生物制品 第三章生物制品课件

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1、第三章灭活剂、保护剂、与免疫增强剂第一节灭活剂一、灭活与灭活剂(一)灭活:杀死病原微生物,但不影响免疫原性;其次是破坏血清的补体,以免干扰血清学反应结果。灭活剂:灭活微生物的化学试剂。灭活方法:物理灭活:加热、超声波及射线灭活微生物,此方法免疫原性易破坏,现很少使用(血清56°C半小时灭活补体用此方法)。化学灭活:用化学试剂将病原微生物杀死,此方法经常使用。二、常用的灭活剂种类和原理(一)甲醛:是最古老常用的灭活剂,现在我国用的26种灭活疫苗,均以甲醛为灭活剂。性质:甲醛为刺鼻的气体,水溶液叫福尔马林,浓度为36%-40%。10°C以下易聚

2、合成三聚甲醛或多聚甲醛,为白色沉淀。原理:甲醛的醛基起灭活作用,可使蛋白质的氨基→羟甲基胺羧基→亚甲基二醇单酯羟基→羟甲基酚巯基→硫代亚甲基二醇浓度:需氧菌甲醛浓度到0、1%--0、2%.厌氧菌0、4%--0、8%.病毒0、05%--0、4%.原则是浓度低,时间短,温度低可以灭活细菌,尽量减少破坏抗原(通常加入量,以甲醛含量量计算,折合福尔马林浓度)。(二)烷化剂:将烷基引入,形成烷基取代物,使微生物变性死亡。原理:主要破坏病毒的核酸,作用于A:G碱基,引起DNA单链断裂或双链铰连。此类常用于病毒灭活,种类有AEI—N-乙酰乙烯亚胺,加入浓

3、度到0、05%。BEI—二乙烯亚胺,浓度0、02%;EEI—2—乙基乙烯亚胺,GDA—缩水甘油醛。灭活后加硫代硫酸钠可终止灭活,防止抗原损失。保存:AEI,0--4°C一年,--20°C二年;BEI0--4°C保存一个月。(三)苯酚(石碳酸)人类用的第一个消毒药,具有特殊气味的无色结晶,易潮解成水溶液,与光、氧后颜色变紫色。原理:蛋白质变性以及抑制氧化脱氢酶,芽孢和病毒对它抵抗力强。灭活浓度:抑菌作用是0、2—0、5%(血清防腐),杀菌是1%,杀葡萄球菌是3%。消毒常用它的衍生物,来苏儿(甲酚皂)3—5%浓度,特殊气味,覆盖其他气味,也是医

4、院常用的。(JosephLister,1827~1912)首创用石炭酸喷洒手术室和煮沸手术用具以防术后感染,为防腐、消毒,以及无菌操作奠定了基础。(四)结晶紫(龙胆紫),也叫紫药水,碱性染料,也叫甲紫或甲基青莲,化学名,六甲基副玫瑰苯胺。原理:碱性阳离子可结合细菌阴离子羧基;干扰细胞壁粘肽合成;常作用于革兰氏阳性菌。生物制品的应用有猪瘟结晶紫疫苗,鸡白痢染色抗原。(五)β—丙酰内酯良好病毒灭活剂,性状是无色有气味液体,易潮解和高温失效,5°C密封保存好,现主要用于狂犬灭活苗。另还有防治细菌霉菌生长的防腐剂:硫柳汞(乙基汞硫代水杨酸钠),叠氮

5、钠(NaN3)它们使用浓度0、01-0、02%。可防止血清腐败。三、影响灭活作用的因素(一)药物的特异性:酚类不能杀灭真菌和病毒,阳离子的结晶紫,主要作用于G+菌。(二)微生物的种类和特异性:G+菌和G-菌对药物敏感不一样,繁殖体和芽孢对药物敏感也不一样。(三)药物浓度:浓度愈大,灭活越快,抗原也损失大;但是,95%酒精没75%酒精杀灭细菌好。(四)温度:温度与灭活成正比,每升高10度,金属类杀菌作用增加2—5倍。但高温超过40°C,抗原也损失大。(五)时间:灭活时间与温度和浓度成反比,即灭活杀菌长,温度旧低,浓度也低,就可以杀灭细菌。(六

6、)pH:碱性快,酸性慢,酸性环境对抗原保护好。(七)有机物存在:环境的有机物减低灭活的效果,微生物也是有机物。四、灭活疫苗时的注意事项2人参加灭活,注意药品名和量,灭活后标记。37°C灭活一天后,接种适宜培养基—无菌检查。动物试验,灭活苗制成后,注射小白鼠0、2ml,两只,观察3天。使用试验:用户可先注射1-2头,观察1—2天,看有无过敏,应激等反应,证明安全,才全群使用。思考题:什么叫灭活和灭火剂?灭活剂的种类有哪些?影响灭活的因素是什么?灭活的注意事项有哪些?第二节保护剂保护剂也叫稳定剂,是防止微生物在冻干过程中受到破坏。按作用原理分两

7、类:渗透剂:能渗入细胞,使胞内外渗透压平衡,防止慢冻时损伤细胞。有甘油,蔗糖,二甲基亚砜。非渗透剂:防止细胞内外物质交换在速冻时保护细胞。有蛋白质,聚乙烯吡咯酮。按保护剂分子量分类:低分子量保护剂:糖、氨基酸类。高分子量保护剂:脱脂牛奶、明胶。按化学性质分类:复合物:脱脂牛奶,血清。糖类:蔗糖、乳糖。盐类:乳酸钙、谷氨酸钠。醇类:甘油,山梨醇,甘露醇。酸类:柠檬酸,氨基酸。聚合物:葡聚糖,聚乙烯吡咯酮。一、冻干保护剂的组成和作用按组成将保护剂分为营养液,赋形剂,抗氧化剂。营养液:使受损细胞修复:脱脂牛奶,蛋白质,氨基酸,糖类。赋形剂:骨架作

8、用,制品形成网孔结构,易溶解----蔗糖,乳糖。抗氧化剂:保护酶类,防止氧化—VC,VE,硫代硫酸钠。保护剂的作用:防止细胞内水结晶和细胞失去水分。平衡细胞内外渗透压,防止细胞破

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