山茱萸叶片DNA提取方法及ISSR反应体系构建.pdf

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1、第34卷第1期河南林业科技Vo1．34No．120l4年3月JournalofHenanForestryScienceandTechnologyMat"．2014山茱萸叶片DNA提取方法及ISSR反应体系构建董博文，管少花，董卉卉。，赵志浩，李继东(1．河南农业大学，郑州450002；2．信阳市林业科学研究所，河南464031)摘要：山茱萸成熟叶片中多糖及多酚类物质含量较高，传统CTAB法提取其叶片DNA效果较差，该研究在传统的CTAB提取法的基础上进行了改良，经DNA原液电泳检测及PCR产物的电泳检测

2、表明，该法适用于提取硅胶快速干燥保存的山茱萸叶片的DNA。在此基础上，对山茱萸ISSR反应体系中的退火温度、弓l物浓度及模板用量进行了筛选，结果表明，在25L的反应体系中，引物UBC847的最佳退火温度为55．2℃，引物最佳浓度为0．8mol／L，模板最佳用量为70ng，初步构建了山茱萸ISSR反应体系。关键词：山茱萸；DNA提取；ISSR中图分类号：8662．1文献标志码：A文章编号：1003—2630(2014)01—0001—04AMethodforExtractingDNAfr0mMatureL

3、eavesofComusoficinalisandISSRReactingSystemConstructionDONGBo—wen，GUANShao—huaI，DONGtiui—hui。，ZHAOZhi—hao，IAJi—dong(1．tten~tAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2．XinyangForestryScienceRese~wchInstitute，Henan464031，China)Abstract：Cornusoflicimdis

4、isakindofmedicinalplantswithpolysaccharideandpolypheno1．COnventionalCTABIllethodiSuselessforextractingDNAof(==ollicinalis．ThiSstudyireprovedextractionmetIIodbasedontheGonventionalCTABmethod．andlheresultofthespectrophotometry．agarosegelelectrophoresiSandP

5、CRindicatedtheimprovedCTABmethodiSsuitablefortheextractingDNAof(?ofidnalisleafstoredinsilicage1．Basedonthis，theannealingtemperature，theconcentrationofprimerandthedosageofDNAtempl~eisscreened．Al1ourresultssu,~estt

6、hatthe0．8mol／Lprimer，70ngDNAtempleand10I—

7、TaqPCRMasterMixinatotalvolumeof20LweresuitableffISSR—PCRmnplficationsystemofComusoficinalis．rrheopritualvamealingtelnperatureforprimerUBC847iS55．2℃．Keywords：C01111lS(】_f]丘ei¨mis：DNAextraction：ISSR山茱萸，山茱萸科(CoTnaceae)山茱萸属，贵中药材。其药用功效在《神农本草经》、《吴普又名枣皮、山萸肉等，以果

8、实入药，是我国传统名本草》等典籍中均有记载。近几年，山茱萸由于收稿日期：2014—03—15基金项目：国家林业公益性行业科研专项项目(201104047)作者简介：董博文(1989～)，男，安徽阜阳人，硕士研究生，主要从事经济林种质资源收集与评价方面的研究。通讯作者：李继东(1976～)，男，河南南阳人。博士，副教授，主要从事经济林栽培生理与良种选育方面的研究。E—mail：13903868540@139．COIIl2河南林业科技第34卷其药用价值，带来了较高的经济效益，其种质资源离心10rain(12

9、000r／m)，取上清。加入2倍体较为丰富但良莠不齐，利用DNA分子标记，为分积一20℃无水乙醇，一20℃放置30mia，离心，弃上子水平上进行山茱萸的品种选育奠定基础，而进一清。风干后加入700L无菌水溶解，加入700~tL步提高山茱萸的经济效益成为了亟待解决的问题。氯仿：异戊醇(24：1)，充分混合后取上清。再山茱萸成熟叶片中有较高含量的多糖、多酚类次加入2倍体积一20℃无水乙醇，一20℃放置30等杂质，对其DNA提取造成了一定困难，本