51DNA的粗提取与鉴定

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1、课题DNA的粗提取与鉴定备课时间上课时间总课时数课程目标知识与技能1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗捉取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理过程与方法掌握DNA如提取计数，能利用DNA的性质进行实验设计和操作情感态度与价值观通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。教学重点DNA的粗提取和鉴定方法教学难点DNA的粗提取和鉴定方法教学过程二次备课一、情境导入无论是來胶酶还是加酶洗衣粉中的酶制剂，都是从细胞中提取出来的。从今天开始，我们学习生物化学成分的提取与改造技术。二、授

2、新课1.基础知识1・1DNA粗捉取的原理提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐受性两个方面。问：提取DNA的溶解性原理包括哪些方而？DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。1.1.1分析图5-loDNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度冇何特点？要使DNA溶解，需耍使用什么浓度？耍使DNA析出，又需耍使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小;较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。I.1.2在溶解细胞中的DNA时,人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCI溶液中缓慢注入

3、蒸饰水，以稀释NaCl溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精(特别是95%冷却酒精),但细胞中蛋白质可溶于酒精。问:采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么H的？将DNA和蛋白质进一步分离。1.1.3捉取DNA还可以利用DNA对酚、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋口酶只水解蛋口质而不会对DNA产生影响。温度值为60〜8()°C,因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。补充：DNA的变性是指DNA分了在高温下解螺旋，其温度在80°C以上，如在PCR技术屮DNA变性温度

4、在95°C。思考：观察图5-2,洗涤剂在提取DNA中冇何作川？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。1.2DNA的鉴定原理当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。原理总结。通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA,可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的H的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNAo2.实验设计2.1实验材料2.1.1不同牛物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于捉取的原则。你认为教材

5、提供的材料屮哪些不适合提取DNA?哺乳动物的血液和液体培养基屮的人肠杆菌。2.1.2从核DNA数H来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，筛猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。鸡血、獗猴桃。1.2破碎细胞，获収含DNA的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在鸡血细胞液中加入一定量蒸镭水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定虽洗涤剂和食盐，搅拌研幣，过滤后收集滤液。在以上实验屮，加入蒸馆水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用(滤纸、尼龙布)。血细胞在蒸锚水中大

6、量吸水血张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤。在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量减少。具体做法。l()mL鸡血+20mL蒸憎水一同方向搅拌一3层尼龙布过滤一滤液1.3去除滤液屮的杂质最初获得的DNA滤液含冇蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNAo阅读教材提供的三种方法，分析其中的原理。方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液屮溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变

7、性温度不同。具体做法。方案一：30mL滤液+35gNaCl-*同方向搅拌，DNA溶解-*加入蒸镭水DNA析出一过滤得到过滤物一放到2mol/LNaCl溶液中溶解-DNA-NaCl溶解液方案二：30mL滤液+嫩肉粉(木瓜蛋白酶)一静置10〜15分钟一DNA滤液方案三：3()滤液一60〜67°C处理一过滤获得DNA滤液2.4DNA析出与鉴定在滤液屮仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜仏?滤液与等体积的冷却洒梢混合均匀，静置2〜3分钟，析出的白色丝状物就是DNA。DNA呈口色。怎样鉴定析出的H色丝状物就是DNA呢？阅读教材。阅读。简述D

8、NA的鉴定过程。具体做法。试管2支，编号甲乙一各加等®5mLNaCl溶液一甲中放入少量白色丝状物，使Z溶解一