沙门氏菌生化鉴定

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1、沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜烦后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌（e.coli）,则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基

2、酸，牛成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖（不能分解乳糖和蔗糖），由于量较少进而分解蛋白腺而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢,24小时培养后还没分解蛋白腺产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般8小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白腺产碱，斜面又转为碱性。2—志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2So4—大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2

3、So3—沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S,多数产气。赖氨酸脱竣酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱竣产生胺类而使培养基由酸变碱，故乂由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。氨基酸脱竣酶试验（1）原理：某些细菌可产生氨基酸脱竣酶使氨基酸脱竣生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。（2）方法：将待检菌分别接种于

4、1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱竣酶试验管和1支氨基酸脱竣酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35°C孵育l~4d,观察结果。（3）结果：若为漠甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。⑷应用：主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌邙日性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌邙日性）和产气肠杆菌（阴性）等。精氨酸双水解酶试验（1）原理：精氨酸经两次水解后，生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱竣酶的作用下生成腐胺

5、。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。（2）方法：将待检菌接种于试验培养上，置35°C孵箱孵育l-4d,观察结果。（3）结果：漠甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(4)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽抱的革兰阴性杆菌。表2进行判定。反应3：补做ONPG。ONPG为阴性，同时赖氨酸脱竣酶为阳性；赖氨酸脱竣酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别