选51DNA的粗提取和鉴定学案

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1、5.1DNA的粗提取和鉴定学案班级姓名日期【学习目标】木课题通过尝试对植物或动物组织屮的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。一、实验目的：初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。二、实验原理：1.DNA的溶解性：①NaCl溶液屮的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的屮溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。②酒精溶液屮的溶解性：DNA_溶于酒精溶液，但是细胞屮的某些物质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。2.DNA酶、高温和洗涤剂的耐受性：

2、①蛋白酶：能水解,但对没有影响。②高温：大多数蛋白质不能忍受°C的高温，而DNA在°C以上才会变性。③洗涤剂：能够瓦解,但刈'DNA没冇影响。3.动物细胞在屮易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。4.DNA的鉴定：在条件下，DNA遇会被染成_色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。三、实验材料：鸡血细胞液思考题：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？四、方法步骤1.制备鸡血细胞液lOOmL鸡血100ml0.1g/mL柠檬酸钠■PWVWW■■—•—■上清液鸡血细胞液5-10ml鸡血细胞液鸡血细胞液

3、在鸡血中加入质量浓度为0.lg/mL的溶液，与新鲜的鸡血混合并搅拌，然后静置一天或离心机离心约2~3min,除去上清液；（防一止血液凝固，使血细胞与血浆分离）2.提取鸡血细胞的细胞核物质：取20n±蒸傭水与约5〜10mL的鸡血.细胞液混合并充分搅拌，然后用单层纱布过滤，取滤液于烧杯屮；思考题：加入蒸饰水的口的是什么？为什么能达到此目的？严水搅拌过滤伽已2nol/L氯伽落液7—「■■■叩■VW-■・OILW•1.溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；DNA在高浓度氯化钠溶液屮溶解度最2.析出含DNA的黏稠物：沿烧杯内壁慢慢加入蒸憎

4、水并轻轻搅拌，至白色丝状粘稠物不再增加时停止加水，然后用多层纱布过滤，取纱布上的粘稠物；DNA的溶解度随氯化钠溶液浓度的降低而思考题：此时加入蒸憾水的目的是什么？这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？3.将DA的黏稠物再溶解：用银子夹取纱布上的粘稠物放入20mL浓度为氯化钠溶液中，搅拌至完全溶解，然后用两层纱布过滤，取其滤液放入小烧杯中，因为DNA在高浓度氯化钠溶液屮溶解度最大思考题：过滤的口的是什么？为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除朵质?4.提取含杂质较少的DNA：DNA不溶于酒精，出现沉淀。方法：处理后的过滤液加入等体积、冷却的95%的酒精混合搅拌，待岀

5、现丝状物时用玻璃棒将其卷起；思考题：这一步骤的目的是什么？为什么加入的酒精需要冷却的？苯胺5nL0.0l5mol/L55化谕諮液提取物5.DNA的鉴定：取两支试管，各加入0.015mol/L的氯化钠溶液5mL,一支加入提取的DNA,然后两支齐加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水屮加热5min,等试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。思考题：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象?四、常见问题分析1•从鸡血细胞核中提取的物质是DNA吗？.在鸡血细胞中加入蒸憾水，并但搅拌，利用渗透作用原理使鸡血细胞破裂，搅拌进一步促进了鸡血细胞的破裂，于是释放出其中

6、的DNA,当然也冇少量的RA,述的蛋白质。因此，释放出的物质是DNA、RNA和蛋口质的混合物，不仅仅只有DNA。2.怎样提高血细胞因低渗而破裂的效率？血细胞的细胞膜对低渗溶液冇一定的抵抗能力，这称为渗透脆性。一般而言，血细胞与蒸憎水相混合而使血细胞处丁•极度的低渗环境之中，细胞因人量失水而致最终破裂并释放出胞内物（包括细胞核）。为促进细胞在低渗条件下破裂，叮以辅以快速而有力的搅拌，使之受机械震荡而更易破裂。3.怎样才能把血细胞释放的DNA滤入收集的滤液中？这一步较难处理，在过滤过程屮常常发生因粘稠的果月东样物质堵塞过滤纱布的网眼而使后续的过滤难以完成，很多DNA没.

7、能滤入滤液中，这是造成失败的主要原因Z-o解决的方法有：过滤时待过滤溶液倒入漏斗的速度应缓慢，以免沉积于溶液中层的胶状物一下就把纱布堵住，使过滤不能完成；一旦出现大量胶状物使过滤不能进行下去，切忌用力挤压而使胶状物也滤入滤液之中，可以把胶状物重新用适量的加NaCl溶液进行搅拌，使其中的DNA得到溶解，然后再进行过滤。4.实验中看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢？不是。因为DNA分子直径只冇2nm。丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的。5•盛放驾血细胞極册容器，最好是遅科容器。鸡血细胞破碎以后释啟出的DMA,容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA