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《高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法分析6种氨基糖甙类抗生素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第34卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第7期2006年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry979～982高效液相色谱2电喷雾离子阱质谱法分析6种氨基糖甙类抗生素1,21311王建李忠红倪坤仪王志群12(中国药科大学分析化学教研室,南京210009)(浙江省药品检验所,杭州310004)n摘要采用高效液相色谱2电喷雾离子阱质谱(HPLC2MS)联用,分离和鉴定6种氨基糖甙类抗生素及其中的杂质,并探讨这6种结构相似的氨基糖甙类抗生素的质谱裂解规律。采用AgilentSB2C18(250mm×4.6mm
2、,5μm)色谱柱,流动相为0.05mol/L三氟乙酸溶液2甲醇(90∶10)和0.05mol/L五氟丙酸溶液2甲醇(65∶35);在正离子检测方式下,用电喷雾离子阱质谱法对阿司米星、异帕米星、大观霉素、威替米星、奈替米星、西索米星及其杂质进行多级质谱分析。异帕米星、威替米星、奈替米星、西索米星及其杂质在二级质谱分析时,均可发生B环(脱氧链霉胺)与C环(氨基葡萄糖)之间的糖苷键断裂,生成脱去C环的碎片离子,并进一步发生A环(氨基葡萄糖)与B环之间的糖苷键断裂,生成A环或B环的碎片离子。鉴定了6种氨基糖甙类抗生素中7个杂质的结构。关键词氨基糖甙类抗生
3、素,结构解析,高效液相色谱2电喷雾离子阱质谱1引言氨基糖甙类抗生素是一类广泛用于各种革兰阴性菌感染治疗的化合物。该类抗生素在合成过程中会产生一些副产物及降解产物,产生的杂质抗菌活性降低、毒性增加,影响临床使用效果。因此,有必要对这些杂质进行鉴定和控制。n近年来发展起来的高效液相色谱2电喷雾离子阱质谱(HPLC2MS)联用技术,将色谱的强分离性能与质谱的强定性优势相结合,通过多级质谱分析,可获得氨基糖甙类抗生素分子丰富的结构信息,对鉴[1～5]定已知杂质和初步推断未知杂质的可能结构,显示出极大的优越性。本研究通过实验,建立了适合液相色谱2电喷雾离子
4、阱质谱联用分析氨基糖甙类抗生素的液相色谱条件,用电喷雾离子阱质谱对6种氨基糖甙类抗生素及其中的杂质进行多级质谱分析,分离鉴定了6种氨基糖甙类抗生素中的7种杂质,并探讨这6种结构相似的氨基糖甙类抗生素及其中杂质的质谱裂解规律。2实验部分2.1仪器与试剂1100高效液相色谱系统、1100质谱仪(包括电喷雾离子源、离子阱质谱检测器)(美国Agilent公司)。二次蒸馏水;五氟丙酸、三氟乙酸:分析纯;甲醇:色谱纯。硫酸阿司米星原料药及硫酸异帕米星原料药(浙江海正药业股份有限公司);硫酸奈替米星原料药、硫酸西索米星原料药(浙江震元制药有限公司);硫酸威替米
5、星原料药(浙江康乐药业有限公司);盐酸大观霉素原料药(浙江金华康恩贝药业股份有限公司)。2.2实验方法2.2.1供试品溶液的制备取阿司米星、异帕米星、大观霉素、威替米星、西索米星、奈替米星各适量,分别加水溶解并稀释制成5g/L的供试品溶液。2.2.2液相色谱条件色谱柱:AgilentSB2C18(250mm×4.6mm,5μm);阿司米星、大观霉素、威替米星、西索米星、奈替米星分析用流动相0.05mol/L三氟乙酸溶液2甲醇(90∶10),异帕米星分析用流动相0.05mol/L五氟丙酸溶液2甲醇(65∶35);流速:1.0mL/min;蒸发光散射
6、检测。2005210209收稿;2006201212接受980分析化学第34卷2.2.3质谱条件离子源(ESI)喷射电压:3.50kV;雾化器(N2)压力:0.208MPa;干燥气(N2)流速:7.0L/min;干燥气温度:350℃;锥体电压:40V;毛细管输出电压:94V;离子扫描范围:50～1000m/z;2正离子方式检测,采用全扫描一级质谱(Fullscan)和离子全扫描二级质谱(FullscanMS)2种方式同时测定;柱后分流比:10∶1。3结果与讨论3.1色谱条件的选择及杂质分离氨基糖甙类抗生素极性很大,在ODS柱上不保留。可通过与酸形
7、成离子对,降低极性以增加在色谱柱上的保留。同时为了适合液相色谱2电喷雾离子阱质谱联用分析技术,流动相中所加的酸必须是挥发性酸,并采用尽可能低的浓度。在所选择的色谱条件下,保留时间适宜,6种氨基糖甙类抗生素和其中的杂质分离良好,见色谱图a～f。图1硫酸异帕米星(a)、硫酸奈替米星(b)、硫酸西索米星(c)、硫酸阿司米星(d)、盐酸大观霉素(e)和硫酸威替米星(f)的杂质色谱图Fig.1Chromatogramofisepamicinandimpurity(a),netilmicinandimpurity(b)andsisomicinandimpur
8、ity(c),astromicinandimpurity(d),spectinomycinandimpurity(e)andvertil
