课题51DNA的粗提取与鉴定

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1、专题5DNA与蛋白质技术课题5.1DNA的粗提取与鉴定一、【课题目标】（一）知识与技能1、通过尝试对植物或动物组织屮的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理（二）过程与方法掌握DNA如提取计数，能利用DNA的性质进行实验设计和操作（三）情感、态度与价值观通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。二、【课题重点】DNA的粗提取和鉴定方法三、【课题难点】DNA的粗提取和鉴定方法四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】（一）引入新课无论是果胶酶还是加酶洗衣粉屮的酶制剂，都是从细胞屮提取出來

2、的。从今犬开始，我们学习牛物化学成分的提取与改造技术。（二）进行新课1.基础知识1・1DNA粗提取的原理提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐受性两个方面。问：提取DNA的溶解性原理包括哪些方而？DNA在不同浓度NaCl溶液屮溶解度不同；DNA不溶于酒精。1.1.1分析图5-1«DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需耍使用什么浓度？耍使DNA析出，又需耍使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。1・1.2在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaC1溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的N

3、aCl溶液中缓慢注入蒸馆水，以稀释NaCl溶液。酒粹是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95%冷却酒精）,但细胞中蛋白质可溶于酒精。问:釆用DNA不溶于酒精的原理,可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。1.1.3提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的I耐受性原理。利用该原理时，应选川怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60〜80°C,因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。补充：DNA的变性是指DNA分了在高温下解螺旋，其温度在&）°C以上，如在PCR技术+DNA变性温度在95°C。思考：观察图

4、5-2,洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。1.2DNA的鉴定原理当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。原理总结。通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA,nJ以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒梢进一步将DNA与蛋白质分离开來，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提収的物质是否是DNA。2.实验设计1.1实验材料2.1」不同牛物的组织中DNA含量不同。在选収材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA?哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠

5、杆菌。2」.2从核DNA数目來看，猪38条，鸡78条，II甫乳动物血0条，扌弥猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，人肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。鸡血、獗猴桃。1.2破碎细胞，获取含DNA的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在鸡血细胞液中加入一定量蒸憎水并川玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。在以上实验屮，加入蒸馆水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。血细胞在蒸憎水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤。在处理植物组织时需要进行研磨，其目的

6、是什么？研磨不充分产生什么结果？破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl溶液屮；研磨不充分会使DNA的提取最减少。具体做法。10mL鸡血+20mL蒸憎水-*同方向搅拌-*3层尼龙布过滤滤液1.3去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。阅读教材提供的三种方法，分析其中的原理。方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。具体做法。方案一：3OmL滤液+35gNaCl->同方向搅拌，DNA溶解一加入蒸馆水一DNA析出一过滤得到过滤物放到2mol/LNaCl溶液

7、屮溶解->DNA-NaCl溶解液方案二：3OmL滤液+嫩肉粉（木瓜蛋白陆）一静置10〜15分钟一DNA滤液方案三：30滤液一60〜67°C处理一过滤获得DNA滤液2.4DNA析出与鉴定在滤液中仍然含冇一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？滤液与等体积的冷却洒梢混合均匀，静置2〜3分钟，析出的白色丝状物就是DNAoDNA呈白色。怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA呢？阅读教材。阅读。简述