pak4在乳腺癌发生发展中的作用及其机制研究

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1、PAK4在乳腺癌发生发展中的作用及其机制研究TheeffectsandmechanismofPAK4onbreastcancerprogression2010级临床医学硕士研究生肿瘤学姓名：贺丽芳导师：张国君教授课题来源：国家重点基础研究发展计划（No.2011CB70770）国家自然科学基金（No.31271068）广东省乳腺癌诊治研究重点实验室(No.2060299)汕头大学医学院2013年5月学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对

2、本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要背景与目的：乳腺癌是女性最常见的

3、肿瘤之一，也是女性癌症患者的第二大死因，其发病率逐年增高，且日益年轻化，已成为中国妇女疾病负担最重的恶性肿瘤之一。乳腺癌的发生发展是一个多因素、多基因参与调控的复杂过程。近来大量研究表明p21-活化激酶4（PAK4）过表达于人类多种肿瘤组织中，在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用，并且与肿瘤患者的较差预后密切相关。但是有关PAK4在乳腺癌发生发展中的作用及其机制研究尚未见论文报道。本研究主要通过体外细胞实验、体内成瘤实验及免疫组织化学实验，探索PAK4在乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭中的作用及可能机制，并分析PAK4与乳腺癌患者临床病理学参数及预后的关系，进而为乳腺癌

4、的治疗提供一个新的潜在预后因子或治疗靶点。材料和方法：本实验分别通过过表达和干扰MDA-MB-231细胞中PAK4后，采用细胞增殖实验、划痕实验、迁移及侵袭实验来研究PAK4对乳腺癌细胞的作用，采用WesternBlot及实时荧光定量PCR进一步探索PAK4影响乳腺癌细胞生物学行为的机制；通过裸鼠体内成瘤实验来验证PAK4对乳腺癌生长的影响；利用免疫组织化学方法检测PAK4在93例乳腺癌组织中表达情况，应用SPSS16.0软件进行统计分析，采用卡方检验及Fisher精确检验来分析PAK4表达水平与乳腺癌患者临床病理学参数的关系；采用Kaplan-Meier生存分

5、析法进行无病生存及总生存分析，组间比较使用log-rank检验法。P≤0.05为差异具有统计学意义。结果：PAK41.过表达PAK4后，细胞增殖实验显示MDA-MB-231细胞的吸光度明显高于空PAK4载体组细胞，MDA-MB-231细胞的迁移率增加了2.5倍，侵袭率增加了1.88倍。2.干扰PAK4后乳腺癌细胞增殖能力明显下降，细胞的迁移率及侵袭率分别降低了78%和73%。3.过表达PAK4后，P-ERK1/2蛋白含量增加；干扰PAK4后，P-ERK1/2蛋白含量降低，MMP2mRNA水平也降低，而总ERK1/2蛋白含量一直不变。I汕头大学医学院硕士学位论文P

6、AK44.裸鼠皮下成瘤实验发现接种MDA-MB-231细胞后的肿瘤体积及瘤体重量均高于对照组。5.PAK4主要定位于乳腺癌细胞浆，PAK4的表达与诊断时患者年龄、组织学分级、ER表达、PR表达及HER2表达无相关性，肿瘤体积＞2cm的胞浆PAK4高表达率为74.7%，淋巴结转移状态阳性者PAK4高表达率为84.4%，肿瘤分期为III期者，PAK4表达率越高。6.生存分析显示胞浆高表达PAK4与患者无病生存及总生存显著相关。结论：1.PAK4在乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭过程中发挥着正调控作用。2.PAK4促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制可能是通过上调ERK1

7、/2/MAPK通路或促进MMP2的转录。3.PAK4可以促进裸鼠乳腺癌的生长。4.PAK4的表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移个数及肿瘤分期等乳腺癌预后因素密切相关，PAK4高表达是乳腺癌患者预后不良的重要指标。关键词：乳腺癌；p21-活化激酶4；细胞增殖；预后II汕头大学医学院硕士学位论文AbstractBackgroundandObjectives:Breastcancerisoneofthemostcommoncancerandthesecondcauseofmortalityinfemales,theincidenceofbreastcanceris

8、increasingye