hplc法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量

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1、HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量【关键词】辣椒精；辣椒碱；二氢辣椒碱；高效液相色谱法；含量测定　　Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodeterminethetedonC18column(4.6mm×250mm,5μm),ethanol-obilephase.ThefloL/minandthedetection.ResultThelinearrelationshipsofcapsaicinanddihydrocapsaicinethodisconvenient,theresult

2、isaccurateandreliable,andcanbeusedtodeterminethecontentoftination　　　　辣椒精为植物辣椒中经物理方法提练、精制而成,常用作镇痛、消炎、活血、冻伤、止痒、杀菌、戒毒、祛风湿、止痛、减肥。辣椒中的主要化学成分为辣椒碱和二氢辣椒碱,不同辣椒品种果实整体及不同部位中辣椒总碱的含量不同。为了建立辣椒有效成分质量控制标准,达到有效控制辣椒精质量的目的,本试验建立了高效液相色谱(HLPC)法测定辣椒精中主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱的定量分析方法。该方法简便快速,分离度好,准确度高,可为辣椒精质

3、量控制提供参考。　　1仪器与试药　　LC-10ATvpplus高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10Avpplus检测器；AB265-s电子分析天平(METTLER瑞士)；超声仪。　　辣椒碱、二氢辣椒碱对照品由美国Sigma公司提供；辣椒精油溶液样品(河南倍特生物科技有限公司,批号20090416)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水(自制)。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇-水(70∶30)；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；检测波长为280nm；进样量20μL。在此条件下

4、辣椒碱的保留时间为12.20min,二氢辣椒碱的保留时间为16.52min,能与其他成分很好分开。色谱图见图1。　　注：1.辣椒碱；2.二氢辣椒碱；A.辣椒碱对照品；B.二氢辣椒碱对照品；C.供试品图1辣椒精HPLC图谱　　2.2对照品溶液的制备　　分别精密称取辣椒碱和二氢辣椒碱粉末适量,分别置于10mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成约含0.2000g/L的辣椒碱和二氢辣椒碱的对照品溶液,低温避光保存备用。　　2.3供试品溶液的制备　　精密称取辣椒精油样品0.03g,置100mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45μm微孔滤膜滤

5、过,即得。　　2.5精密度试验　　分别吸取辣椒碱和二氢辣椒碱同一对照品溶液,重复进样6次,20μL/次,测定其峰面积,计算其RSD分别为0.24%和0.92%,表明仪器精密度良好。　　2.6稳定性试验　　精密吸取同一样品溶液20μL,分别于0、4、12、24、36、48h进样分析,分别测定峰面积,计算其RSD,结果辣椒碱峰为0.92%,二氢辣椒碱峰为2.35%,表明样品溶液在48h内稳定性良好。　　2.7重复性试验　　精密称取6份辣椒精油样品0.03g,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,分别进样20μL,分别计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱含量

6、,结果其RSD分别为0.69%和0.72%。　　2.8加样回收率试验　　精密称取10份已测知辣椒碱和二氢辣椒碱含量的辣椒精样品0.03g,分为2组,分别准确加入辣椒碱0.02mg和已知浓度的二氢辣椒碱对照品溶液,依法测定,并计算加样回收率,结果见表1、表2。表1辣椒碱加样回收率试验结果表2二氢辣椒碱加样回收率试验结果　　2.9样品测定　　取辣椒精油样品约0.03g,精密称定,以甲醇溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤后,超声脱气30min,按上述色谱条件进行分析测定。以20μL进样测定色谱峰面积,根据标准曲线计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱的质量分数

7、。结果辣椒碱平均质量分数为51.59%,RSD＝0.69%,二氢辣椒碱的平均质量分数为49.72%,RSD＝0.72%。　　3讨论　　本试验为了能在适宜的分析时间内获得指标成分的完全分离,对流动相体系进行了反复摸索,随着流动相甲醇-水的比例变化(75∶25、70∶30、65∶35、60∶40),出峰时间逐渐延长,峰高逐渐变小,峰面积也逐渐变小,分离度差。故最终确定用70∶30比例洗脱。　　试验中还对辣椒精水样、天然辣椒碱进行了含量测定。结果方法稳定可靠,重复性好,适合于辣椒总碱的质量控制。