糖萜素水平对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响

《糖萜素水平对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

，’斧：；聲ｒ序巧；妍孚．？．．．’．．ｒ辦屯ｒ細义＇‘＾頃與，分类号’：Ｓ８３４学校代码；１０巧８Ｖ＊＼ｖ／．、，替：挨私巧．；、’韦＇又－，、密级：公开，Ｖ学号：１３３５犯０３１５一：１＇Ｘ；巧．，ｖ：ｉ｜■．＇＇．‘＾＇；Ｔ／／木；缘；冷ｊｉｆｙ；农业推广硕ｉ专业学位论文ｙ巧＇＇‘．苗達，；；：．－＇Ｉ：－／／：／．．糖旋素水平对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的穀响‘’－么．：ＥｆｆｅｃｔｏｆＳａｃｃｈａｒｉｃｔｅｒｅｎｉｎＬｅｖｅｌｏｎＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｙ产：ｐ，－ＬｉｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎＳｈａｏｘｉｎＤｕｃｋｓＩｐｇ．、－■、片‘．巧．＇４、—Ｍ—－’；Ｖ％Ｖ－‘－公＞．、：．．；；．，；＾Ｖ聲．研究生姓准何丽安串華片ｉ，．、、、＇？吟、护校；、￥内导师姓名及雌秋江教授Ｖ：；乂，■’、／／Ｊ—；亡Ｖ．－Ｖ校外导师姓；名及卢立志研究员巧‘、＾换ｉ＼＼专业学位类别农业推广硕去，：。＇‘—一￣ｆ聲．＼＞’．殖领域名称．，养，＇——．‘．．■■’；＇营研究方向家舍养。夢维＾讓’．‘物院亦．在学晓动，所科学学＇．．—．—．．ｋ‘’．．，Ｖ，．梦＇．－：．．論哈中．、Ｖ产、＇、．－－—＇＇．；‘＇章．、＇＜＇＾＇．二；；新疆乌鲁齐寶致＼．、ｉ苗＞＞勢４沐Ｉ句＾＾’飞二一＇。五，如年六月角，，歡＾違巧游學戶 国家水禽产业技术体系项目“糖萜素在蛋鸭上应用研究及推广示范”（项目编号：CARS43-2）课题主持人：卢立志研究员（浙江省农业科学院） 糖萜素水平对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响摘要本课题以绍兴鸭为试验对象，在基础饲粮中分别添加不同水平的糖萜素，研究糖萜素对蛋鸭产蛋性能、蛋品质、胸肌及肝脏的影响，并对其调节脂类代谢的作用机理进行初步的探讨，得出糖萜素适宜的添加剂量，为糖萜素的合理研发以及其在蛋鸭生产中的实际应用提供一定的科学依据。选取产蛋后期的绍兴鸭300只，采用单因子随机试验设计，试验期为60d，随机分为4个组，每组设5个重复，每重复15只，在基础日粮中添加糖萜素添加剂4个水平：0、250、500、750mg/kg。预饲2周，试验饲养60d。试验过程中均栏养，自由采食饮水。试验结果表明：(1)随着饲粮糖萜素水平的升高，产蛋率、平均蛋重、日产蛋重显著增加(P<0.05)，料蛋比显著降低(P<0.05)；(2)在饲喂第30d时，随着饲粮糖萜素水平的提高，蛋重、蛋黄颜色、蛋黄重、蛋黄比例均有显著影响(P<0.05)；(3)在饲喂第60d时，蛋壳强度、蛋重、蛋黄颜色和蛋黄比例均无显著影响(P>0.05)，蛋白高度和哈夫单位差异达到了显著水平(P<0.05)；(4)饲粮中添加糖萜素显著降低了试验鸭肝脏中粗脂肪、胆固醇、甘油三酯以及胸肌中粗脂肪和甘油三酯的含量(P<0.05)；(5)饲粮中糖萜素水平对试验鸭蛋中胆固醇影响小，各组之间无显著差异（P>0.05）；(6)饲粮中添加不同水平的糖萜素显著降低了试验鸭肝脏、胸肌中饱和脂肪酸(SFA)的比例（P<0.05），显著升高了试验鸭肝脏、胸肌中单不饱和脂肪酸（MUFA）以及多不饱和脂肪酸(PUFA)的比例（P<0.05）；(7)饲粮中添加糖萜素使血浆中脂肪酶活力（LPS）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量显著升高（P<0.05），其他没有显著影响；(8)随着饲粮中糖萜素水平的升高，血浆中IgA、IgM含量显著升高（P<0.05）；(9)研究表明，随着饲粮中糖萜素水平的增加，CYP7A1和SREBP-2基因在肝脏中的表达量也增加(P<0.05),其中Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组的表达丰度显著高于空白组Ⅰ(0)(P<0.05)；(10)综合产蛋性能和蛋品质推荐产蛋期绍兴鸭糖萜素的需要量为250-500mg/kg；I 研究表明，基础饲粮中添加一定量的糖萜素可提高蛋鸭平均蛋重、日产蛋重、蛋黄比例，增加蛋黄颜色，降低蛋鸭肝脏、胸肌中粗脂肪和甘油三酯的含量，以及肝脏中胆固醇含量，同时可影响肝脏和胸肌中不同脂肪酸的比例，影响试验鸭的血液生化指标，提高CYP7A1和SREBP-2基因在肝脏中的表达。关键词：绍兴鸭；糖萜素；产蛋性能；脂质代谢；CYP7A1；SREBP-2II EffectofSaccharicterpeninLevelonProductionPerformance,LipidmetabolisminShao-xingDucksAbstractThepresentstudyinvestigatedthattheeffectsofbasaldietsupplementationwithsaccharicterpeninoneggproduction,eggquality,breastmuscleandliverofShaoxingducks,andstudiedfurtheronthemetabolismmechanisminvolvedinlipmetabolism,thenprovidedtheappropriateamountofsaccharicterpeninsupplementedintobasaldietforthefutureresearchesandpraticalapplications.300Shaoxingducks(justenteringthelayingperiod)wereselectedandthenrandomlyallottedto4treatments,and5biologicalreplicatespertreatmentwith15ducksineachreplicate.GroupI,II,III,IVwerefedwithbasaldietsupplementationwith0,250,500,750mg/kgsaccharicterpenin,respectively.GroupIasthecontrolgroup.Theseanimalswerepre-fedfor14daysandfedfor60days,waterwereprovidedfreely.Resultsshowedthat:(1)Thelayingrate,theaverageeggweightandthedailyeggweightweresignificantlyimproved(P<0.05)withtheincreasingdoesofsaccharicterpenininbasaldiet,andthefeedeggratioweresignificantlylower(P<0.05)thangroupⅠ(0)(2)Theaverageeggweight,yolkcolor,averageyolkweight,eggyolkratioweresignificantlyimproved(P<0.05)withtheincresingdoesofsaccharicterpeninonday30(3)Nosignificantdiffernces(P>0.05)werefoundineggshellstrength,averageeggweight,yolkcolorandeggyolkratioonday60;ThegreatestaveragealbumenheightandHaughweresignificantdifference(P<0.05).(4)Thecontentofcrudefat,cholesterolandtriglyceridesinliverincludethecontentofcrudefatandtriglyceridesinbreastmuscleweremarkedlysignificantlydecreased(P<0.05)viatheuseofsaccharicterpenininbasaldiet(5)Nosignificantdifferences(P>0.05)werefoundinthecontentofcholesterolineggsbetweeneachtestgroups.(6)Theproportiontofsaturatedfattyacid(SFA)ratioinliverandbreastmuscleweresignificantlydecreased(P<0.05),theproportionofmonounsaturatedfattyacids(MUFA)andpolyunsaturatedfattyacids(PUFA)weresignificantlyimproved(P<0.05)viatheuseofdifferentdoesofsaccharicterpenininbasaldiet.(7)Thelipaseactivity(LPS),highdensitylipoproteincholesterol(HDL-C)inplasmaweresignificantlyincreased(P<0.05),Butnosignificantdifferences(P>0.05)werefoundinanothertestgroups.(8)TheserumIgA,IgMweresignificantlyimproved(P<0.05)viatheuseofsaccharicterpeninsupplementedinbasaldiet(9)TheexpressionofCYP7A1andSREBP-2geneinliverwerepresentedanincreasingtrendwiththeincreasingdoesofsaccharicterpeninsupplementedinbasaldiet,andtheexpressionofCYP7A1andSREBP-2geneingroupⅡ(250)andⅢ(500)weresignificantlygreater(P<0.05)thangroupⅠ(0),respectively.(10)Takingtofetherfromtheeggproductionandeggquality,thebestdoesofsaccharicterpeninIII forShaoxingduckreached250~500mg/kg.Studiessuggestedthatsaccharicterpenincanimprovetheaverageeggweight,dailyeggweightandeggyolkratio;reducethecontentofcrudefatandtriglyceridesinliverandbreastmuscle,andthecontentofcholesterolinliver;affecttheproportionofdifferentfattyacidsaffectinliverandbreasrmuscleandbloodbiochemicleindex;improvetheexpressionofCYP7A1andSREBP-2geneinliver.Keywords:Shaoxingduck;saccharicterpenin;eggproduction;lipidmetabolism;CYP7A1;SREBP-2IV 目录第1章研究综述......................................................................................11.1糖萜素的研究概况...........................................................................................11.1.1糖萜素理化性质......................................................................................11.1.2糖萜素的有效成分测定..........................................................................21.1.3糖萜素的提取方法..................................................................................21.2糖萜素对动物机体的免疫功能概况...............................................................21.3糖萜素在生产中的应用及国内外研究现状.............................................31.3.1糖萜素国内外研究现状..........................................................................31.3.2糖萜素糖萜素在家禽营养中的应用研究..............................................31.3.3糖萜素在水产中的应用研究..................................................................41.4CYP7A1和SREBP-2基因研究进展................................................................41.4.1CYP7A1基因研究进展...........................................................................41.4.2SREBP-2基因的研究进展.....................................................................51.5本研究的目的和内容.......................................................................................61.5.1研究的意义..............................................................................................61.5.2研究的目的及研究内容..........................................................................6第2章不同糖萜素水平对产蛋性能、蛋品质的影响..........................72.1材料与方法.......................................................................................................72.1.1试验动物与饲养管理..............................................................................72.1.2试验设计与饲粮组成..............................................................................72.1.3检测指标与方法......................................................................................72.1.4主要仪器..................................................................................................82.1.5数据统计及分析......................................................................................92.2试验结果...........................................................................................................92.2.1糖萜素水平对绍兴鸭产蛋性能的影响..................................................92.2.2糖萜素水平对绍兴鸭蛋品质的影响....................................................102.3讨论.................................................................................................................112.3.1不同糖萜素水平对绍兴鸭产蛋性能的相关影响................................112.3.2不同糖萜素水平对绍鸭蛋品质的相关影响........................................122.4结论.................................................................................................................13第3章不同糖萜素水平对绍兴鸭脂质代谢的影响............................153.1材料与方法.....................................................................................................153.1.1试验动物与饲养管理............................................................................153.1.2主要仪器................................................................................................153.1.3试验设计................................................................................................153.1.4试验样品的采集....................................................................................163.1.5检测指标与方法....................................................................................163.1.6数据处理与统计分析............................................................................163.2试验结果.........................................................................................................173.2.1不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏、胸肌中胆固醇、粗脂肪、甘油三酯、V 极低密度脂蛋白的含量的影响...............................................................................173.2.2不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋中胆固醇含量的影响............................183.2.3不同糖萜素水平对肝脏、胸肌组织中脂肪酸的影响........................193.2.4不同糖萜素水平对绍兴鸭血液生化指标的影响................................223.2.5饲粮糖萜素水平对绍兴鸭血液中免疫球蛋白含量的影响................233.3讨论与分析.....................................................................................................233.3.1不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏、胸肌组织中胆固醇、粗脂肪、甘油三酯及极低密度脂蛋白比的影响...........................................................................233.3.2不同糖萜素对肝脏、胸肌组织中脂肪酸含量的影响........................243.3.3不同糖萜素水平对绍兴鸭免疫的影响................................................253.4结论.................................................................................................................25第4章糖萜素对CYP7A1和SREBP-2基因表达的影响..................274.1材料与方法.....................................................................................................274.1.1材料........................................................................................................274.2测定方法.........................................................................................................294.2.1总RNA提取.........................................................................................294.2.2RNA反转录..........................................................................................294.2.3鸭CYP7A1和SREBP-2基因及内参基因β-actin荧光定量PCR....304.2.4荧光定量PCR引物扩增效率检测......................................................314.2.5组织样品表达丰度检测........................................................................324.2.6统计学分析............................................................................................324.3结果与分析.....................................................................................................324.3.1总RNA电泳检测.................................................................................324.3.2荧光qPCR结果....................................................................................334.4讨论.................................................................................................................374.5结论.................................................................................................................38第5章结论.............................................................................................39参考文献.....................................................................................................40附录1:.........................................................................................................47致谢..............................................................................................................57VI 主要英文缩略词表缩写英文名称中文名称AKPAlkalinephosphatase碱性磷酸酶活性SACSaccharicterpenin糖萜素CPCrudeProtein粗蛋白DHADocosahexaenoicacid二十二碳六烯酸DPADocosapentaenoicacid二十二碳五烯酸EPAEicosapentaenoicacid二十碳五烯酸EEEtherExtract粗脂肪FAsFattyacids脂肪酸HDL-CHighDensityLipoproteincholesterol高密度脂蛋白胆固醇LDL-CLowDensityLipoproteinCholesterol低密度脂蛋白胆同醇LPSLipaseactivity脂肪酶活力MUFAMonounsaturatedfattyacid单不饱和脂肪酸NEFANonestesterifiedfattyacid游离脂肪酸PUFAPolyunsaturatedfattyacids多不饱和脂肪酸PLPhospholipid磷脂Phosphatidylethanolamine-N-methylPEMT磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶transferaseT-CHOTotalCholesterol总胆固醇TGTotalGlycerinate总甘油三脂VLDLVerylowdensitylipoprotein极低密度脂蛋白VB12VitaminB12维生素B12RT-PCRReversetranscription反转录VII 新疆农业大学硕士学位第1章研究综述我国蛋鸭占到世界饲养量的70%左右，蛋鸭亦是浙江省优势特色产业，该省的蛋鸭养殖在全国水禽养殖中占有十分重要的地位。著名的蛋鸭品种绍兴鸭及缙云麻鸭都是浙江省地方良种，其中绍兴鸭为全国蛋鸭饲养的主打品种，占全国蛋鸭饲养量的60%，此外，缙云麻鸭占5%，同时，我国是最大的鸭蛋消费和贸易国，据中国水禽发展报告（2012年），我国蛋鸭存栏3.16亿只，产鸭蛋511.79万吨，蛋鸭年出口量为5万吨左右，居世界首位。鸭蛋价格是鸡蛋的1.3倍左右,蛋鸭除提供大量蛋、肉产品外，还可提供羽绒等产品，促进羽绒加工业的发展，萧山区被国际羽绒局命名为“世界羽毛之都”，全国的羽毛出口的50%通过萧山出口。动物食品是我们日常生活中获取营养与能量的不可或缺的重要来源，各种饲料是动物主要的直接食物，那么饲料产品无疑成为了人类的间接食品，其对动物的安全性与我们息息相关。目前抗生素是动物饲料的主要添加剂之一，但是众所周知其副作用明显，这就使得我们必须寻求更加高效。安全无公害的绿色饲料添加剂。糖萜素是杭州唐天科技有限公司和浙江大学承担国家高技术研究发展计划（863计划）《安全新型饲用抗生素替代物研究及开发》课题，从山茶科饼粕中提取三萜皂苷和糖类活性物质研制成功的饲料添加剂，现列入农业部第2045号公告《允许使用的饲料添加剂品种目录（2013）》[1]。目前糖萜素在水禽领域上的研究较少，尚未开展糖萜素对蛋鸭、肉鸭和鹅方面的研究和应用。因此，本实验提出在蛋鸭上进行研究应用，以期提高产蛋性能、代替蛋鸭饲料中的抗生素、提高产品安全性具有重要的经济和社会效益。1.1糖萜素的研究概况1.1.1糖萜素理化性质糖萜素（Saccharicterpenin）是由糖类（≥30%），配糖体（≥30%）和有机酸等组成的天然活性类物质，理化性质较为稳定，且不溶于苯、石油醚、乙醚、氯仿、丙酮等溶1 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响剂，其外观为棕黄色微细状的结晶体，味道微苦带辣，却可溶于醋酸乙酯、温水和二硫[1]化碳，易溶于正丁醇、冰醋酸、含水甲醇和含水乙醇。研究表明，糖萜素主要成分见表1-1。表1-1糖萜素理化常数Table1-1Saccharicterpeninphysicochemicalproperties理化常数糖萜素三萜皂甙测定方法熔点/℃165---185225---226电热熔点仪测定比旋光度[α]20d23.4142.50WZZ-IS数字式旋光仪测定pH4.825.70PHS-2C型PH计测定1.1.2糖萜素的有效成分测定研究表明，糖萜素实际上是油茶皂素和总糖及淀粉的水解产物，根据其分子结构式，[2]可大致推出总糖含量为≥49%，皂甙元部分含量为≥39%，有机酸部分含量约12%。1.1.3糖萜素的提取方法糖萜素可以用以下两种方法进行提取:第一种是用酸或适当的酶水解油茶籽粕，再[3]从水解液中提取三萜化合物和寡糖，按一定比例混合即为糖萜素。第二种是用纯净的油茶皂素水解(酸解或酶解均可)，然后得到五环三萜化合物和寡糖(即低聚糖)，二者的混合物就是糖萜素。1.2糖萜素对动物机体的免疫功能概况若采用细胞和分子免疫法，研究糖萜素对试验动物免疫的影响。研究结果表明：糖萜素不但能调控免疫抗病毒、调节肠道微生态平衡和机体信号传导系统而且还能有效地提高正常动物机体免疫功能和提高发病鸡免疫功能。糖萜素具有抗应激、抗诱变和抗病原微生物作用。2 新疆农业大学硕士学位1.3糖萜素在生产中的应用及国内外研究现状1.3.1糖萜素国内外研究现状初步研究表明糖菇素能够改善畜禽肉质。目前糖菇素己经获得了中美等四国的专利(美国,专利号:6007822;以色列,专利号:121917;澳大利亚,专利号:715733;中国,专利号:ZL96193005.5),获农业部批文,并被国家授予国内从级饲料添加剂,是国家唯一创制型饲料添加剂,国际首创。目前在猪、蛋鸡、肉鸡以及蛋鸭饲料等中添加糖菇素替代抗生素[4]可提高动物成活率、饲料转化率和饲养的经济效益,体增重和采食量与使用抗生素的日粮相近,而且蛋鸡和蛋鸭的产蛋率和蛋重都提高,猪场环境也得到了明显改善,臭味降低。1.3.1.1糖萜素在猪饲料中的应用研究表明在仔猪饲料中添加糖萜素可以降低仔猪的腹泻率，同时使用添加了糖萜素[5]可以是仔猪体内的大肠杆菌显著降低，有益菌的数量显著增加,在母猪饲料中添加糖萜素，可以提高其繁殖性能及免疫球蛋白的含量，仔猪通过母猪的初乳获得更多的免疫球[6,7]蛋白，从而提高其成活率，获得经济效益。1.3.1.2糖萜素在牛羊养殖中的应用研究表明。在黑白花土牛中添加一定水平的糖萜素，可以提高其屠宰率、熟肉率，[8]提高其肉品质。同时在山羊中添加糖萜素可提高其日增重、提高饲料报酬、生产性能[9]及育肥效果。1.3.2糖萜素糖萜素在家禽营养中的应用研究1.3.2.1糖萜素在肉鸡生产中的相关应用研究[10-12]糖萜素在肉鸡上也有广泛的应用，研究表明，当在饲料中添加一定水平的糖萜[13-15]素后，其平均日增重、成活率以及肉质质量均得到提高。在贵妃鸡的饲料中添加一定量的糖萜素显著提高了饲料中粗蛋白以及磷的利用率。在AA肉鸡使用糖萜素表明[16-17]其料肉比降低、饲料转化率提高。1.3.2.2糖萜素在蛋鸡生产中的相关应用研究表明，在蛋鸡的基础日粮中添加一定水平的糖萜素，可提高蛋鸡的产蛋性能、3 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响提高饲料的利用率、降低死淘率，同时，抗病能力增强，进而提高其经济效益。林元银等在蛋鸡饲料中添加一定量的糖萜素，蛋鸡的产蛋性能提高、饲料的利用率增加，死淘[13,18][13,19]率降低。有试验表明，饲料中添加糖萜素可使产蛋率增加。还能提高种蛋受精[20]率、孵化率，降低了养殖成本。能够显著改善鸡蛋的蛋比重、和蛋形指数和蛋壳强度[21]等指标。1.3.3糖萜素在水产中的应用研究研究表明糖萜素在鲫鱼中也有一定的应用效果，能够提高鲫鱼的生长性能和蛋白酶[22]活性，同时对罗非鱼的体增重、成活率、血清总蛋白质含量以及小肠内消化酶活性有[23][13,24]显著影响；有研究报道，糖萜素可以降低淡水白鲳鱼肉中胆固醇含量。1.4CYP7A1和SREBP-2基因研究进展1.4.1CYP7A1基因研究进展1.4.1.1CYP7A1基因的结构特点胆固醇7a-羟化酶又名胆固醇7a-单氧酶，该酶属于肝脏特异性微粒体细胞色素P450酶系，胆固醇7a-羟化酶具有催化胆固醇在肝脏中快速分解为胆汁酸的作用，也是该反[25]应的限速酶。在5’非翻译区侧翼区，胆固醇7a-羟化酶除了有高度保守的调控元件外，[25-26]还存在能与肝脏特异转录因子结合的相应位点。CYP7A1基因因其自身多态性、多种细胞因子、核受体、激素对维持体内胆汁酸-胆固醇平衡及脂质动态平衡有重要的作用。1.4.1.2CYP7A1基因的表达[25,27]有研究发现，在胚胎期胆固醇7a-羟化酶就已经在肝脏中特异性表达。胆固醇[28]7a-羟化酶在肝脏中的表达量最大，且呈一定的带状分布模式。Fu等研究表明CYP7A1[29]基因表达具有性别的差异。CYP7A1基因与代谢疾病的相关研究[30-32]胆汁酸有2种合成途径：经典途径和替代途径，其中经典途径是主要途径，CYP7A1基因将胆固醇转化成7a-羟化胆固醇是限速酶催化胆汁酸经典合成途径的第一4 新疆农业大学硕士学位步反应，而人类的CYP7A1基因活性是哺乳动物中最高的（5.8s-1），其作用是能够为人[33-35]体排除体内多余胆固醇。此外，固醇和胆汁酸能作为核受体的配体参与胆固醇代谢[36-37]相关的相关基因的表达。1.4.1.3CYP7A1的表达与脂类代谢疾病相关的研究[37,39]Feingold等研究发现了人在炎热状态下血清胆固醇水平升高的原因，Li等通过对转基因小鼠研究的研究发现：当增大疏水性胆汁酸池可促进CYP7A1表达，利用这种[37][37,40]方法可治疗一些诸如糖尿病、脂肪肝、肥胖症等代谢絮乱病。同时，Zong等在对小鼠饲喂不同剂量的寡糖后发现，寡糖能够降低血液中LDL和总胆固醇的含量，同时可增加肝脏腹膜胆固醇、巨噬细胞和排泄物中胆汁酸的含量，说明寡糖的作用是促进CYP7A1基因表达。1.4.2SREBP-2基因的研究进展细胞主要是通过调节胆固醇的合成、吸收、酯化和外流等途径之间的相对平衡从而达到维持正常的胆固醇浓度，而对于生物个体来说，胆固醇的平衡调控主要发生在以下[41]三方面：即合成、吸收与代谢。研究这些途径中的关键酶和基因让人们对于胆固醇平衡调控和其中涉及的转录因子有了深入的认识，其中最重要的是固醇调控元件结合蛋白(SREBP,Sterolregulatoryelement-bindingproteins)途径，SREBPs是脂质代谢的重要转录[41]因子，其在调节脂质代谢等方面具有重要作用,其靶基因众多,参与脂肪酸合成、甘油[42]三酯合成、胆固醇合成和LDL摄取等重要的生理过程。其包括两种异构体SREBP-1[43]和SREBP-2，SREBP-1调控脂肪酸及甘油三酯的合成，SREBP-2则调控胆固醇的代谢[44,45]。1.4.2.1SREBP-2基因多态性与高胆固醇血症在细胞核中，SREBPs基因结合特定的转录辅助因子，刺激或抑制对应的靶基因转[47]录。SREBP-2基因主要参与胆固醇合成及相关酶类的基因调控,其中包括胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰CoA(HMG-CoA)还原酶，SREBP-2基因作为一种特异的核转录因子在胆固醇代谢调控中起重要作用，当细胞内胆固醇缺乏时，SREBP-2可与羟甲基戊二酸单酰辅酶A合酶(HMGCoAsynthase)、低密度脂蛋白受体(LDLR)等基因5 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响上的胆固醇调节元件发生特异性结合，直接参与细胞内胆固醇代谢的调控，以维持胆固醇稳态，SREBP-2的多态性和发生异常突变将会引起其功能的改变，从而影响机体脂质[46][48-49]代谢的过程。研究表明SREBP-2多态性与高胆固醇血症密切相关。其相关调节机制还有待于进一步的研究。1.5本研究的目的和内容1.5.1研究的意义2-自由基学指出，机体内的自由基，尤其是超氧阴离子（O）可使机体内的类脂质等发生过氧化，而由于生物膜中的类脂质被氧化致使破坏了生物膜的结构，极其容易导致[50-51]细胞死亡。尤其是当机体内的过氧化反应参与各种病理过程，并与机体的衰老有密[52-53]切的关系。研究表明，萜类皂苷具有抗细胞损伤、清除自由基的能力。同时，糖萜[13]素对大肠杆菌、沙门氏菌等病菌有良好的抑制作用，糖萜素能降低动物肌肉胆固醇含[54]量，提高动物生产性能，明显改善肉质，是有效替代饲料中抗生素类添加剂。目前糖萜素在水禽领域上的研究较少，尚未开展糖萜素对蛋鸭、肉鸭和鹅方面的研究和应用。因此，本实验提出在蛋鸭上进行研究应用，以期提高产蛋性能、降低鸭中胆固醇、代替蛋鸭饲料中的抗生素、提高产品安全性具有重要的经济和社会效益。1.5.2研究的目的及研究内容研究目的：确定糖萜素在绍兴鸭中最佳添加剂量。研究内容：1.不同剂量糖萜素添加剂对产蛋后期蛋鸭生产性能（产蛋率、平均日产蛋量、平均蛋重、采食量和饲料转化率等）的影响2.研究以糖萜素对蛋鸭蛋品质的影响（蛋形指数、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋比重、哈氏单位、蛋白高度）3.研究糖萜素对鸭蛋胆固醇、脂质代谢、蛋鸭免疫功能的影响6 新疆农业大学硕士学位第2章不同糖萜素水平对产蛋性能、蛋品质的影响糖萜素是国家高技术研究发展计划（863计划）《安全新型饲用抗生素替代物研究及开发》课题的成果，是从山茶科饼粕中提取三萜皂苷和糖类活性物质研制成功的一项饲料添加剂，现已列入国家农业部批准使用的饲料添加剂品种目录。目前糖萜素在水禽领域上的研究还是一个空白，尚未开展糖萜素对蛋鸭、肉鸭和鹅方面的研究和应用。本试验针对浙江省地方特色蛋鸭品种（绍兴鸭）的应用，以期提高产蛋性能、代替蛋鸭饲料中的抗生素、提高鸭蛋品质和安全具有重要的经济和社会效益。2.1材料与方法2.1.1试验动物与饲养管理添加剂：糖萜素，由杭州唐天科技公司生产提供实验地点：诸暨市国伟禽业绍鸭国家级保种场试验动物及试验设计：选取产蛋后期的绍兴鸭300只，采用单因子随机试验设计，试验期为60d，随机分为4个组，每组设5个重复，每重复15只，在基础日粮中添加糖萜素添加剂4个水平：0、250、500、750mg/kg。试验鸭均采用栏养，自由饮水，每天光照17小时。试验持续两个月，试验前预饲2周。2.1.2试验设计与饲粮组成本试验采用单因子随机试验设计，试验中各个组有相同的能量、营养水平。在基础饲粮基础上分别添加糖萜素0、250、500、750mg/kg。基础饲粮及预混料配方见表2-1。2.1.3检测指标与方法2.1.3.1产蛋性能试验期间，准确记录饲料给料量、平均日采食量、蛋重、产蛋数量，以及计算试验鸭的产蛋率、平均个蛋重、日产蛋重、料蛋比率。2.1.3.2蛋品质指标7 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响每组采蛋50枚，每个重复采10枚，用于测定蛋品质。测定指标：蛋重、蛋形指数、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄颜色和蛋黄重。测定在产蛋后48h内完成。表2-1基础饲粮组成及营养水平Table2-1Compositionandnutrientlevelsofthebasaldiets%饲料原料Ingredients含量content营养成分Nutrientlevels含量content代谢能Mcal/kg2.50玉米Corn53.2粗蛋白质CP17.00赖氨酸Lys0.87豆粕Soybeanmeal25.8蛋氨酸Met0.40蛋胱氨酸Met+Cys0.72麦麸Wheatbran10.414钙Ca3.6总磷TP0.74磷酸氢钙CaHPO41.35可利用磷AP0.35苏氨酸Thr0.68石粉Limestone7.8色氨酸Trp0.22DL-蛋氨酸异亮氨酸Ile0.630.136DL-methionine亮氨酸Leu1.39精氨酸Arg1.10食盐NaCl0.30缬氨酸Val0.76组氨酸His0.421)预混料premix1.00粗纤维CF3.10合计100.00蛋能比g/MJ16.312.1.4主要仪器表2-2主要仪器Table2-2maininstruments主要仪器型号数显千分尺karldeutschMODEL-1061强度仪测定eggshellforcegauge，MODEL-Ⅲ蛋品分析仪eggmultitester，EMT-52008 新疆农业大学硕士学位2.1.5数据统计及分析用Excel软件对数据进行整理和制图。采用Duncan氏法进行多重比较。应用SPSS13.0软件进行单因素方差分析（One-wayANO-VA）,用平均值±标准误表示，以P<0.05为差异显著水平。2.2试验结果2.2.1糖萜素水平对绍兴鸭产蛋性能的影响表2-3糖萜素水平对绍兴鸭产蛋性能的影响Table2-3TheeffectsofSaccharicterpeninlevelsonlayingperformanceofShaoXingducks产蛋性能指标Layingperformance糖萜素水平日产蛋重平均蛋重(g)料蛋比Saccharicterpenin日采食量产蛋率(g/d)AverageeggFeed/egglevelmg/kgADFI(g/d)LayingrateDailyeggweightratioweightaaaaⅠ（0）174.000.752671.928554.12843.1635bbbbⅡ（250）174.000.817574.124060.66762.8742bcccⅢ（500）174.000.802472.972558.65042.9828acaaⅣ（750）174.000.757372.870255.20683.1013P值——0.00000.00000.00000.0000SEM——0.00370.07080.28170.0170注：同列数据肩标相同小写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，相邻小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。Inthesamecolumn，valueswiththesamesmallornolettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05)，whilewithadjacentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05)．Thesameasbelow．由表2-3可知，在日采食量保持一致的情况下，不同糖萜素水平对产蛋后期绍兴鸭的产蛋率、平均蛋重、日产蛋重、料蛋比均产生显著的影响。随着饲粮糖萜素水平的升高，产蛋率显著增加(P<0.05)，试验Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组显著高于基础组Ⅰ(0)(P<0.05)，Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组之间差异不显著，但和Ⅳ(750)组之间差异显著(P<0.05)。饲粮不同糖萜素水平对试鸭平均蛋重、日产蛋重也产生了显著的影响(P<0.05)，Ⅱ(250)组平均蛋重显著高于其他组(P<0.05)，而对照组Ⅰ(0)的值显著低于其他试验组(P<0.05)，对于日产蛋重试验Ⅱ(250)组显著高于其他组(P<0.05)，而Ⅲ(500)组显著高于Ⅰ(0)组和Ⅳ(750)组(P<0.05)，Ⅳ(750)的日产蛋重高于Ⅰ(0)组，但未达到显著水平。Ⅰ(0)组与Ⅱ(250)、Ⅲ(500)9 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响组之间均差异显著(P<0.05)，Ⅱ(250)组的料蛋比显著低于其他组(P<0.05)，Ⅲ(500)显著低于Ⅰ(0)组(P<0.05)，Ⅰ(0)组和Ⅳ(750)组之间差异不显著。2.2.2糖萜素水平对绍兴鸭蛋品质的影响表2-4不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋品质的影响Table2-4TheeffectsofSaccharicterpeninlevelsoneggsqualityofShaoXingducks组别糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kgGroupsⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）P值SEM蛋形指数1.36281.36951.35971.35300.56300.0041蛋壳强度4.04194.26214.12663.91760.37410.0709abbbWgt(g)72.621675.723375.242375.00930.02670.398130天Hgt(mm)7.43007.22456.95107.02200.36620.1049aababCol12.912213.118012.949013.16800.00140.0279Hu(c)83.496081.251079.700079.95600.21070.7085abbab蛋黄重23.726324.733025.021124.29750.04390.1723ababab蛋黄比例0.32630.32670.33270.32390.17410.0015蛋形指数1.3673a1.3678a1.3665ab1.3884b0.28750.0046蛋壳强度4.21694.30173.94303.72970.00580.0636Wgt(g)70.548571.935471.564770.35950.42360.394760天abaabbHgt(mm)6.98517.55927.12806.60230.02370.1105Col12.887815.427712.904013.06280.41160.6321abaabbHu(c)81.636284.451081.516077.90930.02350.7445abaab蛋黄重22.566523.176423.219922.15450.06690.1641蛋黄比例0.31990.32240.32410.31520.19210.0015由表2-4可知，在饲喂第30天时，蛋形指数、蛋壳强度、蛋白高度和哈夫均无显著影响(P>0.05)，试验组的蛋重均显著高于空白对照组(P<0.05)，随着饲粮糖萜素水平的提高，蛋黄颜色Ⅳ(750)显著高于Ⅰ(0)和Ⅲ(500)组(P<0.05)，蛋黄重Ⅱ(250)和Ⅲ(500)均显著高于Ⅰ(0)(P<0.05)，蛋黄比例Ⅲ(500)显著高于Ⅳ(750)组(P<0.05)。在饲喂第60天时，蛋壳强度、蛋重、蛋黄颜色和蛋黄比例均无显著影响(P>0.05)，Ⅳ(750)组的蛋形指数显著高于Ⅰ(0)和Ⅱ(250)组，其他组差异均不显著，蛋白高度和哈夫单位均值最高的是Ⅱ(250)，最差的是Ⅳ(750)组，且Ⅱ(250)和Ⅳ(750)组差异达到了显著水平(P<0.05)，蛋黄重Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组均高于Ⅰ(0)组，但未达到差异极显著水平，10 新疆农业大学硕士学位但与Ⅳ(750)组差异显著(P<0.05)。2.3讨论2.3.1不同糖萜素水平对绍兴鸭产蛋性能的相关影响[53]蛋鸭的产蛋性能是人们最关注的经济指标之一，其性能的变化直接影响经济收入。[55-56]而产蛋性能是反映家禽繁殖性能的重要数量性状之一，其性状的遗传力较低，本试验研究表明，不同糖萜素水平对产蛋后期绍兴鸭的产蛋率、平均蛋重、日产蛋重、料蛋[57]比均产生显著的影响。李静姬研究结果表明,糖萜素使雏鸡的生产性能明显提高。许振华等研究表明在饲料中添加糖菇素，能提高三黄鸡的生长性能，且能有效改善肠道[58]微生物环境和提高机体免疫器官的相对重量。李桂枝研究结果表明,饲料中添加糖萜[59]素能提高仔猪的采食量和日增质量。ZhangYanqiu研究表明饲粮中添加糖萜素为[60]250mg/kg时可以提高淡水白菌的生长性能。LiangQZ研究表明饲料转化率提高5.1％[61]（P<0.05）。JiangN研究表明，饲粮中添加糖萜素，与对照组相比，试验组有一个[62]小的增加对蛋重产蛋率和哈夫单位和下降和饲料效率（P>0.05）。2.3.1.1不同糖萜素水平对绍鸭产蛋率的相关影响本试验研究表明，随着饲粮糖萜素水平的升高，产蛋率显著增加(P<0.05)，饲粮中[53]250、500mg/kg糖萜素产蛋率显著高于其它组。石传林探讨了糖萜素对产蛋鸡生产性能的影响，结果表明，添加糖萜素的试验组其平均产蛋率为74．3％，而对照组为69．8％，[63]差异显著(P<0.05)。陈宝江对绿壳蛋鸡饲喂含糖萜素600mg/kg的日粮，测定其结果[64]表明，产蛋率提高了7.9%(P<0.01)。张俊妍研究313日龄海兰褐蛋种鸡表明，一定剂[65]量的糖萜素可抑制高峰后期产蛋率的下降，其中以300mg/kg糖萜素的效果比较明显。在葛洪伟报道的广西麻鸡产蛋性能试验中，试验组的产蛋率显著高于对照组(P<0.05)，[66]说明糖萜素具有显著提高其产蛋性能的作用。杨兴武报道：糖萜素对提高蛋鸡的生产性能有显著的作用，与本试验结果相同，同时试验组比对照组少死亡鸡145只(P<0.01)；[67]且产蛋率提高1.78%(P<0.05)。姜宁在贵妇鸡生产性能试验中，试验组（500mg/kg[68]和700mg/kg）的产蛋率略有提高(P>0.05)。11 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响2.3.1.2不同糖萜素水平对绍兴鸭平均蛋重的影响蛋重是鲜蛋分级的重要指标之一，在正常的蛋重范围内，鸭蛋的蛋重越大等级则越高，其受多种因素的影响。本试验研究表明，随着饲粮中糖萜素的增加，平均蛋重呈递增的趋势，其中Ⅱ(250)组平均蛋重显著高于其他组(P<0.05)。张春天等研究糖萜素对肉种鸡蛋品质的影响试验表明各处理组的蛋壳厚度、平均蛋重、蛋壳强度、蛋形指数、蛋[69,73]白高度、蛋壳相对重等指标和对照组相比略有提高(P>0.05)。2.3.1.3不同糖萜素对绍兴鸭日产蛋重、料蛋比的影响本试验研究表明，随着饲粮中糖萜素的增加，日产蛋重呈递增的趋势，其中Ⅱ(250)组日产蛋重显著高于其他组(P<0.05)，糖萜素使试验鸭料蛋比逐渐降低，其中试验组Ⅱ(250)显著低于其他组(P<0.05)。姜宁等在贵妇鸡生产性能试验中，试验组糖萜素添加[68]剂量为500mg/kg和700mg/kg的蛋重、料蛋比低于对照组(P>0.05)。而杨兴武等报[67]道：糖萜素能减少蛋鸡的饲料消耗量，饲料报酬提高2.6%，与本试验结果相同。2.3.2不同糖萜素水平对绍鸭蛋品质的相关影响蛋品质的衡量指标主要有蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数、蛋黄颜色、蛋白高度及哈夫单位等，品系、品种、环境、营养因素、疾病、年龄、环境均会对蛋品质有一定的[53]影响。2.3.2.1不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋蛋重、蛋壳强度和蛋型指数的影响研究表明，蛋重是衡量蛋品质及经济效益的一个重要指标,由表2-3可知，试验组的蛋重均显著高于空白对照组(P<0.05)，阳光远等人的研究表明，蛋重对种蛋的孵化率[70]有一定影响，同时雏鸡出壳重随蛋重的增加而显著增大，成强正相关（r=0.973）。蛋壳强度越大，则鸡蛋的抗压能力比较强，不容易破损，对保持鸡蛋的新鲜度和完[70]整有一定作用。蛋形指数则通常被视为种质分类的指标之一，具有中等遗传力。本试验研究表明，饲粮中添加糖萜素对蛋壳强度无显著性影响。蛋型指数是禽类种质分类的指标之一，不同的品种，其蛋型指数往往是不一样的。[71]武书庚报道蛋型指数与蛋重也有密切关系，蛋形指数随着蛋重的增加有降低的趋势。12 新疆农业大学硕士学位本试验研究表明，Ⅳ(750)组的蛋形指数显著高于Ⅰ(0)和Ⅱ(250)组。2.3.2.2不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋白高度和哈夫单位的影响蛋白高度及哈夫单位是衡量鸡蛋新鲜程度的重要指标，其主要受浓蛋白量及黏度的影响，哈夫单位越高，则蛋白质越粘稠，说明蛋白品质越好，此外哈夫单位对孵化率和出雏质量有较大影响，其中AA级表示哈夫单位大于72，为优质鸡蛋的标志，62～70[70,73-76]的鸡蛋为A级，而低于60的鸡蛋为B级。姜宁在贵妇鸡生产性能试验中，试验[68]组（500mg/kg和700mg/kg）蛋的哈夫单位略有提高(P>0.05)。葛洪伟等报道：糖萜[66]素能够提高鸡蛋的哈氏单位。本试验研究表明饲喂30d时蛋白高度和哈夫均无显著影响(P>0.05)，60d时，蛋白高度和哈夫单位均值最高的是Ⅱ(250)，值最低的是Ⅳ(750)组，且Ⅱ(250)和Ⅳ(750)组差异达到了显著水平(P<0.05)。说明适量的糖萜素含量可以提高哈夫单位及蛋白高度，过量则会影响蛋品质。2.3.2.3不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋黄颜色的影响蛋黄颜色是衡量禽蛋品质的重要感官指标之一，同时蛋黄色泽对蛋的商品价值和价格也有一定影响，而出口鲜蛋的蛋黄色泽要求达到8级以上，人们偏好蛋黄大的蛋，尤其是在制作月饼的时候，蛋黄比率大表示蛋品质较好，所以，拥有较好蛋黄色泽以及较[66]高蛋黄比率的鸡蛋更受到广大消费者的青睐。同时，深色蛋黄的种蛋具有较高的受精[53,81-83][53]率和出雏率。葛洪伟报道：糖萜素具有加深蛋黄色泽及提高蛋黄比率的效果。[66]本试验表明，蛋黄颜色则随着糖萜素水平的提高而逐渐升高。2.3.2.4绍兴鸭糖萜素需要量的探讨本试验结果表明，生产性能中的平均蛋重、日产蛋重和产蛋率均是Ⅱ(250)组显著高于其他组，而料蛋比是Ⅱ(250)组显著低于其他组，蛋品质指标中Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组蛋[53]重和蛋黄比率值最高。综合产蛋性能和蛋品质，产蛋期后期绍兴鸭糖萜素的需要量添加量为250至500mg/kg之间即可达到较好效果。2.4结论1.基础饲粮中添加一定量的糖萜素可提高产蛋后期绍兴鸭的产蛋率、平均蛋重日13 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响产蛋重，降低料蛋比(P<0.05)。2.蛋黄重随着饲粮糖萜素水平的增加而升高。3.综合产蛋性能和蛋品质，本试验条件下，产蛋期绍兴鸭饲粮中糖萜素添加的最佳剂量为250mg/kg-500mg/kg。14 新疆农业大学硕士学位第3章不同糖萜素水平对绍兴鸭脂质代谢的影响脂质在动物体内起着多重的作用。脂质也是一种能量来源，其是多种前体分子以及[84]细胞膜的重要组成部分，诸如维生素、胆汁酸及类固醇激素等。同时，脂质也是机体内重要的营养成分。而胆固醇是机体内重要的脂类物质，胆固醇具有多种生理功能，是构成生物膜及神经髓鞘、细胞表面的特殊性物质，当细胞内胆固醇的量超过生理范围时,会造成细胞膜的功能受到一定的损伤，形成晶体沉淀在细胞中杀死细胞,甚至进入血液造[85]成动脉粥样硬化。血胆固醇水平增加，会造成高胆固醇血症、进而引发动脉硬化(AS)[86]等严重疾病。同时糖萜素可以调节肠道微生态平衡、调控免疫抗病毒和机体信号传导系统；能够提高消化酶活性和小肠吸收面积，促进细胞增殖；提高肌肉中肌苷酸、肌红蛋白含量和蛋白质沉淀，降低胆固醇含量等作用。本试验旨在研究不同糖萜素水平对绍兴鸭脂质代谢的影响。3.1材料与方法3.1.1试验动物与饲养管理试验动物与饲养管理见第二章2.1.1。3.1.2主要仪器表3-1主要仪器Table3-1maininstruments主要仪器型号210Plus紫外可见光分光光度计GB/T5009.128-2003索氏全自动脂肪提取仪丹麦FOSS2050气质联用仪6890GC/5973MS3.1.3试验设计试验设计见第二章2.1.2。15 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响3.1.4试验样品的采集在试验结束的前一天，每组各个重复采集试验动物1只，过夜空腹后称活体重，采血10mL，4℃下离心10rnin(600g))制备血浆，-80℃冻存，待后期测血液生化指标。采血后进行试验鸭的解剖，采集一侧完整的肝脏、胸肌，放入已知重量的封口袋中密封保存，-20℃保存，等待后期的指标测定。3.1.5检测指标与方法3.1.5.1蛋中胆固醇、粗脂肪指标在试验开始、第30天和60天产蛋后期采集蛋样，每栏采集样品3个，打碎后混合用于测定蛋中胆固醇的含量。测定方法见附录1。3.1.5.2肝体比、胸体比以及肝脏、胸肌指标的测定胸体比=单侧胸肌质量×2/鸭体重肝体比=肝脏重量/鸭体重取一侧完整肝脏、胸肌重量，进行称重，并计算其胸体比和肝体比，测定肝脏和胸肌中的胆固醇、甘油三酯、极低密度脂蛋白、粗脂肪的含量。3.1.5.3血液生理生化指标采样后对血样进行血浆中低密度脂蛋白(LDL-C)、脂肪酶活性(LPS)、极低密度脂蛋白(VLDL)、高密度脂蛋白(HDL-C)、总胆固醇含量(T-CHO)、甘油三酯(TG)、碱性磷酸酶活性(AKP)和游离脂肪酸(NEFA)等指标的测定。步骤详见附录2。3.1.5.4饲粮糖萜素水平对绍兴鸭血液中免疫球蛋白含量的影响测定血浆中IgA、IgM、IgG等抗体的含量，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。3.1.6数据处理与统计分析用Excel软件对数据进行整理和制图。采用Duncan氏法进行多重比较。应用SPSS13.0软件进行单因素方差分析（One-wayANO-VA）,用平均值±标准误表示，以P<0.05为差异显著水平。16 新疆农业大学硕士学位3.2试验结果3.2.1不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏、胸肌中胆固醇、粗脂肪、甘油三酯、极低密度脂蛋白的含量的影响表3-2不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏中胆固醇、粗脂肪、甘油三酯、极低密度脂蛋白的含量的影响Table3-2TheeffectsofdifferentSaccharicterpeninlevelsonthecontentofcholesterol,crudefat，triglyceridesandverylowdensitylipoproteininliverofShaoXingduck糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kg组别GroupsⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）P值SEM肝体比Liverweight/duck0.02700.02690.02460.02800.48800.0008weight肝脏胆固醇mg/gaabb230.7540224.9160200.0960204.5960<0.00013.4058Cholesterolinliver肝脏粗脂肪（%）abcc3.64403.23202.89202.9980<0.00010.0719Crudefatinliver甘油三酯（mg/g）abccTriglyceridesin39.792038.644036.252037.0880<0.00010.3498liverbabab极低密度脂蛋白8.890010.864012.654010.53500.0690.5183注：同例数据肩标相同小写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，相邻小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。Inthesamecolumn，valueswiththesamesmallornolettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05)，whilewithadjacentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05)．Thesameasbelow．由表3-2可知，饲粮添加糖萜素对试验鸭的肝体比没有显著影响，与对照组Ⅰ(0)相比，饲粮中添加糖萜素显著降低了试验鸭肝脏中粗脂肪、胆固醇和甘油三酯的含量(P<0.01)，试验组Ⅲ（500）含量最低，试验组Ⅲ(500)、Ⅳ(750)之间差异不显著。试验鸭肝脏胆固醇含量随着饲粮糖萜素添加水平的增加而递减，当糖萜素添加水平达到500mg/kg时与对照组Ⅰ(0)之间差异显著（p<0.05），试验组Ⅲ(500)和Ⅳ(750)之间差异不显著。随着饲粮糖萜素水平的增加，试验鸭肝脏粗脂肪含量不断降低，试验组Ⅱ(250)、Ⅲ(500)、Ⅳ(750)与对照组Ⅰ(0)之间差异显著（p<0.05），Ⅲ(500)含量最低，试验组Ⅳ(500)、Ⅴ(750)之间差异不显著，与其他试验组之间差异显著。甘油三酯含量中，对照组Ⅰ(0)含量显著高于其他试验组（p<0.05），其中Ⅲ(500)组含量最低，与Ⅱ(250)组差异显著17 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响（p<0.05），而与Ⅳ(750)组差异不显著。试验鸭肝脏中极低密度脂蛋白的含量随着糖萜素水平的增加而呈递增的趋势，试验组Ⅲ(500)组含量最高，显著高于对照组Ⅰ(0)（p<0.05），而与其他组差异未达到显著性水平。表3-3不同糖萜素水平对绍兴鸭胸肌中胆固醇、粗脂肪、甘油三酯、极低密度脂蛋白的含量的影响Table3-3TheeffectsofdifferentSaccharicterpeninlevelsonthecontentofcholesterol,crudefat，triglyceridesandverylowdensitylipoproteininmuscleofShaoXingducks糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kg组别GroupsP值SEMⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）胸体比Liverweight/duck0.08090.08370.08230.07510.61530.0023weight胸肌胆固醇mg/g78.978078.086075.526069.33400.14671.6394Cholesterolinliver胸肌粗脂肪（%）aabb2.20002.19401.99402.0200b<0.00010.0265Crudefatinliver甘油三酯（mg/g）aabb13.542013.218011.994012.0220<0.00010.1800Triglyceridesinliver极低密度脂蛋白22.332917.831519.541221.34550.40410.9816由表3-3可知，饲粮中糖萜素水平对试验鸭的胸体比、胸肌胆固醇、极低密度脂蛋白均无显著性影响，但随着糖萜素水平的增加，胸肌中胆固醇呈递减趋势。Ⅲ(500)胸肌粗脂肪和甘油三酯含量均显著低于对照组Ⅰ(0)和试验组Ⅱ(250)（p<0.05），而与Ⅳ(750)差异不显著，随着糖萜素水平的增加，极低密度脂蛋白含量逐渐减低，但未达到显著水平。3.2.2不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋中胆固醇含量的影响分别在试验前、第30天和第60天进行采样，测定蛋重胆固醇。由表3-4可知，第一次、第二次和第三次蛋重胆固醇含量差异均不显著。饲喂糖萜素前检测数值（第一次）胆固醇含量从大到小依次为Ⅳ(750)、Ⅲ(500)、Ⅰ(0)和Ⅱ（250），而饲喂糖萜素第60天检测数值（第三次）胆固醇含量从大到小依次为Ⅰ(0)、Ⅳ(750)、Ⅲ(500)和Ⅱ（250）组，18 新疆农业大学硕士学位试验组Ⅲ(500)低于对照组Ⅰ(0)，但未达到显著性水平。表3-4不同糖萜素水平对绍兴鸭蛋中胆固醇含量的影响Table3-4TheeffectsofdifferentSaccharicterpeninlevelsonthecontentsofcholesterolineggsofShaoXingducks组别糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kgP值SEMGroupsⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）第一次14.426014.304014.530014.62200.76570.1049第二次14.115014.080014.230014.49200.16300.7169第三次14.229013.939014.001014.14100.34440.06123.2.3不同糖萜素水平对肝脏、胸肌组织中脂肪酸的影响3.2.3.1不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏中脂肪酸的组成及比例的影响由表3-5可知，在所列六种饱和脂肪酸中，C12:0、C13:0、C14:0、C16:0、C17:0随着饲粮胆碱添加水平的增加而逐渐降低，C12:0比例中Ⅳ(750)含量显著低于对照组Ⅰ(0)和试验组Ⅱ(250)（P<0.05）,饲粮糖萜素添加水平对C13:0和C18:0影响不显著，C14:0和C16:0中的Ⅲ(500)组比例均显著低于其他组（P<0.05），饲粮中添加不同水平的糖萜素显著降低了试验鸭肝脏中饱和脂肪酸(SFA)的比例（P<0.05）,各试验组之间差异显著。在单不饱和脂肪酸(MUFA)中，饲粮糖萜素添加水平对C15:1和C16:1影响不显著，对于C14:1(c=9)，随着糖萜素浓度的不断升高，试验组Ⅲ(500)和Ⅳ(750)组显著低于对照组Ⅰ(0)（P<0.05），而对于C18:1(c=9)，随着糖萜素水平的增加，Ⅰ(0)、Ⅱ(250)、Ⅲ(500)和Ⅳ(750)组比例呈递增趋势（P<0.05）。与对照组Ⅰ(0)相比，饲粮中添加糖萜素显著升高了试验鸭肝脏中多不饱和脂肪酸(PUFA)的比例（P<0.05），试验组Ⅲ(500)和Ⅳ(750)之间差异不显著。在所列四种多不饱和脂肪酸中，C18:2、C20:2、C20:3随着糖萜素添加水平的增加呈递增趋势，对于C18:2，试验组Ⅲ(500)显著高于其他组（P<0.05），对于C20:2，试验组Ⅱ(250)、Ⅲ(500)和Ⅳ(750)均显著高于对照组（P<0.05），而彼此之间差异不显著。对于C20:3，Ⅱ(250)、Ⅲ(500)组显著高于对照组Ⅰ(0)（P<0.05），C22:4中，试验组Ⅱ(250)显著高于对照组Ⅰ(0)19 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响（P<0.05），而与Ⅲ(500)、Ⅳ(750)差异不显著。表3-5不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏、胸肌组织中脂肪酸的组成及比例的影响(%)Table3-5TheeffectsofdifferentSaccharicterpeninlevelsonthecontentoffattyacidsinliver,muscleofShaoXingducks组别糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kgP值SEMGroupsⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）肝脏LiveFattyacidsabbC12:02.5520a2.51602.43602.42800.00100.0150C13:00.34800.34800.33600.34200.29440.0025aababC14:02.24402.25402.16202.21200.01300.0119abcbC16:022.366022.010021.770022.0880<0.00010.0580abbbC17:01.89201.86201.85801.84800.03080.0058C18:016.690016.708016.674016.61400.25700.0174abcbTSFA46.092045.698045.236045.5320<0.00010.0782aabbbC14:1c=91.02201.00000.97200.98200.04900.0071C15:10.45400.45200.44200.44800.36180.0025C16:13.15003.13403.10403.10200.21270.0095abccC18:1c=921.766021.950022.340022.1940<0.00010.0565aabcbcTMUFA26.392026.536026.858026.7260<0.00010.0502aabcbC18:213.212013.258013.386013.29400.00100.0181abbbC20:21.35401.39001.40601.39200.00940.0062abbabC20:311.604011.714011.724011.68000.08900.0189abababC22:41.36601.40401.39001.37600.13230.0061aabcbcTPUFA26.392026.536026.858026.7260<0.00010.0502注：①表中相对含量为占总脂肪酸的质量分数。②TSFA：饱和脂肪酸所占总比例；TMUFA：单不饱和脂肪酸所占总比例；TPUFA：多不饱和脂肪酸所占总比例。下同：Note:①tablerelativecontentoftotalfattyacidcontent.②TSFA:Thepercentageoftotalsaturatedfattyacids;TMUFA:monounsaturatedfattyacidsproportionofthetotal;TPUFA:polyunsaturatedfattyacidsproportionofthetotal.Thesamebelow:3.2.3.2不同糖萜素水平对绍兴鸭胸肌中脂肪酸的组成及比例的影响由表3-6可知，与对照组Ⅰ(0)相比，饲粮中添加糖萜素显著降低了试验鸭胸肌中饱和脂肪酸(SFA)的比例（P<0.05）。在检测的七种饱和脂肪酸中，C12:0对照组Ⅰ(0)最高，且显著高于其他试验组（P<0.05），试验组之间差异不显著。对于C14:0，Ⅲ(500)组显著低于对照组Ⅰ(0)和试验组Ⅳ(750)，而与Ⅱ(250)组差异不显著。C16:0中，试验组Ⅱ(250)显著低于其他组，而在C17:0中，比例最高为Ⅰ(0)，最低为Ⅲ(500)组，C18:0和C20:0随着糖萜素添加水平的增加而逐渐降低，比例最低的为试验组Ⅳ(750)。C24:0中Ⅲ(500)20 新疆农业大学硕士学位显著高于对照组Ⅰ(0)（P<0.05），而与其他试验组差异不显著。随着饲粮中糖萜素水平的增加，试验鸭胸肌中单不饱和脂肪酸(MUFA)的比例不断升高，试验组Ⅳ(750)最高，且试验组Ⅱ(250)、Ⅲ(500)、Ⅳ(750)与对照组Ⅰ(0)之间差异显著（P<0.05）。C14:1(c=9)中，Ⅲ(500)组的比例显著低于其他组，而C16:1(t=9)、C16:1c9中，Ⅲ(500)、Ⅳ(750)组的比例均显著高于其他组，且Ⅳ(750)组最高。C18:1(c=9)中，Ⅳ(750)组显著高于其他组（P<0.05）。表3-6不同糖萜素水平对绍兴鸭胸肌组织中脂肪酸的组成及比例的影响(%)Table3-6TheeffectsofdifferentSaccharicterpeninlevelsonthecontentoffattyacidsinliver,muscleofShaoXingducks组别糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kgP值SEMGroupsⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）胸肌MuscleFattyacidsabbbC12:00.06600.05400.05000.05400.02650.0021abccabC14:00.44000.41200.40200.42600.01120.0047abaaC16:00.23000.20000.24400.2320<0.00010.0046aababC17:00.30410.30400.28000.29200.05250.0037aaabbC18:023.106022.254020.322018.46500.01340.5799aabbbC20:00.53600.51800.48000.47600.03610.0091aabbabC24:00.35200.36400.38200.37000.06620.0042aaabbTSFA25.034024.106022.160016.62200.04171.1942aabaC14:1c=93.18003.16403.09403.16200.02520.0115aabbC16:1t=930.688030.792031.026030.9540<0.00010.0353aabbC16:1c=91.41601.43001.46801.48200.00570.0085abccC18:1c=929.540030.188031.550031.7980<0.00010.2262abccTMUFA64.824065.574067.138067.3960<0.00010.2565C18:25.31405.31605.41405.23000.72040.0536aabbabC18:30.65600.68400.69600.69000.14130.0066aabbC20:41.17201.21201.32201.2720<0.00010.0155aabbabC20:52.93003.02203.15803.04600.01550.0272abccC22:60.07000.08600.11200.1060<0.00010.0041aabbabTPUFA10.142010.320010.702010.34400.04420.0748与对照组Ⅰ(0)相比，饲粮添加糖萜素显著升高了试验鸭胸肌中多不饱和脂肪酸(PUFA)的比例（P<0.05），试验组Ⅲ(500)比例最高。五种多不饱和脂肪酸中，C18:2试验组均高于对照组，但未达到显著性水平。而C18:3(n=3)、C20:4、C20:5(n=3)、C22:621 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响均随着饲粮胆碱添加水平的增加而逐渐升（P<0.05），且都是试验组Ⅲ(500)最高，Ⅲ(500)、Ⅳ(750)组之间差异均不显著，而和对照组Ⅰ(0)均显著增加（P<0.05）。3.2.4不同糖萜素水平对绍兴鸭血液生化指标的影响表3-7不同糖萜素水平对绍兴鸭血液生化指标的影响Table3-7TheeffectsofSaccharicterpeninlevelsonthebloodinliver,ofShaoXingducks糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kg组别GroupsP值SEMⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）碱性磷酸酶aabbAKP16.916418.170813.038413.8755<0.00010.5947(金氏单位/100ml)脂肪酶活力abcd413.3694335.1510513.3701578.7172<0.000122.8264LPS（U/L）游离脂肪酸abaabbNEFA2327.92792454.05402145.94591985.58560.078170.1263（μmol/L）血浆总胆固醇3.58192.84502.92552.73050.25030.1619T-CHO（mmol/L）甘油三酯4.86904.81674.52343.58410.53600.3256TG（mmol/L）高密度脂蛋白胆固醇aaab0.45490.51770.55680.8555<0.00010.0435HDL-C（mmol/L）低密度脂蛋白胆固醇aaabb1.64591.83871.43201.08090.05540.1017LDL-C(mmol/L)极低密度脂蛋白aababb300.3067284.9401234.1974208.22920.063614.3063VLDL(mmol/ml)由表3-7可知，饲粮中添加糖萜素水平对于绍兴鸭血浆AKP，对照组Ⅰ(0)与试验组Ⅱ(250)与对照组Ⅰ(0)之间差异不显著，而与Ⅲ(500)、Ⅳ(750)之间差异显著（P<0.05），且含量最高。对于血浆中LPS，试验组Ⅱ(250)、Ⅲ(500)、Ⅳ(750)与对照组Ⅰ(0)之间差异均显著，且试验组之间均差异显著（P<0.05）。对于血浆中NEFA，随着糖萜素含量的增加，含量呈降低趋势；Ⅱ(250)显著高于Ⅳ(750)组。HDL-C、IgA含量随着饲粮中糖萜素水平的升高而不断增加，且Ⅳ(750)显著高于Ⅰ(0)、Ⅱ(250)、Ⅲ(500)组（P<0.05）。而LDL-C随着饲粮中糖萜素水平的升高而逐渐降低，Ⅳ(750)显著低于Ⅰ(0)、Ⅱ(250)组，22 新疆农业大学硕士学位而与Ⅲ(500)组差异不显著。对于VLDL，Ⅳ(750)显著低于对照组Ⅰ(0)（P<0.05），而与Ⅱ(250)、Ⅲ(500)差异不显著。饲粮中糖萜素水平对甘油三酯(TG)、血浆总胆固醇含量(T-CHO)没有显著影响。3.2.5饲粮糖萜素水平对绍兴鸭血液中免疫球蛋白含量的影响表3-8不同糖萜素水平对绍兴鸭血液中免疫球蛋白含量的影响Table3-8TheeffectsofdifferentlevelsSaccharicterpeninShaoxingduckbloodimmunoglobulincontent组别糖萜素水平Saccharicterpeninlevelmg/kgP值SEMGroupsⅠ（0）Ⅱ（250）Ⅲ（500）Ⅳ（750）免疫球蛋白AIgAaaab433.1783441.5129469.9419553.16880.002714.3298（μg/ml）免疫球蛋白GIgG6.64896.71927.3017.86210.24150.2378（μg/ml）免疫球蛋白MIgMaaab322.4409311.9746336.9198424.42970.007314.1687（μg/ml）结果表明，随着饲粮中糖萜素水平的升高，血浆中IgA、IgM含量呈上升趋势，且试验组Ⅳ（750）显著高于其他组（P<0.05）。在IgA中，试验组Ⅳ（750）比对照组Ⅰ(0)提高了27.7%，而IgM，试验组中试验组Ⅳ（750）比对照组Ⅰ(0)提高了31.63%，免疫球蛋白G（IgG）各组之间差异未达到显著性水平。3.3讨论与分析3.3.1不同糖萜素水平对绍兴鸭肝脏、胸肌组织中胆固醇、粗脂肪、甘油三酯及极低密度脂蛋白比的影响胆固醇是动物细胞神经髓鞘以及各种膜结构的重要组成部分，而脂肪主要是以脂蛋白的形式存在，如极低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和卵黄脂磷蛋白等。对绍兴鸭来说，23 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响[53,87]肝脏是合成胆固醇的主要器官，同时也是血浆中胆固醇的主要来源，本试验表明，饲粮中添加500mg/kg糖萜素能够显著降低了试验鸭肝脏和胸肌中粗脂肪和胆固醇的[88]含量（P<0.05），同时涂兴强研究表明，剂量450mg/kg能显著降低胆固醇含量(P<0.05)。[89]而付立春研究表明添加糖萜素显著降低了贵妃鸡肌肉干物质、粗脂肪含量(P<0.05)。ZhangYanqiu研究表明饲粮中添加糖萜素为250mg/kg时可以降低肌肉胆固醇水平和提[90]高肉品质。3.3.2不同糖萜素对肝脏、胸肌组织中脂肪酸含量的影响脂肪酸不仅是构成生物体重要的物质，同时也是生物生长需要的重要营养元素。必需脂肪酸作为生物膜质合成的基础，对绍兴鸭脂肪酸组成鸭苗生长成活及饲料利用率等方面具有重要的作用。饲粮中添加糖萜素显著降低了试验鸭肝脏、胸肌中饱和脂肪酸的比例（P<0.05）,显著升高了单不饱和脂肪酸以及多不饱和脂肪酸的比例（P<0.05）。血液流动促进各组织细胞间的物质交换，维持机体内环境稳定，是机体主要的运输[91,94]系统，且血液的生理生化值能在一定程度上反映动物机体代谢及其生理机能状况。[91-92]鸭血浆还可作为疾病诊断的相关依据。本试验研究表明，日粮中添加500mg/kg糖萜素血清中脂肪酶活力（LPS）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量有提高的趋势，而甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、极低密度脂蛋白（VLDL）碱性磷酸酶（AKP）、游离脂肪酸（NEFA）、血浆总胆固醇（T-CHO）有降低的趋势。AKP与骨骼的代谢密切相关,血浆AKP酶活性高低与鸡生长速度和产蛋性能有较[93]为密切的关系，Wilcox发现鸡血清碱性磷酸酶(AKP)活性的高低与产蛋性呈正相关[94,95]。而陈国宏研究新扬州鸡血浆碱性磷酸酶水平，发现早期酶水平与产蛋量、总蛋重等生产性能呈强的负相关，与各时期体重、开产蛋重和开产日龄等生产性能呈强的正相[96][97]关；陈国宏研究表明血浆AKP活性与12周龄体重呈极显著相关（P<0.01）。在孙德文的研究中，添加糖萜素糖萜素组血清中游离脂肪酸含量比抗生素组和空白[98]组分别降低了32.06%（P<0.05）和50.25%（P<0.01）。本试验中试验组比空白组略有降低，但未达到显著性水平。唐晓玲等研究表明糖萜素与黄霉素单用及联用均能提高[99]仔猪血清中TP、GLO和G/A的值，而以第Ⅲ组（500mg）糖萜素的效果最好。高密24 新疆农业大学硕士学位度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量与开产日龄呈极显著正相关（P<0.01），甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量与产蛋性状均呈弱相关。HDL的功能是促进乳糜微粒和极低密度脂蛋白(VLDL)的进一步降解，并将肝外组织的胆固醇运回肝脏进一步代谢，因此血清HDL的升高有利于肌肉胆固醇含量的降低，LDL是运送胆固醇的载体，血清[95]中LDL含量降低使运送到血浆及全身的胆固醇量下降。3.3.3不同糖萜素水平对绍兴鸭免疫的影响免疫球蛋白是一种重要的免疫因子，能够刺激特殊的反应以帮助机体抵能抵抗细菌、病毒等致病原对机体的入侵。而IgG能够结合、凝集抗原，具有中和毒素的作用，同时[103]是母体向幼息传递特异性免疫力的主要载体。IgM能够比lgG更为有效地活化补体、调理病原微生物及中和毒素。IgA对防止体表及豁膜表面的微生物感染具有重要意义。本实验研究表明，日粮中添加糖萜素，与对照组相比试验组免疫球蛋白IgA、IgM、IgG含量均升高，当含量为750mg/kg时，IgA、IgM的试验组比空白组差异显著（P<0.05），而IgG未达到差异显著性水平（P>0.05）。张建东研究表明，饲料里添加500ppm糖萜素[99]对肉鸡球虫病的预防效果最好。唐晓玲研究表明糖萜素单独使用及与黄霉素合用均能提高仔猪血清中TP、GLO和G/A的值，以500mg/kg的效果最好；褚玲娜研究表明，饲料中添加500mg／kg糖萜素-Ⅱ，能显著改善鸡肉品质，提高肉鸡特异性免疫功能，生长性能与抗生素相近，饲料中添加750mg／kg糖萜素(浓缩品)能显著提高疫苗免疫后[100]肉鸡ND-HI和AI-HI抗体效价。张建东研究表明饲料里添加糖萜素能明显提高机体[101]的T淋巴细胞转化能力，增强鸡的免疫功能。郝甜甜研究表明饲料中适量糖萜素的[102]加入，可增强大菱鲆幼鱼的免疫能力和转氨酶活性。鲍建芳口服糖萜素能明显增强[103]小鼠NK细胞活性，且使其稳定维持在高水平。李静姬研究结果表明，糖萜素对雏鸡免疫器官的成熟具有明显的促进作用，各试验组与对照组相比较，以试验700mg／kg[104]糖萜素组效果最显著，法氏囊相对重提高幅度最大达74.4%(P<0.01)。3.4结论1.饲粮中添加糖萜素可降低绍兴麻鸭肝脏和胸肌中粗脂肪、甘油三酯和胆固醇的25 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响含量；2.饲粮添加糖萜素对绍兴鸭肝脏、胸肌中饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的比例具有显著的调控作用；3.饲粮添加糖萜素对绍兴鸭血液生化指标有显著性影响，提高了免疫球蛋白含量，提高试验动物机体免疫功能。26 新疆农业大学硕士学位第4章糖萜素对CYP7A1和SREBP-2基因表达的影响胆固醇是动物细胞神经髓鞘以及各种膜结构的重要组成部分，而脂肪主要是以脂蛋白的形式存在，如极低密度脂蛋白(VLDL)、高密度脂蛋白(HDL)和卵黄脂磷蛋白等。然而，高浓度的胆固醇又可以与低密度脂蛋白(LDL)结合，从而增加动脉粥样硬化以及心脏病的危险，因此,机体内胆固醇的浓度必须受到严格的调控,以保证发挥其正常生物功[113]能的同时不影响机体的健康。胆固醇7a-羟化酶又名胆固醇7a-单氧酶，该酶属于肝脏特异性微粒体细胞色素P450酶系，具有催化胆固醇在肝脏中快速分解为胆汁酸的作用，也是该反应的限速酶，研究表明，胆固醇-胆汁酸平衡对机体的健康具有重要的作用，当血液的胆固醇水平过高就会引起动脉硬化、高胆固醇血症、胆结石等疾病，而胆汁酸水平过低将有可能会导致结[25]直肠癌、胆囊癌的发生。SREBP-2基因主要参与胆固醇合成及相关酶类的基因调控,其中包括胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰CoA(HMG-CoA)还原酶，SREBP-2基因作为一种特异的核转录因子在胆固醇代谢调控中起重要作用。当细胞内胆固醇缺乏时，SREBP-2可与羟甲基戊二酸单酰辅酶A合酶(HMGCoAsynthase)、低密度脂蛋白受体(LDLR)等基因上的胆固醇调节元件发生特异性结合，直接参与细胞内胆固醇代谢的调控，以维持胆固醇稳态。本试验研究糖萜素对绍兴鸭肝脏中胆固醇的影响，应用实时荧光定量PCR技术检测鸭CYP7A1和SREBP-2基因在肝脏中的表达丰度。4.1材料与方法4.1.1材料4.1.1.1试验动物及饲养管理试验动物及饲养管理见第二章2.1.1。4.1.1.2主要试剂27 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响表4-1主要试剂Table4-1Reagents主要试剂公司RNaseFreedH2OTaKaRa公司TrizolTaKaRa公司氯仿北京化工厂异丙醇北京化工厂反转录试剂盒TaKaRa公司qPCR试剂盒TaKaRa公司4.1.1.3主要仪器表4-2主要仪器Table4-2maininstruments主要仪器公司超低温冰箱MDFU72V日本SANYO公司台式高速冷冻离心机德国Beckman公司ABIStepOnePlus实时焚光定量PCR系统美国应用生物系统公司TGL-B台式高速离心机上海生工生物工程有限公司DYY-8B型稳压稳流电泳仪北京六一仪器厂Dolphin-Doc凝胶成像系统美国Wealtec公司Bio-Rad核酸/蛋白质测定仪美国Bio-Rad公司电子恒温水浴锅天津市泰斯特仪器有限公司电子天平MettlerToledopL203-IC28 新疆农业大学硕士学位4.2测定方法4.2.1总RNA提取取50-100mg的肝脏组织样，放入1mlTrizol试剂，匀浆↓移入1.5mlEp管中↓每1mlTrizol加入0.2ml氯仿，摇匀15s，室温静置5min↓4℃，12000r/min离心15min↓吸取上清溶液，移入另一EP管中↓加入0.5ml异丙醇，混匀，静置10min↓4℃，12000r/min离心10min↓弃上清，加入1ml75%乙醇，摇匀，充分洗涤沉淀，4℃，7500r/min离心5min↓弃上清，静置5min，加入20ulRNaseFreedH2O溶解沉淀↓核酸定量或电泳检测，剩下样品-70℃保存备用4.2.2RNA反转录TM采用TaKARa公司的PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser（PerfectRealTime）29 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响表4-3反转录的反应体系Table4-3SystemofRTreactionReagentVolume5xPrimerScriptBuffer2（forRealTime）4ulPrimeScriptRTEnzymeMixI1ulRtPrimerMix1uldDNAReactionMix10ulRnaseFreedH2O4ulTotalVolume20ul按此反应后的试剂，加入到PCR管内，37℃水浴15min，850C加热5s，产物即是cDNA，40℃保存。4.2.3鸭CYP7A1和SREBP-2基因及内参基因β-actin荧光定量PCR4.2.3.1PCR引物设计根据本试验所得的鸭CYP7A1和SREBP-2基因序列，选择β-actin作为本试验的内参基因，根据已发表的鸭β-actin序列（GenBankaccessionNo.：EF667345）设计荧光定量PCR引物，送至公司合成。引物序列如表4.4所示：表4-4鸭CYP7A1和SREBP-2基因荧光定量PCR引物Table4-4Real-timePCRprimersforduckCYP7A1andSREBP-2genePrimersSequences(5’→3’)Length(bp)F：TCCATACTTGGGCTGTGCYP7A1250R：AGTGGTGTTTCCCTCTGF：CTCGTCTTGACCACCCTGAAGSREBP-2118R：TCCCAACAAGGGTCTGCGF:ATGTCGCCCTGGATTTCGβ-actin165R:CACAGGACTCCATACCCAAGAA30 新疆农业大学硕士学位4.2.3.2普通PCR反应体系表4-5PCR反应体系Table4-5ThePCRreactionsystemReagentsContent(μL)10×Buffer5Mg2+freeMgCl2325mmol/LdNTP32.5mmol/LForwardprimer110μmol/LReverseprimer110μmol/LTemplate110μg/μLrTaq0.55U/μLdH2O35.5Total504.2.3.3普通PCR反应程序普通PCR反应程序：95℃需预热5min，94℃变性30s，55/53℃退火30s，72℃延伸90s，40次循环，72℃延伸10min，4℃保存。1.5%琼脂糖凝胶电泳检验。4.2.3.4PCR产物回收应用DNAGelExtractionKit试剂盒（Takara）对PCR产物进行回收纯化，操作过程按照试剂盒说明进行，1.5%琼脂糖凝胶电泳检验回收产物。4.2.4荧光定量PCR引物扩增效率检测将反转录得到的cDNA（经RNasefreeDNase处理）进行倍比稀释(10×,100×,1000×,10000×)，进行荧光定量PCR反应。31 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响4.2.4.1荧光定量PCR反应体系荧光定量PCR的反应体表4.6所示：表4-6荧光定量PCR反应体系Table4-6Real-timePCRreactionsystemReagent(μL)SYBRGreenReal-timePCRMix10.0RoxReferenceDye0.4ForwardPrimer0.4ReversePrimer0.4cDNA2.0dH2O6.8Total20.04.2.4.2荧光定量PCR反应程序荧光定量PCR反应程序为：94℃预变性10s;94℃变性5s,60℃退火和延伸40s并采集荧光信号，共进行40个循环；选择溶解曲线分析，60℃升温至94℃5s,60℃保温1min,94℃保温15s,60℃再保温15s,自动采集荧光信号。4.2.5组织样品表达丰度检测鸭CYP7A1和SREBP-2基因在肝脏组织中的表达量，通过荧光定量PCR进行检测，每个样品做3个平行样，反应体系和反应程序同本章4.2.4。4.2.6统计学分析-ΔΔCt以β-actin作为内参基因，各基因相对表达量用2方法表示，ΔCt目的基因=Ct目的基因-Ct内参基因，ΔΔCt=ΔCt（处理组）-ΔCt（对照组）基因表达量的差异倍数（基因相-ΔΔCt对表达量）=2。统计学分析采用SPSS16.0软件的t检验和One-WayANOVA。4.3结果与分析4.3.1总RNA电泳检测将提好的总RNA进行电泳检验，结果如下图4.1所示，由图可见，提取的总RNA32 新疆农业大学硕士学位浓度高，完整度好，可用于后续试验。图4-1总RNA电泳检验Fig.4-1AgarosegelimageofTotalRNA4.3.2荧光qPCR结果4.3.2.1CYP7A1基因的标准曲线、溶解曲线和表达量在本试验中，CYP7A1和β-actin基因2对引物在荧光定量PCR仪中扩增的溶解曲线效果良好，可以用于荧光定量的进一步分析，如图(4-2、4-2、4-3、4-4)所示。其中溶解曲线峰值均单一，无杂峰，峰线窄且尖，表明扩增过程中有特异性较好的引物，单一的扩增产物，扩增产物不具有非特异性。图4-1CYP7A1基因mRNA的标准曲线Figure4-1StandardcurveofCYP7A1genesmRNA33 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响图4-2CYP7A1基因mRNA的标准曲线Figure4-2StandardcurveofCYP7A1genesmRNA图4-3CYP7A1基因mRNA的熔解曲线Figure4-3DissociationcurveofCYP7A1genesmRNA34 新疆农业大学硕士学位图4-4β-actin基因mRNA的熔解曲线Figure4-4Dissociationcurveofβ-actingenesmRNA4.3.2.2SREB-2基因的标准曲线、溶解曲线和表达量鸭SREBP-2基因定量引物标准曲线如图4-5、4-6所示，且各梯度稀释模板的浓度对数值与Ct(thresholdcycle)之间有良好的线性关系；两对引物都得到了特异性的目的产物，适合用荧光定量PCR检测。图4-5SREBP-2基因mRNA的标准曲线Figure4-5StandardcurveofSREBP-2genesmRNA4.3.2.3糖萜素对绍兴鸭鸭CYP7A1和SREBP-2基因在肝脏中的表达丰度的影响试验结束后，禁食24h取试验鸭肝脏样品，进行荧光定量PCR测定CYP7A1基因在肝脏组织中的表达丰度，研究表明，随着饲粮中糖萜素水平的增加，表达丰度也增加，如图4.8所示。结果显示，鸭CYP7A1基因的试验组表达丰度高于空白组，Ⅰ(0)和Ⅳ(750)组差异不显著（P>0.05），而Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组的表达丰度显著高于空白组Ⅰ(0)35 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响(P<0.05)。图4-6SREBP-2基因mRNA的标准曲线Figure4-6StandardcurveofSREBP-2genesmRNA图4-7SREBP-2基因mRNA的熔解曲线Figure4-7DissociationcurveofSREBP-2genesmRNA图4-8CYP7A1基因在不同浓度的相对表达量Figure4-8RelativetranscriptlevelofCYP7A1genesindifferentoncentrations36 新疆农业大学硕士学位对绍兴鸭肝脏组织进行荧光定量PCR测定，检测CYP7A1基因在肝脏组织中的表达丰度，研究表明，随着饲粮中糖萜素水平的增加，表达丰度也增加，如图4.9所示。SREBP-2基因试验组的表达丰度Ⅱ(250)和Ⅲ(500)组显著高于Ⅰ(0)和Ⅳ(750)组(P<0.05)。Ⅳ(750)组高于Ⅰ(0)组但未达到显著性水平(P>0.05)。图4-9SREBP-2基因在不同浓度的相对表达量Figure4-9RelativetranscriptlevelofSREBP-2genesindifferentoncentrations4.4讨论本试验应用实时荧光定量PCR技术检测鸭CYP7A1和SREBP-2基因在肝脏中的表达丰度。实时荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上发展起来的核酸定量检测技[112]术，具有灵特异性好、敏度高等特点，被广泛应用于生物学研究领域。该方法对所设计的引物特异性有较高的要求，并且通过模板稀释法，对2对引物绘制标准曲线，检测引物的扩增效率，结果显示产物特异性良好，说明设计的引物适合用于荧光定量PCR[112]检测，内参基因β-actin的选择是参考了PoultryScience等多种杂志上的相关文献。研究表明，胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)是胆固醇转化为胆酸过程中的关键酶，对维持机体的胆固醇内环境稳定起着重要作用，胆固醇对CYP7A1有诱导作用,在种属之间有[105]很大的差异。胆固醇结石病人的CYP7A1基因mRNA表达水平较非胆固醇病人有所[107]降低。对希腊绝经后健康女性的研究亦显示,CYP7A1基因的多态性不仅和患者是否存在动脉粥样硬化斑块相关(P=0.004),而且与其颈动脉及股动脉中层内膜厚度相关,37 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响[108]CYP7A1基因的多态性与绝经后健康女性的亚临床动脉粥样硬化呈正相关。SREBP-2基因主要参与胆固醇合成及相关酶类的基因调控，作为一种特异的核转录因子在胆固醇代谢调控中起重要作用，当细胞内胆固醇缺乏时，SREBP-2可与羟甲基戊二酸单酰辅酶A合酶(HMGCoAsynthase)、低密度脂蛋白受体(LDLR)等基因上的胆固醇[108]调节元件发生特异性结合。SREBP-2基因直接参与细胞内胆固醇代谢的调控，以维持胆固醇稳态，与前人研究一致。黎虎等研究表明染料木黄酮能够调节细胞内胆固醇的[110]代谢，其作用机制可能与调控SREBP-2通路有关。段雪英等研究110名高胆固醇血症患者，试验表明SREBP-2基因1784G>C位点GG基因型携带者的TC和LDL-C水平[109]降低幅度大于GC/CC基因型的患者。4.5结论本试验表明，适量的糖萜素可以提高试验鸭肝脏CYP7A1和SREBP-2基因的表达量，最佳添加剂量为250mg/kg-500mg/kg。38 新疆农业大学硕士学位第5章结论1.基础饲粮中添加一定量的糖萜素可提高产蛋后期绍兴鸭的产蛋率、平均蛋重日产蛋重，降低料蛋比(P<0.05)；2.蛋黄重随着饲粮糖萜素水平的增加而升高；3.综合产蛋性能和蛋品质，本试验条件下，产蛋期绍兴鸭饲粮中糖萜素添加的最佳剂量为250mg/kg-500mg/kg；4.饲粮中添加糖萜素可降低绍兴麻鸭肝脏和胸肌中粗脂肪、甘油三酯和胆固醇的含量；5.饲粮添加糖萜素对绍兴鸭肝脏、胸肌中饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的比例具有显著的调控作用；6.饲粮添加糖萜素对绍兴鸭血液生化指标有显著性影响，提高了免疫球蛋白含量，提高试验动物机体免疫功能；7.适量的糖萜素可以提高试验鸭肝脏CYP7A1和SREBP-2基因的表达量，最佳添加剂量为250mg/kg-500mg/kg。39 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响参考文献[1]宋志刚,朱立贤,林海.介绍一种新型饲料添加剂—糖萜素[J].饲料博览,2001,6:18.[2]唐晓玲,丰艳平,张石蕊.糖萜素对早期断奶仔猪免疫机能的影响[J].饲料研究,2007(2):71-74.[3]李官兵.糖萜素在母猪和仔猪饲料中应用的效果观察[J].当代畜牧,2011(5):35-36.[4]LugasiA,HorvatovichP,DworschakE.AdditionalinformationtotheinvitroantioxidantactivityofGinkgobilobaL[J].PhytotherapyResearch,1999,13(2):160-162.[5]唐晓玲,丰艳平,张石蕊.糖萜素对早期断奶仔猪免疫机能的影响[J].饲料研究,2007(2):71-74.[6]李官兵.糖萜素在母猪和仔猪饲料中应用的效果观察[J].当代畜牧,2011(5):35-36.[7]刘永和,王振河.仔猪饲喂糖萜素的对比试验与应用[J].饲料博览,2000,9:43-44.[8]王雅静,李周权,尹君亮,等.糖萜素作为肉质改进剂应用于育肥牛的效果初探[J].饲料博览:技术版,2007(5):5-7.[9]王剑锋,胡升益.糖萜素对山羊提高生产性能的初报[J].江西饲料,2002(2):20-21.[10]周宏茂,黄蓓,丁红明,等.糖萜素代替药物添加剂对肉鸡生产性能的影响[J].中国畜牧兽医,2006,32(10):13-14.[11]张爱忠,姜宁,宋屹.糖萜素对育成期贵妃鸡养分利用率和血清生化指标的影响[J].中国畜牧杂志,2007,43(15):27-29.[12]许振华,张石蕊.糖萜素对肉鸡肠道微生物的影响[J].湖南饲料,2003,6:16-18.[13]陈新新.绿色饲料添加剂糖萜素的应用研究[J].武汉工业学院学报,2013,31(4):25-29.[14]肖传发.浅谈禽流感的防制[J].山东家禽,2002,2:10-l2.[15]褚玲娜.糖萜素对肉鸡生长,肉质和特异性免疫影响及作用机理[D].浙江大学,2006.[16]杨慧.糖萜素-Ⅱ对艾维茵肉鸡生长性能和肉质的影响[J].福建畜牧兽医,2007,29(2):6-8.[17]马明颖,胡光林,崔贞爱,等.糖萜素和酵母培养物对雏鸡生长性能及免疫器官的影响[J].中国畜牧兽医,2007,34(1):37-39.[18]林元银,王洪亮.糖萜素对蛋鸡生产性能和降低死亡率的作用[J].饲料博览,2001(1):44-45.[19]王喜明,杨硕,杨兴武.蛋鸡饲料中添加糖萜素对其生产性能影响的研究[J].养殖与饲料,2006(12):6-8.[20]石传林,廖厚祥.夏季饲喂糖萜素对种鸡生产性能的影响[J].饲料与畜牧:新饲料,2001(4):23-24.[21]葛洪伟,唐燕飞,韦宗海,等.糖萜素对广西麻鸡蛋品质的影响[J].广西畜牧兽医,2013,29(1):3-5.40 新疆农业大学硕士学位[22]胡先勤,熊裕含,王学东.糖萜素对鲫鱼消化酶活性的影响[J].中国饲料,2006(4):34-36.[23]李定梅,詹勇.糖萜素饲料添加剂的研究和应用[J].粮食与饲料工业,2000,1:33-36.[24]张艳秋,詹勇,黄磊.多糖复合物——糖萜素对淡水白鲳生长和肉质指标作用的初级报告[J].饲料工业,2005,26(4):57-59.[25]杜雪,李进军,卢立志,等.胆固醇7α-羟化酶基因研究进展[J].浙江农林大学学报,2013,30(5):755-760.[26]CooperAD,ChenJ,Botelho-YetkinlerMJ,etal.Characterizationofhepatic-specificregulatoryelementsinthepromoterregionofthehumancholesterol7α-hydroxylasegene[J].JournalofBiologicalChemistry,1997,272(6):3444-3452.[27]AsahinaK,FujimoriH,Shimizu‐SaitoK,etal.Expressionoftheliver‐specificgeneCyp7a1revealshepaticdifferentiationinembryoidbodiesderivedfrommouseembryonicstemcells[J].GenestoCells,2004,9(12):1297-1308.[28]WangJ,OlinM,RozellB,etal.Differentialhepatocellularzonationpatternofcholesterol7α-hydroxylase(Cyp7a1)andsterol12α-hydroxylase(Cyp8b1)inthemouse[J].Histochemistryandcellbiology,2007,127(3):253-261.[29]FuZD,CsanakyIL,KlaassenCD.Gender-divergentprofileofbileacidhomeostasisduringagingofmice[J].PloSone,2012,7(3):e32551.[30]LeeYK,MooreDD.Dualmechanismsforrepressionofthemonomericorphanreceptorliverreceptorhomologousprotein-1bytheorphansmallheterodimerpartner[J].JournalofBiologicalChemistry,2002,277(4):2463-2467.[31]PeetDJ,TurleySD,MaW,etal.CholesterolandbileacidmetabolismareimpairedinmicelackingthenuclearoxysterolreceptorLXRα[J].Cell,1998,93(5):693-704.[32]MiyakeJH,WangSL,DavisRA.Bileacidinductionofcytokineexpressionbymacrophagescorrelateswithrepressionofhepaticcholesterol7α-hydroxylase[J].JournalofBiologicalChemistry,2000,275(29):21805-21808.[33]SunZ,YuX,WuW,etal.Fibroblastgrowthfactor7inhibitscholesterol7α-hydroxylasegeneexpressioninhepatocytes[J].Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications,2012,423(4):775-780.[34]NakayamaK,PuchkaevA,PikulevaIA.MembranebindingandsubstrateaccessmergeincytochromeP4507A1,akeyenzymeindegradationofcholesterol[J].JournalofBiologicalChemistry,2001,276(33):31459-31465.[35]PikulevaIA.CytochromeP450sandcholesterolhomeostasis[J].Pharmacology&therapeutics,2006,112(3):761-773.[36]RussellDW,SetchellKDR.Bileacidbiosynthesis[J].Biochemistry,1992,31(20):4737-4749.41 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响[37]杜雪.太湖鹅胆固醇7α-羟化酶基因启动子的克隆及p53结合元件的初步鉴定[D].浙江农林大学,2013.[38]LiT,FranclJM,BoehmeS,etal.GlucoseandInsulinInductionofBileAcidSynthesisMECHANISMSANDIMPLICATIONINDIABETESANDOBESITY[J].JournalofBiologicalChemistry,2012,287(3):1861-1873.[39]FeingoldKR,SpadyDK,PollockAS,etal.Endotoxin,TNF,andIL-1decreasecholesterol7alpha-hydroxylasemRNAlevelsandactivity[J].Journaloflipidresearch,1996,37(2):223-228.[40]ZongC,YuY,SongG,etal.ChitosanoligosaccharidespromotereversecholesteroltransportandexpressionofscavengerreceptorBIandCYP7A1inmice[J].ExperimentalBiologyandMedicine,2012,237(2):194-200.[41]姚晓敏,宋保亮,王灿华,等.胆固醇平衡调控中的SREBP途径[J].上海交通大学学报:农业科学版,2006,24(3):311-320.[42]郝军,王晨,吴海江,等.SREBP-1和SREBP-2在Ⅰ型糖尿病大鼠肾脏中的表达[J].中国病理生理杂志,2009,25(3):566-571.[43]BennettMK,NgoTT,AthanikarJN,etal.Co-stimulationofpromoterforlowdensitylipoproteinreceptorgenebysterolregulatoryelement-bindingproteinandSp1isspecificallydisruptedbytheyinyang1protein[J].JournalofBiologicalChemistry,1999,274(19):13025-13032.[44]WangH,LiuF,MilletteCF,etal.Expressionofanovel,sterol-insensitiveformofsterolregulatoryelementbindingprotein2(SREBP2)inmalegermcellssuggestsimportantcell-andstage-specificfunctionsforSREBPtargetsduringspermatogenesis[J].Molecularandcellularbiology,2002,22(24):8478-8490.[45]YokoyamaC,WangX,BriggsMR,etal.SREBP-1,abasic-helix-loop-helix-leucinezipperproteinthatcontrolstranscriptionofthelowdensitylipoproteinreceptorgene[J].Cell,1993,75(1):187-197.[46]段雪英,朱文丽,刀京晶,等.SREBP-2基因1784G>C位点多态性与血清脂质水平变化的关系[J].营养学报,2005,27(2):96-100.[47]MiserezAR,MullerPY,BarellaL,etal.Sterol-regulatoryelement-bindingprotein(SREBP)-2contributestopolygenichypercholesterolaemia[J].Atherosclerosis,2002,164(1):15-26.[48]DuanXY,ZhuWL,DaoJJ,etal.TherelationbetweenSREBP-2gene1784G>Cpolymorphismandserumlipidslevels[J].ActaNutrimentaSinica,2005,27(2):96-100.[49]RiosDLS,VargasAF,TorresMR,etal.InteractionbetweenSREBP-1aandAPOBpolymorphismsinfluencestotalandlow‐densitylipoproteincholesterollevelsinpatientswithcoronaryarterydisease[J].Clinicalgenetics,2003,63(5):380-385.[50]侯玉洁,侯小辉,刘苏娇,等.新型饲料添加剂—糖萜素的研究进展[J].饲料博览,2012(4):42 新疆农业大学硕士学位42-46.[51]DuG,WilletK,Mouithys-MickaladA,etal.EGb761protectslivermitochondriaagainstinjuryinducedbyinvitroanoxia/reoxygenation[J].FreeRadicalBiologyandMedicine,1999,27(5):596-604.[52]ChenJX,ChenWZ,HuangHL,etal.ProtectiveeffectsofGinkgobilobaextractagainstlysophosphatidylcholine-inducedvascularendothelialcelldamage[J].Zhongguoyaolixuebao=ActapharmacologicaSinica,1998,19(4):359-363.[53]马维英.饲粮添加胆碱水平对绍兴鸭生产性能，脂质代谢的影响[D].新疆农业大学,2013.[54]李云格.饲料添加剂糖萜素研究[J].饲料研究,2004(3):24-26.[55]王忠艳.滨白鸡血液若干生化指标及其与产蛋性能的关系[J].中国家禽,1989,11(2):31-33.[56]赵河山.蛋用型鸡育种历史的回顾及现状[J].中国家禽,1993,15(3):36-40.[57]李静姬,李国江.糖萜素对雏鸡生产性能和免疫器官的影响[J].中国畜牧兽医,2005,32(1):20-22.[58]许振华.糖萜素在三黄鸡生产中的研究[D].湖南农业大学,2003.[59]李桂枝,唐晓玲,邱伟海.糖萜素对仔猪生产性能及腹泻率的研究[J].饲料研究,2007(9):62-64.[60]YanqiuZ,YongZ,LeiH.EffectsofSaccharicterpeninonGrowthPerformanceandMeatQualityinColossomaSp[J].FeedIndustry,2005,4:19.[61]LiangQZ,RenKL,XiaoBY,etal.Effectofdietarysaccharicterpenintorabbitproductionperformance[C]//Proceedingsofthe8thWorldRabbitCongress,September7-10,2004,Pueblo,Mexico.WorldRabbitScienceAssociation(WRSA),2005:880-884.[62]JiangN,ZhangA,LiC,etal.Effectofdietarysaccharicterpeninonperformanceandnutritionphysiologicalparametersofroyalchickens[J].SpecialWildEconomicAnimalandPlantResearch,2001,24(2):1-4.[63]石传林,廖厚祥.糖萜素饲喂蛋鸡的试验效果[J].兽药与饲料添加剂,2001,6(4):13-13.[64]陈宝江,赵学军.糖萜素对绿壳蛋鸡生产性能的影响[J].饲料研究,2002(4):12-14.[65]张俊妍,王德贺,赵丽杰,等.糖萜素对蛋种鸡生产性能的影响[J].中国家禽,2014,36(3):21-24.[66]葛洪伟,韦宗海,唐燕飞,等.糖萜素对广西麻鸡产蛋性能的影响[J].饲料广角,2012(13):28-29.[67]杨兴武.糖萜素对提高蛋鸡生产性能的作用[J].四川畜牧兽医,2002,29(9):23-24.[68]姜宁,李春雁.糖萜素对贵妇鸡生产性能,营养代谢率及其血清生化指标的影响[J].特产研究,2002,24(2):1-4.[69]张春天,黄忠勇,梁明振,等.糖萜素对肉种鸡蛋品质的影响[J].广西农学报,2012,26(6):43 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响57-59.[70]何丽,卢立志,田勇,等.四明香鸡蛋品质测定与相关性分析[J].畜牧与兽医,2015,2:14.[71]武书庚.日粮中不同硫酸铜和柠檬酸铜添加水平及其组合对产蛋鸡生产性能及蛋品质的影响[D].北京:中国农业科学院硕士学位论文.2001.[72]苏蕊,徐廷生,雷雪芹,等.不同品种鹅种蛋品质的比较分析[J].中国农学通报,2012,28(26):28-31.[73]吕宗友,李艳,郭旭东,彭春燕.糖萜素在鸡营养中的应用[J].饲料与畜牧,2010,11:41-44.[74]戴有理.青壳蛋鸡常规蛋品质的观测与改进[J].中国家禽,2001,23(10):42-43.[75]邱祥聘.家禽学[M].四川科学技术出版社,1993[76]杨宁.家禽生产学[M].第二版.北京:中国农业出版社,2010.[77]RobertsJ.R.Factorsaffectingeggshellandinternaleggquality[C]//LEMERIDIENSR.18thAnnualASAIMSoutheastAsianFeedTechnologyandNutritionWorkshop.Cambodia：[s.n.].2010，1-9.[78]PuthpongsiripornU，ScheidlerSE，SellJ.L.EffectsofvitaminEandCsupplementationonperformance,invitrolymphocyteproliferation,andantioxidantstatusoflayinghensduringheatstress[J].PoultryScience,2001,80(8):1190-1200.[79]KirundaDF,ScheidelerSE.TheefficacyofvitaminE(DL-α-tocopherylacetate)supplementationinhendietstoalleviateeggqualitydeteriorationassociatedwithhightemperatureexposure[J].PoultryScience,2001,80(9):1378-1383.[80]尹兆正,童莲芳.蛋黄色素的研究进展[J].中国家禽:1994,(4):32-33.[81]郭吉余,刘汉林,苏基双.饲料叶黄素的研究进展[J].广东饲料,1996,(6):14-15.[82]曲湘勇,中岛隆.天然着色剂提高蛋黄色泽度的比较研究[J].中国畜牧杂志,1999,(2):29-31.[83]张志刚,朱博.叶黄素对鸡生产性能和蛋品质的影响[J].饲料广角,2009(16):42-46.[84]王涛,梅旭荣,钟秀丽,等.脂质组学研究方法及其应用[J].植物学报,2010(2):249-257.[85]李健斋,董军.降低血清胆固醇防治冠心病的新指南[J].中国动脉硬化杂志,2001,9(3):185-189.[86]BernsteinMJ.Loweringbloodcholesteroltopreventheartdisease[J].Jama-journalOfTheAmericanMericanMedicalAssociation,1985,253(14):2080-2086.[87]NaberEC.Nutrientanddruneffectofcholesterolmetabolisminlapinghen[J].FederationProc,1983,42:2486-2493.[88]涂兴强.糖萜素，大蒜素在生长育肥猪中的应用研究[D].硕士学位论文.南宁:广西大学,2013.[89]付立春,张爱忠,姜宁,等.糖萜素对育成期贵妃鸡生长性能，肠道微生物区系和肉质的影响[J].家畜生态学报,2008,29(3):48-52.44 新疆农业大学硕士学位[90]YanqiuZ,YongZ,LeiH.EffectsofSaccharicterpeninonGrowthPerformanceandMeatQualityinColossomaSp[J].FeedIndustry,2005,4:19.[91]杨光荣,李翠蓉.鹅血浆某些生化指标的测定[J].畜牧与兽医,2005,36(10):29.[92]赵齐川.雁鹅血清十三项生化正常值测定[J].中国家禽,1985,5:17.[93]陈国宏,李碧春.新扬州鸡血浆碱性磷酸酶变化规律的研究.西北农业学报,1996,5(3):5-8.[94]康波,杨焕民,刘胜军,等.东北白鹅和籽鹅血液生化指标[J].中国兽医学报,2006,26(6):649-652.[95]林显华.脱胶海带粉对肉仔鸡生长发育、肉品质及脂质代谢的影响[D].扬州大学硕士论文,2009.[96]陈国宏,黄志荣.鸡血浆碱性磷酸酶与生产性能关系的研究.江苏农学院学报,1990,11(2):37-39.[97]陈国宏,卞建春.地方鸡种血浆AKP和GPT及CPK活性比较研究[J].西北农业大学学报,1998,26(4):66-70.[98]孙德文.糖萜素对鸡肉品质的影响及其作用机理研究[D].浙江大学,2003.[99]张建东.糖萜素对肉鸡球虫病的调控及其作用机理的研究[D].浙江大学,2003.[100]褚玲娜.糖萜素对肉鸡生长,肉质和特异性免疫影响及作用机理[D].浙江大学,2006.[101]张建东.糖萜素对肉鸡球虫病的调控及其作用机理的研究[D].浙江大学,2003.[102]郝甜甜.饲料中添加糖萜素对大菱鲆幼鱼生长，免疫及消化生理的影响[D].上海海洋大学,2014.[103]裴晓言,顾名夏,黄鹤,等.牛乳中的免疫球蛋白与健康的研究[J].现代生物医学进展,2007,3(7):418-420.[104]李静姬,李国江.糖萜素对雏鸡生产性能和免疫器官的影响[J].中国畜牧兽医,2005,32(1):20-22.[105]李燕,凌文华.胆固醇和脂肪酸对CYP7A1的调节[J].国外医学:内科学分册,2004,31(1):1-4.[106]邢万佳,高聆,赵家军,等.胆固醇7α-羟化酶CYP7A1表达及调控相关研究进展[J].WorldChineseJournalOfDigestology,2012,20(16):1439-1446.[107]崔云峰,崔乃强,李东华,等.家族性胆固醇结石患者肝组织CYP7A1mRNA的表达[J].中国中西医结合外科杂志,2005,11(3):179-181.[108]段雪英,朱文丽,刀京晶,等.SREBP-2基因1784G>C位点多态性与血清脂质水平变化的关系[J].营养学报,2005,2:96-100.[109]段雪英,朱文丽,刀京晶,等.SREBP-2基因1784G>C位点多态性与血清脂质水平变化的关系[J].营养学报,2005,27(2):96-100.[110]黎虎,纪桂元,王宇琦,等.染料木黄酮对HepG2细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调控作45 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响用[J].华南预防医学,2014,40(2):114-118.[111]李翠萃.SREBP-2-LDLr途径在IgAN儿童肾脏脂质沉积的作用机制研究[D].重庆医科大学,2010.[112]何俊.鸭L-FABP、A-FABP基因多态性与肌内脂肪含量的相关性及其对脂肪代谢相关基因表达的影响[D].浙江大学博士论文,2013.[113]李敏.TSH调节人肝细胞SREBP-2表达的研究[D].山东大学硕士论文,2010.46 新疆农业大学硕士学位附录1:胆固醇含量的测定（国标GB/T5009.128-2003）1原理当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。2试剂2.1石油醚。2.2无水乙醇。2.3硫酸盐。2.4冰乙酸：优级纯。2.5磷酸。2.6胆固醇标准物质。2.7胆固醇标准液。2.7.1胆固醇标准储备液（1mg/ml）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定容至100ml。此液至少在2个月内保持稳定。2.7.2胆固醇标准使用液（100μg/ml）：吸取胆固醇标准储备液10ml，用冰乙酸定容至100ml。此液用时临时配制。2.8铁矾显色剂。2.8.1铁矾储备液：溶解4.463g硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2‧H2O]于100ml85％磷酸中，贮存于干燥器内，此液在室温中稳定。2.8.2铁矾显色液：吸取储备液10ml，用浓硫酸定容至100ml。贮存于干燥器内，以防吸水。2.9氢氧化钾溶液（500g/L）：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100ml。2.10氯化钠溶液（50g/L）：称取5g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100ml。47 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响2.11钢瓶氮气：纯度99.99％。3仪器3.1实验室常用设备。3.2721型分光光度计。3.3电热恒温水浴。3.4电动振荡器。3.5具玻塞试管：体积10ml、25ml。4分析步骤4.1胆固醇标准曲线吸取胆固醇标准使用液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0ml分别置于10ml试管内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达4ml。沿管壁加入2ml铁矾显色液，混匀，在15min～90min内，在560nm～575nm波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。4.2测定4.2.1食品脂肪的提取与测定根据食品种类分别用索氏脂肪提取法，研磨浸提法和罗氏发提取脂肪。并计算出每100g食品中脂肪含量。4.2.2食品胆固醇的测定将提取的油脂3滴～4滴(约含胆固醇300μg～500μg)，置于25ml试管内，准确记录其质量。加入4ml无水乙醇，0.5ml500g/L氢氧化钾溶液，在65℃恒温水浴中皂化1h。皂化时每隔20min～30min振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出试管，冷却。加入3ml50g/L氯化钠溶液，10ml石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡器上振摇2min，静置分层(一般约1h以上)。取上层石油醚液2ml，置于10ml具玻塞试管内，在65℃水浴中用氮气吹干，加入4ml冰乙酸，2ml铁矾显色液，混匀，放置15min后在560nm～575nm波长下比色，48 新疆农业大学硕士学位测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。5结果计算按下式计算：X=(A×V1×c)/(V2×m)×1/1000式中：X---试样中胆固醇含量，单位为毫克每百克(mg/100g)；A---测得的吸光度值在胆固醇标准曲线上的胆固醇含量，单位为微克(μg)；V1---石油醚总体积，单位为毫升(ml)；V2---取出的石油醚体积，单位为毫升(ml)；m---称取食品油脂试样量，单位为克(g)；c---试样中油脂含量，单位为克每百克(g/100g)；1/1000---折算成每100g试样中胆固醇毫克数。测定结果表示到小数点后一位。6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。49 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响附录2：血液生理生化指标的测定方法1脂肪酶(LPS)测定1.1操作过程：①、将分光光度计于420nm处，1cm光径玻璃比色皿，用Tris缓冲液调零；②、将底物缓冲液37℃预温5分钟以上；③、往相应编号的试管中加入50μl血清，吸取已预温好的底物缓冲液2ml冲入试管中，快速混匀，并计时；④、迅速倒入比色皿中，在分光光度计420nm处比浊，30秒时读取吸光度值A1；⑤、将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10分钟，再迅速倒入比色皿中，10分30秒时读取吸光度值A2；⑥、求出2次吸光度差值（△A=A1-A2）。1.2计算公式：血清（浆）脂肪酶单位定义：在37℃条件下，每升血清（浆）在本反应体系中与底物反应1分钟，每消耗1μmol底物为一个酶活力单位。标准管吸光度的计算：取底物缓冲液2ml加生理盐水25μl，420nm处比浊，读取吸光度值AS值，此AS值相当于标准管（454μmol/L）的浓度的吸光度值。血浆LPS活力AA标准品浓度反应液总体积（2.05ml）反应时间12U/LAS454mol/L取样量(0.05ml)10分钟50 新疆农业大学硕士学位2碱性磷酸酶（AKP）测定2.1操作步骤：样本前处理：直接取血清50μl进行测定。操作表：如表2-1所示。表2-1碱性磷酸酶（AKP）测定操作表空白管标准管测定管双蒸水(ml)0.050.1mg/ml酚标准液0.05(ml)血清(ml)0.05缓冲液(ml)0.50.50.5基质液(ml)0.50.50.5充分混匀37℃水浴15分钟显色剂(ml)1.51.51.5混匀，520nm，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度。2.2计算公式：单位定义：100ml血清(浆)在37℃与基质作用15分钟产生1mg酚为1个金氏单位。计算公式：碱性磷酸酶测定管吸光度标准管含酚的量100ml样本测定前(金氏单位/100ml)标准管吸光度(0.005mg)0.05ml稀释倍数3游离脂肪酸(NEFA)测定3.1操作步骤：样本前处理：直接取血清200μl进行测定。操作表：如表3-2所示。血清NEFA含量测定OD值空白OD值标准品浓度3.2计算公式：（mol/L）标准OD值空白OD值（1000mol/L）51 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响4甘油三酯（TG）测定4.1操作步骤：样本前处理：血清稀释后取10μl测定。操作表：如表2-2所示。表2-2游离脂肪酸(NEFA)测定操作表空白管标准管测定管双蒸水(ml)0.20.21000µmol/L棕榈0.2酸(ml)待测样本(ml)0.2试剂二缓冲液0.50.50.5(ml)试剂三铜试剂1.01.01.0(ml)试剂一(ml)4.03.84.0充分混匀抽提2分钟，3500转/分离心10分钟，仔细吸去上层蓝色液体及蛋白凝块弃之，吸取下层抽提液2ml进行显色。下层抽提液(ml)2.02.02.0显色剂(ml)0.250.250.25混匀，室温放置2分钟，在440nm，1cm光径，试剂一调零比色。表2-3甘油三酯（TG）测定操作表空白管标准管样本管蒸馏水(μl)102.26mmol/L标准液(μl)1052 新疆农业大学硕士学位血清(μl)10工作液(μl)100010001000混匀，37℃水浴5分钟，500nm波长，1cm光径，测定各管OD值4.2计算公式：TG含量测定OD值-空白OD值标准品浓度(mmol/L)标准OD值-空白OD值(2.26mmol/L)5高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定5.1操作步骤：样本前处理：取血清25μl加入25μl的沉淀剂充分混匀，室温放置15分钟后3000转/分，离心10分钟，取上清10μl测定。操作表：如表3-4所示。表2-4高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定操作表空白管标准管样本管蒸馏水(μl)10标准液(μl)10待测上清(μl)10工作液(μl)100010001000混匀，37℃水浴5分钟，500nm处，1cm光径，测定各管OD值5.2计算公式：HDL-C含量测定OD值空白OD值标准品浓度样本测定前（2）mmolL/标准OD值空白OD值1.29mmolL/稀释倍数6低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定6.1操作步骤：样本前处理：取样40μl加入20μl的沉淀剂充分混匀，室温放置15分钟后3500转/分，离心10分钟，取上清10μl测定。操作表：如表3-5所示。53 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响表2-5低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定操作表空白管标准管样本管蒸馏水(μl)10标准液(μl)10待测上清(μl)10工作液(μl)100010001000混匀，37℃水浴5分钟，500nm波长，1cm光径，测定各管OD值6.2计算公式：上清液胆固醇含量测定OD值空白OD值标准品浓度样本测定前（1.5）mmolL/标准OD值空白OD值1.29mmolL/稀释倍数低密度脂蛋白胆固醇含量总胆固醇上清液胆固醇mmolL/7低密度脂蛋白（VLDL）测定7.1试剂盒信息：美国R&DDuckVerylowdensitylipoprotein（VLDL）Elisa测定试剂盒Lot：201208Exp：2013027.2实验仪器信息：LabsystemsFinnpipette100μl单道移液器；Thermo50μl8道移液器。HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)。华东电子DG5033A酶标仪(南京华东电子集团医疗装备有限责任公司)。54 新疆农业大学硕士学位7.3操作步骤：7.3.1样本前处理：直接取样40ul。7.3.2测定过程：严格按照试剂盒的说明进行操作①测定前将试剂盒放置室温40分钟，所有试剂在使用前都轻轻摇匀。②标准品的稀释与加样:取5个离心管分别标记为S2、S3、S4、S5、S6，然后用标准品稀释液把2400nmol/ml的标准品原液稀释成15、30、60、120、240nmol/ml的不同浓度的标准品应用液，取稀释好的标准品各50ul加入到酶标板上。③加样：分别设定空白孔(空白对照孔不加样本及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。然后在酶标包被板上待测样本孔中先加入样品稀释液40ul，然后再加入待测样本10ul(样本最终稀释度为5倍)。加样时将样本加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。盖上封板膜后，37℃温育30分钟。④配液：浓缩洗涤液与新鲜的医用双蒸水1︰20倍稀释，混匀后室温放置待用。⑤洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，在吸水纸上将酶标板拍干。⑥加酶：每孔加酶标试剂50ul，空白孔除外。盖上封板膜后，37℃温育30分钟。⑦洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，在吸水纸上将酶标板拍干。⑧显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，然后37℃避光反应15分钟。⑨终止：每孔加终止剂50ul，终止反应（此时蓝色立即转黄）。⑩测定：在华东电子DG5033A酶标仪上，450nm处测定OD。计算：根据制备的标准曲线，计算样本含量。7.4标准曲线的制备：如表2-6和图2-1所示。55 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响表2-6低密度脂蛋白标准曲线制备表标准浓度测定OD绝对OD（nmol/ml）00.09420.0000450.34110.2469900.60480.51061801.15921.06503602.25232.15817203.88843.7942图2-1低密度脂蛋白标准曲线56 新疆农业大学硕士学位致谢值此论文完成之际，我要感谢我的指导老师雒秋江教授和论文指导老师卢立志研究员。感谢他们在我完成硕士论文期间给予我的思想启迪、学术指导和生活关怀。雒秋江校长渊博的知识、开阔的视野和深厚的造诣深深地影响着我，必将使我在今后的科研和工作中受益良多。卢立志老师严谨的科学态度、活跃的科研灵感、幽默机智的谈吐深厚的科研学术功底以及其平易近人的生活态度都使我倍感亲切，受益匪浅。感谢杨开伦教授、余雄教授、李海英教授、姚新奎教授、黄锡霞教授、刘武军教授、陶争荣研究员、李国勤老师、沈军达老师以及其他老师给予的指导和关心。感谢您们在学习和生活上对我的关怀。感谢硕士期间一起生活学习的师兄师姐、师弟师妹和同学，新疆农业大学动物科学学院：李伟东、刘丽元、刘春洁、朱文强、任海帆、王位莹、宴华春、王军、周靖航、朱坤、赵鑫源、罗鹏辉、王欢、马晓婷、陈晖、林英英、李林玲等；浙江省农业科学院：田勇师姐、李进军师兄、任晋东师兄、何俊师兄、熊胜师兄、曾涛师兄、杜雪师姐、马维英师姐、许静师姐、徐小钦师姐、刘钧、黄俊杰、张丽萍、候烁烁等。同这些师兄师姐和同仁们一起学习工作的日子不仅让我感受到团队的力量，也让我感受到生活的充实和愉快。感谢室友兼挚友李冬梅、陈艳丽、石岩这些年的融洽相处，使我感受到亲人般的支持和关怀。衷心感谢我的父母、兄弟姐妹、表哥表姐、（表）嫂（表）姐夫对我的理解、宽容和支持，家人无私的爱，是我前进中源源不断的动力。在即将毕业之际，再次向所有关心、帮助过我的老师、同学、朋友和家人致以最衷心的感谢！何丽2015年4月1日57 糖萜素对绍兴鸭生产性能、脂质代谢的影响作者简历一、作者简历何丽，女，中共党员，1990年出生。2009-2013年就读于新疆农业大学动物科学学院，获学士学位。2013年通过全国研究生考试进入新疆农业大学动物科学学院研究生院学习，攻读硕士学位，师从雒秋江教授，与浙江省农科院联合培养，学习一年半，师从卢立志研究员。二、学期间参与课题及奖励国家星火计划项目课题（2012GA700002）浙江省农业科学院重点实验室开放课题研究。获得2015年新疆维吾尔自治区奖学金一万元三、在学期间主要发表论文何丽,卢立志,田勇,等.四明香鸡蛋品质测定与相关性分析[J].畜牧与兽医,2015(2):58-59.58