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1、羊肚菌多糖提取分离条件的研究论文.freelin提高效果最明显。不同类型的菌种在多糖产量上存在明显差异,GIM5.69型菌种多糖得率明显高于GIM5.29型。结论羊肚菌多糖最佳提取分离条件为：超声10min,超声频率为40kHz,在90℃下恒温加热150min,浸提2次。【关键词】羊肚菌；黑脉羊肚菌；多糖；提取工艺Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractiontechnologyofMorchellapolysaccharide.Methods5.69(Morchellaesculenta(L.)P
2、ers.)andGIM5.29(Morchellaelata)astheresearchobject,thedifferenceofpolysaccharideyieldeetime,thedifferenceofpolysaccharidesyieldofthesetebothcanimprovethepolysaccharidesyield,andtheeffectof10minofultrasoundeansdifferentstrainhasdifferentpolysaccharidesyield.ConclusionThe
3、bestextractionconditionis10minofultrasoundatthefrequencyof40kHz,heating150minat90℃andlixiviationtin,浸提次数2次,加水比1∶40。鉴于单纯热水浸提多糖的提取量有限,笔者在前人研究基础上进行了改进,研究超声及其酶法对多糖得率的影响,为工业生产提供必要的研究基础。1材料与方法1.1试药与仪器供试菌种羊肚菌GIM5.69(Morchellaesculenta(L.)Pers.)及黑脉羊肚菌GIM5.29(Morchellaelata),广东省
4、微生物研究所微生物菌种保藏中心提供。纤维素酶和果胶酶由Solarbio公司提供,标准葡聚糖DextranT70为Pharmacia公司产品,其余试剂均为国产分析纯。Labofuge400R台式冷冻离心机(德国Heraeus),恒温培养箱(上海智城),RE-52旋转蒸发仪(上海青浦沪西),BP211D电子天平(德国Sartorius),MLS-3750灭菌器(日本Sanyo)。1.2培养基及培养方法斜面培养基：采用PDA培养基,含土豆10%、蔗糖3%、蛋白胨0.1%、酵母膏0.5%、KH2PO40.05%、MgSO4·7H2O0.05%
5、,无菌接种后25℃培养7～10d,4℃保存。液体种子培养基：含蔗糖3%、蛋白胨0.1%、酵母膏0.5%、MgSO40.05%、KH2PO40.05%；每瓶200mL分装于500mL三角瓶中,灭菌后从斜面培养基上接种,25℃摇床培养10～14d,转速180r/min。发酵培养基：含蔗糖4%、NH4NO30.3%、KH2PO40.15%、MgSO40.15%、酵母膏0.5%；每瓶200mL分装于500mL三角瓶中,灭菌后按2%接种量吸取摇床培养的种子培养液接种,25℃摇床培养10～14d,转速180r/min。1.3多糖提取经过以上培养后
6、得到的羊肚菌菌丝体经过干燥后用于多糖提取,本研究将羊肚菌菌丝体分别以超声、纤维素酶、果胶酶处理后进行多糖提取,并将结果与常规热水浸提加以比较,以获得优化多糖提取方式。1.3.1热水浸提称取5g干菌丝体,粉碎后加入40倍体积的去离子水,90℃,150min,残渣重复浸提2次。合并上清液,过滤。在37℃条件下,上清液用旋转蒸发仪浓缩至适当体积并以ΦMolish反应；FeCl3反应；(CTAB)络合反应5；硫酸-咔唑反应；I2-KI反应；同时在190～390nm波长范围内对羊肚菌多糖进行扫描。2结果2.1粗多糖重量比较(见表1)表1粗多糖重
7、量比较（略）从粗多糖重量比较上分析,与单纯热水浸提相比,超声及酶法均可明显提高粗多糖得率。2.2苯酚-硫酸法检测多糖含量及制作标准曲线根据苯酚-硫酸法检测结果制作标准曲线,多糖含量与吸光度A490之间的关系满足方程Y＝0.0071X－0.0455,其中X为A490,Y为溶液中多糖含量。2.3粗多糖中总糖含量检测测得羊肚菌多糖的A490值,对照标准曲线方程Y＝0.0071X－0.0455计算所得的总糖含量。结果见表2、表3。表2黑脉羊肚菌GIM5.29的多糖得率（略）表3羊肚菌GIM5.69的多糖得率（略）在以往对多糖提取方法的优化研究
8、中,通常以最终粗多糖得率来衡量提取技术优劣,如武氏等6对羊肚菌多糖提取方法优化后所得粗多糖得率为2.58%。该衡量标准较直观快捷,但因粗多糖中仍存在一定杂质,故结果可能有一定误差。本研究在统计粗多糖重量基础上进一步采用苯
