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《高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱法推定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第6期2010年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry817~822DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00817高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱法推定硫酸依替米星中有关物质的结构*1112袁耀佐张玫钱文张正行12(江苏省食品药品检验所,南京210008)(中国药科大学药物分析教研室,南京210009)n摘要采用高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱法(HPLC-ESI-IT-MS)对硫酸依替米星中有关物质结构
2、进行推定。采用PhenomnexGeminiNXC18色谱柱,以水-氨水-冰醋酸(963.60.4,V/V)-甲醇(7030,V/V)为流动相,质谱条件:电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式;离子源温度350;雾化氮气压力275.8kPa;干燥氮气流速10L/min;离子阱质谱检测器,Smart扫描模式,扫描质量范围m/z100~900。硫酸依替米星样品中共检出18种有关物质,对其中的13种物质的结构进行了推定,其余5种有关物质的结构未进行解析,只提供了分子量和二级质谱信息。关键词硫酸依替米星;高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱;结构鉴定1引言依替米星(E
3、timicin),又称1-N-乙基-庆大霉素C1a(图1),是以庆大霉素C1a为原料,通过络合催化保护氨基、硅烷化保护羟基、缩合-还原型N-乙基化等一系列反应,在庆大霉素C1a的1-N位上引入乙基[1][2]而得,具有高效、安全、广谱抗菌、无交叉耐药性等特点,临床应用主要是硫酸盐,即硫酸依替米星。[3]硫酸依替米星及其相关物质测定多见报道,包括微生物检定法、柱前衍生化高效液相色谱-紫外[4][5]检测法(HPLC-UV)、高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)、高效液相色谱-脉冲电化学[6][7]检测法(HPLC-PED)等,但对硫酸依替米星中有关物质的研
4、究报道极少。刘军等对依替米星合成过程中的N-乙基化产物3-氮-乙基庆大霉素C1a和1,3-二-氮-乙基庆大霉素C1a(图1)进行了分离和鉴定,但该方法工作量大、实验周期长。采用高效液相色谱质谱联用技术(HPLC-MS)对氨基糖苷类抗生[8~14]素中有关物质进行结构推定已有很多报道,对依替米星及其它氨基糖苷类抗生素质谱裂解规律的[15,16]研究也有相关文献,但采用HPLC-MS对硫酸依替米星中有关物质结构推定的报道鲜见。R1R2R3依替米星EtimicinC2H5HH小诺霉素MicronomicinHCH3CH3庆大霉素CGentamycinCHHH1a1a3-
5、氮-乙基庆大霉素C1aHHC2H53-N-ethylgentamycinC1a1,3-二-氮-乙基庆大霉素C1aCHCH1,3-N-diethylgentamycinC25H251a中间体P1IntermediateP1CH3COCH3COCH3CO图1依替米星及其部分有关物质化学结构Fig.1ChemicalStructuresofEtimicinandsomeofitsrelatedsubstances文献[9~11]中,氨基糖苷类抗生素HPLC-MS分析的流动相均含三氟乙酸或五氟丙酸,由于它们[12~14][17]对电喷雾离子化有强抑制作用,检测灵
6、敏度很低。Li等通过柱后添加丙酸的TFAfix技术提高了离子化效率,但该技术需要在柱后连接泵系统,操作烦琐。本研究基于文献[18],建立了适合于LC-MS分析的流动相。从一批有代表性的硫酸依替米星样品中检出18种有关物质,对其中13种物质的结2009-07-07收稿;2010-01-27接受*E-mai:lyuanyaozuo@yahoo.com.cn818分析化学第38卷构进行了推定并参考相关文献和合成工艺佐证推定结果的合理性。2实验部分2.1仪器与试剂1100LC/MSDTrap液质联用仪(美国Agilent公司)。硫酸依替米星(批号:080103,080
7、106,080105,常州方圆制药有限公司),依替米星、小诺霉素、庆大霉素C1a对照品(中国药品生物制品检定所),乙腈(色谱纯),其余试剂均为分析纯。2.2高效液相色谱及质谱条件GeminiNXC18色谱柱(150mm4.6mm,5m,美国Phenomnex公司);以水-氨水-冰醋酸(963.60.4,V/V)混合液-甲醇(7030,V/V)为流动相;流速为1mL/min;柱温为35;进样量为20L;采用柱后分流模式,分流比为73。电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式;离子源温度350;雾化氮气压力275.8kPa;
