对阿霉素耐药机制的研究

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1、宁夏医科大学学报第39卷2期·144·JournalofNingxiaMedicalUniversity2017年2月文章编号：1674-6309（2017）02-0144-05·论著·RANKL/RANK通路介导人乳腺癌MCF-7细胞株对阿霉素耐药机制的研究122王柚熙，唐振宁，刘奇伦（1.宁夏医科大学,银川750004；2.宁夏医科大学总医院肿瘤医院，银川750004）摘要：目的观察核因子κB活化因子受体（RANK）/核因子κB活化因子受体配体（RANKL）通路对乳腺癌细胞耐药性的影响,并研究其作用机制。方法

2、培养人乳腺癌细胞株MCF-7和人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF7/ADR，用免疫荧光显微技术及Westernblot检测MCF-7及MCF7/ADR中RANK蛋白表达情况；分别用RANKL和RANKL抑制剂人骨保护素（OPG）处理两种细胞，用Westernblot检测乳腺癌干细胞相关乙醛脱氢酶1（ALDH1）蛋白表达情况，CCK-8法检测不同浓度的RANKL与OPG处理后MCF-7细胞在阿霉素作用下的细胞存活率。结果免疫荧光显微技术及Westernblot结果显示，RANK蛋白在MCF7/ADR中的表达较MCF-7

3、均明显增强（P＜0.05）。相同RANKL浓度预处理时，MCF7/ADR中ALDH1蛋白表达均高于MCF-7（P＜0.05）。随着RANKL浓度的增高（0、50、100ng·mL-1），两种细胞中的ALDH1蛋白表达均升高；RANKL100ng·mL-1及OPG500ng·mL-1的共同预处理MCF-7细胞，其ALDH1蛋白的表达明显低于RANKL100ng·mL-1组（P＜0.05）。CCK-8法检测MCF-7细胞在RANKL及OPG预处理后的细胞存活率实验中，在阿霉素浓度为2.5～5μmol·L-1范围内，随

4、着RANKL浓度升高，细胞存活率也随之增高，而RANKL抑制剂OPG可以逆转RANKL的作用（P＞0.05）。结论RANKL/RANK通路参与了乳腺癌耐药过程，其可能通过维持肿瘤干细胞群介导乳腺癌细胞耐药。关键词：RANKL/RANK；乳腺癌；阿霉素；癌症干细胞中图分类号：R737.9文献标识码：ADOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2017.02.007乳腺癌是全球女性发病及死亡最多的恶性ofnuclearfactorκBligand，RANKL）及其受体肿瘤。全球每年新发乳腺癌

5、病例约167.1万，每（RANK）最初是在1997年作为T细胞和树突细[2][3]年约52.2万病人死于乳腺癌，据统计，2000-胞的功能因子和受体被发现，研究已经证实，2011年间我国乳腺癌发病率及死亡率均位居女RANK及其配体RANKL是孕激素信号通路下游[1]性癌症首位。现今，乳腺癌的化学治疗已成为的重要效应器，是其与乳腺癌之间的一个重要关[4]乳腺癌治疗过程中非常重要的一个环节。阿霉素联体。有研究表明，RANKL/RANK系统可通过是一种抗瘤谱较广的细胞毒类药物，在乳腺癌的多种途径导致化学耐药，RANKL

6、干预使多药耐辅助治疗与复发转移后的解救治疗中作为一药基因1（MDR1）等表达增加，且通过RNA沉默线药物被广泛应用。因此，研究乳腺癌对阿霉素技术并不能克服RANKL诱导的耐药性。然而，化疗耐药的机制具有重要的临床指导意义。核因RANKL/RANK通路引起的乳腺癌耐药机制尚不子κB活化因子受体配体（thereceptoractivator明确，本研究通过检测RANK蛋白与乙醛脱氢酶1（ALDH1）蛋白在人乳腺癌敏感株MCF-7及与收稿日期：2016-09-18其同源的耐药株MCF7/ADR中的表达，并观察通基金项目

7、:国家自然科学基金（81360390）；宁夏自然科学基金过RANKL及RANKL抑制剂人骨保护素（OPG）（NZ13161）；宁夏医科大学特殊人才科研启动项目（XT201327）预处理后MCF-7细胞对阿霉素的耐药性，为改作者简介：王柚熙，女，在读硕士研究生，从事乳腺癌肿瘤研究。善乳腺癌化疗效果寻找新途径。E-mail：wyx6537@163.com1材料与方法通信作者：刘奇伦，男，教授，从事乳腺癌肿瘤研究。1.1材料E-mail：liuql6311@hotmail.com唐振宁，男，博士，从事乳腺癌肿瘤研究。人

8、乳腺癌细胞株MCF-7（南京凯基生物有限E-mail：tzhn-331@163.com公司）；人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF7/ADR2期王柚熙，等.RANKL/RANK通路介导人乳腺癌MCF-7细胞株对阿霉素耐药机制的研究·145·（南京凯基生物有限公司）；胎牛血清（美国Gibco白表达：MCF-7及MCF7/ADR细胞均设RANKL-1公司）；DMEM高糖培养基（美国