成人急性髓系白血病患者NPM1蛋白胞浆表达及分析

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1、中山大学硕士学位论文成人急性髓系白血病患者NPMl蛋白胞浆表达及分析成人急性髓系白血病患者NPMl蛋白胞浆表达及分析专业：内科学(血液病学)硕士研究生：陈庆海导师：彭爱华副教授中山大学附属第一医院血．液科中文摘要背景与目的急性髓系白血病是一种常见的、高度异质性的肿瘤性疾病。目前染色体异常已成为该类疾病一项独立的预后指标，但仍有约45％的急性白血病患者不伴染色体异常。现发现这类核型正常的急性髓系白血病(AML-NK)患者有一部分伴有一种或多种分子生物学改变，其中以核仁磷酸蛋白(NPMl)基因突变最多见，约占AML．NK患者的50％一6096、A

2、ML患者的三分之一。经NPMl基因转录、翻译的NPMl蛋白定位在细胞核的核仁区，可在细胞核和细胞浆之间穿梭，发挥运送前核糖体、调节中心体复制、维持染色体稳定、调控细胞增殖与凋亡等重要功能。NPMl基因突变导致野生型NPMl(NPMwt)减少，产生的NPMl突变蛋白干扰NPMwt正常功能，从而导致细胞增殖、凋亡异常，促进白血病的发生。伴NPMl突变的AML患者具有独特的生物学和临床学特点。发生在AML患者中的NPMl突变绝大部分是NPMl基因12号外显子突变，具有较高的突变率。据目前所知，NPMI突变绝大部分见于AML患者，在慢性粒细胞白血病、

3、淋巴系统肿瘤、多种实体瘤中还未发现。因此NPMl突变在AML患者中具有极高的特异性。NPMl基因突变阳性的AML患者在化疗未缓解时突变仍存在，但化疗缓解后突变可消失，而复发后不伴突变的极罕见，因此NPMl突变在AML患者中有极好的稳定性。另外，伴NPMl突变的AML患者在l临床上有女性多发、外周血白细胞数高、CD34阴性、骨髓多细胞系累及、单核细胞系多见、化疗缓中山大学硕士学位论文成人急性髓系白血病患者NPMl蛋白胞浆表达及分析解率高、无事件生存率和总生存率高等特点。因此，检测AML患者是否伴有NPMI基因突变有助于疾病治疗方案的选择、预后的

4、判断及微小残留病灶的监测。尽管检测NPMl突变对AML患者具有重要意义，但目前尚难以普及，原因是直接检测NPMl基因突变的方法主要是基因探针法、PCR法，存在着实验方法复杂、设备要求高、费用昂贵等缺点。目前己证实NPMl基因突变可使NPMl突变蛋白增加一个核输出信号(NES)序列和丧失核仁定位功能，导致NPMl突变蛋白在细胞胞浆中异常累积。这种改变在AML患者中具有特异性，因此取该类患者的骨髓活检样本进行免疫组化检测，阳性结果可间接判断NPMl基因突变存在。该方法简单、经济、可靠，有利于临床推广普及。因此本课题的目的是：(1)观察琼脂石蜡双包

5、埋免疫组化法检测骨髓液单个核细胞胞浆NPMl表达的敏感性，以判断免疫组化法检测骨髓细胞胞浆NPMl表达的可行性；(2)分析胞浆NPMl表达阳性的AML(NPMe+AML)患者临床特点；(3)观察NPMe+AML患者对化疗的反应及其生存时间，以了解白血病细胞胞浆NPMl表达异常对AML患者治疗和预后的影响。材料和方法本实验107例成人AML患者骨髓液样本来自2007年12月至2008年12月我院住院及门诊初诊AML患者，其中男性49例，女性58例，中位年龄42(11-82)岁。按FAB分型标准，包括M212例，M316例，M417例，M550例

6、，M64例。本研究中未收集到一例Mo、MI或M7患者的骨髓液样本。对照组为血液系统非肿瘤性疾病8例，其中ITP患者4名，自身免疫性溶血2名，失血性贫血和再生障碍性贫血各1名。主要研究方法是：(1)用ficoll淋巴细胞分离液分离骨髓液单个核细胞，以琼脂石蜡双包埋法包埋，免疫组化SP染色法染色；(2)收集、分析入选患者的实验室及临床相关资料，了解NPMe+AML患者临床特征；(3)随访上述住院患者对化疗的反应及其生存时间，了解预后。结果107例成人AML患者中有29例胞浆NPMl表达阳性(阳性率27．1％)，其中M2为6／20(30％)、M3为

7、0／16(0％)、M4为6／17(35．3％)，M5为17／5011中山大学硕士学位论文成人急性髓系白血病患者NPMl蛋白胞浆表达及分析(34％)、M6为0／4(0％)。8例血液系统非肿瘤性疾病患者骨髓液细胞胞浆NPMl表达均阴性。AML患者胞浆NPMl表达与高外周血LDH值呈显著相关，而与HLA．DR、CD34、CDl17等表面抗原表达负相关(P值均<0．05)。NPMc+AML患者的外周血白细胞、血红蛋白、血小板计数与胞浆NPMl阴性表达的AML(NPMc．AML)患者相比较未见差异(P值分别为O．72、0．776、0．735)。胞浆NP

8、Ml表达与AML患者的性别、年龄无关(P值分别为0．286和O．836)。NPMc+AML患者和NPMc．AML患者的首次化疗完全缓解率(CRl)及生存时间未见差异