肝脏局灶性结节性增生的全外显子测序研究

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1、也，《诚如皆聲化临床医学专业学生毕业论文巧（八年制）麵晴。—Ｖ？＾巧Ｖ．－鱼＿＾捆痛学校代码：００２３１１学号：２００７００２７肝脏局化性结节性増生的全外虽子测序研究专业年级：北京协和医学院临床医学专业２００７级姓名：汤洁莖导师：焦宇辰教授中国医学科学院肿瘤医院国家重点实验室完成日期：２０１５年６月目录英文缩写词表１摘要２引胃６材料与方法１０实验结果２９Ｗ３９论４３结论与展望数据附录４４参考文献

2、５２综述５６致谢７０英文缩略表英文缩写英文全称中文全称ＦＮＨＦｏｃａｌＮｏｄｕｌａｒＨｙｐｅｒｐｌａｓｉａ肝脏局灶性结节性增生ＨＣＡＨｑ）ａｔｏｃｅｌｈｉｌａｒＡｄｅｎｏｍａ肝细胞腺瘤ＦＬＨＣＣ＾ｂｒｏｌａｍｅｌｌａｒｓｕｂｔｙｐｅｏｆ纤维板层状肝细胞肝癌Ｈｅａｔｏｃｅｌｌ山ａｒＣａｒｃｉｎｏｍａｐｅｌａｎｉｅｃｔａｔｃＦＮＨ毛细血管扩张型肝脏巧ＮＨＴｇｉ局化性结节性增生ＮＧＳＮｅｘ一ｔＧｅｎｅｒａｔｉｏｎＳｅｑｕｅｎｃｉｎ

3、ｇ新代测序ＩＧＶＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｉｃｓＶｉｅｗｅｒ整合基因细浏览器ＴＧＦ－ＴＧｐｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ转化生长因子ｐＰＧＳＧｌｕｔａｍｉｎｅＳｙｎｔｈｅｔａｓｅ谷氨醜胺合成酶ＨＣＶＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ丙肝病毒民Ａｒｇｉｎｈｉｅ精氨酸ＳＳｅｒｉｎｅ丝氨酸ＭＭｅｔｈｉｏｎｉｎｅ甲硫氮酸ＴＴｈｒｅｏｎｉｎｅ苏氨酸１摘要背景肝脏局灶性结节性增生（Ｆｏｃａｌｎｏｄｕｌａｒｈ

4、ｙｐｅｒｐｌａｓｉａ，ＦＮＨ）是临床中第二高发的良性肝脏肿瘤，仅次于肝血管瘤，女性人群的发病率明显高于男性，男／女比例在－且女性患者的年龄主要分布于１：８１：１２，并３０至５０岁之间。大多数ＦＮＨ患者无明显临床症状，，相应病灶通常是在腹部影像学筛查时偶然发现即使部分患者有腹痛症状，但其与病变本身是否有直接关系目前尚无定论。经典ＦＮＨ组织病理学特点为：Ｗ纤维疲痕为中私，由呈放射状的纤维板性隔膜分割而成的无包膜性肝细胞增生性结节。中央纤维疲痕区通常含有管径大小不同的异常血管及增生胆小管。而

5、非典型ＦＮＨ约占到总病例数的２０％，共同特点为无中央纤维藤痕性结构，其中包含Ｈ种亚型分别为毛细血管扩张型（ＴｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃＦＮＨｔＦＮＨ）、增生腺瘤混合型，和非典型细胞型。ＦＮＨ的病生理机制考虑是由己有的血管结构襄乱所致的增生性改ＦＮＨ变，目前认为其本身并无潜在恶变风险。分子生物学方面的研究认为１００％典型－ｌｔ具有多克隆性，Ｗ〇〇％ＦＮＨ与１００％肝细胞腺瘤具有单克隆性。临床上，非典型ＦＮＨ与肝细胞腺瘤、纤维板层状巧细胞巧癌较难鉴别。二代测序技术是新一代高通量测序技术，具

6、有高灵敏度、高测序效率、相对低成本的优势。全外显子组测序基于二代测序技术平台，可Ｗ全面筛查具有编码蛋白功能的全外显子组肉的突变情况，对肿瘤学研究有重要的突破作用。实验目的通过全外显子测序技术，对ＦＮＨ病变的全外显子姐进行全面筛查，期望可Ｗ发现特异的突变，对ＦＮＨ的病因、病生理机制、生物学特性或者与其他肝脏病变的鉴别中有一定提示作用。ＦＮＨ虽为第二高发的肝脏良性肿瘤，但其发病率仍相对较低。少见肿瘤中可能会发现特异的基因突变。Ｗ少见肿瘤的特异突变为切入点，研究特异基因的功能，进而推

7、广到其他肿瘤中验证该基因在牌瘤发生机制中的作用，期望对肿瘤学机制研究能有一定的提示作用。实验材料和方法１．病例收集２０１１年至２０１４年由中国医学科学院肿瘤医院腹部肝胆外科手术切除肝脏局灶病变，术后病理诊断为ＦＮＨ的病例５例。收集相应肿瘤姐织标本及对照全血标本。２．全外显子组测序实验根据全外显子组测序的规范流程，完成ｇＤＮＡ提取、配对验证、建立ＤＮＡ文库、外显子富集、上级测序、生物信息学分析的实验步骤。３．数据分析２通过复习文献一步总结选出感兴趣的候选基，根据生物学

8、功能、突变频率等因素进因。４．验证对候选基因进行ＰＣＲ／Ｓａｎｇｅｒ验证。实验结果全外显子姐测序生物信息分析结果盈示５例ＦＮＨ标本中发现１５８个突变，选出４个候选基因＞２、巧？、ｒＺ，２：＾化祀５巧ｗｗ、ＭＺＹ其中ｒｗｗ在例标本中检测到２个不同突变。对这５个突变进行了ＰＣＲ／Ｓａｎｇｅｒ验证，得到了其中４个突变的）阳性验证结果，包括化２基因１