2型糖尿病患者脂联素及视网膜病变相关性探究

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2型糖尿病患者脂联素及视网膜病变相关性探究【摘要】目的研究2型糖尿病(T2DM)患者血浆脂联素(APN)水平及脂联素基因启动子区-11377位点单核苷酸多态性(SNP)与糖尿病视网膜病变(DR)之间的关系。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对200例T2DM患者[无DR(NDR)组82例、非增殖型DR(NPDR)组72例、增殖型DR(PDR)组46例],检测APN基因启动子SNP-11377C→G多态性,同时检测血浆APN浓度、血脂、血糖、空腹胰岛素,比较各组基因型和等位基因频率,并分析各指标间的相关性。结果①APN水平随视网膜病变程度呈递增趋势NDR、NPDR、PDR各分别为(6.11±2.77),(7.49±3.84),(9.83±4.97)mg/L,其中PDR组显著高于NDR和NPDR组(P0.05)。基因型(CC型、CG型和GG型)的血清APN水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论T2DM患者血APN水平随糖尿病视网膜病变进展而增高。未发现福建地区T2DM患者APN基因启动子区-11377C→G多态性与DR明显相关。【关键词】2型糖尿病;视网膜病变;脂联素;多态性;单核苷酸Relationshipbetweenadiponectinand11 retinopathyinpatientswithtype2diabetesmellitusJIANGHai-bin,LINJia-yu,SHIYa-xiong,etal.DepartmentofEndocrinology,TheSecondHospitalAffiliatedtoFujianMedicalUniversity,Quanzhou362000,China【Abstract】ObjectiveToexploretheassociationofadiponectinlevel,adiponectingene-11377polymorphismanddiabeticretinopathy(DR)inpatientswithtype2diabetesmellitus.MethodsAdiponectingeneSNP-11377C→Gwasidentifiedin200patientswithtype2diabetesmellitus,including82patientswithoutretinopathy(NDR,n=82),72patientswithnon-proliferativediabeticretinopathy(NPDR,n=72)and46patientswithproliferativediabeticretinopathy(PDR,n=46),bypolymerasechainreactionrestrictionfragmentlengthpolymorphism(PCR-RFLP).Plasmaadiponectin,bloodlipid,fastingplasmaglucoseandfastinginsulinserumwerealsomeasured,andcomparedwithgenotypeandallele11 frequencies.ResultsPlasmaadiponectinlevelshowedanincreasingtendencyingroupsofNDR,NPDRandPDR(6.11±2.77),(7.49±3.84),(9.83±4.97)mg/L.PlasmaadiponectinlevelwassignificantlyhigherinPDRgroupthaninNDRandNPDRgroups(P0.05).Plasmaadiponectinlevelsinthreegenotypeswerenotdifferent(P>0.05).ConclusionAggravationofdiabeticretinopathyaccompaniedincreasingadiponectinlevelinpatientswithtype2diabetesmellitus.TherewasnosignificantassociationofSNP-11377C→Gpolymorphisminpromoterregionofadiponectingeneanddiabeticretinopathyinpatientswithtype2diabetesmellitusofFujian.【Keywords】Type2diabetesmellitus;Retinopathy;Adiponectin;Polymorphism;Singlenucleotide11 糖尿病视网膜病(DR)是糖尿病常见的微血管并发症之一,其主要病理变化是视网膜微血管结构和功能的改变。结构改变包括毛细血管基底膜增厚、毛细血管通透性增加、外周血细胞减少以及毛细血管微动脉瘤的形成。近年来,研究发现脂肪因子参与了2型糖尿病及其并发症的发生发展。脂联素是脂肪组织分泌的脂肪因子,具有改善胰岛素抵抗、拮抗动脉粥样硬化、负性调节免疫反应等作用,对糖尿病微血管病变尤其阻止糖尿病视网膜病变的发生发展,是否也具有保护效应,目前尚未明确。本研究旨在探讨血浆脂联素水平及APN基因启动子区-11377C→G多态性与T2DM视网膜病变发生发展之间的关系。1资料和方法1.1一般资料按1999年世界卫生组织(WHO)制定的糖尿病诊断标准,选自本院内分泌科住院T2DM患者200例(男105例,女95例),排除心、肺、肝功能不全、糖尿病急性并发症、急性感染等疾病。按2001年国际临床糖尿病视网膜病变标准,根据眼底检查和眼底荧光血管造影结果分为3组:无DR(NDR)组82例(男44例,女38例),非增殖型DR(NPDR:微血管瘤,出血,硬性渗出,棉絮状软性渗出)组72例(男36例,女36例),增殖型DR(PDR:新生血管形成,玻璃体出血,机化物增生,继发性视网膜脱离,失明)组46例(男25例,女21例)。1.2检测方法11 测量身高、体质量、腰围、臀围,计算体重指数(BMI)和腰臀比(WHR);测血压,检测糖化血红蛋白(HbA1C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、血肌酐(Scr),计算低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和内生肌酐清除率(Ccr)。ELISA试剂盒测定血浆脂联素水平。体重指数(BMI)=体质量(kg)/身高(m�2);稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)=FPG×FINS/22.5。脂联素基因多态性:提取全血DNA进行PCR扩增。从GenBank中查取人脂联素基因序列,用Primer3软件进行在线引物设计:上游引物5’-CTTTACTTTAATGGTGGACTTG-3’,下游引物5’-CTAGAAGCAGCCTGGAGAA-3’。反应条件:94℃预变性5min;94℃变性1min,57℃退火1min,72℃延伸2min,共35个循环;72℃终末延伸20min。PCR产物以限制性内切酶HhaI在37℃水浴消化8h后,行2%琼脂糖凝胶电泳,即得出该SNP的基因分型结果:只于347bp处出现条带为CC型(无变异纯合子),于222bp和125bp两处出现条带者为GG型(变异纯合子),于347bp、222bp和125bp三处出现条带者为CG型(杂合子)。1.3统计学分析计量资料以均值±标准差(x±s)表示,用SPSS11 12.0统计软件包进行分析,计量资料组间比较用t检验,非正态分布的计量资料经对数转换后统计;计数资料组间比较用χ2检验。脂联素水平与临床指标的相关性,采用简单相关分析和偏相关分析。以Hardy-Weinberg平衡检验确定研究样本的群体代表性。2结果2.1NDR、NPDR、PDR各组临床资料比较,见表1。APN在NDR、NPDR、PDR各组呈递增趋势(6.11±2.77),(7.49±3.84),(9.83±4.97)mg/L,其中PDR组显著高于NDR和NPDR组(P0.05),见表2。2.4各APN基因型观测指标的比较CC、CG和GG三组基因型的性别、年龄、病史、血压、血脂、血糖差异无统计学意义;APN水平差异无统计学意义(7.53±3.99),(7.28±3.96),(7.73±4.75),P>0.05)。注:NDR:无糖尿病视网膜病变组;NPDR:非增殖型糖尿病视网膜病变组;PDR:增殖型糖尿病视网膜病变组;BMI:体质指数;WHR:腰臀比;SBP:收缩压;DBP:舒张压;1mmHg=0.133kPa;TC:总胆固醇;TG:三酰甘油;LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇;HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇;FPG:空腹血糖;FINS:空腹胰岛素;HOMA-IR:稳态模型胰岛素抵抗指数;HbA1C:糖化血红蛋白;Scr血肌酐;Ccr:肌酐清除率;APN:血浆脂联素;与NDR组比较,�*P11 关于脂联素基因SNP与糖尿病视网膜病变发生发展的相关性研究结论尚无肯定结论。Yoshioka等[14]在对696例糖尿病患者进行脂联素SNP94的研究中未发现脂联素SNP94基因型和等位基因的分布频率与糖尿病视网膜病变存在相关性。日本学者Yoshioka等[15]在对444名日本人进行脂联素SNP+276的研究中发现。脂联素SNP+276基因型和等位基因的分布频率在DR与NDR患者之间差异无统计学意义(P=0.63)。本研究组选取国内外研究较少的脂联素基因启动子5’侧翼区SNP-11377C→G,虽然前期报道该基因多态性与T2DM患者大血管病变CIMT有关,且独立于脂联素水平[16]与Patel等[17]最近的报道一致。但在本研究中未发现与福建地区T2DM患者视网膜病变的发生发展存在相关性。原因可能为:糖尿病性视网膜病变的发生与病程、代谢控制及遗传等多种因素综合有关,脂联素基因所起的作用可能被削弱。总之,随着T2DM视网膜病变发生发展,血脂联素逐渐升高,可能存在脂联素抵抗,也可能是一种有益的代偿机制。高脂联素水平发挥保护作用,阻止糖尿病视网膜及肾脏病变进展,或是其自身参与了糖尿病微血管病变的发生发展,现在尚待研究阐明。脂联素及其基因多态性与糖尿病视网膜病变等微血管病变的相关性还有待更深入研究。参考文献[1]BZietz,CBuechler,KKobuch,etal.Serum11 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