外周血淋巴细胞绝对值及亚群和补体C3水平与系统性红斑狼疮疾病的相关研究

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分类号：R446.63学校代码：10114密级：学号：021420732硕士学位论文外周血淋巴细胞绝对值及亚群和补体C3水平与系统性红斑狼疮疾病的相关研究RelatedresearchbetweenperipheralbloodlymphocytecountsandsubsetsandcomplementC3levelinpatientswithsystemiclupuserythematosus研究生：王蕾指导教师：郭存九主任技师专业名称：临床检验诊断学研究方向：风湿性疾病相关检验学位类型：专业学位所在学院：第二临床医学院中国山西二〇一七年四月十四日 分类号：R446.63学校代码：10114密级：学号：021420732外周血淋巴细胞绝对值及亚群和补体C3水平与系统性红斑狼疮疾病的相关研究RelatedresearchbetweenperipheralbloodlymphocytecountsandsubsetsandcomplementC3levelinpatientswithsystemiclupuserythematosus研究生：王蕾指导教师：郭存九主任技师专业名称：临床检验诊断学研究方向：风湿性疾病相关检验学位类型：专业学位所在学院：第二临床医学院中国山西二O一七年四月十四日 学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师郭存九指导下，本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉；4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：日期：年月日指导教师签名：日期：年月日（本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用） 目录中文摘要................................................................................................................................I英文摘要.............................................................................................................................IV常用缩写词中英文对照表................................................................................................VII前言...................................................................................................................................11材料与方法.....................................................................................................................31.1研究对象.................................................................................................................31.2研究方法.................................................................................................................32结果.............................................................................................................................52.1一般资料分析结果.................................................................................................52.2对照组与病例组补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群变化.......................52.3病例组各期补体C3、PBL绝对值及亚群的相关性...........................................52.4SLE疾病活动性与补体C3、PBL绝对值及亚群的相关性................................82.5补体与PBL及其亚群联合诊断SLE重度活动...................................................93讨论............................................................................................................................114结论...........................................................................................................................15参考文献.............................................................................................................................16综述.................................................................................................................................19致谢.................................................................................................................................25个人简历.............................................................................................................................26 山西医科大学硕士学位论文外周血淋巴细胞绝对值及亚群和补体C3水平与系统性红斑狼疮疾病的相关研究摘要目的：本研究旨在探讨血清补体C3和外周血淋巴细胞（peripheralbloodlymphocyte，PBL）绝对值及其亚群与系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus，SLE）疾病活动的相关性，以及各指标单独或联合对SLE患者是否发生重度活动的诊断价值，为临床判断系统性红斑狼疮疾病活动和治疗提供依据。方法：本研究以350例SLE患者为病例组、220例非SLE患者为对照组作为研究对象，收集其临床资料进行回顾性分析，将病例组的疾病活动根据系统性红斑狼疮病活动指数（systemiclupuserythematosusdiseaseactivityindex，SLEDAI）分为4期：静止期、轻度活动、中度活动、重度活动，收集整理所有研究对象的血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群（T细胞、B细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞）等实验室指标数据。运用SPSS23.0统计软件，进行t检验、方差分析、Pearson相关分析；以是否发生重度疾病活动(SLEDAI≥15分)为状态变量，血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群（T细胞、B细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞）为检验变量绘制受试者工作特征曲线（ROC），将病例组与对照组的各项实验室指标进行比较、分析各项实验室指标与SLE疾病活动的相关性，并探讨各指标单独或联合对SLE患者是否发生重度活动的诊断价值。结果：1.与对照组比较，病例组的补体C3水平明显下降（P<0.01），病例组中的静止期、轻度活动、中度活动、重度活动组的补体C3水平各不相同（P<0.01）；病例I 山西医科大学硕士学位论文组外周血淋巴细胞绝对值与对照组相比水平偏低（P<0.01），病例组中的静止期、轻度活动、中度活动、重度活动组的外周血淋巴细胞绝对值各不相同（P<0.05）；病例组与对照组相比，外周血淋巴细胞亚群中总T淋巴细胞、总B淋巴细胞、Th细胞、Ts细胞、Th/Ts比值、NK细胞水平明显下降（P<0.01），病例组中的静止期、轻度活动、中度活动、重度活动组的总T淋巴细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞水平也各不相同（P<0.01），总B淋巴细胞、Th/Ts比值差异无统计学意义（P>0.05）。2.与疾病活动强度呈负线性相关的相关指标有补体C3水平(r=-0.44，P<0.01)、外周血淋巴细胞绝对值(r=-0.24，P<0.05)、总T淋巴细胞（r=-0.298，P<0.01）、Th细胞(r=-0.299，P<0.01)、Ts细胞(r=-0.209，P<0.05)、NK细胞(r=-0.333，P<0.01)、Th/Ts比值(r=-0.24，P<0.05)。3.以是否发生重度疾病活动(SLEDAI≥15分)为状态变量，血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群（T细胞、B细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞）为检验变量绘制受试者工作特征曲线（ROC），得出如下结果：（1）单项指标血清补体C3水平曲线下面积(AUC)为0.711(P<0.01)，截点值为0.37g/L，对应的敏感性为56.52％，特异性为87.67％；外周血淋巴细胞绝对值AUC为90.634(P<0.05)，截点值为0.75×10／L，敏感性为60.87％，特异性为68.57％；总T淋巴细胞AUC为0.714(P<0.01)，截点值为786个／uL，敏感性为69.6％，特异性为69.9％；Th细胞AUC为0.709(P<0.01)，截点值为448个/uL，敏感性为86.96％，特异性为47.95％；Ts细胞结果显示AUC为0.659(P<0.01)，截点值为313个/uL，敏感性为60.87％，特异性为77.78％；NK细胞AUC为0.645(P<0.05)，截点值为54个/uL，敏感性为65.22％，特异性为70.83％；Th/Ts比值AUC为0.652(P<0.05)，截点值为0.58,敏感性为52.17％，特异性为81.94％；（2）联合指标血清补体C3水平与外周血淋巴细胞绝对值联合诊断的AUC为0.744，敏感性为90.5％，特异性为41.8％；外周血淋巴细胞亚群（T细胞、B细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞）联合诊断的AUC为0.771，敏感性为76.2％，特异性为65.7％。II 山西医科大学硕士学位论文所有实验室指标（血清补体C3、外周血淋巴细胞亚群及其绝对值）联合诊断是否发生重度活动的AUC为0.817，敏感性为90.5％，特异性为53.7％；结论：1.与对照组相比，病例组（静止期，轻度活动，中度活动，重度活动）的血清补体C3、PBL绝对值及亚群中的各项指标均明显降低。2.血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值、外周血淋巴细胞亚群中的总T细胞、++-+-+Th细胞（CD3CD4CD8）、Ts细胞（CD3CD4CD8细胞）、NK细胞、Th/Ts分别随着SLEDAI评分的升高而降低，与SLE疾病活动度呈负相关。3.在诊断是否发生SLE重度活动（SLEDAI≥15分）时，单个实验室指标中总T细胞的诊断价值最大；血清补体C3、外周血淋巴细胞亚群及其绝对值所有指标联合的诊断价值最大。关键词：系统性红斑性狼疮；补体C3；外周血淋巴细胞亚群；SLE疾病活动指数III 山西医科大学硕士学位论文RelatedresearchbetweenperipheralbloodlymphocytecountsandsubsetsandcomplementC3levelinpatientswithsystemiclupuserythematosusAbstractObjective:Theaimofthisstudywastoinvestigatethecorrelationbetweenperipheralbloodlymphocytesubsets,serumcomplementC3andsystemiclupuserythematosus,todiagnosetheaccuracyofSLEsevereactivityevents,andtoprovideevidencefortheclinicaldiagnosisandtreatmentofsystemiclupuserythematosusdiseasesevereactivityevents.Methods:Thissubjectcollects350patientswithsystemiclupuserythematosusand220age-andsex-matchednormalhealthycontrolsasthestudyobject.Theclinicaldatawerecollectedandretrospectivelyanalyzed.Thepatientsweredividedintofourgroupsaccordingtothesystemiclupuserythematosusdiseaseactivityindex(SLEDAI)forthestationarygroup,mildactivitygroup,moderateactivitygroup,severeactivitygroup.TheserumcomplementC3,peripheralbloodlymphocytesubsets(Tcells,Bcells,Thcells,Tscells,NKcells)wereselectedfromthestudygroup.Comparedtohealthycontrolgroup,thepatientswithSLEweretreatedwithstatisticalmethods(ttest,varianceanalysis,Pearsonanalysis)toanalyzethecorrelationwithSLEdiseaseactivity.(ROC)curvesweretakenfromtheserumcomplementC3,peripheralbloodlymphocytesubsets(Tcells,Bcells,Thcells,Tscells,NKcells)toinvestigatethediagnosticvalueofthepatientshadsevereactivityinSLEpatients.IV 山西医科大学硕士学位论文Results:1.Comparedwiththehealthycontrolgroup,thelevelofcomplementC3inSLEpatientswassignificantlydecreased(P<0.01),andthelevelsofcomplementC3intherestingstage,mildactivity,moderateactivityandsevereactivitygroupweredifferent(P<0.01).TheabsolutevalueofperipheralbloodlymphocytesinSLEpatientswaslowerthanthatinhealthycontrols(P<0.01).Theperipheralbloodlymphocytesoftherestingstage,mildactivity,moderateactivityandsevereactivitygroupweredifferentinSLEpatients(P<0.05).Comparedwiththehealthycontrolgroup,thetotalTlymphocytes,totalBlymphocytes,Thcells,Tscells,Th/TsintheperipheralbloodlymphocytesubsetsoftheSLEpatientsweredifferent(P<0.05)(P<0.01).ThelevelsoftotalTlymphocytes,Thcells,TscellsandNKcellsintherestingstage,mildactivity,moderateactivityandsevereactivitygroupwerealsosignificantlylowerintheSLEpatientsgroup(P<0.01),totalBlymphocyte,Th/Tsratiowasnotstatisticallysignificant.2.ThenegativecorrelationbetweenthediseaseactivityofSLEandthecomplementC3(r=-0.44，P<0.01),peripheralbloodlymphocyteabsolutevalue(r=-0.24，P<0.05),totalTcell（r=-0.298，P<0.01）,Thcell(r=-0.299，P<0.01),Tscell(r=-0.209，P<0．05),NKcell(r=-0.333，P<0.01),Th/Ts(r=-0.24，P<0.05).3.Totheoccurrenceofseverediseaseactivity(SLEDAI≥15points)asthestatevariables,thereceiveroperatingcharacteristic(ROC)curvewasgeneratedusingthefollowinglaboratoryvariablesastestvariables:theareaunderthecurve(AUC)ofC3complementwas0.711(P<0.01),andthecut-offvaluewas0.37g/L.ThesensitivityandspecificityofC3complementwere56.52%and87.67%,respectively,thelymphocyte9absolutevalueofAUCwas0.634(P<0.05),thecut-offvaluewas0.75×10/L,thesensitivitywas60.87%andthespecificitywas68.57%;thetotalTcellshowedaAUCof0.714(P<0.01)andacut-offvalueof786/uL,withasensitivityof69.6%andaspecificityof69.9%;theAUCofThcellwas0.709(P<0.01),andthecutoffvaluewas448cells/μL.ThesensitivityandspecificityofThcellwere86.96%and47.95%,respectively.TheresultsshowedthattheAUCwas0.659(P<0.01),thecut-offvalueV 山西医科大学硕士学位论文was313/uL,thesensitivityandspecificityofTscellswere60.87%and77.78%respectively.NKcellresultsshowedAUCof0.645(P<0.05),thecut-offvalueof54/uL,thecorrespondingsensitivityof65.22%,specificityof70.83%;Th/TsshowedaAUCof0.652(P<0.05)andacutoffvalueof0.58.ThesensitivityandspecificityoftheTh/Tsratiowere52.17%and81.94%respectively.TheAUCofallthelaboratoryindicatorswas0.817,thespecificsensitivitywas90.5%andthespecificitywas53.7%.TheAUCoftheserumcomplementC3levelandtheabsolutevalueoftheperipheralbloodlymphocyteswere0.744,thespecificsensitivitywas90.5%andthespecificitywas41.8％.TheAUCoftheperipheralbloodlymphocytesubsets(Tcells,Bcells,Thcells,Tscells,NKcells)were0.771,thecorrespondingsensitivitywas76.2%,andthespecificitywas41.8%,Thespecificitywas65.7%.Conclusion：1.Comparedwiththenormalcontrolgroup,thepatientgroup(quiescent,mildactivity,moderateactivity,severeactivity)complementC3,peripheralbloodlymphocyteabsolutevalue,peripheralbloodlymphocytesubpopulationoftheindicatorsaredifferent.2．ThenegativecorrelationbetweenthediseaseactivityofSLEandthecomplementC3,peripheralbloodlymphocyteabsolutevalue,totalTcell,ThcellTscell,NKcell,Th/Ts.WiththeriseofSLEDAIscoredecreased,andSLEdiseaseactivitywasnegativelycorrelated.3.InthediagnosisofSLEsevereactivity(SLEDAI≥15points),thecomprehensivelaboratoryindicators(serumcomplementC3,peripheralbloodlymphocyteabsoluteandsubgroup)diagnosticvalueisthelargest,andasinglelaboratoryindicatorsoftotalTcelldiagnosisisthemostvaluable.Keywords:Systemiclupuserythematosus;ComplementC3;Peripheralbloodlymphocytesubsets;SLEdiseaseactivityindexVI 山西医科大学硕士学位论文常用缩写词中英文对照表英文缩写英文名称中文名称SLESystemiclupuserythematosus系统性红斑狼疮ALAanti—lymphocyteantibody抗淋巴细胞抗体ACRAmericanCollegeofRheumatology美国风湿病协会systemiclupuserythematosusdiseaseactivitySLEDAI系统性红斑狼疮病活动指数indexROCreceiveroperatingcharacteristiccurve受试者工作特征曲线PBLperipheralbloodlymphocyte外周血淋巴细胞BcellbonemarrowdependentlymphocyteB淋巴细胞TcellthymusdependentlymphocyteT淋巴细胞ThcellHelperTcell辅助性T细胞TscellSuppressprTcell抑制性T细胞NKcellnaturalkillercell自然杀伤细胞CTLCytotoxicTlymphocytes细胞毒性T细胞VII 山西医科大学硕士学位论文前言系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）是一种常见的、可累及多系统、多器官的慢性进行性自身免疫性疾病，判断SLE是否处于疾病活动期对指导临床治疗及预后观察具有重要的临床价值。已有临床研究表明处在疾病活动期的大部分SLE患者会出现血清补体系统蛋白异常，其中补体C3降低最为常见。补体是存在于人和动物血清中的一组与免疫有关，并具有酶活性和自我调节作用的糖蛋白，可补充、协助抗体免疫溶菌、溶血作用。补体系统在SLE的发病机制中有[1]着重要作用。有研究显示遗传性缺乏补体C1、C2、C4会致机体易患SLE。SLE患者[2]的补体C1q、C3、C4水平下降与外周血巨噬细胞功能障碍有关。除此之外，低C3水平是血细胞减少和皮肤粘膜损伤的最重要的危险因素，低C3与C4可以预测SLE的复[3]发。文献报道显示，SLE患者中约有50~75%出现低补体血症，同时在狼疮肾炎活动期以及具有血液学表现的早期未治疗的患者中血清补体水平可以急速下降，甚至到低[3,4]于检验系统检验下限无法测量。在重度活动的狼疮患者中约由60％和50％中发现[4]异常降低的C3和C4水平，张晓莉等人指出补体C3水平低于截点值0.57g/L时，SLE[5]更容易处于重度活动状态，其敏感性为78.0％，特异性为64.3％。血液系统的损害是SLE最常见的临床表现之一，文献报道约50%-70%患者在病[6,7]程中出现血液系统损害，其中，淋巴细胞减少发生率可达93%。目前认为抗淋巴细胞抗体（anti—lymphocyteantibody,ALA）是淋巴细胞减少的主要原因。有研究提示淋巴细胞减少与皮疹、浆膜炎、肾脏受累、关节炎、血管炎相关；也有研究表明淋[8,9]巴细胞显著减少是神经精神性狼疮的独立危险因素。李春等人研究发现淋巴细胞[10]减少与SLEDAI评分显著相关。Ustinger与Mirzayan等人发现外周血淋巴细胞减少[11,12]与病情改善、疾病复发有关。+-外周血淋巴细胞亚群主要包括总T淋巴细胞（Tcell,CD3CD19）、总B淋巴细胞-+++（Bcell,CD3CD19）、NK细胞（NKcell,CD16CD56），总T细胞又分为Th细胞（Th++-+-+cell,CD3CD4CD8）、Ts细胞（Tscell,CD3CD4CD8）。SLE是免疫系统疾病，其特征是多克隆B细胞激活、T细胞功能异常，产生多种自身抗体，形成免疫复合物，沉积于血管壁、肾小球和关节，导致Ⅲ型超敏反应并造成全身多系统、多器官的慢性炎1 山西医科大学硕士学位论文[13]症损害。有文献报道，T细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞计数均与SLEDAI呈负相关(P<0.05)；SLE疾病活动期时的B细胞比非活动期组及健康对照组明显增多(P<0.05)。可以证明外周血淋巴细胞亚群除指导治疗、反映预后外，与SLE疾病活动性也息息相关。但未有相关论文对其诊断疾病是否发生重度活动的诊断价值进行报道，故本篇论文要证明补体C3、外周淋巴细胞绝对值及亚群与SLE疾病活动的相关外，对其诊断SLE是否处于重度活动的准确性进行比较。2 山西医科大学硕士学位论文1材料与方法1.1研究对象1.1.1病例组收集2013年1月至2016年10月收治于山西医科大学第二医院350例确诊的SLE住院患者作为病例组，所有患者均符合美国风湿病协会（ACR）1997年修订的SLE分类标准，其中，女性325例，男性25例，男女比例约1:13，年龄31.11±11.50岁。SLE的疾病活动度主要由SLEDAI评分系统判定，其中将SLE患者分为静止期（0～4分）89例、轻度活动（5～9分）93例、中度活动（10～14分）82例、重度活动（≥15分）86例病例。排除标准：SLE患者并发以下疾病之一，不作为本研究的研究对象：（1）其他非SLE的自身免疫性疾病，如干燥综合征、类风湿性关节炎、炎症性肠炎等；（2）各个系统的恶性肿瘤；（3）血液系统疾病或最近4个月输过血的患者；（4）心脑血管疾病，如急性心梗、心绞痛、脑梗死、脑出血。1.1.2对照组从实验室记录中随机选取220例非SLE诊断的正常对照。1.2研究方法1.2.1资料收集通过医生工作站系统、病案室、检验科收集研究对象详细资料，主要内容包括患者的姓名、性别、年龄、临床症状及体征、临床诊断、治疗方案和相应的实验室检查。后者包括血常规、血沉、C反应蛋白、血清补体C3，C4、尿常规、24小时尿蛋白、发热筛查、狼疮系列、PBL绝对值及亚群。1.2.2资料分组根据是否符合ACR在1997年修订的SLE分类标准以及排除标准选出疾病组350例和对照组220例。前者根据SLEDAI评分系统分为静止期（0～4分）89例、轻度活动（5～9分）93例、中度活动（10～14分）82例、重度活动（≥15分）86例。3 山西医科大学硕士学位论文1.2.3数据整理运用MicrosoftExcel软件对病例资料进行数据整理，结果如下：表1-1SLE患者临床基本资料及SLEDAI评分SLE活动分级临床基本资料静止期轻度活动中度活动重度活动（n=89）（n=93）（n=82）（n=86）SLEDAI评分标准0～4分5～9分10～14分≥15分SLEDAI评分值2.95±0.896.88±1.3410.93±1.2618.46±3.55年龄27.84±10.6034.54±10.1332.03±11.7628.88±12.05男女比例1:181:7.671:13.51:20.9狼疮肾炎14（15.73%）46（50.0%）39(47.56%)61(70.93%)关节炎28（31.46%）39（42.39%）20(24.39%)43(50.00%)神经精神狼疮19（21.35%）18（19.57%）19(23.17%)32(37.21%)皮肤病变56（62.92%）64（69.57%）48(58.54%)62(72.09%)血液系统受累32（35.96%）32（34.78%）31(37.80%)46(53.49%)浆膜炎2（2.25%）7（7.61%）11(13.41%)29(33.72%)发热14（15.73%）17（18.48%）17(20.73%)21(24.41%)9淋巴细胞绝对值（×10/L）1.36±0.461.01±0.531.10±0.550.89±0.34抗dsDNA抗体23(25.84%)64(69.57%)57(69.51%)72(83.72%)抗Sm抗体5(5.62%)18(19.57%)14(17.07%)14(16.28%)抗ENA33(37.09%)74(80.43%)54(65.85%)61(70.93%)C30.77±0.210.58±0.190.50±0.210.42±0.25抗磷脂抗体9(10.11%)31(33.69%)11(13.41%)36(41.86%)尿蛋白（尿常规）4(4.49%)17(18.48%)25(30.49%)39(45.35%)CPR3.62±4.098.76±18.9910.74±22.5731.25±77.961.2.4统计分析运用SPSSStatistics23.0软件进行分析，对收集的组别资料分别进行W检验与F检验，以判断所收集数据其是否正态分布及行方差齐，若符合条件则行方差分析，不符则行非参数检验。如方差分析比较结果不同，则行LSD-t检验两两比较；非参数检验比较结果不同，则行Kruskal-Wallis检验。相关分析方法资料若符合正态分布则用Pearson相关，不符则用Spearman秩相关。以是否发生重度疾病活动(SLEDAI≥15分)为状态变量，以与疾病活动相关的实验室指标为检验变量制作受试者工作特征曲线(ROC)。除单个诊断指标外还进行联合诊断，运用SPSS软件先行logistic二元回归后，绘制ROC曲线，比较曲线下面积以及观察截点。4 山西医科大学硕士学位论文2结果2.1一般资料分析结果所有数据经分析后，均符合正态分布、方差齐。2.2对照组与病例组补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群变化与对照组相比，SLE患者组（静止期，轻度活动，中度活动，重度活动）的补体C3、PBL绝对值、PBL亚群（总T淋巴细胞、总B淋巴细胞、Th细胞、Ts细胞、Th/Ts比值、NK细胞）水平明显下降，差异具有统计学意义（P<0.01），结果见表2-1。表2-1SLE疾病组与正常对照组相关实验室指标t检验结果PBL绝对值总T细胞总B细胞Th细胞Ts细胞NK细胞C3（g/L）Th/Ts9（×10/L）（个/uL）（个/uL）（个/uL）（个/uL）（个/uL）对照组1725.68±279.69±885.93±779.44±526.92±1.11±0.252.22±0.661.65±0.53（n=220）412.07113.51226.85221.58258.41病例组929.87±179.32±413.43±465.75±86.14±0.56±0.241.08±0.660.95±0.49（n=350）478.69183.41252.51256.6763.29t值10.899.387.612.498.775.858.638.78P值0.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0002.3病例组各期补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群变化2.3.1血清补体C3水平统计学分析：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相比，差异具有统计学意义（P<0.01）；SLE患者组中静止期组与轻度活动组相比,后者水平偏低（LSD-t=2.76，P<0.01）；静止期组与中度活动组、重度活动组比较水平较高（LSD-t=4.02、LSD-t=4.95，P<0.001），轻度活动组与中度活动组、中度活动组与重度活动组相比无差异（P>0.05），轻度活动组与重度活动组相比差异有统计学意义（LSD-t=2.49，P<0.05），结果见表2-2。5 山西医科大学硕士学位论文表2-2SLE疾病组相关实验室指标方差分析结果淋巴绝对值总T细胞总B细胞Th细胞Ts细胞NK细胞C3（g/L）Th/Ts9（×10/L）（个/uL）（个/uL）（个/uL）（个/uL）（个/uL）静止期2b2d1177.05±279.69±533.86±571.37±133.47±0.77±0.211.36±0.462d2c2c1.13±0.64（n=89）444.88113.51212.02295.2091.94轻度活动3d3d908.52±174.64±386.56±468.13±91.33±0.58±0.191.01±0.533d3d3d0.93±0.45（n=92）457.59119.65232.94266.7659.37中度活动1a4d1d4d988.76±226.28±465.38±464.69±68.31±0.50±0.211.10±0.551d4c1d4b1a3d1.00±0.44（n=82）476.42280.30287.99203.9335.04重度活动1a2c1b2d674.61±137.17±277.65±377.35±64.09±0.42±0.250.89±0.341b2d1b2d1a2d0.76±0.32（n=86）385.59114.96167.55231.3637.20F值9.643.114.470.694.642.056.172.18P值0.0000.0300.0060.5630.0050.1130.0010.0951234注：静止期组轻度活动组中度活动组重度活动组abcdP＜0.001P＜0.01P＜0.05P＞0.052.3.2PBL绝对值的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；静止期组较重度活动组水平偏高（LSD-t=2.75，P<0.01）；静止期组与轻度活动组、静止期与中度活动组、轻度活动组与中度活动组、轻度活动组与重度活动组、中度活动组与重度活动组两两比较差异无统计学意义（P>0.05），可见表2-2。2.3.3PBL亚群总T淋巴细胞的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相比均有差异，差异具有统计学意义（P<0.01）；静止期组与重度活动期结果相比，差异具有统计学意义（LSD-t=3.70，P<0.01）；中度活动组与重度活动组结果相较，差异有统计学意义（LSD-t=2.52，P<0.05）；静止期组与轻度活动组、静止期组与中度活动组、轻度活动组与中度活动组、轻度活动组与重度活动组两两比较差异没有统计学意义（P>0.05），结果见表2-2。2.3.4PBL亚群总B淋巴细胞的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动组、中度活动组、重度活动组相较无差异（P>0.05），结果见表2-2。6 山西医科大学硕士学位论文2.3.5PBL亚群Th细胞的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相比，差异具有统计学意义（P<0.01）；静止期组与轻度活动组相比结果偏高（LSD-t=2.04，P<0.05）；静止期组与重度活动组、中度活动组与重度活动组相比，差异有统计学意义（LSD-t=3.49、LSD-t=2.84，P<0.01）；静止期组与中度活动组、轻度活动组与中度活动组、轻度活动组与重度活动组比较无差异统计学意义（P>0.05），结果见表2-2。2.3.6PBL亚群Ts细胞的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相结果无差异（P>0.05），结果见表2-2。2.3.7PBL亚群NK细胞的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相比均有差异，差异具有统计学意义（P<0.01）；静止期与轻度活动相比偏高（LSD-t=2.34，P<0.05）；静止期组与中度活动组、静止期与重度活动组相比，，差异有统计学意义（LSD-t=3.76、LSD-t=3.82，P<0.001）；轻度活动组与中度活动组、轻度活动组与重度活动组、中度活动组与重度活动组两两比较无差异（P>0.05），结果见表2-2。2.3.8PBL亚群Th/Ts的统计学分析结果：病例组静止期、轻度活动、中度活动、重度活动各组相比无差异（P>0.05），结果见表2-2。7 山西医科大学硕士学位论文2.4SLE疾病活动性与补体C3、PBL绝对值及亚群的相关性从上述结果可以看出补体与PBL绝对值及其亚群随着疾病程度的加重而有相应降低的趋势，因此对其进行Pearson相关。除总B淋巴细胞与疾病活动性无明显相关性外，其余指标均与SLEDAI相关，结果见表2-3。表2-3SLEDAI与补体、PBL绝对值及其亚群相关性与SLEDAI正负相关相关指数rP相关指标补体C3负相关-0.44P＜0.01淋巴细胞负相关-0.24P＜0.05绝对值总T细胞负相关-0.298P＜0.01Th细胞负相关-0.299P＜0.01Ts细胞负相关-0.209P＜0.01NK细胞负相关-0.333P＜0.01Th/Ts负相关-0.266P＜0.018 山西医科大学硕士学位论文2.5补体与外周血淋巴细胞及其亚群联合诊断SLE重度活动（SLEDAI≥15分）的价值以是否发生重度疾病活动(SLEDAI≥15分)为状态变量，以与疾病活动相关的实验室指标为检验变量制作受试者工作特征曲线(ROC)，包括补体C3、PBL绝对值、总T细胞、总B细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞、Th/Ts。图2-1单个指标及组合诊断SLE是否发生重度活动的ROC曲线9 山西医科大学硕士学位论文表2-4各个实验室指标ROC曲线下面积及截点灵敏度特异度95%CI实验室指标AUROCCUTOFF（%）（%）下限上限补体C30.6890.3752.489.60.5430.834淋巴细胞绝对值0.6560.7560.8768.570.5250.786总T细胞0.73178671.468.70.6120.850Th细胞0.71544885.747.80.5990.832Ts细胞0.68131371.462.70.5510.810NK细胞0.64454.573.161.90.5130.775Th/Ts0.6350.58582.147.60.5060.764C3+淋巴细胞绝对值0.744—90.541.80.6250.863C3+总T细胞0.790—76.280.60.6740.906C3+Th细胞0.780—71.474.60.6660.893C3+总T细胞+Th细胞0.788—76.273.10.6760.900外周血淋巴细胞亚群0.771—76.265.70.6650.877所有实验室指标0.817—90.553.70.7260.90810 山西医科大学硕士学位论文3讨论国际上判断SLE疾病活动性主要有以下几个评分系统：医生全面评估（PGA）、英岛狼疮评估组指数（BILAGIndex）、SLE活动性测定（SLAM）、SLE疾病活动性指数（SLEDAI）、欧洲通用狼疮活动性指数（ECLAM）、狼疮活动计算标准（LACC）[14]等。其中，最为广泛应用的为SLEDAI，影响其评分的主要指标有发热、关节痛、皮疹、胸膜炎、脱发、口腔溃疡、心包炎、活动性神经精神症状、蛋白尿、补体降低、抗dsDNA抗体滴度升高、血小板降低。其中补体C3、C4的降低在标准中明确提出。补体为一种炎性介质，它的级联反应是固有免疫中的一部分，主要有三种生理活动：防御微生物感染；在组织内环境稳定的背景下桥接固有免疫与先天性免疫；处置[15]免疫复合物和炎症损伤的产物。其减少或生成障碍也会造成SLE的发生。补体中含量较高的C3在激活补体的3条途径中必不可少，分别为经典途径（CP）、旁路途径（AP）、甘露糖结合凝集素途径（LP）。它们都需激活C3，形成不同的C5转化酶[5]后进行后续反应。有研究指出，在诊断SLE疾病的免疫活动中，补体C3会经CP与AP被消耗，而补体C4只在CP中消耗，故补体血清补体C3水平较补体C4水平下降明显；测定SLE患者治疗前、后血清补体C3、C4水平发现前者水平差异具有统[5,16]计学意义且出院时水平升高，后者并无差异。在评判SLE疾病活动性时测定血清补体C3水平较C4更为灵敏。前面提到SLEDAI评分系统中血清补体C3、C4降低所占2分，但并未对其下降水平进行描述，根据本实验结果显示，血清补体C3水平随着SLE疾病的活动性也存在下降趋势，同时静止期患者的血清C3水平均较轻度活动组、中度活动组、重度活动组偏低；重度活动组也比轻度活动组水平低。可能是在SLE疾病活动期时，机体内免疫活动活跃，血清补体C3大量消耗所致。随着血清补体C3水平的降低，各个系统发生病变的比例也在逐渐升高，如狼疮肾炎、神经精神狼疮、皮肤病变以及血液系统。血清补体C3水平随着SLEDAI评分升高而降低（r=-0.44，P＜0.01），为了确定能有相应的血清补体C3水平，以是否发生重度疾病活动(SLEDAI≥15分)为状态变量，血清补体C3为检验变量，绘制ROC曲线，其截点值为0.37g/L，敏感性为52.4％，特异性为89.6％，为临床医生排除是否发生重度活动性提供参考，以便进行下一步的实验室检查以及相应的治疗方案。11 山西医科大学硕士学位论文值得注意的是血清补体水平的改变或降低对SLE疾病的诊断或活动性并不具有特[4]异性。因为低补体成分也存在于其他免疫复合物介导的疾病，它们作为急性反应期产物，补体成分的减少也可以在细菌感染中发现。这种情况会降低可比性。PBL绝对值在SLE疾病活动期降低已在多项研究中证实，国内外研究也显示相较白细胞，其与SLE疾病活动相关性更好。前言提到神经精神狼疮、皮疹、狼疮肾炎等系统病变发生比例升高与淋巴细胞减少相关，本实验也得到证实。随着SLEDAI评分的升高，淋巴细胞绝对值降低，二者成负相关（r=-0.24，P＜0.05），而PBL亚群主要由T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞等细胞组成。在SLE活动期，除PBL绝对值降低外，其亚群也会出现各自变化。+B淋巴细胞是机体体液免疫的主要参与者，可根据细胞表面是否表达CD5，将其+-分为B1细胞（CD5）和B2细胞（CD5）,前者主要针对内源性抗原产生抗体，在清除异常自身抗原时有重要作用，而后者主要针对外源性抗原产生抗体。大量研究表明在[17][13]SLE中B淋巴细胞大多功能亢进，产生大量自身抗体进行自身免疫活动。有报道指出SLE疾病组的B淋巴细胞水平高于正常对照组（P＜0.01），SLE疾病活动组的B淋[18]巴细胞也高于缓解组（P＜0.01）。也有文献结果显示，活动期SLE患者组B淋巴细胞明显减少，缓解组与正常对照组无差异。本实验表明对照组的B淋巴细胞水平比SLE患者组偏高，病例组中的静止期、轻度活动、中度活动、重度活动四组之间差异无统计学意义。外周血B淋巴细胞与SLEDAI评分无明显相关性。此等现象可能有药物治疗所致，毕竟其中有一部分患者属于复发患者，除此之外也可能是出现浆母细胞分化[19]和B细胞组织或骨髓归巢，目前B淋巴细胞在SLE疾病活动期减少的具体机制尚未有研究报道，但研究仍在继续。T淋巴细胞主要参与机体进行的细胞免疫，以表达CD3、CD4、CD8分为Th细胞++-+-+++-（CD3CD4CD8）和Ts细胞（CD3CD4CD8）。Th细胞（CD3CD4CD8）为辅助性T细胞，主要辅助B淋巴细胞产生抗体以及巨噬细胞活化，对体液免疫与细胞免疫+-+有重要作用；Ts细胞（CD3CD4CD8）为抑制性T细胞，可抑制T细胞活跃、B细胞[20]产生抗体以及细胞毒作用，抑制体液及细胞免疫。因此，Th细胞与Ts细胞之间的相互制约与平衡对机体的免疫应答有重要的调节作用。曾有文献对于SLE疾病活动期[21]++-中的T淋巴细胞亚群的报道有不同的，之前有研究指出Th细胞（CD3CD4CD8）、+++-Th/Ts细胞（CD4细胞/CD8细胞）在SLE疾病活动期比例升高，而Ts细胞（CD3CD412 山西医科大学硕士学位论文+[22]+CD8）比例或差异无差异，或降低，或升高。本研究显示T细胞（CD3细胞）、Th++-+-++细胞（CD3CD4CD8细胞）、Ts细胞（CD3CD4CD8细胞）、Th细胞/Ts细胞（CD4+细胞/CD8细胞）随着SLEDAI评分升高而降低，呈负相关，且与对照组水平相比差异也具有统计学意义。[23,24]Th细胞亚群可分泌不同种类的细胞因子，如γ干扰素(IFN-γ)参加细胞免疫；IL-4、IL-5和IL-13参加体液免疫；IL-17，IL-21，IL-22和IL-6参与协调组织炎症，同时也有研究表示这些细胞因子在SLE中也有致病作用；IL-10、TGF-β可能参与自身免[25]++-疫性疾病的发展。有报道指出，Th细胞（CD3CD4CD8）异常凋亡在SLE疾病进展中起着重要作用，并与自身抗体的形成有密切关联，主要是通过细胞接触或炎症因子作用于靶细胞或靶器官。本研究结果可能是因在SLE疾病活动期产生大量自身抗++-体，经由不同途径进入淋巴细胞，致使细胞周期紊乱，致使Th细胞（CD3CD4CD8）凋亡，细胞数量减少。此外在SLE患者中因血细胞凋亡产物增加导致核小体释放增多，致敏自身反应性T细胞生成并活化B细胞，两者联合作用进一步使狼疮活动、细[26][8]胞凋亡加重，形成恶性循环。文献报道SLE患者体内淋巴细胞凋亡致淋巴细胞数量减少，以及多脏器受累外，还与与SLE疾病活动度评分显著相关，与本研究的结果以及相应临床症状一致。除此之外，Th细胞减少还是是SLE患者预后不良的重要原因之一。[27-29]+有研究表明狼疮小鼠体内的细胞毒性CD8T细胞（CTL）活性缺陷及CTL+主要杀伤途径缺失致使SLE疾病会加速。CD8T细胞能够促进或预防自身免疫性疾+病，SLE中的CTL应答总被报道为有缺陷，但是CD8T细胞在SLE中的作用还没有明[30]+确。有报道发现SLE外周血的CD8T细胞亚群有所改变，其中效应记忆T细胞的数目减少，此类细胞亚群主要是产生效应细胞因子如IFNγ，并可在抗原攻击下迅速转化为细胞毒性细胞，此亚群在微生物感染时会出现快速反应；外周血中心记忆T细胞在SLE疾病活动期也会减少，中心记忆T细胞主要在淋巴结，其主要作用是增殖并在抗原刺激后产生效应细胞。虽然在目前此类分布及数量减少的原因不明，但其比正常对+-+照组的Ts细胞数量减少，与本研究结果一致，且Ts细胞（CD3CD4CD8细胞）与+-+SLEDAI评分呈负相关，说明在某种程度上Ts细胞（CD3CD4CD8细胞）在判断疾病活动度方面也有一定的临床意义。本研究示病例组NK细胞较对照组水平偏低，差异具有统计学意义（P＜0.05），13 山西医科大学硕士学位论文且随着SLEDAI评分的升高而降低，与近来研究结果相近。NK细胞是体内非特异性免疫效应细胞，对多种细胞如T、B淋巴细胞具有调节作用，是针对感染和肿瘤的先天[31]免疫反应中的重要效应细胞。NK细胞减少，对T、B淋巴细胞免疫调节作用减弱，同时T淋巴细胞、B淋巴细胞也出现功能紊乱及数量变化，二者共同作用，产生临床症状及体征以及实验室检查的变化。以血清补体C3、外周血淋巴细胞亚群为指标绘制ROC曲线，其中曲线下面积由+++-+大到小分别是总T细胞（CD3）﹥Th细胞（CD3CD4CD8）﹥补体C3﹥Ts细胞（CD3-+CD4CD8细胞）﹥PBL绝对值﹥NK细胞﹥Th/Ts。其中，AUC﹥0.7有总T细胞+++-（CD3）、Th细胞（CD3CD4CD8）两个指标，其灵敏度、特异度及截点值已在表2-4中描述，此不在赘述。对实验室指标进行组合以联合诊断SLE是否发生重度活动此时AUC由大到小分别是所有实验室指标（包括外周血淋巴细胞绝对值及亚群、血++清补体C3）﹥血清补体C3与总T细胞（CD3）﹥血清补体C3与总T细胞（CD3）++-++-以及Th细胞（CD3CD4CD8）﹥血清补体C3与Th细胞（CD3CD4CD8）﹥PBL+亚群﹥血清补体C3与外周血淋巴细胞绝对值﹥总T细胞（CD3）。结果联合实验室指标诊断SLE是否发生中重度活动的诊断价值高于单个实验室指标，同时外周血淋巴细胞绝对值及亚群与补体C3的联合诊断价值最高。总之，血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及其亚群联合检测对于SLE是否发生中重度活动具有一定的诊断价值，可作为SLEDAI评价疾病活动性的实验室依据。14 山西医科大学硕士学位论文4结论1.与对照组相比，病例组（静止期，轻度活动，中度活动，重度活动）的血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值、外周血淋巴细胞亚群中的各项指标均有不同。2.血清补体C3、外周血淋巴细胞绝对值、外周血淋巴细胞亚群中的总T细胞、++-+-+Th细胞（CD3CD4CD8细胞）、Ts细胞（CD3CD4CD8细胞）、NK细胞、Th/Ts分别随着SLEDAI评分的升高而降低，与SLE疾病活动度呈负相关。3.在诊断是否发生SLE重度活动（SLEDAI≥15分）时，单个实验室指标中总T细胞的诊断价值最大；血清补体C3、外周血淋巴细胞亚群其及绝对值所有指标联合的诊断价值最大。15 山西医科大学硕士学位论文参考文献[1]Kallel-SellamiM,Baili-KlilaL,ZerzeriY,LaadharL,BlouinJ,AbdelmoulaMS,ZitouniM,Fremeaux-BacchiV,DridiMFB,MakniS.PediatricSystemicLupusErythematosuswithC1qDeficiency[J].AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,2007,1108(1):193-196.[2]李娟,张卓莉.补体系统与系统性红斑狼疮相关性研究进展[J].中华风湿病学杂志,2013,17(6):424-426.[3]袁风红,孙凌云,潘文友.系统性红斑狼疮患者补体C3变化及临床意义探讨[J].中华风湿病学杂志,2012,16(9):611-615.[4]BiesenR,RoseT,HoyerBF,AlexanderT,HiepeF.Autoantibodies,complementandtypeIinterferonasbiomarkersforpersonalizedmedicineinSLE[J].Lupus,2016,25(8):823-829.[5]张晓莉,徐胜前,蔡静.补体C3水平与系统性红斑狼疮疾病活动强度的关系研究[J].中华全科医师杂志,2016,15(5):375-378.[6]张学增,张育,孙凌云,邹耀红,潘文友,王向党,潘解萍,张缪佳,谭魁麟,李晶,陈志伟,丁翔,钱先,达展云,陶娟,王美美.系统性红斑狼疮血液系统损害与疾病预后分析[J].中华风湿病学杂志,2011,15(2):101-104.[7]NgWL,ChuCM,WuAKL,ChengVCC,YuenKY.Lymphopeniaatpresentationisassociatedwithincreasedriskofinfectionsinpatientswithsystemiclupuserythematosus[J].QJMed,2006,99(1):37-47．[8]YuHH,WangLC,LeeJH,LeeCC,YangYH,ChiangBL.Lymphopeniaisassociatedwithneuropsyehiatricmanifestationsanddiseaseactivityinpaediatricsystemiclupuserythematosuspatients[J].Bheumatology,2007,46(9):1492-1494.[9]RivereSJ,Diaz-JouanenE,Alarcon-SegoviaD.Lyrnphopeniainsystemiclupuserythematosus:clinical,diagnostic,andprognosticsignificance[J].ArthritisPmeum,1978,21(3):295-305．[10]李春,路晓燕,李晶,何菁,叶华,穆荣,栗占国.淋巴细胞减少及抗淋巴细胞抗体在系统性红斑狼疮中的分布及意义[J].中华风湿病学杂志,2009,13(5):316-319.[11]UtsingerPD.Relationshipoflymphocytotoxicantibodiestolymphopeniaandparametersofdiseaseactivityinsystermiclupuserythematosus[J].JRheumatol,1976,3(2)：175-185.[12]MirzayanMJ,SchmidtRE,WitteT.Prognosticparametersforflareinsystemiclupuserythematosus[J].Rheumatology(Oxford),2000,39(12):1316-1319．[13]杨宇峰,朱剑,晋丽,车国柱,靳志勇,孙慧萍,靳雪琴,陈伟华,李小峰.系统性红斑狼疮16 山西医科大学硕士学位论文380例外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义[J].解放军医药杂志,2015,27(5):69-72.[14]程文静,李亚萍,陆前进.系统性红斑狼疮活动性评价新进展[J].国际皮肤性病学杂志,2012,38(4):224-227.[15]GarabetL,GilboeIM,MowinckelMC,JacobsenAF,MollnesTE,SandsetPM,JacobsenEM.AntiphospholipidAntibodiesareAssociatedwithLowLevelsofComplementC3andC4inPatientswithSystemicLupusErythematosus[J].ScandJImmunol,2016,82(2):95-99.[16]郑文军,林有坤,刘京平.系统性红斑狼疮患者C3、C4水平与病情活动的关系[J].临床皮肤科杂志,2008,37(1):26-27.[17]张丽君,李博,钟力,汪迅,李剑松,庄俊汉,叶志中.系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞亚群与体液免疫功能的研究[J].中华风湿病学杂志,2005,9(1):45-47.[18]张德杰,向阳,黄世林.73例系统性红斑狼疮患者淋巴细胞亚群分析[J].检验医学与临床,2012,9(4):427,430.[19]KorganowAS,KnappAM,Nehme-SchusterH,Soulas-SprauelP,PoindronV,PasqualiJL,MartinT.PeripheralBcellabnormalitiesinpatientswithsystemiclupuserythematosusinquiescentphase:DecreasedmemoryBcellsandmembraneCD19expression[J].JournalofAutoimmunity,2010,34(4):426-434.[20]任娜,赵威,邱广斌.系统性红斑狼疮患者的外周血淋巴细胞亚群结果分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(20):2449-2451.[21]RaziuddinS,NurMA,AlwabelAA.IncreasedcirculatingHLA-DR+CD4+Tcellsinsystemiclupuserythematosus:olterationsassociatedwithprednisolonetherapy[J].ScandJImmunol,1990,1(2):139-145．[22]吴文冰,林一,陈雯.系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群分析[J].实验与检验医学,2014,32(2):1674-1129.[23]车国柱,茹晋丽.Th1/Th2及Th17/Treg平衡在系统性红斑狼疮患者治疗前后变化的研究.[硕士学位论文].山西太原:山西医科大学,2015:1-34.[24]TalaataRM,MohamedaSF,BassyounibIH,RaoufcAA.Th1/Th2/Th17/Tregcytokineimbalanceinsystemiclupuserythematosus(SLE)patients:Correlationwithdiseaseactivity[J].Cytokine,2015,72(2):146-153.[25]NowakEC,NoelleRJ.Interleukin-9asaThelpertype17cytokine[J].Immunology,2010,131(2):169-173.[26]刘树锋,张北平,王海,谭校.106例系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群分析与疾病活动相关性研究[J].中外医学研究,2014,12(18):45-46.[27]StohlW.ImpairedpolyclonalTcellcytolyticactivity.Apossibleriskfactorforsystemiclupuserythematosus[J].ArthritisRheum,1995,38(4):506-16.17 山西医科大学硕士学位论文[28]CohenPL,EisenbergRA.Lprandgld:singlegenemodelsofsystemicautoimmunityandlymphoproliferativedisease[J].AnnuRevImmunol,1991,9:243-269.[29]PengSL,MoslehiJ,RobertME,CraftJ.Perforinprotectsagainstautoimmunityinlupus-pronemice[J].JournalOfImmunology,1998,160(2):652-660.[30]ComteD,KarampetsouMP,YoshidaN,Kis-TothK,KyttarisVC,TsokosGC.SLAMF7engagementrestoresdefectiveeffectorCD8+Tcellsactivityinresponsetoforeignantigensinsystemiclupuserythematosus[J].ArthritisRheumatol,2017,doi:10.1002/art.40038.[31]LinSJ,ChenJY,KuoML,HsiaoHS,LeePT,HuangJL.EffectofInterleukin-15onCD11b,CD54,andCD62LExpressiononNaturalKillerCellandNaturalKillerT-LikeCellsinSystemicLupusErythematosus[J].MediatorsofInflammation,2016,(2016-10-26),2016,2016(1):1-8.18 山西医科大学硕士学位论文综述系统性红斑狼疮与补体C3、外周血淋巴细胞绝对值及亚群之间相关性系统性红斑狼疮（SLE）是系统性炎症性自身免疫疾病，其特征在于对核组分的耐受性丧失，导致丰富的自身抗体产生和免疫复合物形成。SLE最终导致多器官和多系统损伤，包括皮肤，关节，血管，肾脏和中枢神经等不同系统的损伤。根据各个系统损伤出现的相应症状体征以及实验室检查综合评判SLE患者是否处于疾病活动期，这对于指导临床治疗以及提示疾病预后起到至关重要的作用。对于狼疮疾病活动性的评价在初发年轻患者中较易做出准确评价，因为这部分绝大部分症状是由于疾病本身引起。而大部分患者因有累积性损伤、或大量并发症以及药物作用（潜在副作用）。即便是经验丰富的狼疮专家，可能也较难区分狼疮以及非[1]狼疮的临床症状。国际上用于判定SLE疾病活动性的主要有以下几个评分系统：医生全面评估(PGA)、英岛狼疮评估组指数(BILAGIndex)、SLE活动性测定(SLAM)、SLE疾病活动性指数(SLEDAI)、欧洲通用狼疮活动性指数（ECLAM）、狼疮活动计算标准(LACC)等，其中SLEDAI在国内较为常用，血清补体C3、C4的降低也包含在内。补体是存在于人和动物血清中的一组与免疫有关，并具有酶活性和自我调节作用的糖蛋白。其级联反应是固有免疫中的一部分，主要有三种生理活动：防御微生物感染；在组织内环境稳定的背景下桥接固有免疫与先天性免疫，并且处置免疫复合物和[2]炎症损伤的产物。机体内存在大量的补体成分，其中，C3，C4，C1q和C5，以及CH50（总溶血补体活性）在临床实践评估中最常运用。补体中含量较高的C3在激活补体的3条途径中必不可少，分别为经典途径(CP)、旁路途径(AP)、甘露糖结合凝集[3]素途径(LP)。它们都需激活C3，形成不同的C5转化酶后进行后续反应。有研究指出，在诊断SLE疾病的免疫活动中，补体C3会经CP与AP被消耗，而补体C4只在CP中消耗，故补体血清补体C3水平较补体C4水平下降明显；测定SLE患者治疗前、后血清补体C3、C4水平发现前者水平差异具有统计学差异且出院时水平升高，后者[3,4]并无差异。在评判SLE疾病活动性时测定血清补体C3水平较C4更为灵敏。文献报道显示，SLE患者中约有50~75%出现低补体血症，同时在狼疮肾炎活动19 山西医科大学硕士学位论文期以及具有血液学表现的早期未治疗的患者中血清补体水平可以急速下降，甚至到低[5,6]于检验系统检验下限无法测量。在重度活动的狼疮患者中约由60％和50％中发现[6]异常降低的血清补体C3和C4水平，张晓莉等人指出补体C3水平低于截点值0.57[4]g/L时，SLE更容易处于重度活动状态，其敏感性为78.0％，特异性为64.3％[6]值得注意的是血清补体水平的改变或降低并不能对SLE疾病的诊断或活动性有特异性。因为低补体成分也存在于其他免疫复合物介导的疾病，它们作为急性反应期产物，补体成分的降低也可以在细菌感染中发现。这种情况会降低可比性。血液系统的损害是SLE最常见的临床表现之一，文献报道约50%-70%患者在病程[7,8]中出现血液系统损害，其中，外周血淋巴细胞（PBL）减少发生率可达93%。目前认为抗淋巴细胞抗体（anti—lymphocyteantibody，ALA）是淋巴细胞减少的主要原因。有研究提示淋巴细胞减少与皮疹、浆膜炎、肾脏受累、关节炎、血管炎相关；也有研[9,10]究表明淋巴细胞显著减少是神经精神性狼疮的独立危险因素。李春等人研究发现[11]PBL减少与SLEDAI评分显著相关。Ustinger与Mirzayan等人发现PBL减少与病情改[12,13]善、疾病复发有关。+-外周血淋巴细胞亚群主要包括总T淋巴细胞（Tcell，CD3CD19）、总B淋巴细胞-++（Bcell，CD3CD19）、NK细胞（NKcell，CD16），总T细胞又分为Th细胞（Thcell，++-+-+CD3CD4CD8）、Ts细胞（Tscell，CD3CD4CD8）。+B淋巴细胞是机体体液免疫的主要参与者，可根据细胞表面是否表达CD5，将其+-分为B1细胞（CD5）和B2细胞（CD5）,前者主要针对内源性抗原产生抗体，在清除异常自身抗原时有重要作用，而后者主要针对外源性抗原产生抗体。大量研究表明在[14][15]SLE中B淋巴细胞大多功能亢进，产生大量自身抗体进行自身免疫活动。有报道指出SLE疾病组的B淋巴细胞水平高于正常对照组（P＜0.01），SLE疾病活动组的B细[16]胞也高于缓解组（P＜0.01）。也有文献结果显示，活动期SLE患者组B淋巴细胞明显减少，缓解组与正常对照组差异无统计学意义。T淋巴细胞主要参与机体进行的细胞免疫，以表达CD3、CD4、CD8分为Th细胞++-+-+++-（CD3CD4CD8）和Ts细胞（CD3CD4CD8）。Th细胞（CD3CD4CD8）为辅助性T细胞，主要辅助B淋巴细胞产生抗体以及巨噬细胞活化，对体液免疫与细胞免疫+-+有重要作用；Ts细胞（CD3CD4CD8）为抑制性T细胞，可抑制T细胞活跃、B细胞[17]产生抗体以及细胞毒作用，抑制体液及细胞免疫。因此，Th细胞与Ts细胞之间的20 山西医科大学硕士学位论文相互制约与平衡对机体的免疫应答有重要的调节作用。曾有文献对于SLE疾病活动期[18]++-中的T淋巴细胞亚群的报道有不同的，之前有研究指出Th细胞（CD3CD4CD8）、+++Thcell/Tscell（CD4细胞/CD8细胞）在SLE疾病活动期比例升高，而Ts细胞（CD3-+[19]CD4CD8）比例或差异无统计学意义，或降低，或升高。[20,21]Th细胞亚群可分泌不同种类的细胞因子，如γ干扰素(IFN-γ)参加细胞免疫；IL-4、IL-5和IL-13参加体液免疫；IL-17，IL-21，IL-22和IL-6参与协调组织炎症，同时也有研究表示这些细胞因子在SLE中也有致病作用；IL-10、TGF-β可能参与自身免[21]++-疫疾病的发展。有报道指出，Th细胞（CD3CD4CD8）异常凋亡在SLE疾病进展中有着重要作用，并与自身抗体的形成有密切关联，主要是通过细胞接触或炎症因子作用于靶细胞或靶器官。在SLE患者中因血细胞凋亡产物增加导致核小体释放增多，致敏自身反应性T细胞生成并活化B细胞，两者联合作用进一步使狼疮活动、细胞凋[22][9]亡加重，形成恶性循环。文献报道SLE患者体内淋巴细胞凋亡致淋巴细胞减少和脏器受累相关，与SLE疾病活动度评分显著相关。[24-26]+有研究表明狼疮小鼠体内的细胞毒性CD8T细胞（CTL）活性缺陷及CTL主+要杀伤途径缺失导致疾病会加速。CD8T细胞能够促进或预防自身免疫性疾病，事实+上SLE中的细胞毒性细胞应答总被报道为有缺陷，但CD8T细胞在SLE中的作用还没[27]+有明确。有报道发现SLE外周血的CD8T细胞亚群有所改变，其中效应记忆T细胞的数目减少，此类细胞亚群主要是产生效应细胞因子如IFNγ，可在抗原攻击下迅速转化为细胞毒性细胞，此亚群在微生物感染时会出现快速反应；外周血中心记忆T细胞在SLE疾病活动期也会减少，中心记忆T细胞主要在淋巴结，其主要作用是增殖并在抗原刺激后产生效应细胞NK细胞是体内非特异性免疫效应细胞，对多种细胞如T、B淋巴细胞具有调节[28]作用，是针对感染和肿瘤的先天免疫反应中的重要效应细胞。NK细胞减少，对T、B淋巴细胞免疫调节作用减弱，同时T淋巴细胞、B淋巴细胞也出现功能紊乱及数量变化，二者共同作用，产生临床症状及体征以及实验室检查的变化。综上所述，血清补体C3水平、外周血淋巴细胞绝对值亚群与SLE疾病活动程度息息相关，虽然目前具体机制尚未明了，但相关研究逐渐深入，希望在不久的将来血清补体C3水平、外周血淋巴细胞亚群能更好的为临床服务，为治疗、预后提供更切实的依据。21 山西医科大学硕士学位论文参考文献：[1]程文静,李亚萍,陆前进.系统性红斑狼疮活动性评价新进展[J].国际皮肤性病学杂志,2012,38(4):224-227.[2]GarabetL,GilboeIM,MowinckelMC,JacobsenAF,MollnesTE,SandsetPM,JacobsenEM.AntiphospholipidAntibodiesareAssociatedwithLowLevelsofComplementC3andC4inPatientswithSystemicLupusErythematosus[J].ScandJImmunol,2016,82(2):95-99.[3]张晓莉,徐胜前,蔡静.补体C3水平与系统性红斑狼疮疾病活动强度的关系研究[J].中华全科医师杂志,2016,15(5):375-378.[4]郑文军,林有坤,刘京平.系统性红斑狼疮患者C3、C4水平与病情活动的关系[J].临床皮肤科杂志,2008,37(1):26-27．[5]袁风红,孙凌云,潘文友.系统性红斑狼疮患者补体C3变化及临床意义探讨[J].中华风湿病学杂志,2012,16(9):611-615.[6]BiesenR,RoseT,HoyerBF,AlexanderT,HiepeF.Autoantibodies,complementandtypeIinterferonasbiomarkersforpersonalizedmedicineinSLE[J].Lupus,2016,25(8):823-829.[7]张学增,张育,孙凌云,邹耀红,潘文友,王向党,潘解萍,张缪佳,谭魁麟,李晶,陈志伟,丁翔,钱先,达展云,陶娟,王美美.系统性红斑狼疮血液系统损害与疾病预后分析[J].中华风湿病学杂志,2011,15(2):101-104.[8]NgWL,ChuCM,WuAKL,ChengVCC,YuenKY.Lymphopeniaatpresentationisassociatedwithincreasedriskofinfectionsinpatientswithsystemiclupuserythematosus[J].QJMed,2006,99(1):37-47．[9]YuHH,WangLC,LeeJH,LeeCC,YangYH,ChiangBL.Lymphopeniaisassociatedwithneuropsyehiatricmanifestationsanddiseaseactivityinpaediatricsystemiclupuserythematosuspatients[J].Bheumatology,2007,46(9):1492-1494.[10]RivereSJ,Diaz-JouanenE,Alarcon-SegoviaD.Lyrnphopeniainsystemiclupuserythematosus：clinical，diagnostic,andprognosticsignificance[J].ArthritisPmeum,1978,21(3):295-305．[11]李春,路晓燕,李晶,何菁,叶华,穆荣,栗占国.淋巴细胞减少及抗淋巴细胞抗体在系统性红斑狼疮中的分布及意义[J].中华风湿病学杂志,2009,13(5):316-319.[12]UtsingerPD.Relationshipoflymphocytotoxicantibodiestolymphopeniaandparametersofdiseaseactivityinsystermiclupuserythematosus[J].JRheumatol,1976,3(2)：175-185.22 山西医科大学硕士学位论文[13]MirzayanMJ,SchmidtRE,WitteT.Prognosticparametersforflareinsystemiclupuserythematosus[J].Rheumatology(Oxford),2000,39(12):1316-1319．[14]张丽君,李博,钟力,汪迅,李剑松,庄俊汉,叶志中.系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞亚群与体液免疫功能的研究[J].中华风湿病学杂志,2005,9(1):45-47.[15]杨宇峰,朱剑,晋丽,车国柱,靳志勇,孙慧萍,靳雪琴,陈伟华,李小峰.系统性红斑狼疮380例外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义[J].解放军医药杂志,2015,27(5):69-72.[16]张德杰,向阳,黄世林.73例系统性红斑狼疮患者淋巴细胞亚群分析[J].检验医学与临床,2012,9(4):427,430.[17]任娜,赵威,邱广斌.系统性红斑狼疮患者的外周血淋巴细胞亚群结果分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(20):2449-2451.[18]RaziuddinS,NurMA,AlwabelAA.IncreasedcirculatingHLA-DR+CD4+Tcellsinsystemiclupuserythematosus:olterationsassociatedwithprednisolonetherapy[J].ScandJImmunol,1990,1(2):139-145．[19]吴文冰,林一,陈雯.系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群分析[J].实验与检验医学,2014,32(2):1674-1129.[20]车国柱,茹晋丽.Th1/Th2及Th17/Treg平衡在系统性红斑狼疮患者治疗前后变化的研究[硕士学位论文].山西太原:山西医科大学,2015:1-34.[21]TalaataRM,MohamedaSF,BassyounibIH,RaoufcAA.Th1/Th2/Th17/Tregcytokineimbalanceinsystemiclupuserythematosus(SLE)patients:Correlationwithdiseaseactivity[J].Cytokine,2015,72(2):146-153.[22]NowakEC,NoelleRJ.Interleukin-9asaThelpertype17cytokine[J].Immunology,2010,131(2):169-173.[23]刘树锋,张北平,王海,谭校.106例系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群分析与疾病活动相关性研究[J].中外医学研究,2014,12(18):45-46.[24]StohlW.ImpairedpolyclonalTcellcytolyticactivity.Apossibleriskfactorforsystemiclupuserythematosus[J].ArthritisRheum,1995,38(4):506-16.[25]CohenPL,RAEisenberg.Lprandgld:singlegenemodelsofsystemicautoimmunityandlymphoproliferativedisease[J].AnnuRevImmunol,1991,9:243-269.[26]PengSL,MoslehiJ,RobertME,CraftJ.Perforinprotectsagainstautoimmunityinlupus-pronemice[J].JournalOfImmunology,1998,160(2):652-660.[27]ComteD,KarampetsouMP,YoshidaN,Kis-TothK,KyttarisVC,TsokosGC.SLAMF7engagementrestoresdefectiveeffectorCD8+Tcellsactivityinresponsetoforeignantigensinsystemiclupuserythematosus[J].ArthritisRheumatol,2017,doi:10.1002/art.40038.[28]LinSJ,ChenJY,KuoML,HsiaoHS,LeePT,HuangJL.EffectofInterleukin-15onCD11b,CD54,andCD62LExpressiononNaturalKillerCellandNaturalKillerT-Like23 山西医科大学硕士学位论文CellsinSystemicLupusErythematosus[J].MediatorsofInflammation,2016,(2016-10-26),2016,2016(1):1-8.24 山西医科大学硕士学位论文致谢时光荏苒,白驹过隙。转眼间三年逝去，三年前的我与今日的我在思想、生活、甚至学习上都有了质的飞跃。在这里我由衷的从内心感谢我的导师郭存九主任，在学习上，他认真指导，因材施教，让我明白用严谨的态度努力学习；在工作上，他以身作则、早出晚归，教会了我要对待每一位患者或标本负责；在他的教导下，我受益良多，真心祝愿郭存九主任今后身体健康，万事顺心。同时，我还要感谢朱爱萍老师，她于百忙之中为我悉心指导，帮我解决很多学习上的问题，让我受益匪浅。衷心感谢内基实验室的杨波老师以及本科室的所有老师，在你们的身上我看到了敢于寂寞，努力工作，对每一位患者都认真负责的工作态度。由衷感谢微生物实验室张老师以及本科室的所有老师，她们的言传身教让我对微生物学的相关知识有了深刻了解，受益良多。同时也要感谢检验科、病理科、心内科、内分泌科的各位老师，谢谢你们的我轮转学习时对我倾囊传授，让我对临床与检验之间的关系有了更为深刻地认识。谢谢所有帮过我的同学以及朋友！好人一生平安！25 山西医科大学硕士学位论文个人简介一、基本情况王蕾，女，1992年生，汉族，山西省运城市人。专业：临床检验诊断学，主要研究方向：风湿性疾病相关检验。二、学习工作经历2009年9月-2014年7月，吉林医药学院，检验学院，医学检验专业，学士2014年9月-2017年7月，山西医科大学，第二临床医学院，临床检验诊断学专业，硕士三、研究成果（一）科研项目无（二）发表文章1、第一作者文章[1]王蕾，郭存九.鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及其耐药机制的研究进展[J].中国药物与临床,2016,16(6):839-843.26