沙门氏菌生化鉴定.doc

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1、沙门氏菌生化试验判定步骤表1三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶初步判断斜面底层产气硫化氢产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑－黄可疑沙门氏菌产酸黄产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是

2、在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继

3、而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄

4、色。氨基酸脱羧酶试验 (1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。 (2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。(4)应用：主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯

5、菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。精氨酸双水解酶试验 (1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。  (2)方法：将待检菌接种于试验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察结果。(3)结果：溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(4)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。表2序号硫

6、化氢（H2S）靛基质尿素酶氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶1＋黑－不变－黄－澄清＋紫2＋黑＋红色环－黄－澄清＋紫3－黄－不变－黄－澄清＋／－（紫/黄）注：＋阳性；－阴性；＋／－阴性或阳性反应1：典型沙门氏菌，如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按表3进行。如有2项异常为非沙门氏菌。表3尿素酶氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶判定结果－黄－澄清－黄甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）－黄＋混浊＋紫沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性）＋红－澄清＋紫沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：＋阳性；－阴性。反应2：补做甘露醇和山梨醇试

7、验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应3：补做ONPG。ONPG为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性；赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别表4项目ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ卫矛醇＋黄动力＋黄动力－绿/蓝无动力－绿/蓝无动力＋黄动力－绿/蓝无动力山梨醇＋黄＋黄＋黄＋黄＋黄－绿/蓝水杨苷－绿/蓝－绿/蓝－绿/蓝＋黄－绿/蓝－绿/蓝ONPG－不变－不变＋黄－不变－不变－不变丙二酸盐－不变/黄＋蓝＋蓝－不变/黄－不变/黄－不变/黄KCN－澄清－澄清－澄清＋混浊＋混浊－

8、澄清注：＋阳性；－阴性。