51DNA的粗提取和鉴定

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1、专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取和鉴定【学习目标】DNA的粗提収和鉴定。【学习过程】一、DNA的粗提収和鉴定：（一）实验原理：1、粗捉取原理：提取生物大分子的基本思路是o对于DNA的粗提収而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分。（1）DNA与其他细胞成分在不同浓度溶液屮的溶解度不同；请画出DNA在氯化钠溶液中的溶解度曲线。（2）DNA和蛋白质对、和的耐受性不同；蛋白酶能水解，但是对没有影响。例如使用;大多数蛋白质不能忍受60°C〜80°C的高温，而DNA在以上才会变性。例如可以使用°C的恒温水浴箱，严格控制温度范

2、围；洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。（3）DNA不溶于溶液，但蛋白质则溶于。2、鉴定原理：在条件下，DNA遇会被染成色，因此可以作为鉴定DNA的试剂。另外DNA还能与染色剂反应，呈色。（二）实验过程：1、实验材料的选取：要选収含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难。例如可选择等作为实验材料。2、破碎细胞，释放和溶解DNA：这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解。如果是动物细胞，直接加入一定量的，用玻璃棒搅拌；如果是植物细胞，需先用—溶解硼膜，再加入进行充分的搅拌和研磨。最后过滤，收集滤液。特另!J提示

3、：提取鸡血细胞核物质时，应快速搅拌，其目的是加速血细胞破裂。3、去除滤液屮的杂质（DNA的纯化）：根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性不同等特性，最大限度地将与杂质分开。特别提示：向含核物质的2mol/LNaCl溶液中加入蒸憎水析出DNA黏稠物时和DNA黏稠物再溶解于2mol/LNaCl溶液时以及用冷却的95%的酒精提取含杂质较少的DNA时，应轻缓搅拌，目的是尽量保持DNA分子的完整性。第一次过滤第二次过滤第三次过滤第四次过滤过滤前加入的物质蒸僧水2mol/LNaCl蒸懈水（至0.14mol/LNaCl）2mol/LNaCl过滤目的滤液中所含物质纱布上遗

4、留物质实验中四次过滤（填写下面表格）：特别提示：（1）实验中两次用到蒸镭水的作用：第一次是提取鸡血细胞中的核物质时，目的是造成低渗环境，加速血细胞破裂，便于DNA析出；第二次是析出DNA过程中加蒸馆水，目的是使DNA的溶解度下降，从而析出DNA。（2）盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器，因为DNA容易被玻璃容器吸附。4、DNA的析出与鉴定：用与滤液等体积的、冷却的溶液析出DNA；将玻璃棒上的丝状物溶于2mol/LNaCl溶液,加入4ml的试剂，将试管置于沸水中加热5min,观察颜色变化。（需设置不加DNA的对照组）（三）注意事项：1、以血液为实验材料时，不

5、能选择动物的血液，因为o取血时，需要加入，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要o否则容易产生03、加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧4、二苯胺试剂要,否则会o【巩固练习】1.在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是A・防止凝血B・加快DNA析出C・加快DNA溶解D・加快凝血2.下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是A.使鸡血细胞在蒸馆水屮充分破裂，放出DNA等核物质B・搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C.在析出DNA黏稠物时，要缓缓加蒸憾水，直至溶液中黏稠物不再增加D.在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却

6、3.含有DNA的氯化钠(0.015mol/L)溶液中加入二苯胺试剂后，加热煮沸5min,溶液呈A•紫色B・蓝色C・砖红色D・红色4.在“DNA的粗提取实验”中，有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是①DNA在物质的量浓度为0.14mol/L的氯化钠中的溶解度最低②DNA在冷却的体积分数为95%的酒精中能沉淀析出A.两次都是①B.第一次是①，第二次是②C.两次都是②D.第一次是②，第二次是①5•在向溶解DNA的NaCl溶液中不断加入蒸镭水的目的是A.加快溶解DNA的速度B.加快溶解杂质的速度C.减小DNA的溶解度，加快DNA析出D.减小杂质的溶解度，加快杂质的

7、析Ill6.提取含杂质较少的DNA所用的溶液是A.体积分数为90%的冷却的酒精B.加热的、体枳分数为95%的酒精C・体积分数为95%的冷却的酒精D・加热的、体积分数为90%的酒精7.DNA的粗提取和鉴定实验，与下列哪项原理无关A.DNA在0.14mol/LNaCl溶液中的溶解度最低B.DNA易被龙胆紫染成紫色C.在DNA溶液中加入二苯胺，加热后产生蓝色D.加入95%的冷酒精，DNA会从溶液中析出8.下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是"DNA溶解度"DNA溶解度0」4NaCl浓度(mol/L)014NaCl浓度(mol/L)014NaC

8、l浓度(mol/L)CBDNA溶解度014NaCl浓