抑癌蛋白ubiad1及其突变体在人体细胞中的表达分布及功能探究

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1、分类号学号M201271534学校代码10487密级硕士学位论文抑癌蛋白UBIAD1及其突变体在人体细胞中的表达分布及功能探究学位申请人赵：莹学科专业：遗传学指导教师：红凌教授答辩日期：2015年5月18日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceDistributionandfunctionoftumorsuppressorUBIAD1inhumancellsCandidate:ZhaoYingMajor:GeneticsSupervisor:Prof.Hong,

2、LingHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子

3、版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文摘要UBIAD1蛋白作为人体中两种重要物质维生素K2及CoQ10的生物合成酶，不仅与多种肿瘤的发生发展相关，还能够以直接的方式参与胆固醇代谢调控，在生物体中发挥抵抗过氧化损害保护心血管的作用。UBIAD1的跨膜区保守氨基酸突变能够导致罕见遗传病SCCD的发生，它的更多生理，病

4、理作用仍在被发现的过程中。作为生物体中一个多功能的，极为重要的蛋白，UBIAD1在细胞中的亚细胞定位也一直存在争议，已有的研究结果表明，于不同细胞系中，UBIAD1蛋白的定位情况迥然不同。在本文中，我们主要利用免疫荧光染色、过表达融合质粒、MTT实验等方法，验证了UBIAD1蛋白在人体细胞HEK293T和膀胱肿瘤细胞T24中的表达分布和生长抑制功能。结果显示，外源性的UBIAD1蛋白在正常细胞HEK293T和肿瘤细胞T24中均能在内质网和高尔基体两种细胞器上分布，且在高尔基体上呈现聚集现象，但内源表达的UBIAD1蛋白主要显示出在内质网上均匀分布，在高尔基体上的聚集现象不明显。UBIA

5、D1蛋白N端的71、72、73位氨基酸LAY对其在内质网上滞留分布最为关键。破坏已知的UBIAD1蛋白的高尔基体定位信号RPWS后，突变体会专一地滞留在内质网上而不会发生弥散。UBIAD1蛋白及其内质网滞留信号破坏的突变蛋白均能抑制肿瘤细胞T24的生长，但均不影响正常细胞HEK293T的生长；添加维生素K2能够显著地促进UBIAD1内质网滞留信号突变体对T24细胞的生长抑制作用。关键词：UBIAD1，表达分布，内质网，滞留信号，生长抑制，维生素K2I华中科技大学硕士学位论文AbstractUBIAD1,thesynthetaseforbothVitaminK2andCoQ10,whic

6、haretwoimportantmoleculesinhumanbody,isnotonlyrelatedtotheoccurrenceanddevelopmentofmanytumors,butalsoactsasanantioxidanttoprotectcardiovascularbyregulatingthecholesterolmetabolismdirectlyorindirectly.Meanwhile,themutationofconservativeaminoacidsintransmembrancedomainofUBIAD1canleadtheoccurrence

7、ofSCCD,araregeneticdisease.Moreofitsphysiologicalandpathologicalfunctionsarestillbeingfound.UBIAD1isavitalmultifunctionalproteininorganism,andthere’salwaysaheateddisputeforitssubcellularlocalization.Theexistingresearchesshow