新生sd大鼠坐骨神经wallerian变性规律及

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1、新生SD大鼠坐骨神经Wallerian变性规律及【摘要】目的:了解新生SD大鼠周围神经ethods:Thesciaticnervesofthe10-dayratsentalresultethodsofSchalextremityofthedamagedperipheralnerve,butthepermanentity.ThereproductiverateofSchentalgroupagedperipheralnerveoftheneonatalSDratsissimilartotheprocessofthetypicaleofSchiddlest

2、ageofa公司生产），多聚赖氨酸（Sigma生产），S-100免疫组化试剂盒（北京中山公司提供）。1.2　方法1.2.1实验动物选取及分组：随机选取10d龄SD大鼠80只，所有新生大鼠右侧坐骨神经预g/kg）腹腔麻醉后，在无菌条件下作右股后正中切口显露股二头肌和臀后血管束，游离右侧坐骨神经，在梨状肌下缘3mm处用5-0丝线结扎坐骨神经，留2mm线头标记，分层缝合切口；左侧坐骨神经不予处理。术后仍由母鼠喂养。术后未有新生鼠死亡，排除对照组切口感染1只，余79只纳入检测、统计。1.2.3雪旺细胞培养：随机选取术后24h组、3d组、5d组、7d组和9d组新

3、生SD大鼠各8只，经引颈处死后，浸入0.3%碘伏5min，切取40只鼠右侧结扎线远侧端1.2cm长的坐骨神经和左侧同等长度坐骨神经，并将实验组与对照组所有坐骨神经集中培养。按双酶消化培养法获得原代雪旺细胞，将雪旺细胞稀释成（2.5～3.0）×105/ml，接种1.5ml于50ml培养瓶，置于37℃、含5%CO2温箱培养24h后，用含10-5mol/L的Ara-C的DMEM/F12混合培养液作用24h，后改为正常DMEM/F12血清培养液培养。5d后，待细胞长满培养瓶时，用0.25%胰蛋白酶消化传代，每周更换培养液2次。1.2.4绘制雪旺细胞的生长曲线：

4、当24h组、3d组、5d组、7d组和9d组及对照组传2代后的雪旺细胞长满培养瓶底时，在每天同一时间点，吸出培养基，勿弃之，用PBS溶液冲洗2次，勿剧烈震荡。然后加入0.25%胰蛋白酶消化并于显微镜下观察，待贴壁的细胞收缩、变圆后，但尚未脱落时移去消化液，把原培养液倒回，用毛细吸管充分反复吹打制成细胞悬液，镜下观察，所有细胞从培养板壁脱落，取细胞悬液于细胞计数板上计算每ml的细胞数，绘制雪旺细胞生长曲线,并统计术后不同时间点的所有观察天数雪旺细胞总数。1.2.5S-100免疫组化染色观察：与取材作雪旺细胞培养的同时，各组动物经引颈处死后，将术后24h组、

5、3d组、5d组、7d组和9d组余下的新生SD大鼠实验侧及对照侧坐骨神经同时取出，置入10%甲醛溶液中，经过常规石蜡切片过程，制成结扎线远侧1cm坐骨神经的纵切片和横切片，然后采用北京中山公司提供的美国ZYMED公司生产的SP-9003试剂盒对组织切片进行免疫组织化学染色。用同济医科大学HPIAS-1000病理图像分析系统在400倍镜下每例取3个视野进行自动盲测，计数每视野阳性雪旺细胞数。1.3统计学处理方法所有试验结果均重复3次以上，计量资料以±s表示，所有的数据用统计软件SPSS13.0进行统计学分析，不同时间点的实验组与对照组之间采用t检验，实验组

6、的不同时间组间采用单因素方差分析。2结果2.1雪旺细胞观察经双酶消化法培养及Ara-C作用去除成纤维细胞，并传代2次后，在倒置显微镜下对术后24h组、3d组、5d组、7d组和9d组及对照组进行雪旺细胞观察。结果发现各实验组均比对照组雪旺细胞生长旺盛，增殖速率快于对照组，且细胞倍增时间短于对照组，尤以7d组最明显(见图1，图2)。雪旺细胞呈长梭形，胞体狭窄，胞核透光，核周边缘有一明亮光晕，并伸出约45μm的细长突起，状如麦芒，为单极和双极，少见三极，突起长度可达胞体横径5～10倍，继续培养后，雪旺细胞的突起继续增长，并按略呈“圆形”的规则形状不断生长、分

7、裂和繁殖，细胞突起首尾相互融合、交联，瓶壁上有少许生长不佳的成纤维细胞。每视野雪旺细胞的阳性率约为95%。x【摘要】目的:了解新生SD大鼠周围神经edicalCollege,ethods:Thesciaticnervesofthe10-dayratsentalresultethodsofSchalextremityofthedamagedperipheralnerve,butthepermanentity.ThereproductiverateofSchentalgroupwerebetterthanthatofthecontrolgroup.Ther

8、eproductiveabilityinthe7thdaygroupreachedthepea