心肌标志物荧光检测方法的建立

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1、分类号：密级：可公开UDC：编号:心肌标志物荧光检测方法的建立QUANTITATIVEDETERMINATIONOFMYOCARDIALMARKERSWITHFLUORESCENCEIMMUNEANALYSIS学位授予单位及代码：0703学科专业名称及代码：化学（070301）研究方向：生物与化学分析申请学位级别：硕士指导教师：于源华教授研究生：丁秋雨论文起止时间：2015.9.1—2016.12.1长春理工大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，《心肌标志物荧光检测方法的建立》是本人在指导教师的指导

2、下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日长春理工大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解“长春理工大学硕士、博士学位论文版权使用规定”，同意长春理工大学保留并向中国科学信息研究所、中国优秀博硕士学位论文全文数据库和CNKI系列数据库及其它国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。

3、本人授权长春理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，也可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。作者签名：年月日导师签名：年月日摘要近些年来，急性心肌梗死具有死亡率高及发病急等特点，已对人类健康产生重大的威胁。肌酸激酶同工酶（CK-MB）与肌红蛋白（Myo）是心肌细胞产生的重要心肌损伤有关标志物，对急性心肌梗死的诊断有着重要的临床意义。本研究利用荧光微球免疫分析方法对血液中的Myo以及CK-MB建立了定量检测分析方法，同时制备了定量检测试纸条。通过免疫层析技术与光致发光相结合，将一种单克隆

4、抗体与荧光微球通过EDC与NHS进行偶联作成荧光标记物，将另一种对抗原不同作用靶点的抗体包被到NC膜上，最终两种单克隆抗体与样本中的目标被测物形成“三明治”的夹心结构，标记的荧光微球在紫外光激发波长为365nm下发出红光，通过荧光定量检测仪测定相对荧光强度从而定量检测Myo以及CK-MB的含量。本文通过荧光微球标记及表征、原料的筛选、免疫层析试纸条的构建及优化以方法学评估等系列实验。结果显示Myo试纸条线性范围25ng/ml~1500ng/ml，灵敏度为12.5ng/ml，CV<7%；CK-MB试纸条线性范围1ng/ml~

5、1000ng/ml，灵敏度为1ng/ml，CV<8%。通过样本测试结果显示自制试纸条与购买的胶体金试纸条具有良好的相关性。但荧光试纸条定量，胶体金只能定性，而且荧光试纸条比较灵敏。本论文的实验结果为开发Myo以及CK-MB荧光检测方法及检测卡提供实验基础。关键词:肌红蛋白肌酸激酶同工酶荧光免疫分析法急性心肌梗死IABSTRACTInrecentyears,acutemyocardialinfarctionwithhighmortalityandacuteonsetandothercharacteristics,hasasi

6、gnificantthreattohumanhealth.Creatinekinaseisoenzyme(CK-MB)andmyoglobin(Myo)areimportantmarkersofmyocardialinjuryinmyocardialcells,andhaveimportantclinicalsignificanceinthediagnosisofacutemyocardialinfarction.Inthisstudy,thequantitativemethodofMyoandCK-MBinbloodwa

7、sestablishedbyusingfluorescentmicrospherewithimmunoassayanalysis,andaquantitativeteststripwasalsoprepared.Principleisthecombinationofimmunochromatographyandphotoluminescence.ThemonoclonalantibodyandfluorescentmicrosphereswereconjugatedtoafluorescentlabelbyEDCandNH

8、S,andanotherantibodyagainstthedifferenttargetofantigenwascoatedontoNCmembrane.Finally,sandwichstructureconsistsoftwokindsofmonoclonalantibodiesandtheant