姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角cfos表达的影响

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　　姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角cfos表达的影响【关键词】姜黄素；cfos；神经病理性痛；脊髓；大鼠　　Abstract：［objective］Toinvestigatetheeffectsofcurcuminonthebehaviorofchronicconstrictiveinjury(CCI)ratsandthecfosexpressioninspinalcorddorsalhorn.［Methods］108maleSDratslydividedinto4groups:Controlgroup(treatedoperationgroup;Solventcontrastgroup;Curcumintreatedgroup.ThermalechanicalinedbyHargreave’sthermalradiationapparatusandvonFrey’smethodofmicrofilament，respectively.Thetimecourseofexpressionofcfosmunohistochemicalanalysis.［Results］CurcumincouldsignificantlyattenuatetheactivationofcfosinducedbyCCIandsimultaneouslyamelioratethermalandmechanicalhyperalgesiainducedbyCCI.［Conclusion］ThisstudyshoincouldattenuatetheactivationofcfostoamelioratetheCCIinduced neuropathicpain.　　Keyin;cfos;neuralgia;spinalcord;rat　　神经病理性痛主要表现为痛觉过敏（包括热痛敏和机械痛敏两种类型），由于其机制复杂，现有的疼痛治疗方法均无显著疗效，给患者带来了极大的痛苦，因而成为疼痛学研究的热点。有研究表明，细胞外信号调节激酶和JNK参与了神经病理性痛的信号转导［1］。姜黄素具有痛经止痛的作用，又是一抗炎、抗肿瘤药物,同时又可抑制JNK［2］。本研究通过动态观察姜黄素腹腔注射后对CCI模型大鼠的行为学及脊髓背角原癌基因cfos表达的变化，旨在探讨姜黄素对于神经病理性痛的作用及其可能机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物及试剂雄性SD大鼠，体重200～280g，由温州医学院实验动物中心提供［实验动物使用许可证编号：SYXK(浙2005-0061)］。兔抗cfosIgG多抗（产品标号：sc52），为美国SantaCruz公司产品，姜黄素购自美国Sigma公司。姜黄素用二甲基亚砜溶解配置成30、100、300mg/kg贮存液，避光于4℃冰箱保存。　　1.2模型制备神经病理性痛模型 参照Bent和Xie方法［3］建立CCI模型。1%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉。在大腿中点通过股二头肌钝性分离并暴露坐骨神经，接近三股分叉处，游离神经约7mm，松松结扎4道(4.0铬肠线)，结扎强度以引起小腿肌肉轻度颤动为宜，相隔lmm，受影响神经长4～5mm，缝合肌肉皮肤。假手术组大鼠仅暴露坐骨神经不进行结扎。　　1.3实验分组雄性SD大鼠108只，随机分为6组，每组6只。实验对照组（Con），不给予任何药物；假手术组（Sham），大鼠游离右侧坐骨神经但不结扎；溶剂对照组(SC)，腹腔注射二甲基亚砜；姜黄素组（Cur30）、（Cur100）、（Cur300）分别术后每天腹腔注射30、100、300mg/kg的姜黄素。　　1.4行为学测定坐骨神经松扎前连续测定大鼠缩足行为2d,然后从造模后d1、d3、d5、d7、d10、d14分别采用热辐射法（热痛觉过敏）［4］和vonFrey细丝法（机械性痛觉过敏）［5］测定热刺激缩足反射潜伏期（Tin后用一系列标准化的纤维丝vonFrey(美国Stoelting公司产品)刺激后肢足底中部,如大鼠在刺激时间内或移开vonFrey纤维丝时出现快速缩足或舔足反应为阳性反应,每次间隔30s,以15g为上限热辐射法即按Hargreaves方法，将大鼠置于底为3mm厚玻璃板的有机玻璃箱(22cm×12cm×22cm)中,使其适应30min后用热辐射刺激仪(50m 光斑照射大鼠足底,记录从照射开始至大鼠出现抬腿回避时间即为Tin,取平均值为Tg/kg麻醉下,经主动脉灌注生理盐水100mL,继而灌注4%多聚甲醛400ml，制作SD大鼠L4-5脊髓、背根神经节石蜡切片，54℃恒温水浴展开，晾干备用。60℃烤片至石蜡溶解，二甲苯梯度酒精脱蜡。抗原高压热修复，枸橼酸修复液（pH6.0）煮至微沸，放入切片，喷气10min，离开热源自来水流水冷却。3％过氧化氢封闭10min，滴加1∶100的一抗，4℃孵育24h，取出后室温复温20～30min，加二抗37℃孵育2h后PBS冲洗，DAB显色,苏木素轻度复染8min，盐酸化酒精酸化5秒，酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片,光镜观察。　　1.6图像分析cfos免疫组织化学染色,切片采用LEICAQwin图像处理与分析系统进行图像分析。每张切片取CA1区中1/3段测量平均灰度值,然后减去此片背景平均灰度值,取其相反数作为最终光密度值(OD)。　　1.7统计分析所有数据采用表示,采用SPSS11.0统计软件进行统计分析，组间相比采用单因素方差分析，组内比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。　　表1腹腔注射姜黄素对CCI大鼠TAPK家族成员能诱导DRG神经元发生敏感性增加、兴奋性增强等可塑性改变。JNK又叫应急激活蛋白激酶，使cJunN端转录活化区的Ser63和Ser 73磷酸化，提高其转录活性。在脊神经结扎模型，损伤后JNK在DRG神经元表达增加，用JNK抑制剂可以减轻损伤后触诱发痛［8］。原癌基因cfos的表达产物Fos蛋白,在胞浆形成后迅速入核,与cjun表达产物Jun蛋白通过亮氨酸拉链形成同源或异源二聚体复合物转录因子AP1,结合至靶基因启动子的AP1位点及TPA反应序列,转而调节后期反应基因的表达，使细胞产生长期适应性的变化［9］。Fos表达是神经元兴奋性长时程变化的第一步，是痛觉过敏状态发展的反映，伤害性刺激引起Fos表达可能是通过启动脊髓内源性抑制机制极力对抗过度的刺激，但同时也导致痛觉过敏，痛阈降低。本实验发现CCI对照组术侧cfos明显增加。　　本实验发现姜黄素能有效的减轻CCI诱发的痛温觉过敏，并维持一定的时间，尤其是浓度为100mg/kg的姜黄素组的作用效果最为明显。同时还观察到姜黄素能够降低CCI引起的核内Fos蛋白表达水平，与大鼠神经病理性痛行为改善一致。姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种酚性色素,具有破血行气，通经止痛，散风活血的作用。对姜黄素的分子药理学研究表明,姜黄素具有多方面药理作用,如抗炎、抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗微生物等作用。综上所述，姜黄素抑制JNK［2］，进而抑制c fos的表达可能是姜黄素能改善神经病理性痛的机制之一。【参考文献】　　［1］Maicroglia:InvolvementoftheATPReceptorP2X(4)［J］.JPharmacolSci，2004，94(2):1124.　　［8］ObataK，YamanakaH，etal.Roleofmitogenactivatedproteinkinaseactivationininjuryandintactprimaryafferentneuronsformechanicalandheathypersensitivityafterspinalnerveligation［J］.JNeurosci，2004，24(45):1021122.　　［9］AkinPT，LiuPK，HsuCY.Immediateearlygeneexpressioninresponsetocerebralischemia:friendorfoe［J］.Stroke，1996，27:16821687.