小体与APC内溶酶体结合，生成吞噬溶酶体，在吞噬溶酶体内，结核菌胞体成分被分解为多肽类物质，与内质网内合成的MCH-Ⅱ类分子结合成为抗原肽-MCHⅡ类分子抗原复合物，该抗原复合物表达于APC表面，只能被CD4+T细胞识别。CD4+T细胞根据分泌的细胞因子不同可分为Th1和Th2两类，Th1细胞能够产生IL-2、INF-γ等多种细胞因子发挥作用。Th1细胞所分泌的这些细胞因子,可促进吞[30]噬小体活化，诱导自噬清除细胞内MTB，增强其杀灭其细胞内的病原体的能力。谭耀驹等学者发现，病情严重的结核患者Th2细胞水平高于中、轻度患者，痰涂片阳性的病例Th2细胞水平升高，做出以下推论：Th2细胞能够降低患者的细胞免疫水［31］平，使病情向严重的方向发展。Th2细胞分泌IL-4、IL-10等细胞因子，主要激[30、32]活B细胞产生抗体,并能够能够抑制巨噬细胞功能，拮抗Th1细胞反应。2.2.2Th17细胞Th17细胞是一类新发现的特殊的CD4+T细胞。Th17细胞通过分泌多种细胞因[33]子（IL-17、IL-17F以及IL-21、IL-22、IL-6、TNF-α等）发挥作用，Th17能够迅速激活中性粒细胞，使其迅速到达感染部位，发挥清除某些真菌及胞外细菌的[34]作用。结核杆菌感染机体后，若IL-17被阻断，就会影响中性粒细胞针对结核菌[35]的炎症反应。但是反复感染结核菌的动物，损伤部位会出现溃烂坏死，坏死组织[36]镜下可见大量粒细胞。对于此种损伤反应,IL-17大量生成可使其加重,抗IL-17[36]抗体可减轻损伤。但是对于结核病患者,结核病的发生与结核杆菌特异性的Thl7[37]反应比率的下有关。同时也有研究表明Thl7参与抗结核保护性免疫。人类感染结核杆菌可以诱导Thl7产生,但在结核病患者中，INF-γ、IL-2等细胞因子会抑制-20- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义[37]Thl7的产生。2.2.3Treg细胞+++CD4CD25FoxP3T细胞是一类具有免疫抑制功能的调节性T细胞（Treg细胞）。Treg细胞能够抑制其他自身免疫细胞，保持机体自身耐受，防止自身免疫性疾病的［38-40］［38-41］产生，但这也削弱了机体对感染病原菌的免疫抑制反应。研究表明，+++CD4CD25FoxP3调节T细胞分泌的IL-10和TGF-β1能抑制干扰素（IFN）-γ介导的[32]杀结核杆菌作用，有效减弱炎症反应，从而有助于结核杆菌生存。在肺结核患者，机体抗结核免疫反应增强，但增多的CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞抑制了抗结核菌感染的免疫力，使结核菌在体内长期生存、感染呈慢性化表现。这样虽然削弱了机体杀灭结核菌的免疫力，但这也使机体免遭过强的抗结核免疫反应导致的免疫病理损害，达到保护性的抗结核免疫与机体免疫病理损害之间的平衡，推测它们之间的平衡可能与结核的发生、发展及转归有密切关系，有待今后进一步深入研究。2.2.4CD8+细胞结核菌为胞内寄生菌，进入体内的结核菌被吞噬细胞吞噬后，部分可被直接杀灭，还有部分通过形成抗溶酶体膜，使吞噬溶酶体不能成熟，减弱吞噬细胞的杀灭[42、43]作用，从而寄生于吞噬细胞体内，此时吞噬细胞丧失了杀灭结核菌的免疫活性，成为了结核菌的堡垒，帮助其逃避其他效应细胞的攻击。被结核菌感染的吞噬细胞与体内结核菌相互作用，生成内源性抗原肽，与内质网生成的MCH-Ⅰ类分子结合后，+抗原肽-MCHⅠ类分子复合物表达于靶细胞表面，只能被CD8+细胞识别。CD8T细胞识别靶细胞抗原后,可分化增殖为抑制性T细胞（Ts）和杀伤性T细胞（Tc）。Tc细胞发挥细胞毒效应,生成穿孔素、颗粒酶及颗粒溶素等杀菌成分，溶解失去免疫活性的靶细胞，细胞内结核菌失去了保护，附近活化的吞噬细胞、杀伤T细胞可将其杀灭。综上所述，CD8+细胞在抗结核保护性免疫中也发挥着重要的作用。2.2.5CD4+CD8+双阳T细胞（DPT细胞）CD4+CD8+双阳T细胞在胞内感染性疾病的保护性免疫中发挥一定的作用，已经［43］得到国内外研究的证实。雷建平等学者指出CD4+CD8+双阳T细胞是抗结核保护性免疫细胞，主要通过产生并释放细胞毒性细胞因子（穿孔素、颗粒溶素、颗粒酶等）杀灭和清除细胞内外结核菌及其留持菌，尤其是PFN-颗粒溶素途径可直接杀灭-21- 文献综述［44］细胞内持留菌并保护免疫细胞。3.小结综上所述，固有免疫和适应性免疫，体液免疫和细胞免疫在抗结核免疫中都发挥着不可替代的作用，他们相互作用，相互影响，缺一不可。目前普遍认为吞噬细胞、NK细胞、Th1细胞、CTL细胞为抗结核的主要效应细胞，近年来新发现的Th17细胞、Treg细胞受到越来越多的关注。结核杆菌进入机体后所产生的免疫应答极其复杂，机体抗结核免疫机制仍待进一步研究，结核病发病率的升高及耐药性的产生，都为我们医务工作者敲响了警钟，只有不断完善结核菌的免疫机制，才能从根本上解决临床上出现的难题。参考文献：[1]赵辉，张荣波.T细胞在结核杆菌感染中的研究进展[J].医学综述.2010,16(18):55～58[2]Globaltuberculosisreport2013[M].WHO,2013.[3]ErnstJD.Theimmunologicallifecycleoftuberculosis[J].NatRevImmunol,2012,12:581-591.[4]刘昕訸，张彦洁，罗茂财等.固有免疫细胞及其模式识别受体与表观遗传学调控研究进展[J].生命科学.2014，26（8）:846-851[5]李凡，刘晶星.医学微生物学［M］.第七版.北京：人民卫生出版社，2009:77-84[6]HildaJN,SelvarajA,DasSD.MycobacteriumtuberculosisH37Rvismoreeffectivecomparedtovaccinestrainsinmodulatingneutrophilfunction:aninvitrostudy[J].FEMSImmunolMedMicrobiol,2012,66(3):372-381[7]LoweDM,RedfordPS,WilkinsonRJ,etal.neutrophilsintuberculosis:friendorfoe?[J]TrendsImmunol,2012,33(1):14-25.[8]ThomasCJ,SchroderK.Patternrecognitionreceptorfunctionineutrophils[J].TrendsImmunol,2013,34(7):317-328.[9]AnderssonM,LutayN,HallgrenN,etal.MycobacteriumbovisbacilliCalmette-GueriNregulatesleukocyterecruitmentbymodulatingalveolarinflammatoryresponse[J].InnateImmun,2012,18(3):531-540.[10]徐晓萌，李俊明.中性粒细胞在结核病免疫中的作用及其研究进展[J].细胞与分子免疫学杂志.2014.30（8）:885-888-22- 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致谢致谢转眼间，三年的校园生活即将结束。有些兴奋，但是更多的是对这种纯粹的学习生活的不舍。一方水土养一方人，延安作为革命圣地，养育了一批又一批优秀的中华儿女，能够在延安生活与学习三年，是我的幸运，也是我的骄傲。首先，我要感谢我的导师呼彩莲教授，感谢您在这三年间对我学习和临床实习工作方面的谆谆教诲，感谢您对我学校生活方面的热心帮助。您的理论知识渊博，您的专业技水平精湛，您的医德高尚，全心全意为病人考虑，您的工作作风严谨细致，您的为人谦虚豁达，您以最积极、最热情的心态面对人生，这一切的一切都深深的感染和激励着我，值得我用一生的时间来学习。我将以您为奋斗目标，不断的激励自己。感谢呼吸科一、二病区主任常晓红老师和杜延龄老师，感谢两位在临床实习工作上给予的指导与支持。感谢高健全老师、薛亚妮老师在临床病例收集方面的帮助与支持。感谢李元军老师、贺小龙老师，在繁忙的医务工作只余能够抽出宝贵的时间与我交流，教给了我很多临床知识和专业技能，令我收益匪浅。感谢支气管镜操作室袁佳静老师、肺功能操作室郎华老师，在我实习期间的耐心讲解。感谢检验科白老师在标本检测方面的帮助与支持。感谢研究生管理科白玉老师、杨克强老师的帮助与支持。感谢陪伴我三年的各位同学们，尤其是同住在224宿舍的张娜娜同学、杨天芬同学、李晓梅同学，感谢你们在学习和生活中对我的帮助与支持，你们在我快乐的时候分享我的快乐，让我享受到加倍的快乐，你们在我遇到困难的时候，安慰我，帮我出谋划策，鼓励我，让我能够顺利度过难关，我们之间的友情是宝贵的，与你们共同度过这三年的时光让我感到很幸福。最后，要感谢我的父母，如果没有他们的支持，我不可能顺利的完成学业，他们在精神上和物质上都给给我无私的支持，让我没有后顾之忧，专心完成自己的学业，他们给我的是天下最无私的爱，只有通过不懈的奋斗，以他日辉煌的事业让父母为之骄傲。我也相信自己不会辜负他们的期望。在论文脱稿付梓之际，再次向所有关心和帮助过我的老师、同学、家人和同学表示由衷的感谢，并献上崇高的敬意。-26- 肺结核患者T细胞亚群检测的临床意义攻读硕士期间研究成果高琼瑶，呼彩莲.肺结核与机体免疫应答[J].大家健康，2015,9（8）：61-63.-27-