资源描述：
《卵巢癌抗独特型单链抗体6b11scfvmgm-csf融合蛋白的构建、表达及活性测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定解剖学报2000年第3期第31卷论著作者：刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位：刘蓓（北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044）；崔恒（北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044）；冯捷（北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044）；叶雪（北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044）；李艺（北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044）；曹善津
2、（北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044）关键词：卵巢癌；重组融合蛋白；抗体；抗独特型；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；包涵体 【摘要】 目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv和鼠GM-CSF融合蛋白(6B11mGM)，以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应，为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据。 方法 用DNA重组技术，将mGM-CSF连于单链抗体6B11ScFv羧基末端，构建重组质粒pET30-6B11mGM，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导，以包涵体形式获高效表达，
3、超声破碎细菌细胞获得包涵体，用8mol·L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性，SDS-PAGE分析蛋白纯度，ELISA分析技术和细胞增殖实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性。 结果 复性蛋白纯度达90%以上。采用氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为1mmol·L-1，还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为5mmol·L-1，10℃复性48h，复性率达36%。表达的融合蛋白分别能与COC166-9单抗和大鼠抗小鼠GM-CSF单抗特异结合，并能刺激mGM-CSF依赖株NFS-60细胞增殖。 结论 以包涵体表达的融合蛋白6B11
4、mGM保留了两种蛋白的活性，为研究融合蛋白在体内的免疫功能提供了基础。 【中图分类号】 R392.11 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)03-226THECONSTRUCTION，EXPRESSIONANDACTIVITYEXAMINATIONS OF6B11ScFv／MURINEGM-CSFFUSIONPROTEINLIUBei,CUIHeng,FENGJie,YEXue,LIYI,CAOShan-jin,GEHua,FUTian-yun,YAOYu,QIANHe-nia
5、n (GynecologicOncologyCenter,People'sHospital,BeijingMedicalUniversity,Beijing 100044,China) 【Abstract】 Objective Toconstructexpressionvectorwhichexpressesfusionproteinofantiidiotypicsinglechainantibody6B11ScFvandmurineGM-CSF(6B11mGM)forobservingitspossi
6、bleimmunereactionsinvivo.Methods UsingDNArecombinanttechniques,themurineGM-CSFcDNAgenewasrecombinedto6B11ScFvandtheywereclonedintoexpressionvectorpET-30a(+)toproduceinsolubleprotein.Inclusionbodiescollectedafterthebreakageofbacteriathroughsonicationweresubj
7、ectedtorepeatedlywashing.Inclusionbodiessolubilizedintheresenceof8mol·L-1ureaweredilutedwithrenaturationsolutionssothatfoldingprocesscouldbeinitiated.ThepuritywasexaminedbySDS-PAGE,ELISAandcellproliferationassaywereusedtodeterminetheactivitiesoffusionprotei
8、n.Results 6B11mGMfusionproteinswereobtainedwithapurityofover90%.Theoptimumconditionswere1mmol·L-1and5mmol·L-1fortheconcentrationsofGSSGandGSH,respectively,with48hoursat10℃asrenaturedtime.Fusionproteinc
