骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素样细胞

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1、骨髓问充质干细胞诱导分化为胰岛素样细胞骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素样细胞姓名：裴学莲(人体解剖与组织胚胎学)导师：慕晓玲教授摘要目的：将骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)诱导分化为胰岛素样细胞，观察诱导前后细胞的形态变化及功能。方法：取自然流产胎儿股骨、胫骨等长骨骨髓或成人手术弃骨骨髓，采用全骨髓贴壁培养法，按1X106／ml的密度接种于含10％胎牛血清(FBS)的a．MEM培养基中，5％C02培养箱中孵育48h后换液，以后每3天换液一次，细胞贴壁生长呈梭形。l

2、：2传代继续扩增培养，然后分成4组，其中三组细胞为加入不同诱导组合的实验组，一组为对照组：第一实验组的细胞首先给予bFGF,EGF诱导，然厉用Becutallin，Activin，HGF等进行诱导：第二实验组是在第一实验组的诱导条件基础上加入2．巯基乙醇；第三实验组基础诱导条件同第一实验组，但是在诱导的第二阶段加入噻唑烷二酮继续培养；第四组设为空白对照。观察诱导前后细胞形态，胰岛素蛋白表达，细胞表面标志和胰岛素分泌量的变化。结果：骨髓间充质干细胞为贴壁生长的梭形细胞，表面抗原CD44表达阳性，CD34

3、阴性。诱导分化斤的各实验组的细胞形态变化相似，细胞逐渐变圆，双硫腙染色可见棕红色细胞；细胞表面抗原CD44，第三组细胞阳性率最低；第二、三实验组胰岛素蛋白表达阳性细胞较第一实验组多，第二实验组在诱导第一阶段加入2．巯基乙醇后阳性率最高，与第三组相近。第二、三实验组胰岛素分泌较第一组高，第二实验组中在诱导第一阶段加入2一巯基乙醇后分泌量最高，与第三组相近。结论：骨髓间充质干细胞在体外能定向诱导分化为具有分泌胰岛素功能的细胞。关键词：骨髓间充质干细胞，诱导分化，胰岛索样细胞，胰岛素论文类型：B(应用研究)

4、骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素样细胞Differentiationofbonemarrowmesenchymalstemcellsintoinsulin—producingcellsinvitroGraduate：PeiXue．-lian(HumananatomyandHistologyandEmbry0Io鳓Supervisor：ProfessorMuXiao-lingAbstractObjective：Tostudycultureconditionsofinsulin-producingcell

5、sinducedinvitrobybonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs)．Methods：Bonemarrow(BM)wasobtainedfromtheboneofhumanspontaneousabortionfetus．BMcells(1×106／m1)werecultured(37。C，5％C02)inplasticflaskswithO-MEMmediumcontaining1O％FBS(fetalbovineserum)，48hlater,totalmed

6、iainthecultureWaschanged．Thirdorforthpassagescellswereusedtodifferentiateintoinsulin-producingcells．Firstgroup：thecellswereculturedfirstlyinIMDMmediumcontainingbFGF,EGF，thenculturedinIMDMcontainingBetacullinActivinandHOESecondgroup：theculturalconditionW

7、ascommonwiththefirstgroupexceptthe2-mercaptoethanolisusedinfirstorsecondstagerespectively．Thirdgroup：theculturalconditioniscommonwiththefirstgrouptoo，buttherosiglitazonereplacesthe2-mercaptoethanolandWasaddedonlyinsecondstage．Negativecontrol：undifferent

8、iatedcells．Wecomparetheresultsofthedifferentexperimentalgroupinmoohology,insulinsecretionandinsulinproteinandcellsurfaceantigenexpression．Results：MSCsattachedtothesurfaceofflaskswithspindle-shapedorfibroeyte—likeshape．CD44positiv