重组DNA技术-I

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1、重组DNA技术及应用RecombinantDNATechnologyanditsApplication许正平博士浙江大学医学院生物电磁学省重点实验室参考书J.萨姆布鲁克等编，《分子克隆实验指南》，科学出版社F.奥斯伯等编，《精编分子生物学实验指南》，科学出版社INTERNET思考1、如果已知某基因的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？2、如果已知某基因的两段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？3、已知一蛋白质的部分氨基酸序列，怎样克隆编码该蛋白的基因？4、已分离、纯化某蛋白质，并制备了相应的抗体，如何克隆其编码基因？5、如果已获得某基因的DNA序列，如何研究其结构、功能？1、如

2、果已知某基因的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）获得/人工合成该DNA片段2）标记该DNA片段3）从cDNA/基因组文库筛选阳性克隆4）基因片段的分离、克隆和分析5）基因研究1、如果已知某基因的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）获得/人工合成该DNA片段2）标记该DNA片段3）从cDNA/基因组文库筛选阳性克隆4）基因片段的分离、克隆和分析5）基因研究1、如果已知某基因的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）获得/人工合成该DNA片段2）标记该DNA片段3）从cDNA/基因组文库筛选阳性克隆4）基因片段的分离、克隆和分析5）基因研究1、如果已知某基因

3、的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）获得/人工合成该DNA片段2）标记该DNA片段3）从cDNA文库/基因组筛选阳性克隆4）基因片段的分离、克隆和分析5）基因研究1、如果已知某基因的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）获得/人工合成该DNA片段2）标记该DNA片段3）从cDNA/基因组文库筛选阳性克隆4）基因片段的分离、克隆和分析5）基因研究1、如果已知某基因的一段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）获得/人工合成该DNA片段2）标记该DNA片段3）从cDNA/基因组文库筛选阳性克隆4）基因片段的分离、克隆和分析5）基因研究2、如果已知某基因的两段DNA

4、序列，如何获得（克隆）该基因？1）人工合成DNA片段（oligonucleotide,oligo）2）PCR扩增该两oligo间的DNA序列3）基因片段的分离、克隆和分析4）基因研究2、如果已知某基因的两段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）人工合成DNA片段（oligonucleotide,oligo）2）PCR扩增该两oligo间的DNA序列3）基因片段的分离、克隆和分析4）基因研究2、如果已知某基因的两段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）人工合成DNA片段（oligonucleotide,oligo）2）PCR扩增该两oligo间的DNA序列3）基因片段的分离

5、、克隆和分析4）基因研究2、如果已知某基因的两段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）人工合成DNA片段（oligonucleotide,oligo）2）PCR扩增该两oligo间的DNA序列3）基因片段的分离、克隆和分析4）基因研究2、如果已知某基因的两段DNA序列，如何获得（克隆）该基因？1）人工合成DNA片段（oligonucleotide,oligo）2）PCR扩增该两oligo间的DNA序列3）基因片段的分离、克隆和分析4）基因研究问：所获得的基因完整吗？TTT…TTT5’5’cap3’tailOligo1Oligo2如果所克隆的基因不完整，怎么办？5‘RACE3’

6、RACE问：所获得的基因完整吗？TTT…TTT5’5’cap3’tailOligo1Oligo2如果所克隆的基因不完整，怎么办？5‘RACE3’RACE3、基于氨基酸或全蛋白序列的基因克隆氨基酸序列核苷酸序列合成寡核苷酸筛选cDNA/基因组文库目的基因全蛋白序列抗体筛选表达文库首尾两个核苷酸序列一对合成引物PCR扩增4、如果已获得某基因的DNA序列，如何研究其结构、功能？PossibleResearchStrategiesKnock-outanalysisTransgenicstudyRNAinterference(RNAi)ProteinexpressionStructure-

7、functionstudy一、克隆的基本过程BasicProceduresforCloningBasicProcedureDNAinsertVectorConstructCells(bacteriumoreukaryoticcell)LigationTransformation/TransfectionIdentificationofpositiveclone&itsanalysisColony/Transformant1.克隆的定义(thedefinitionofc