高效液相色谱_电喷雾离子阱质谱法鉴定金匮肾气丸总苷化学成分及代谢产物

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2010年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1765～1770DOI:10．3724/SP．J．1096．2010．01765高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法鉴定金匮肾气丸总苷化学成分及代谢产物*1，211，2111，2李文兰胡杨季宇彬杜娟孙志白晶1(哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨150076)2(国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨150076)n摘要应用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法(HPLC-ESI/MS)鉴定金匮肾气丸总苷的化学成分及总苷大鼠灌胃给

2、药血浆化学成分或代谢产物。对比体内外样品色谱图各色谱峰，根据负离子模式下的分子离子峰获得化合物分子量信息，金匮肾气丸总苷含19个化学成分:没食子酰-3-O-芹糖基(1→6)葡糖苷、羟基芍药苷、莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、地黄苷A或B、1，2，3-三-O-没食子酰葡萄糖、芍药苷、山茱萸新苷Ⅱ、6'-(3，4，5-三羟基苯甲酰)芍药苷、1，2，3，6-四-O-没食子酰葡萄糖、山茱萸新苷Ⅰ、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰羟基芍药苷、丹皮酚原苷、苯甲酰芍药苷、4'-羟基，6'-(3，4，5-三羟基苯甲酰)芍药苷和两个未知化合物成分。金匮肾气丸总苷大鼠灌胃血浆鉴定出17个化学成分，其中有8个化合物以

3、原型存在，9个可知代谢转化成分，分别为没食子酸，2-羟基苯乙酮-4-O-葡萄糖醛酸酯，芍药苷代谢素Ⅰ，2-羟基-4-甲氧基苯乙酮-5-O-硫酸酯，2，4-二羟基苯乙酮-5-O-硫酸酯，2，4-二羟基苯乙酮和3个未知成分。关键词金匮肾气丸总苷;成分分析;代谢产物;高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术1引言金匮肾气丸为祖国医学经典补肾壮阳方药，临床上多用于治疗肾阳虚型疾病，具有抗衰老、增强免［1］疫力、改善脂肪和糖代谢等作用。该方剂由熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮、肉桂、附子(制)药味组成，其中熟地黄主要成分为环烯醚萜苷类、糖类及氨基酸类;山药富含皂苷、甾醇类、多糖及多种微

4、量元素;山茱萸主要含马钱苷、莫诺苷等苷类和有机酸及酯类成分;泽泻含多种四环三萜酮醇衍生物;茯苓主要含三萜类成分;牡丹皮含有丹皮酚、芍药苷、苯甲酰芍药苷等苷类及挥发油、植物甾醇等;肉桂主要含挥发油类成分;附子(制)主要成分为生物碱类和多糖类。前期实验对复方有效部位进行了［2］筛选，确定复方的总苷类成分可使肾阳虚大鼠的睾酮含量和SOD活性升高，MDA水平降低，有效改善性激素分泌状况，具有抗衰老及抗自由基等作用，为金匮肾气丸治疗肾阳虚及抗衰老的药效部位。高效液相色谱和电喷雾离子阱质谱(HPLC-ESI/MS)联用技术具有高灵敏、高选择性的特点，利用离子阱技术在温和的条件下直接获得待测物的

5、准分子离子峰，并对选定的母离子逐步提高其相对碰撞能量，给出母离子与碎片离子的关系，为代谢产物的结构分析提供丰富的信息。本研究采用HPLC-ESI/MS方法鉴定金匮肾气丸总苷及其在大鼠血浆中的代谢产物，对全面系统了解总苷的化学及代谢信息提供了理论依据。2实验部分2．1仪器、试剂与材料1100液相色谱系统(Agilent公司，包括四元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、DAD检测器);1100液相色谱/VL型离子阱液质谱联用仪(Agilent公司，配大气压电喷雾源ESI及化学电离源APCI);仪器操作及数据处理系统采用HPLC-3D化学工作站;XW-80A型旋涡混合器(江苏海门麒麟

6、医用仪器厂);Allegra-64R型低温高速离心机(美国贝克曼公司)。2010-04-15收稿;2010-06-28接受本文系黑龙江省科技厅攻关项目(No．GC05C31601)资助*E-mail:lwldzd@163．com1766分析化学第38卷对照品:马钱苷、芍药苷标准品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号分别为111640-200502、110736-200320);药材熟地黄(RadixRehmanniae)、山药(RhizomaDioscoreae)、山茱萸(FructusCorni)、牡丹皮(CortexMoutan)、泽泻(RhizomaAlismatis

7、)、茯苓(Poria)、附子(制)(RadixAconitiLateralisPreparata)、肉桂(CortexCinnamomi)均购于宝丰医药商业有限公司，经张德连教授鉴定;乙腈、甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司);冰醋酸(色谱纯，天津耀华化学试剂公司);实验用水为超纯水。金匮肾气丸总苷:依据参考文献［3，4］制备，以马钱苷计总苷含量为43．9%。雄性Wistar大鼠(10周龄，(300±20)g，长春国家生物产业基地实验动物中心，批号SCXK-