体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究

《体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第四军医大学硕士学位论文体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究姓名：苑媛申请学位级别：硕士专业：内科学（心血管内科）指导教师：吕安林20060501独铹牲声啤Y88681；8秉承学校严谨的学风与优良的科学道露，本人声明所呈交的论文是莪个八在导师指导下进行的哥I究工作及取得的硼究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方9}，论文中不包含其他A已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或共他用途使用过的成泉。与莪一同工作的同志对本研究所傲的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之

2、处，本人承担一切相关责任。论文作者釜各监胁型!』鬃挣艇谖产袄声呀本人完全了霹第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期闻论文工作的娜识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或捷用论文工I乍成果时署各单按册然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容(含电子版，保密内容除9})，可以采用影印，缩日I或其地夏制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅租借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作吉签各：避导师签各El期：兰竖型———————————————-一塑堕呈垦拦堡主兰堡堡塞缩略语MSCshBMMS

3、Cs0一azaAngII8一Br-cAMPSPMAPKERKl／ERK2cTnIa-aCtlnRT—PCR英文缩略语表英文全称mesenchymalstemcelishumanbonemarrow—derivedmesenchymalstemcellS5-azacytidineangiotensinII8-Bromo—cyclic3’，5’一adenosinemonophosphateSubstancePmitogenactivatedproteinkinaseextracellularsignalregulatedkinase1／2cardi

4、acTroponinIa—actinReverseTranscription—PolymeraseChainReactionWesternblot4中文全称间充质干细胞人骨髓间充质干细胞5一氮(杂)胞苷血管紧张素II8一溴一环腺苷酸P物质有丝分裂原活化蛋白激酶细胞外信号调节激酶1／2一心肌肌钙蛋白Ia肌动蛋白逆转录一聚合酶链式反应蛋白印迹法第四军医大学硕士学位论文体外诱导人骨髓间充质干细胞为心肌样细胞的实验研究研究生苑嫒导师吕安林副教授辅导老师张荣庆主管技师第四军医大学西京医院一5,1n管内科，西安710032中文摘要实验背景心肌细胞不可逆性死

5、亡及纤维瘢痕增生，是心血管瘸患者心功能进行性恶化甚至死亡的重要原因之一。药物治疗、介入治疗和心外冠脉搭桥术不能逆转坏死的心肌，因此不能治愈严重心肌损伤的心衰患者，临床疗效局限。心脏移植由于受供体和费用的限制，也难以广泛开展。近年来对干细胞理论及技术研究的逐渐深入，发展速度超然，已经取得了初步的实验成果。这些重要发现为修复和重建病损心肌提供了很好的基础。目前国内外研究证实多种胚胎及成体干细胞在适当的培养环境中加入某种有效成份时可在体外诱导分化为心肌样细胞。自体骨髓问充质干细胞(MSCs)具有操作简单，取材方便，无免疫排异性，还具有很好的增殖和多向

6、分化潜能及伦理学优势，因此MSCs逐渐成为生命科学领域研究的重点。大量研究证实MSCs在体外可经化学物质诱导分化为心肌样细胞，但因为对MSCs心肌样细胞化的分子调机制不完全明确，所以目前尚未发现某一种化学物质能特异性地诱导MSCs全部向心肌样细胞分化，这些都为MSCs的临床应用造成困难，很有必要进行进一步的深入探讨。如果能够把MSCs高质量的诱导分化为心肌细胞，并以此修复坏死心肌组织，将具有广阔的医疗前景。目的第四军医大学硕士学位论文i．体外分离、纯化、传代hBMMSCs。2．对比研究5-aza、AngII、8一Br—cA肝、SP对hBMMSC

7、s的诱导分化作用，筛选更加合理的分化诱导剂和诱导克隆方法。3．初步探讨AngII诱导hBMMSCs向心肌样细胞分化时可能涉及的信号通路。方法第一部分：自正常人髂骨抽取骨髓，以1．0779／m1Ficoll分离液分离纯化hBMMSCs，用低糖DMEM在体外培养、传代。第二部分：收集第8代hBMMSCs，分为实验组和空白对照组。实验组分4个亚组，分别用10umol／L5一aza、0．1pmol／LAngII、Imol／L8-Br—cAMP、0．1umol／LSP诱导孵育hBMMSCs24h。各组细胞通过倒置显微镜、免疫细胞化学法、RT—PCR法、透

8、射电镜观察鉴定诱导细胞是否具备心肌样细胞的形态、结构特点及是否表达心肌特异性蛋白a—actin和cTnl，最后用流式细胞仪测定各组心肌样细胞诱导分化率