人骨髓间充质干细胞体外向肝样细胞的诱导分化论文

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1、人骨髓间充质干细胞体外向肝样细胞的诱导分化论文【摘要】目的：研究人骨髓来源的间充质干细胞(humanbonemarroesenchymalstemcells，hBM-MSCs)在肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)、抑瘤素M(OSM)诱导下，体外向肝样细胞的诱导分化。方法：通过密度梯度离心和贴壁培养法获得hBM-MSCs，分离的hBM-MSCs扩增传至第6代，流式细胞仪检测hBM-MSCs表面CD34、CD45、CD105、CD166表达。第6代hBM-MSCs生长达100%融合时采用两步法对hBM-MSCs进行诱导

2、分化。第1～第14天采用IMDM诱导培养基(含2%FCS、20ng/mLHGF、20ng/mLFGF-4)，第15～第21天在上述培养基中加OSM(10ng/mL)，促进诱导细胞的成熟，同时收集第0、第7、第14、第21天培养上清液标本.freelanbonemarroesenchymalstemcellsintohepatocyte-likecellsinducedbyhepatocytegroalstemcells(MSCs)fromhumanbonemarroetryedusingthefolloouseanti-humanantibo

3、dies:anti-CD34FITC，anti-CD45FITC，anti-CD105PE，anti-CD166APC.ThesixthgenerationMSCsethed.Differentiationedium，consistingofIMDMsupplementedLHGFand20ng/mLFGF-4for14days，folloentaturationmedium，consistingofIMDMsupplementedLHGF，20ng/mLFGF-4，10ng/mLoncostatinM.MediumchangesedtRNA

4、ofALBandCK18erasechainreaction.ProductionofALBandCK18munofluorescenceanalysisandElisa.GlycogendepositshumanboneexpressedCD105andcd166，andorphologyandfunctionofhepatocytes.Cellolarmorphologychangedfromaspindletoaratherpolygonalshapetypically.DifferentiatedhBM-MSCsarkers，such

5、asCK-18(cytokeratin18)andALB(albumin).Moreover，secretionofALBbydifferentiatedhBM-MSCsincreasedasculturetimeanbonemarroesenchymalstemcellscandifferentiateintohepatocyte-likecellsinresponsetoHGF，FGF-4andOSM，aybeusedasakindofcellresourcestotreatseverehepaticdisease.Keyesenchym

6、alstemcells;humanbonemarroesenchymalstemcells;hepatocyte-like;cytokine肝细胞移植、生物型人工肝是治疗肝衰竭的有效手段，却面临肝细胞来源缺乏的困境，因此寻找新的肝细胞源代替成体肝细胞尤为迫切1-2。骨髓间充质干细胞(humanbonemarroesenchymalstemcells，hBM-MSCs)体外容易分离，免疫原性弱，可大量扩增3，把hBM-MSCs定向分化为肝细胞，将对肝病的治疗带来新的思路和新的前景。当前对骨髓体外向肝样细胞诱导分化没有统一的标准，细胞因子之间组合

7、、诱导分化时细胞生长融合状态也有争议。本实验探讨了生长100%融合时的hBM-MSCs，在肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)、抑瘤素M(OSM)诱导培养下，向肝样细胞的转化，从而为骨髓间充质干细胞对肝衰竭的治疗提供理论依据。1材料和方法1.1实验材料骨髓由浙江大学医学院附属第一医院骨髓室提供。L-DMEM培养基、胎牛血清(FCS)、PAS染色液、0.25%胰蛋白酶购于GIBCO公司，Ficoll分离液购于StemCell公司，鼠抗人FITC-CD34，FITC-CD45，PE-CD105，APC-CD166抗体购于

8、美国BD公司，HGF，FGF-4，OSM购于Peprotec公司，RNA提取试剂盒购于Invitrogen公司，逆转录试剂盒购于Promega公司，PCR试剂盒购于