资源描述：
《51DNA的粗提取与鉴定习题2》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、5.1DNA的粗提取与鉴定习题2【目标导航】1.了解DM的物理性质.2.理解DM粗提取以及DM鉴定的原理.知识清单一、提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路(1)选用一定的或方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子.(2)DNA的粗提取就是利用DNA与、和等在物理或化学性质方面的差异，提取D7A,去除其他成分.2.提収DNA分子的基本原理(1)利用DNA的溶解性①D7A和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一点，选择适当浓度的NaCl溶液就能使DNA溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的.DM与蛋口质在不同
2、浓度的NaC1溶液中溶解度不同.溶解规律2mol/LNaCl0.14mol/LNaClDNA在NaCl溶液中，浓度为mol/L吋溶解度_溶解析出蛋白质NaCl浓度从2mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大部分发生盐析溶解由上表可以看111,在NaCl为2mol/L时DNA,而部分蛋白质发生盐析而生成,通过过滤可除去部分:NaCl为0.14mol/L时DNA,过滤可除去溶解的部分.②D7A不—酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则—酒精.利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离.(2)利用DNA和蛋白质对酶、和的耐受性不同①蛋白酶能水解蛋白质，但对没有
3、影响.②大多数蛋白质不能忍受的高温，而DNA在80°C以上才会变性.③洗涤剂能够溶解，但对没有影响.(3)DNA的鉴定：D7A在沸水浴的条件下，遇会染成.二、提取DNA及鉴定DNA的实验流程1.实验材料的选取实验材料的选择原则是选用含量高的生物组织.有些材料不宜选用，如有些哺乳动物的成熟红细胞无细胞核，无法提取DM.实验中一般选用或作为实验材料.1.破碎细胞，获取含DNA的滤液(1)动物细胞一般采用破碎的方法.(2)植物细胞需要先用溶解细胞膜，再加入一定量,进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集.归纳总结动、植物细胞在获取D7A滤液方面的比较原理方法动
4、物细胞(鸡血细胞)在低渗溶液中会吸水涨破在鸡血细胞液屮加入一定量的蒸馆水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液植物细胞(洋葱)洗涤剂能够溶解细胞膜在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐，充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨液3.去除滤液中的杂质释放出的核物质是D7A、RNA和蛋白质等的混合物，根据不同的方案，可采用以下三种去除滤液屮杂质的方案.原理方法方案DNA在不同浓度的_溶液中溶解度不同①在滤液中加入NaCl,使其溶液浓度为2mol/L,过滤除去不溶的杂质②调节滤液屮的WC1溶液浓度为0.14mol/L,析出DNA,过滤去除溶液中溶解的杂质方案DNA对
5、酶的耐受性直接在滤液中加入，中的能够分解蛋白质，反应10~15min方案DNA对高温的耐受性将滤液放在的恒温水浴箱中保温10〜15min,注意严格控制温度范围，使沉淀，而分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分开4.D7A的析出(1)原理：DNA不溶于,但细胞中的某些蛋白质则能溶于酒精.(2)方法①将过滤得到的含DM的黏稠物溶于的NaCl溶液，再过滤得到含DNA的滤液.②向滤液中加入与滤液体枳相等的、冷却的、体积分数为的酒精溶液，静置2〜3min,溶液中会出现丝状物，它就是粗提収的DNA.③用玻璃棒沿同一方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分.
6、(3)目的①析出DNA；②去除溶于酒精的杂质.(1)鉴定原理：DNA+(2)步骤5.DNA的鉴是项目两支20汕的试管1号2号实验步骤加入2mol/L的NaCl溶液5mL5mL加入丝状物(DNA)J用玻璃棒搅拌溶解加入二苯胺试剂4mL4mL沸水浴加热5min5min观察现彖—变蓝5__min提醒(1)甲基绿可将DNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要水浴加热5min,可使DMA呈蓝色。(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。6.对实验结果作出分析与评价(1)鉴别提取的DNA观察你提取的D7A颜色，
7、如果不是,说明DNA屮的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新提取。(2)分析DNA中的杂质本实验提取的DM粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。(3)不同实验方法的比较对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选収不同的实验材料,其次同种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好。对应训练知识点一提取DM的方法1.DNA的粗提取与鉴定实验，与下列哪项原理无关
8、()A.DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中,溶解度最低B.DNA易被龙胆紫溶液染成紫色C.DNA溶液中加入二苯胺试剂，加热后产生
