高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱法推定硫酸依替米星中有关物质的结构.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第6期2010年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry8l7—822DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．O0817高效液相色谱．电喷雾-离子阱质谱法推定硫酸依替米星中有关物质的结构袁耀佐张玫钱文张正行(江苏省食品药品检验所，南京210008)(中国药科大学药物分析教研室，南京210009)摘要采用高效液相色谱一电喷雾一离子阱质谱法(HPLC—ESI—IT—MS)对硫酸依替米星中有关物质结构进行推定。采用PhenomnexGeminiNXC8色谱柱

2、，以水一氨水一冰醋酸(96：3．6：0．4，)一甲醇(70：30，)为流动相，质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正离子检测模式；离子源温度350℃；雾化氮气压力275．8kPa；干燥氮气流速10L／min；离子阱质谱检测器，Smart扫描模式，扫描质量范围m／z100～900。硫酸依替米星样品中共检出18种有关物质，对其中的13种物质的结构进行了推定，其余5种有关物质的结构未进行解析，只提供了分子量和二级质谱信息。关键词硫酸依替米星；高效液相色谱一电喷雾一离子阱质谱；结构鉴定1引言依替米星(Etimicin)，又称1一N一乙基一庆大霉素C(图1)，

3、是以庆大霉素c为原料，通过络合催化保护氨基、硅烷化保护羟基、缩合一还原型Ⅳ一乙基化等一系列反应，在庆大霉素c。的1一N位上引入乙基C而得】J，具有高效、安全、广谱抗菌、无交叉耐药性等特点J，临床应用主要是硫酸盐，即硫酸依替米星。5硫酸依替米星及其相关物质测定多见报道，包括微生物检定法、柱前衍生化高效液相色谱一紫外检测法(HPLC—uV)J、高效液相色谱一蒸发光散射检测法(HPLC—ELSD)J、高效液相色谱一脉冲电化学H检测法(HPLC—PED)等，但对硫酸依替米星中有关物质的研究报道极少。刘军等对依替米星合成过程中的Ⅳ一乙基化产物3一氮．乙基庆大

4、霉素C和1，3一二一氮一乙基庆大霉素c，(图1)进行了分离和鉴定，但该方法工作量大、实验周期长。采用高效液相色谱质谱联用技术(HPLC—MS)对氨基糖苷类抗生H素中有关物质进行结构推定已有很多报道，对依替米星及其它氨基糖苷类抗生素质谱裂解规律的研究也有相关文献¨j，但采用HPLC—MS对硫酸依替米星中有关物质结构推定的报道鲜见。依替米星Etimicin小诺霉素Micronomicin庆大霉素C1GentamycinC13一氮一乙基庆大霉素Cl3"-N-ethylgentamycinCl1，3"-二一氮一乙基庆大霉素Cl1，3"-N—diethylg

5、entamycinCl中间体PIIntermediatePI图1依替米星及其部分有关物质化学结构Fig．1ChemicalStructuresofEtimicinandsomeofitSrelatedsubstances文献[9～11]中，氨基糖苷类抗生素HPLC—MS分析的流动相均含三氟乙酸或五氟丙酸，由于它们对电喷雾离子化有强抑制作用，检测灵敏度很低。IJi等通过柱后添加丙酸的TFAfix技术”提高了离子化效率，但该技术需要在柱后连接泵系统，操作烦琐。本研究基于文献[18]，建立了适合于Lc—MS分析的流动相。从-~tt有代表性的硫酸依替米星样

6、品中检出l8种有关物质，对其中l3种物质的结2009-07-07收稿；2010-01—27接受E—mail：yuanyaozuo@yahoo．con．cn818分析化学第38卷构进行了推定并参考相关文献和合成工艺佐证推定结果的合理性。2实验部分2．1仪器与试剂1100LC／MSDTrap液质联用仪(美国Agilent公司)。硫酸依替米星(批号：080103，080106，080105，常州方圆制药有限公司)，依替米星、小诺霉素、庆大霉素C对照品(中国药品生物制品检定所)，乙腈(色谱纯)，其余试剂均为分析纯。2．2高效液相色谱及质谱条件GeminiN

7、XC】8色谱柱(150mm×4．6film，5m，美国Phenomnex公司)；以水-氨水一冰醋酸(96：3．6：0．4，v／v)混合液．甲醇(70：30，v／v)为流动相；流速为1mIZmin；柱温为35℃；进样量为20ixL；采用柱后分流模式，分流比为7：3。电喷雾离子源(ESI)，正离子检测模式；离子源温度350℃；雾化氮气压力275．8kPa；干燥氮气流速10L／min；离子阱质谱检测器，Smart扫描模式，扫描范围m／z100～900。3结果与讨论3．1部分对照品及硫酸依替米星样品的LC-MS分析结果分别准确称取依替米星、小诺霉素、庆大霉

8、素c对照品适量，分别用水溶解并稀释制成约0．1g／L溶液，作为对照品溶液；另准确称取硫酸依替米星适量，用水溶解并稀释，制成