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1、淋巴细胞培养后主动免疫治疗反复自然流产疗效评价【关键词】淋巴细胞主动免疫反复口然流产反复口然流产(recuiTentspintaneousabortion,RSA)是妇科常见病之一，除遗传、内分泌、感染、自身免疫、解剖I大I素外，80%以上原因不明［1］,成为临床难治性不育症。近年來国内外学者根据Beer等［2］在1981年创立的淋巴细胞主动免疫疗法，对原因不明的反复自然流产(unexplainedrecurrentspontaneousabortion,URSA)患者大胆采用丈夫和无关个体淋巴细胞进行主动免疫治疗，大大提高了URSA的临床诊治水平
2、。2006年3月〜2007年6月，我们运用配偶淋巴细胞培养后皮内注射法对40例URSA患者进行治疗，并观察妊娠预后，取得了较好的治疗效果，现报道如下。对彖与方法1.对象：2006年3月至2007年6月，就诊木院生殖免疫诊疗中心门诊的RSA患者。详细询问病史、经妇科检杳、子宫输卵管造影或宫腔镜检查证实无生殖器器质性病变，内分泌化验正常，体温双相，黄体期不少于12d,H.较平稳，夫妻染色体核型正常，TORCH常规检查无异常，排除血型不合，自身免疫无异常(抗心磷脂抗体、抗核抗体、抗秸子抗体、抗透明带抗体等阴性)，配偶精液常规在正常范围者诊断为URSAo对
3、其符合条件的66例URSA,经征求意见表示愿意参加研究，并签知情同意书，根据患者的自愿分为3组，孕前实行主动免疫治疗(孕前治疗组)20例，确诊妊娠后实行主动免疫治疗(孕后治疗纽)20例，对照组26例。对照组采用黄体酮保守治疗。3组年龄(23〜35岁，平均年龄29岁)、健康状况、流产次数(既往曾发生自然流产2〜10次，平均流产次数3.4次)及流产时间(流产时孕周为5〜12周,平均孕周7周),差异无统计学意义(P>0.05)o2.淋巴细胞的培养：全部采用RSA患者配偶为供血对彖，身体健康，传染病4项止常(甲肝病毒、乙肝病毒、梅毒螺旋体、爱滋病病毒检测阴
4、性)。无菌技术抽取配偶外周抗凝全血30ml,常规川•素抗凝，与等量磷酸缓冲液(phosphatebalancedsolution,PBS)混合，使用Ficoll-Hypaque法密度离心分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)o川RPMI1640培养液洗涤离心2次，加入培养液后置于培养瓶屮于37°C5%CO2培养箱内。培养液配制，每1ml含RPMI1640为0.73ml,其中含重组人γ-干扰素0.05万U/ml,植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)0.02mg/
5、ml,5%小牛血淸(0.2ml)。培养细胞内毒素和细菌培养阴性，酚红染色细胞活率≥85%,培养72h后的细胞再川0.9%氯化钠溶液洗涤2次，调整至细胞数为20〜30×106/ml方可丿IJ于治疗。3.免疫治疗方法：孕前治疗纽20例孕询治疗3次后嘱其妊娠，如3月内未受孕，行输卵管通液，并在排除不育症的情况下重新加强1次主动免疫治疗。妊娠35d加强免疫1次，此后每3周治疗1次。孕后治疗纽20例在确定怀孕后开始主动免疫治疗。2组均每3周给患者双侧前臂皮内多点免疫注射1次，每次每点为0.3〜0.5ml,XL至妊娠14周。课题纽.人员固定，
6、接受木免疫疗法者不接受对该病的其它治疗。对照组26例URSA患者再次妊娠后仅以黄体酮常规保胎药物治疗到妊娠12周停药。4.疗效判断标准：奸娠达28周以上，或分娩正常新牛儿为成功妊娠,再次流产、死胎及新牛儿畸形作为妊娠失败。5.统计学处理：采用SPSS10.0软件进行数据分析，分析方法为χ2检验，PV0.05判定差异有统计学意义。结果4()例URSA患者经配偶淋巴细胞免疫治疗后，29例患者获得了成功妊娠，总的妊娠成功率为72.5%(29/40),其中18例患者已足月分娩,11例已停止治疗且妊娠已超过28周,11例流产。足月分娩的患者中剖宫产率
7、为44.4%(8/18),无妊娠高血压综合征发生，产后出血1例。经免疫治疗后成功妊娠的新生儿中巨大儿1例，未发现畸形儿及胎儿生长受限者。18例新生儿体重为2.6〜4.1kg,平均体垂为3.4kgoll例流产屮2例生化妊娠流产，4例孕40〜50d流产，5例孕8〜12周胚胎停育流产。孕前开始免疫治疗组成功率为80.0%(16/20),孕后开始免疫治疗组成功率为65.0%(13/20),2纽比较，差异无统计学意义(χ2=1.130,P=0.288),常规保胎组妊娠成功率为30.8%(8/26),与免疫治疗孕前和孕后治疗组比较，差异有统计学意义(&
8、chi;21=10.98,P=0.000;χ22=5.34,P=0.020),见表1。表1配偶淋巴细胞免疫治疗再次
