鸡西地区戊型肝炎流行病学研究

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试验研究鸡西地区戊型肝炎流行病学研究曲立春（黑龙江工业学院，牡丹江157000）摘要：目的：探讨鸡西地区戊型肝炎流行病学特征。方法：对600份猪血清样本采用双抗原夹心法检测HEV-DNA，记录检测结果阳性率，给予统计学分析后得出结论。结果：600份猪血清中116份HEV-RNA检测结果为阳性（阳性率19.33%），检测结果与年龄、品种相关性对比分析可知，年龄与检测结果阳性率呈正相关，而约克夏品种检测结果阳性率最高（100.00%），对比结果具有统计学意义（P<0.05）。结论：养殖者及防疫工作者应准确掌握本地区猪戊型肝炎病毒流行病学特征，对戊型肝炎高危猪群应采取适当药物干预措施并积极改善饲养环境，降低猪戊型肝炎发生率，提高人民饮食安全性。关键词：猪；戊型肝炎；流行病学DOI:10．3969/J.ISSN．1671-6027．2014．08.016本文将于2013年1月1日至2013年12月31日期间物P-out2）于42℃恒温环境下逆转录60min，PCR反应体系选取600份猪血清样本进行本次研究，探讨鸡西地区戊型肝（25μL）组成成分为0.5μL、10mmol/LdNTP混合物；0.5μL炎流行病学特征，从而为防疫工作者提供可靠依据，降低戊Taq酶；16μL灭菌水；2.5mL反转录产物模板；2.5μL、10×型肝炎发生率及保障人类生活质量，现结果如下。PCR缓冲液；P-out1/P-out2或P-in1/P-in2引物各1资料与方法0.5μL，首轮PCR反应于95℃预变性3min后，94℃条件下1.1一般资料共采集鸡西地区养殖场猪前腔静脉血清样变性1min并退火1min（53℃）、延伸1min（72℃），共35个循本600份（5~10mL），年龄19d~1n，平均年龄（4.89±1.83）个环，最后循环应72℃延伸10min；再次PCR实施30个循环，月，品种分布：大约克夏（LargeYorkshire）109份、长白（Lan-条件同首轮PCR。经琼脂糖凝胶电泳后于成像仪保存图像，drace）256份、杜洛克（Duroc）194份、约克夏（Yorkshire）41经Cutoff值对检测结果进行分析，其中COV值为D450nm+0.22份。（阳性对照D450nm≥1.0，阴性对照D450nm≤0.05），若所得结果1.2方法D450nm值不小于COV值则判断为阳性，反之为阴性。1.2.1试剂上海生物工程公司提供10mmol/LTrizol及1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学10mmol/LdNTP；Promega公司提供200U/μL反转录酶分析，计量资料采用t检验（由±s表示），计数资料采用X2M-MuLVReversTranscriptase；MBI公司提供5U/μLTaq检验，以P<0.05为差异有统计学意义。DNApolymerase；TaKaRa公司提供40U/μLRNAsin；北京贝2结果尔生物工程有限公司提供HEV抗体酶联免疫试剂盒（双抗600份猪血清中116份HEV-RNA检测结果为阳性（阳原夹心法）。性率19.33%），检测结果与年龄、品种相关性对比分析可知，1.2.2HEV-RNA检测以ORF2为扩增目片段，长度年龄与检测结果阳性率呈正相关，而约克夏品种检测结果阳617bp，由上海生物工程公司合成两对引物：①外引物（out）：性率最高（100.00%），对比结果具有统计学意义（P<0.05），具5’-CCAATGGCGAGCCGACAG-3’、5’-CTCCCGAGTTTTAC-体情况见表1。CCAC-3’；②内引物（in）：P1：5’-GTGGCGTTCACTTGA-表1600份猪血清中HEV-RNA流行病学分析（例%）GAC-3’、5’-GCAACACCCTTATCGCGT-3’。将血清样本置入恒温箱（370）中培养1h后经每分钟3000r；离心10min，分离血清（上清液）后于-200C保存待用，根据HEV抗体酶联免疫试剂盒相关说明，应用双抗原夹心法检测血清中HEV抗体（若样本为猪粪或猪肝脏则应采用Trizol法提取病毒RNA）。26μL反转录-聚合酶链式反应体系组（2μL、10mmol/LdNTP混合物；16μLRNA模板；0.5μL、40U/μLRNAsin；5μL、5×Buffer缓冲液；1μL、25mmol/L反转录引注：△表示与1个月＜阳性率所占比例对比结果具有统基金项目：黑龙江省教育厅高职高专院校科学技术研究项目计学意义（P<0.05）；▲表示与1~3个月阳性率所占比例对比项目编号：12535182282014年第08期畜畜牧兽医科技信息牧兽医科技信息 试验研究黄鳝嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验★高明辉，严玉萍，袁昌果，唐兰，王钢（四川省乐山师范学院生命科学学院，乐山614000）DOI:10．3969/J.ISSN．1671-6027．2014．08.017黄鳝是我国经济鱼类兼药用鱼类之一，富含丰富的10）、氧氟沙星（OFL，5）、头孢唑啉（CEZ，30）、头孢拉定（CE，DHA和卵磷脂，是构成器官细胞膜不可缺少的物质，其特有30）、利福平（RD，30）上述材料均购自杭州天和微生物试剂的“黄鳝素”有清热解毒之功效并且黄鳝还富含蛋白质和维有限公司。生素A，营养价值和药用价值极高，肉嫩味鲜深受大众青睐。1.1.4试验动物清洁级昆明系小白鼠雌雄各半，共12只，近年来，黄鳝的人工养殖迅速发展，但却缺乏疾病防治的科购自乐山长征制药厂。健康的黄鳝体长和重量均相仿的20学指导，大大阻碍黄鳝养殖业的发展。其中以嗜水气单胞菌尾，购自乐山海棠公园农贸市场。引起的黄鳝出血症危害最大,一般发病率达30%,其中死亡的1.2试验方法要占70%,这给黄鳝养殖业带来了巨大的损失。我们对该病1.2.1病原菌的分离培养从乐山某黄鳝养殖场采集病体进行了细菌分离鉴定，生化试验，致病性试验及药物敏感试黄鳝，其表现特征是行动迟缓，鳝体乌青，头部红肿，鳃少量验，以期待为治疗提供技术依据。充血，腹部偶见红斑，肛门红肿，重者肛门溃烂，深陷，有黄色1材料与方法黏液流出，偶尔病体黄鳝伴有羽毛状的水霉。将发病鳝体用1.1材料75％乙醇棉球反复擦洗体表，然后用灭菌剪刀打开腹腔，分1.1.1病料的采集从乐山市海棠农贸市场购买病体黄鳝。别取肝脏、消化道、血液于普通营养琼脂平板上作划线分离，1.1.2主要试剂培养基及细菌鉴定用的生化试剂等由乐在28℃培养18~24h，待平板上长出菌落后，挑选单个优势菌山师范学院生命科学学院实验室提供。落再次划线分离，直到获得纯细菌为止，然后转接到营养琼1.1.3供试药片14种抗菌药药敏纸片及每片的含药量脂斜面上，置冰箱4℃保存备用。（单位：μg／片）分别为青霉素（P，10）、阿莫西林（AML，10）、1.2.2菌体形态观察将上述培养基上所得的菌落进行涂氨苄青霉素（AMP，10）、红霉素（E，10）、新霉素（NEO，30）、复片，革兰氏染色，镜检，观察细菌形态以及染色特征。方新诺明（SXT，25）、强力霉素（DO，30）、诺氟沙星（NOR，1.2.3生化试验将上述分离出单个培养菌落接种生化管，10）、环丙沙星（CIP，5）、恩诺沙星（ENR，5）、培氟沙星（PEF，按常规法进行氧化酶试验、运动性测定以及分解葡萄糖、甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷、鸟氨酸脱羧酶等生化试验。★通讯作者!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!结果具有统计学意义（P<0.05）；☆表示与4~6个月阳性率所与猪年龄及品种具有显著相关性，本文中7~12月龄待检猪占比例对比结果具有统计学意义（P<0.05）；★表示与7-12群猪戊型肝炎病毒阳性率高达48.98%，而小于1个月猪群个月阳性率所占比例对比结果具有统计学意义（P<0.05）；*猪戊型肝炎病毒阳性率仅为3.13%，提示年龄越大则戊型肝表示与其他品种阳性率所占比例对比结果具有统计学意义炎病毒阳性率越高；本文中选取大约克夏、约克夏、长白及杜（P<0.05）。洛克四大品种猪群进行研究，其中大约克夏、长白、杜洛克猪3讨论群猪戊型肝炎病毒阳性率对比结果无显著差异（P>0.05），但戊型肝炎（HepatitisE，HE）属于人畜共患急性病毒性肝约克夏猪群猪戊型肝炎病毒阳性率则高达100.00%，与国内炎类型，主要由戊型肝炎病毒（HepatitisEvirus，HEV）通过相关研究结果相符。消化道传播疾病，普通人群戊型肝炎病死率约1%~2%，戊型综上所述，养殖者及防疫工作者应准确掌握本地区猪戊肝炎孕妇病死率则高达20%以上，严重威胁人类生活质量及型肝炎病毒流行病学特征，对年龄大于3个月、约克夏品种生命安全。近年来，随着人们自我保护意识不断加强，人猪共等戊型肝炎高危猪群作为主要防治对象，采取适当药物干预患戊型肝炎频繁见诸于各类报道中，已引起广大人民及医务措施并积极改善饲养环境，降低猪戊型肝炎发生率，提高人工作者高度重视。民饮食安全性。本文研究可知，猪戊型肝炎病毒阳性率高达19.33%，且畜畜牧兽医科技信息牧兽医科技信息2014年第08期29