青蒿发酵液的药学及细胞活性试验研究

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1、学院代号10716专业代码100800学号011051512166密级陕西中医学院ShaanxiUniVersityofChineseMedicine硕士学位论文青蒿发酵液的药学及细胞活性试验研究学位申请人专业名称申请学位类型指导教师姓名论文提交日期牛红妹中药学医学硕士学位庞来祥2014年4月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不合

2、任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贞献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。菁案篙帮R期：知配年‘月7同关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院呵以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布(包括刊登)论文的全部或部

3、分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签论文导师签期：州嶂‘月<}r

4、期：押够年幻7同中文摘要目的：本课题利用中药发酵技术，对青蒿发酵液的制备工艺、质量标准、初步稳定性、细胞毒性试验进行了研究，为中药的研究开发提供了新思路。方法：提取工艺以青蒿素含量、双氢青蒿素含量及醚浸出物为指标，对发酵米水比、青蒿糯米配比、发酵时间、酒曲、PH值、发酵温度进行单因素考察，根据单因素试验结果又对米水比、青蒿糯米配比以及发酵温度采用正交试验设计进行考察；纯化工艺以青蒿素，双氢青蒿素含量，醚浸出物以及澄清度为

5、指标，对离心、静置、滤过三种纯化方法进行考察；矫味剂以口感为指标，分别对矫味剂甜菊糖、柠檬酸的用量进行了考察；灭菌条件以外观、微生物限度、青蒿素含量、双氢青蒿素含量以及醚浸出物为指标，对高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、煮沸灭菌法、减压滤过法四种灭菌方法进行考察；在质量标准研究中，采用薄层色谱法对原药材青蒿叶，成品青蒿发酵液进行鉴别，采用紫外分光光度法测定青蒿素含量、双氢青蒿素含量以及醚浸出物的量；最后对本品的初步稳定性进行考察。采用体外细胞MTT试验观察该发酵液对肺癌A549、MDA231细胞，结肠

6、癌Sw620、LOV0细胞，胃癌AGS细胞以及肝癌HepG一2细胞的抗肿瘤作用。结果：最佳发酵工艺为前期发酵温度35℃，发酵温度22℃，酒曲O．5％，米水比1：4，青蒿糯米配比1：3．5，PH值4．5，发酵时间2个月；纯化工艺为药液静置48h，矫味剂甜菊糖的用量选择0．15％，枸橼酸用量O．2％；最优灭菌条件为减压滤过；在质量标准研究中，青蒿叶原药材薄层色谱与对照品在相应位置显相同颜色的斑点，青蒿发酵液薄层色谱均在相应位置与对照药材显相同颜色的斑点，无阴性干扰；青蒿素在0．024’O．216mg／m

7、l范围内，青蒿素的含量与吸光度线性关系良好，平均回收率为96．97％，RSD为1．68％，初步确定该发酵液青蒿素含量不得少于0．0990mg／m1；双氢青蒿素在O．05、O．4mg／ml范围内，双氢青蒿素的含量与吸光度线性关系良好，平均回收率为98．97％，RSD为2．81％，初步确定该发酵液双氢青蒿素含量不得少于0．0192mg／m1；初步确定醚浸出物的量不得少于0．67mg／ml；在本品初步稳定性考察期内，性状、PH值、相对密度、鉴别、微生物限度及含量均未发生明显变化；青蒿发酵液作用于结肠癌SW

8、620、LOV0细胞，肺癌A549、MDA231细胞，胃癌AGS细胞以及肝癌HepG一2细胞48h后，细胞生长均明显受抑制，与对照组5．FU相比差异显著(P<0．05)，抑制率均随药物浓度的增加而升高，具有剂量依赖性。结论：青蒿发酵液制备工艺合理可行，质量标准可控，成品质量稳定，对结肠癌Sw620、LOV0细胞，肺癌A549、MDA231细胞，胃癌AGS细胞以及肝癌HepG一2细胞均有显著抑制作用。关键词青蒿发酵液；工艺研究；质量标准研究；稳定性试验；细胞活性试验AtudyonPharmacyofA

9、rtemisiaannuaBrewedLiquidAbstract0bjectiVeThistopicusedthefermentationtechnologyofChinesemedicine，bytheresearchofpreparationprocess，qualitystandard，preliminarystability，efficacyandmakeitofmixture，providedanewmethodfortheresearchandexplo