hplc法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量论文

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1、HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量论文.freelm×250mm,5μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为280nm。结果辣椒碱及二氢辣椒碱分别在1.955～7.820μg(r＝0.9999)、2.709～7.224μg(r＝0.9955)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率分别为101.57%、108.87%。结论该法简便,结果准确、可靠,可用于测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。【关键词】辣椒精；辣椒碱；二氢辣椒碱；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveToestablishanHP

2、LCmethodtodeterminethetedonC18column(4.6mm×250mm,5μm),ethanol-obilephase.ThefloL/minandthedetection.ResultThelinearrelationshipsofcapsaicinanddihydrocapsaicinethodisconvenient,.freelinethecontentoftination辣椒精为植物辣椒中经物理方法提练、精制而成,常用作镇痛、消炎、活血、冻伤、止痒、杀菌、戒毒、祛风湿、止痛、减肥。辣椒中的主要化学成分为辣椒碱和二氢辣椒碱,不

3、同辣椒品种果实整体及不同部位中辣椒总碱的含量不同。为了建立辣椒有效成分质量控制标准,达到有效控制辣椒精质量的目的,本试验建立了高效液相色谱(HLPC)法测定辣椒精中主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱的定量分析方法。该方法简便快速,分离度好,准确度高,可为辣椒精质量控制提供参考。1仪器与试药LC-10ATvpplus高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10Avpplus检测器；AB265-s电子分析天平(METTLER瑞士)；超声仪。辣椒碱、二氢辣椒碱对照品由美国Sigma公司提供；辣椒精油溶液样品(河南倍特生物科技有限公司,批号20090416)。甲醇为色谱纯,水为双

4、蒸水(自制)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇-水(70∶30)；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；检测波长为280nm；进样量20μL。在此条件下辣椒碱的保留时间为12.20min,二氢辣椒碱的保留时间为16.52min,能与其他成分很好分开。色谱图见图1。注：1.辣椒碱；2.二氢辣椒碱；A.辣椒碱对照品；B.二氢辣椒碱对照品；C.供试品图1辣椒精HPLC图谱2.2对照品溶液的制备分别精密称取辣椒碱和二氢辣椒碱粉末适量,分别置于10mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成约含0.2000g/L

5、的辣椒碱和二氢辣椒碱的对照品溶液,低温避光保存备用。2.3供试品溶液的制备精密称取辣椒精油样品0.03g,置100mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45μm微孔滤膜滤过,即得。2.4线性关系考察分别精密吸取辣椒碱和二氢辣椒碱对照品溶液,分别进样10、15、20、25、30、35、40μL,按上述色谱条件分析测定。以峰面积(A)为纵坐标,进样量(mg)为横坐标绘制工作曲线,得辣椒碱和二氢辣椒碱回归方程,分别为：Y＝5.54×106X－3.7×104(r＝0.9999)；Y＝2.29×106X－3.3×105(r＝0.9955),线性范围分别为1.955～

6、7.820μg和2.709～7.224μg。2.5精密度试验分别吸取辣椒碱和二氢辣椒碱同一对照品溶液,重复进样6次,20μL/次,测定其峰面积,计算其RSD分别为0.24%和0.92%,表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验精密吸取同一样品溶液20μL,分别于0、4、12、24、36、48h进样分析,分别测定峰面积,计算其RSD,结果辣椒碱峰为0.92%,二氢辣椒碱峰为2.35%,表明样品溶液在48h内稳定性良好。2.7重复性试验精密称取6份辣椒精油样品0.03g,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,分别进样20μL,分别计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱含量,结果其

7、RSD分别为0.69%和0.72%。2.8加样回收率试验精密称取10份已测知辣椒碱和二氢辣椒碱含量的辣椒精样品0.03g,分为2组,分别准确加入辣椒碱0.02mg和已知浓度的二氢辣椒碱对照品溶液,依法测定,并计算加样回收率,结果见表1、表2。表1辣椒碱加样回收率试验结果表2二氢辣椒碱加样回收率试验结果2.9样品测定取辣椒精油样品约0.03g,精密称定,以甲醇溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤后,超声脱气30min,按上述色谱条件进行分析测定。以20μL进样测定色谱峰面积,根据标准曲线计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱的质量分数。结果辣椒碱平均质量分数为51.59%,R

8、SD＝0.69%,二氢辣椒碱的平均质量