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时间:2018-11-28
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1、毛金丝桃提取物的体外抗菌实验朱明熊元君马秀敏丁剑冰古丽娜・沙比尔【关键词】毛金丝桃;,,,提取物;,,,体外抗菌实验 摘要:目的探讨新疆毛金丝桃醇提取物在体外抗菌作用。方法采用连续稀释法对毛金丝桃醇提取物进行MIC、MLC实验研究。结果毛金丝桃提取物在体外对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等有一定的抑制作用。结论毛金丝桃提取物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等有一定的抑制作用,是具有开发价值的抗菌中草药。 关键词:毛金丝桃;提取物;体外抗菌实验 AntimicrobialTestinvitr
2、oofExtractsfromHypericumhirsutumL. Abstract:ObjectiveToexploretheantinuzrobialaltionofextractsfromhirsutumlinrtro.MethodsTheMICMLCexperimentsonasaeruginosa.ConclusionTheextractsofhirsutumlhaveobviousinhibitionsomebacteria. Keyhirsutuml;Extracts;Antimic
3、robialtestinvitro 毛金丝桃(Hypericumhirsutum)是金丝桃属(HypericumL)的一种,属于藤黄科(Guttiferae)。该属植物全世界约有400余种,其中我国约有55种、8个亚种,全国各地均有分布,尤以华东、华西、川北及新疆、贵州等地分布较为集中。该属植物多个品种为药用植物,传统中医学认为,具有清热解毒、收敛止血、利湿之功效,用于治疗咯血、吐血、肠风下血、外伤出血、风湿骨痛、口鼻生疮等症〔1~3〕。近年来研究发现,该属植物中含有金丝桃素(Hypericin)和假
4、金丝桃素(Pesudohypericin)具有抗抑郁、抗肿瘤、抗病毒、镇痛、抗菌消炎、创伤收敛等药理活性。其中毛金丝桃在新疆阿勒泰一带分布较多,在新疆民间广泛应用,但对其他抑菌实验方面的报道却很少,笔者采用连续稀释法对毛金丝桃乙醇提取物进行了抑菌作用的测定,现将结果报道如下。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1药材毛金丝桃的全草2004-03由新疆中药民族药研究所提供及鉴定,其在水中溶解度差,易溶乙醇。 1.1.290%乙醇提毛金丝桃药液的制备〔4,5〕称取一定量的毛金丝桃将其粉碎,过筛后得到
5、粗粉20g,加入90%乙醇100ml,用超声波清洗器超声30min后,在不断搅拌下浸提24h,过滤所得滤液回收乙醇后,加热浓缩成浸膏,再加入蒸馏水15ml,不断搅拌下浸提24h,过滤所得滤液回收乙醇后,加热浓缩成浸膏,再加入蒸馏水15ml,不断搅拌使浸膏溶解,并调整pH为7.4后,滤膜过滤除菌,配成2g/ml醇提毛金丝桃药液15ml,装入无菌棕色瓶中放置冰箱保存,于48h内使用,以保证药效稳定。 1.1.3菌种及培养金黄色葡萄球菌(ATCC29213);绿脓杆菌(ATCC27853);大肠杆菌(ATC
6、C25922);购自中国药品生物制品检定所,水解酪蛋白(MuellerHinton,MH)肉汤、琼脂培养基购自杭州生物试剂厂。实验菌种经传代纯培养后,取1接种环菌种接种于MH肉汤培养基中,37℃恒温箱培养6h,经比浊法测定细胞数为109CFU/ml,稀释至106CFU/ml为工作浓度。通过倾注平板法计数,实验中每毫升液体培养基加入0.1ml细菌液,37℃24h恒温培养,计数后为最终实验浓度,其中金黄色葡萄球菌为3.6×105CFU/ml;绿脓杆菌为3.5×105CFU/ml;大肠杆菌为3.1×105CF
7、U/ml。 表1毛金丝桃的抑菌实验(略) “+++”细菌明显长;“++”细菌少量生长;“0”无菌生长 1.2抑菌实验的方法与结果〔6~10〕采用液体培养基连续稀释法将被检药液用MH肉汤培养基作一系列倍比稀释为9管,使MH肉汤培养基含药浓度分别为133.3,66.5,33.25,16.63,8.31,4.16,2.08,1.04,0.52mg/ml。第10管不加药液为MH肉汤培养基接种相同菌种作对照管,每支试管为1.8ml,然后每支试管加入0.2ml实验细胞液,置37℃培养24h,肉眼观察试管混浊情
8、况,能抑制实验菌生长的最低浓度为毛金丝桃的最低抑菌浓度(Minimalinhibitionconcentration,MIC)。结果见表1。将澄清的未长菌各试管中取0.1ml培养液和10ml营养琼脂分别倾注平皿中,混匀凝固后置37℃培养24h(每管每个浓度均倒3块平皿)观察有无细菌生长,凡平板上无菌生长的该药物最低浓度为毛金丝桃的最低杀菌浓度(Minimallethalconcentration,MIC)。结果见表2。 表2毛金丝桃的杀菌
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