微环境在多囊肾病囊肿发生与发展中的作用及其机制研究

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1、分类号论文编号密级三ｆ庭叫若硕±学位论文微环境在多囊晋病囊巧发生与发展中的作用及其化制研究Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｕ化ｓｏｍａｌｄｏｍ化ａｎｔｏｌｃｓｔｉｃｋｉｄｎｅｄｉｓｅａｓｅｐｇｐｙｙｙ研巧生烛名：陈掲剑学号：２０１２１２０９指导教师：梅长林教授第二军医大学长征医院学科、专业：内科学（肾病）学位类型：略床医学专业学位答辩日期：２０１５年４月二０—五年四月第二军医大学

2、硕古樂化徐文微环境在多襄腎病爱肿发生与发展中的作用及其化制研究Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄｐｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｕ化ｓｏｍａｌｄｏｍｉｎａｎｔｐｏｌｙｃｙｓ枯ｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ研究生姓名陈揭剑学科和专业内科学（肾脏病专业）指导教师梅长林教授指导小组叶朝阳教授郁胜强副教授戴兵副教授第二军医大学长征医院肾内科解放军肾脏病研究所论文提交日期：２０１５年３月学位授予日期；２０１５年６月独劍性声明本人声明所呈交的学位论

3、文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加从标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果一工。与我同作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。－学位论文作者签；＾：签字日期：２０／Ａ年ｉｒ月日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和滋盘，允许论文被查阅和借阅二Ｖ乂。本人授权第军医大学可将学位论文的全部或部分内容编入ｋ、有关数据库进行检索，可义采用影印、缩印或担描等

4、复制手段保存汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本投权书）学位论文作者签名：辦导师签矣带１么０１户去＇於日签訓尸＾月日签字日期：年月字日期：年目录摘要－１－－－Ａｂｓｔｒａｃｔ３缩略词表－５－、／－—－刖胃７－一－９－第部分肾囊肿微环境对肾小管上皮细胞增殖的影响及其相关机制－前９－５－实验设计１１－－－材料与方法１３结果－２３－－３－讨论１第二部分肾损伤条件下微环境的改变及对肾小管上皮细胞作用与机制的探－３３－１＾前胃－３３－实验巧计－－３５材料城

5、－３７－＾＾觀－４５－職－５２－全文总结－５４－参考文献－５５－－综述５９－在读期间完成和发表的文章－的－－致谢７０－微环境在多《肾病爱肿发生与发展中的作用及其机制研究摘要研究目的：本课题探讨了常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）中囊肿衬里上皮细胞与巨帷细胞、肾小管上皮细胞构成的微环境对肾小管上皮细胞的影响，探寻其中可能发挥作用的因子及其相关机制。方法：１．建立小鼠巨隨细胞（ＲＡＷ２６４．７）与人肾囊抑衬里上皮细胞（０ｘ１６１细胞）共培养模型，［实时ＰＣＲ技术与免疫印迹技术检测不同刺激因

6、素对巨旌细胞极化的影响。２．建立ＭＤＣＫＪＩ细胞、小鼠巨尴细胞（ＲＡＷ２６４．７）与人肾囊肿衬里上皮细胞（０ｘ１６１细胞）Ｈ维共培养模型，比较ＭＤＣＫＩＩ细胞不同条件下囊泡直径。Ｗ免疫印迹技术检测ＭＤＣＫＩＩ细胞与多囊肾病相关通路蛋白的表达。３．Ｗ实时ＰＣＲ技术、免疫印迹技术与酶联免疫吸附测定法检测小鼠巨幢细胞（ＲＡＷ２６４．７）与人肾囊肿衬里上皮细胞（化１６１细胞）不同共培养模式与刺激条ＴＮＦ－ａ的表达与分泌件下。４．１＾实时？０反技术、免疫印迹技术检测ＭＤＣＫＩＩ细胞与小鼠巨儀细胞（ＲＡＷ２６４．７）、人肾囊肿衬里上皮细胞（０

7、ｘ１６１细胞）共培养条件下ＦＩＰ２表达。５．繁殖并鉴定Ａｔ泌ＩＫ０小鼠，于４周龄予腹腔注射他莫昔芬诱导Ａｔ成基因敲除，于５周龄建立单侧肾脏缺血再灌注模型。巧谢ＩＫ０小鼠－６．收集ＩＲＩ急性期肾组织标本，免疫印迹法检测其ＴＮＦｏｕＦＩＰ２ＰＣＲ技术检测其７７ＶＦ－ａ、巧表达。蛋白的表达，实时结果：１．Ｈ维培养条件下，与对照组相比，ＭＤＣＫＩＩ细胞与Ｍ２型巨睡细胞、囊肿衬里上皮细胞共培养，其囊泡直径明显増加（戶０．０５）。ＭＤＣＫＩＩ细胞与Ｍ２型巨幢细胞、囊肿衬里上皮细胞共培泰其ＰＳＴＡＴ３、ｐＡ