survivin和il-2重组痘苗病毒载体对树突状细胞功能的影响

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1、·}lllI大学博十学位论文双轼冈重组疖茁病毒载体对树突状细胞功能的影响Survivin和IL．2重组痘苗病毒载体对树突状细胞功能的影响专业：生化与分子生物学博士研究生：陶然导师：郑利民教授摘要重组痘苗病毒具有宿主范围广，基因容量大和安全性好等优势，能诱发较强的体液免疫和细胞免疫应答，因此被认为是肿瘤生物治疗的理想载体。MVA是高度减弱的痘苗病毒株，可作为安全有效的疫苗载体。树突状细胞(DendriticCell)是体内功能最强的抗原呈递细胞，能直接激活幼稚T细胞并有效诱导抗肿瘤免疫应答。目前关于MVA痘苗病毒对DC功能的影响尚不完全清楚，但是有报道痘苗病毒感

2、染可抑制DC成熟并诱导其凋亡。这一特性很可能会影响痘苗病毒作为肿瘤免疫治疗载体的疗效。因此，本课题拟系统的研究MVA痘苗病毒载体对DC表型和功能的影响，并希望能通过构建重组载体来克服MVA作为肿瘤疫苗的固有缺陷。我们首先构建了表达肿瘤特异性抗原Survivin和同时表达Survivin及IL．2双基因的重组MVA痘苗病毒载体，检测了该载体对DC表型、功能以及病毒感染后DC对自体T细胞的凋亡、增殖和活化的影响。结果表明，各组MVA感染均能上调iDC表面成熟标记CD83和共刺激分子CD80、CD86的表达并促进iDC的活化；这些DC经LPS刺激后的成熟受到轻度抑制

3、，但仍能高水平表达重组蛋白。重组MVA载体感染能使DC分泌更多的TNF一0c，同时IL．10的表达降低。各组感染的DC与自体T细胞共培养，均能有效诱导T细胞增殖，激活细胞毒性T淋巴细胞。vDl0组(含Survivin及IL．2双基因)与vSur组、空载体v65组相比，能显著降低T细胞的凋亡、提高T细胞的增殖能力和活性，并在体系中产生大量IL．2和IFN-Y。结论：重组MVA感染尽管能抑制DC成熟，但并不影响DC刺激免疫应答的功能。更重要的是，重组MVA联合IL．2共表达能更显著地加强DC刺激免疫应答的功能。本研究为Survivin和IL．2双基因重组痘苗病毒疫

4、苗的临床研究提供了实验依据，同时也为进一步优化重组MVA抗肿瘤疫苗提供了理论基础。关键词：痘苗病毒、树突状细胞、免疫治疗、细胞毒性T细胞、IL一2、Survivin中山大学博十学位论文双皋冈重组疗曲．病毒载体埘树突状细胞功能的影响ActivationofdendriticcellsbyrecombinantmodifiedvacciniavirusAnkaravectorsencodinghumanSurvivinandIL一2genesMajor：BiochemistryandmolecularbiologyPh．D．Candidate：RanTaoSupe

5、rvisor：ProfessorLiminZhengAbstractRecombinantvacciniavirus(rVV)hasmanyadvantages：(i)largecapacitytoincorporateforeigngenes；(ii)highexpressionofrecombinantproteinsinwiderangeofhostcells；(iii)effectiveinductionofbothhumoralandcellularimmuneresponses．Therefore，^ⅣWasregardedasasafeandpr

6、omisingvaccinevectorforcancerimmunotherapy．Theattenuatedstrain“ModifiedvacciniavirusAnkara”(MVA)hasattractedsignificantattentionasasafevaccinevectorusedtotransfertumorassociatedantigen．Dendriticcells(DCs)arethemostpotentprofessionalantigenpresentingcellsofthehumanimmunesystemwhichpo

7、ssessanuniquecapacitytoactivatenaiveTcell、CD4+ThandCD8+CTLcells．Atpresent，thepreciseeffectofVV-infectiononDCfunctionisstilllargelyunknown．However，severalstudieshaveshownthatVV-infectionalonecouldimpairthematurationandviabilityofDCs，whichwouldhampertheeffortstouseVVasavectorfortumori

8、mmunetherapy．Theref