《广东汉族妊娠期糖尿病妇女胎盘组织microrna差异表达谱及功能的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
分类号密级＿＿＿＿ＵＤＣ编号？讀讀似嗦博ｉ学位论文广东巧族妊娠期糖尿病妇女胎息组织ｍｉｃｒｏＲＮＡ差异表达谱及功能的硏究ＳｔｕｄｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｌａｃｅｎｔａｉｏｆｙｔｓｓｕｅｙｐｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｆｒｏｍＧｕａｎｄｏｎＨａｎｏｌａｔｉｏｎ二ｐｇｇｇｐｐｕ１．三ｒ片■李体‘．．４＾蟲皆錯ｒ；二导师姓名蔡德巧教授、陈宏教授专业名務内科学（内分泌与代谢病）培养类型在职博±论文提交日期２０１５年０３月０６日 南方医科大学２０１２级博±学位论文广东巧族妊娠期糖尿病妇女胎盘组织ｍｉｃｒｏＲＮＡ差异表达谱及功能的研究ＳｔｕｄｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｐｌａｃｅｎｔａｙｙｐｔｉｓｓｕｅｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｆｒｏｍＧｕａｎｇｄｏｎｇｐＨａｎｏｕｌａｔｉｏｎｐｐ课题来源：广东省医学科研基金Ａ２０１３４５２（）学位申请人李伟导姓名蔡德鸿教授、陈宏教授专业名称内科学（内分泌与代谢病）培养类型在职培养层次博±所在学院第二临床学院２０１５年０３月０６日广州 博壬学位论文广东汉族妊娠期糖尿病巧女胎盘组织ｍｉｃｒｏＲＮＡ差异表达谱及功能的研究博±研究生：李伟指导教师：蔡德鸿教授、陈宏教授摘要妊娠期糖尿病（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ，ＧＤＭ）是指妊娠期首次发生或发现的任何程度的糖耐量受损，不包含部分妊娠前已患有糖尿病但产检时首次被一一－诊断的患者。送是种妊娠期常见的并发症之。妊娠糖尿病的发病率在１．７％１１．６％之间，不同地域人群的发病率存在差异如欧美国家的发病率在４％左右，－且有逐年上升的趋势而我国调查结果显示ＧＤＭ发病率在５％７％，而。ＧＤＭ对、、、母儿有严重的危害，可使孕产妇患妊娠期高血皮疾病产后出血产后感染胎儿生长受限、胎儿宫内缺氧甚至死胎等。生产于ＧＤＭ的新生儿易发生呼吸窘迫综合征、低血糖、红细胞增多症及高胆红素血症等严重的并发症，其将来患糖耐量降低，儿童期肥胖、神经必理失调等风险性也增加，甚至有长远的影一些个体后期的生活发展为响，２型糖尿病的危险性升高。目前ＧＤＭ的发病机制尚不清楚，传统的观点认为，妊娠早期因排糖量及胎儿获取葡萄糖量增加，雌激素、孕激素分泌增加，使膜岛素分泌增多，导致高膜岛素血症，同时由于胎盘分泌的皮质醇、雌激素、孕丽等多种对抗膜岛素的激素分泌増加，导致周围姐织对膜岛素反应的敏感性下降。目前，，越来越多的研究显示生活方式、ｅ细胞功能缺陷、炎症因子及脂肪因子等多种因素参与了ＧＤＭ的发病机制。一ＭｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是类普遍存在于动植物中的长度约为２２ｎｔ的内源性非编码小ＲＮＡ分子，迄今为止，大约有２０００多种ｍｉＲＮＡ被发现鉴定，它是Ｉ 中文摘要一类基因调控因子生物体巧最丰富重要的，研究发现ｍｉＲＮＡ参与了细胞调亡、细胞增殖分化、癌症发生、生长发育、病毒感染、炎症等过程。首先基因组ＤＮＡ－ｍ－在ＲＮＡ聚合酶ＩＩ的作用下产生原始ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉｉＲＮＡ）。然后，ｐｒｉｍｉＲＮＡ被ＲＮＡ内切酶ｍ（ＲＮａｓｅ虹）家族中的Ｄｒｏｓｈａ在细胞核内加工成约７０个核ｒｅ－－ｍ－昔酸的前体ｍｉＲＮＡ（ｐｍｉＲＮＡ）。这些ｐｒｅｉＲＮＡ被Ｅｘｏｒｔｉｎ５蛋白Ｗ分解ｐＧＴＰ能量的方ＲＮａ一式从核内运输到细胞质中，并在ｓｅｍ家族的另个成员Ｄｉｃｅｒ的作用下被剪切成约２－ｉ１２５个核巧酸长度的双链ｍＲＮＡ。接着双链ｍｉＲＮＡ被解旋酶解开，形成成熟的单链ｍｉＲＮＡ分子。成熟的ｍｉＲＮＡ结合到ＲＮＡ诱导－的基因沉默复合物（ＲＮＡｉｎｄｕｃｅｄｓｉｌｅｎｃｉｎｃｏｍｐｌｅｘＲＩＳＣ）中，形成非对称ＲＩＳＣｇ，复合物（ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃＲＩＳＣａｓｓｅｍｂｌｙ），该复合物结合到目标ｍＲＮＡ上而发挥转录后对ｍＲＮＡ降解或抑制翻译的作用。研究表明每个ｍｉＲＮＡ可有多个祀基一个基因进行调节因，而几个不同的ｍｉＲＮＡ也可Ｗ对同，从而使得送种调节一个网络可Ｗ利用ｍｉＲＮＡ来调节多个基因的表达、也可Ｗ通过几个ｍｉＲＮＡ来共同调节某个特定基因的表达。近年来许多研究发现ｍｉＲＮＡｓ在糖尿病的发生发展过程中起了重要的作用。ｍｉＲＮＡｓ在膜岛ｅ细胞合成和分泌膜岛素中起重要的调节作用。早在２００４年－３７５可Ｗ调节，人们首次发现膜岛细胞特异性表达的ｍｉＲ葡萄糖诱导的膜岛一素分泌ｍ－。进步的研究显示ｉＲ３７５调节膜岛素分泌的机制不依赖于细胞内巧－离子信号的变化，因ｍ化３７５不能引起细胞内巧离子浓度的变化。小鼠内源性ｍ－缺失ｉＲ３７５将导致族岛目细胞的减少和膜岛素水平的降低，从而引起高血糖。ｍ－ｉＲ因此认为，巧５不仅能够调控膜岛素的合成和分泌，而且影响膜岛目细胞一些的发育。体外实验发现葡萄糖刺激能够改变族岛ｅ细胞中ｍｉＲＮＡ的水平，－ａ－在高糖情况下，ｍ，这些ｍｉＲＮＡ绝大多数表达上调，如ｍｉ民１２４ｉＲ１０７及－ｍｉＲ３０ｄ－－，其中Ｒ３０ｄ的过度表达可增加膜岛素基因表达３０ｄ，说明ｍｉＲ可能促一－进膜岛素的生成。而另个ｍｉＲＮＡ分子ｍｉＲ１２４ａ在膜腺的发育及膜岛ｅ细胞分化过程起重要作用－ａ，研究表明，膜岛目细胞中ｍｉＲ１２４高表达在基础状态下ＩＩ 博去学位论文可増加膜岛素分泌，而在高糖状态下则减少膜岛素分泌，其祀分子ＦｏｘＡ２能调－１－节ＰＤｘ、Ｋｉｒ６．２和Ｓｕｒ１等多个与膜岛素合成及分泌相关的特异性转录因子的ｍ表达。此外，ｉＲＮＡ与膜岛素在效应组织作用发挥有关。在膜岛素的主要铅组－肝脏及脂肪组织中，ＧＫ鼠与ＢＮ鼠（正常血搪对照）比较织糖尿病模型，－ｍ－ｍｉＲＮＡｓ表达有明显差异ｉＲ１２５ａｍｉＲａ的餓，最显著的是，预测分析提示１２５基因与糖脂代谢有关，提示ｍｉＲＮＡ与膜岛素在範组织中发挥作用有关。最近的研究发现在孕早期血清ｍｉＲＮＡ的表达可预示妊娠期糖尿病的发生，主要表－２９ａ－２２２和ｍ－－ｍｉＲｉＲ１３２，ｍｉＲ２９ａ通过作用于现在ｍｉＲ，的表达下降族岛素诱导基因１使得磯酸帰醇式丙丽酸錢激酶２的表达上调，葡萄糖生成增多。一连接母儿的界面胎盘作为唯，是母体与胎儿气体及营养成分等物质交换的器官，又具有内分泌的功能，因此成为研究妊娠期糖尿病发病机制的关键粗点。有许多与膜岛素作用密切相关的细胞因子如肿瘤坏死因子ＣＵ内脂素、脂连素等在ＧＤＭ的胎盘组织表达发生明显异常，ｍｉＲＮＡ作为重要的转录后调控因子可能参与了上述过程。然而目前，关于胎盘组织中有哪些相关的ｍｉＲＮＡ表达异常Ｗ及异常表达的ｍｉＲＮＡ如何参与ＧＤＭ的发病，国内外罕见报道。随着ｍｉＲＮＡ检测技术的发展，离通量、高质量、省时省力的第二代测序技术越来越多地应用到ｍｉＲＮＡ差异表达及功能的研究中，特别是研究者们将此技术与多种实验方法联合使越来越多的ｍｉＲＮＡ功能得到证实。本实验研究ＧＤＭ的一般临床特点及胎盘组织的组织学变化，利用Ｉｌｌｕｍｉｎａ高通量测序平台来筛选ＧＤＭ与正常妊娠女性胎盘组织中差异表达的ｍｉＲＮＡｓ，－ＰＣＲ）验证对得到的部分ｍｉＲＮＡ差异表达谱进行实时焚光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ，借助生物信息学方法预测并巧步分析差异表达ｍｉＲＮＡｓ的祀基因功能和通路，为深入探讨ＧＤＭ的发病机制奠定基拙。第一部分ＧＤＭ的临床特点及胎盘组织学改变目的：分析細Ｍ及正常妊娠妇女临床特点及各自胎盘组织病理学的变化，探讨抑Ｍ对胎盘结构和功能的影响。ＩＩＩ 中文摘要方法；选取于２０１３年１月１日至２０１４年１月１日在广州医科大学附属省武警医院、南方医科大学珠江医院就诊并分娩的孕妇４０例，均为粤籍汉族人并且相互之间无亲缘关系，将妊娠期糖尿病孕妇作为观察组（ＧＤＭ组），随机选取同期无妊娠合并症或并发症的正常孕妇作为对照组。纳入标准为２０１３年世界卫生纪织（ｗｏｒｌｄｈｅａｌｔｈｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎＷＨＯ）妊娠期糖尿病诊断标准；排除对象，包括合并存在妊娠期高血皮疾病、原有糖尿病、先天性松脏病、双胎妊娠、早产、巧炎、甲状腺功能异常等代谢性疾病、产前发热等炎症急性期孕妇。收集ＧＤＭ组及对照组的一般临床数据和血液标本检测空腹血糖、餐后血糖、空腹膜岛素、餐后膜岛素等指标，计算稳态模型膜岛素抵抗指数（ＨＯＭＡＪＲ）和稳态（ＨＢＣＩ）。模型下的膜岛细胞功能指数；取胎盘组织进行组织病理学检查结果：与对照组相比，ＧＤＭ组空腹血糖、餐后２ｈ血糖、餐后化膜岛素、糖化血红蛋白和ＨＯＭＡ－＝４ＩＲ均明显升高，差异有统计学意义（依次为ｔ８．（Ｂ６，户＝＝＝＝－＝＝＝＝０．０００；ｔ２５Ｊ８６，戶０．０００；ｔ１０９．５４３，户０．０００；ｔ２９．０７２，ｆ０．０００；１２９．８９９，ｆ＝显低于对照组０．０００）；而ＧＤＭ组空腹膜岛素、ＨＢＣＩ水平明，差异有统计＝＝＝＝－学意义－ｔ。（依次为ｔ３９．２３５，ｆ０．０００３７．３８９，戶０．０００）；光镜下ＧＤＭ舱盘姐织发生小动脉血管壁绒毛壁増厚，合胞体结节明显增多、合体膜形成等。统计分析显示ＧＤＭ胎盘组织的结构变化与对照组相比差异有统计学意义（依２２２＝＝＝＝二＝８．０．００３２５．６５８户１．９４８户巧８，戶，０．０００９，０．０００）。次为义；义；义；结论：ＧＤＭ者基础膜岛素分泌降低伴有膜岛素分泌的奈乱及膜岛素功能的抵抗，会导致胎盘组织结构变化、进而影响其功能。第二部分ＧＤＭ胎盘组织ｍｉＲＮＡｓ差异表法筛选分析一目的：通过新代Ｉｌｌｕｍｉｎａ高通量测序技术平台筛选并分析广东汉族妊娠期糖尿病妇女胎盘组织与正常妊娠妇女胎盘组织的ｍｉＲＮＡｓ之间的表法差异。一方法：选取第部分收集到的ＧＤＭ病例４０例及正常对照４０例。胎儿分娩后收集胎盘組织，用Ｔｒｉｚｏｌ法进行总ＲＮＡ的提取，经过质量和纯度分析鉴定合格后分别选取１０个样本混合成ＧＤＭ和对照组，采用逆转录法构建小ＲＮＡ文ＩＶ 博击学位论文库，使用第二代高通量测序平台ｍＳｅｑ２０００测序仪采用边合成边测序的方法对ｍｉＲＮＡ测序并分析结果。设定闽值大于２倍Ｗ上为上调０．５，小于倍为下调。结果；１从ＧＤＭ组和对照组胎盘组织提取出质量和纯度合格的总ＲＮＡ，ｃＤＮＡ２０－３５ｎ并成功构建小ＲＮＡ的文库。采用高通量测序得到长度为１ｔ的小－ｍＲＮＡ片段ＥＮＡ长２１ｎｔ２４ｎｔｉＲＮＡ量占所有小，其中文库数量最多的小度在，ＲＮＡ总量的３０％Ｗ上，最终获得洁净的片段超过１０００００００。将得到的片段与Ｇｅｎ沈ａｎｋ及Ｒｆｒａｍ数据库比对去除其他小ＲＮＡ筛选出ｍｉＲＮＡ的种类数达７０００多种。ＧＤＭ组的ｍｉＲＮＡ条目数及总量都要多于对照组。３通过样本两两比较分析，与对照组相比，发现ＧＤＭ组有Ｄ８种已知的ｍｉＲＮＡ表达明显上调，包－－－－－－－５３虹化－－１－１５３－１５４８細＞５、１１５３〇１化９５５、１１８＆１＿５、］１括１１口城巧２口１１民３７４３５口、－－－－－＞ｍ－－５ｓａ－２９ａ３－ｏ２－ｌＰ＜０１ｈｓａｉＲ１２７７、ｈｍｉ民ｐ、ｈｓａｍｉ民８８９３等。ｇｒａｔｉｏ？．０）；ｐｐ，－－－ｍ－１６种已知ｉＲＮＡｓ明显表达下调，如ｈｓａｍｉＲｌ％化、ｈｓａｍｉＲ１２４６、－－－－ｈｓａｍ－、ｓａｍｉＲ－（ｌｒａｔｏ＜ｉＲ６６３ａｈ７７０４等ｏ２ｉｌｆＯ．Ｏｌ）。Ｗ上差异表达的ｇ；ｍ一ｍｉＲＮＡｓ中包括了些己经验证在糖尿病发病过程中起重要作用的ｉＲＮＡ。Ｍｉｒｅａｐ软件预测出１９种新ｍｉＲＮＡ，这些新ｍｉＲＮＡ均有典型的二级茎环结构，－＞＜０在ＧＤＭ组有９种新ｍｉＲＮＡ表达明显增高（ｌｏ２ｒａｔｉｏｌ＿Ｐ．０１、６ｍｉＲＮＡｇ，）种新－＜－ｍ表达明显降低ｌ〇ｇ２ｒａｔｉｏｌｆＯ．Ｏｌ和４种新ｉＲＮＡ表达与对照组无明显差别（，）－＜＜＞－ｌｌｏ２ｒａｔｉｏｌＰ０．０５〇（ｇ，）结论；通过构建ＧＤＭ和正常妊娠妇女胎盘组织小ＲＮＡ的ｃＤＮＡ文库并利用ｍｕｍｉｎａ高通量测序技术平台，对ＧＤＭ妇女胎盘组织ｍｉＲＮＡｓ进行高通量测序研究，结合软件分析发现妊娠糖尿病的胎盈组织ｍｉＲＮＡｓ与对照组存在表达差异。除现有研究发现的１５４种己知ｍｉＲＮＡ，我们还发现１９种新的ｍｉＲＮＡ、其中１５种存在表达差异。第Ｈ部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和報基因的预测及功能分析－目的：利用ｑＲＴＰＣ民法验证高通量测序筛选出ＧＤＭ与正常对照组胎盘组织中差异表达的ｍｉＲＮＡｓ。对差异表这的ｍｉＲＮＡ进行祀基因的预测和功能分析。Ｖ 中文摘要方法：采用第二部分Ｔｒｉｚｏｌ法提取得到ＧＤＭ组和对照组的胎盘组织总ＲＮＡｃＤＮＡ。－ＲＴＰＣＲ，使用商品化的试剂含逆转录合成小ＲＮＡ的通过ｑ法、－Ｇｒｅｅｎ染料采用Ｓｙｂｒ，ＷＲＮＵ６为内参基因，对测序法初筛选出有明显表达差－－－－－－－－－５４８ａｍ５－５、１２４、２６９异的ｈｓａｍｉＲｐ、ｈｓａｍｉＲ％ｐｈｓａｍｉＲ６ｈｓａｍｉＲ１ａ的表达量进行检测。ｍｉＲａｎｄａ，ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ，ＭｉｒｅａｐＨ个软件预测ｍｉＲＮＡ作用的祀基因，并取Ｈ个结果的交集作为範基因预测结果，应用ＧＯ和ＫＥＧＧ数据库对预测的報基因的分子功能及通路进行富集分析，筛选ＧＯ及ＫＥＧＧ显著性差异的标准分别是尸＜０．０１、假阳性率（Ｆａｌｓｅｄｉｓｃｏｖｅｒｒａｔｅ，ＦＤＲ）＜０．０５。ｙ－－－结果：与正常对照相比，ＧＤＭ组胎盘组织的ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ、－＝－－ｓａｍＲ－５（１ｈｉ９５．，户ｐ明显升高，差异有统计学意义依次为户０２０８０．０００；＝－＝－－－４ｓａｍ、ｓａｍ－Ｕ６９ａ表达明显降低ｔ１．８８０，？０．０００）ｈｉＲ１２４６ｈｉＲ，差异；而户＝＝１２５３８７３ｆ有统计学意义（依次为卢．６０．０００户．９，０．０００），，；与测序结果一致。预测差异表达的ｍｉＲＮＡ靴基因数和範基因位点数在ＧＤＭ组都要多于对－－－－－ｍ－－－照组。ｈｓａｉＲ５４８ａｉｎ、ｈｓａｍｉＲ３７２、ｈｓａｍｉＲ３７４和ｎｏｖｅｌｍｉｒ２２等预测到的祀基因有共同的部分。差异表达的ｍｉＲＮＡ勒基因ＧＯ富集分析显示送些祀基因的功能涉及到细胞増殖分化、大分子物质代谢、信号转导、免疫反应及糖尿病密切相关物质转运代谢等生物过程和功能。ＫＥＧＧ通路分析发现，ＧＤＭ组ＫＥＧＧ通路的汇集的祀基因数量要多于正常对照组，差异表达ｍｉＲＮＡ对应的粗基因主要参与了肌动蛋白细胞骨架的调节、局部细胞粘附、细胞内吞作用、巧离子信号通路、趋化因子信号通路、Ｗｎｔ信号通路、泛素介导的蛋白水解、膜岛素信号通路、细胞调亡、过氧化物酶体増殖物激活受体和脂肪细胞因子信号通路等。－ｍ结论：ＲＴＰＣ民法确证通过髙通量测序得到的ｉＲＮＡ差异表达结果可靠。ｑＧＤＭ时胎盘组织ｍ－－－发生ｉＲＮＡｓ的報基因调节位点发生变化。ｈｓａｍｉＲ１３０ｂ３、ｐ－－－－－－ｈ化ｍ－－－－、、ｏｖｅｍｒｉＲ３７２３ｐ、ｈｓａｍｉＲ巧４ｂ５ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５和ｎｌｉ２２等差ｐｐ异表达的ｍｉＲＮＡ交互作用调节糖代谢及膜岛素信号通路关键祀点；ＶＩ 博壬学位论文－－－－－ｍ－ｍｎｏｖｅｌｉｒ１４、ｎｏｖｅｌｉｒ；ｌ９和ｎｏｖｅｌｍｉｒ２２等主要作用于过氧化物酶体增殖物激活受体通路中的脂质的合成与分解代谢调节、族岛素信号传导等。部分差异表达ｍ。ｉＲＮＡ还参与了胎盘组织小血管的重构关键词：妊娠期糖尿病微小ＲＮＡ胎盘组织祀基因预测ＫＥＧＧ通路族岛素信号通路过氧化物酶体增殖物激活受体ＶＩＩ 博去学位论文ｓｔｕｄｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎ村ａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｙｙｐｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅｏｆａｔｉｅｎｔｓｐｐｗｉｔｈｇｅｓｔａ村ｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｆｒｏｍＧｕａｎｇｄｏｎｇＨａｎｏｕｌａ社ｏｎｐｐＮａｍｅ：ＬｉＷｅｉｅｒｖ－－ＨｏｎＳｕｐｉｃｅｒ：ＰｒｏｆｅｓｓｏｒＣａｉＤｅＨｏｎＣｈｅｎｇｇＡＢＳＴＲＡＣＴＧｅｓｔａｔｉｏｎａｌ姐ａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓＧＤＭ，ｄｅｆｉｎｅｄａｓａｎｄｅｒｅｅｏｆｌｕｃｏｓｅ（）ｙｇｇｉｎｔｏｌ巧ａｎｃｅｗｉｔｈｏｎｓｅｔｏｒｆｉｒｓｔＫｃｏｎｉｔｉｏｎｄｕｒｉｎｒｅｎａｎｃｅｘｃｌｕｄｉｎｔｈｏｓｅｗｈｏｍｇｇ，ｐｇｙｇｗｅｒｅｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｅｓｒｅｖｉｏｕｓｔｏｅｓｔａｔｉｏｎｂｕｔｗｅｒｅｆｉｒｓｔｌｙｄｉａｎｏｓｅｄｄｕｒｉｎｒｅｇｎａｎｃｙ．ｐｇｇｇｐＩｔｉｓ０打ｅｏｆｔｈｅｍｏ巧ｃｏｍｍｏ打ｃｏｍｐＫｃａｔｉｏｎｓｏｆｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｒａｎｇｅｓｆｒｏｍ－ｅ１．７％１１．６％ｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｏ山ａｔｉｏｎｓａｎｄｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｄｉａｎｏｓｔｉｃｃｒｉｔｒｉａｕｓｅｄ．ｐｐｇＩｔｗａｓｒｅｐｏｒｔｅｄａｂｏｕｔ４％ｏｆｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｉｎｗｅｓｔｅｒｎｗｏｒｌｄｗｈｉｌｅｉｎＣｈｉｎａａｂｏｕｔ－ｗ５％７％ｏｆａｌｌｒｅｎａｎｃｉｅｓｓｕｆｆｅｒｅｄｆｒｏｍＧＤＭｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎａｔｔａｃｋｒａｔｅｅａｒｂｐｇ，ｇｙｙｙｅａｒ．ＯｆｓｐｒｉｎｇｏｆｍｏｔｈｅｒｓｗｉｔｈＧＤＭａｒｅｒｏ打ｅｔｏｓｕｆｆｅｒｉｎａｄｖｅｒｓｅｏｕｔｃｏｍｅｓｕｃｈｐｇａｓｆｅｔａｌｒｏｗｔｈｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｅｔａｌｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅｈｏｘｉａａｎｄｅｖｅｎｓｔｉｌｌｂｉｒｔｈｆｏｒｆｅｔｕｓａｎｄｇ，ｙｐ＾，ｉｒｅｓｉｒａｔｏｒｙ姐ｓｔｒｅｓｓｓ打ｄｒｏｍｅｌｏｗｂｌｏｏｄｓｕａｒｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｄｉｓｅａｓｅａｎｄｐｙ，ｇ，ｈｉｈｂｌｏｏｄｂｉｌｉｒｕｂｉｎｉｎｎｅｗｂｏｒｎｓ．ＡｌｔｈｏｕｈｍｏｓｔｏｆｔｈｅｗｏｍｅｎｗｉｔｈＧＤＭｒｅｔｕｒｎ化ｇｇａｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｒｉｓｋｏｆ打ｏｒｍａｌｌｕｃｏｓｅｔ：ｏｌｅｒａｎｃｅｓｈｏｒｔｌａｆｔｅｒｄｅｌｉｖｅｒｔｈｅｈａｖｅｇｙｙ，ｙｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅＵｉｔｕｓ（Ｔ２ＤＭ），ｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅａｎｄｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌ泌ｄｉｓｅａｓｅ．ＴｈｅｅｔｉｏｌｏｇｙｏｆＧＤＭｈａｓｎｏｔｂｅｅｎｃｌａｒｉｆｉｅｄ，ｃｌａｓｓｉｃａｌｌｙｉｔｗａｓｂｅＨｅｖｅｄｔｈａｔｉｎｅａｒｌｙｔｒｉｍｅｓｔｅｒｂｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｅｔａｌａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅ，ｉ ＡＢＳＴＲＡＣＴｅｓｔｒｏｇｅｎａｎ过ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏ打ｅｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｗａｓａｕｇｍｅｎｔｅｄｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎｈｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉａａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅａｓｔｈｅｌａｃｅｎｔａｌｈｏｒｍｏｎｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｃｏｒｔｉｓｏｌｙｐ，ｐ，ｔｅｓｏｅｎｈｅｒ－ｒｏｅｓｅｒｏｎｅｔｒａｎｄｏｔａｎｔｉｉｎｓｕｌｉｎｓｕｂｓｔａｎｃｅｗｅｒｅｉｎｔｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｌｅａｄｉｎｇｐｇ，ｇ，化ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｔｈｅｅｒｉｈｅｒａｌｔｉｓｓｕｅ义Ｐｒｅｓｅｎｔｌ，ｍｏｒｅｐｐｙａｎｄｍｏｒｅｓｔｕｄｉｅｓｓｈｏｗｔｈａｔｌｉｆｅｓｔｙｌｅ，ｂｅｔａｃｅｌｌ出ｓｆＵｎｃｔｉｏｎ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒａｎｄａｄｉｏｃｙｔｏｋｉｎｅｓｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎＧＤＭａｔｈｏｅｎｅｓｉｓ．ｐｐｇＭ－ｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡ）ａｒｅａｃｌａｓｓｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｏｆ２１２４ｎｕｃｅｏｅｅｎｅｒａｌｌｉｎａｎｉｌｓａｎｄｌａｎｔｓｔｈｅｒｅａｒｅｂｏｕｔ２０００ｋｉｎｄｓｏｆｌｔｉｄｇｙｍａｐ，ｓｏｆａｒ，ａｍｉＲＮＡｗｅｒｅｆｏｕｎｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｔｉｓｔｈｅｍｏｓｔａｂｕｎｄａｎｔｅｎｅｒｅｕｌａｔｏｒｉｎ，ｇｇｏｒａｎｉｓｍｓｌａｉｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｃｅｌｌａｏｔｏｓｉｓｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｇｙｇ，ｐｐｐ，，ｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｒｏｃｅｓｓｅｔｃ．ＭｉＲＮＡｅｎｅｓｇｐ，，ｙｐｇ－ｍａｒｅｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ化ｐｒｉｍａｒｙｍｉＲＮＡ（ｐｒｉｉＲＮＡ）ｕｎｄｅｒ化ｅａｃｔｉｏｎｏｆＲＮＡｏｌｙｍｅｒａｓｅＩＩｉｎｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓｔｈｅｎｃｌｅａｖｅｄｂｙｔｈｅｍｉｃｒｏｒｏｃｅｓｓｏｒｃｏｍｌｅｘｃｏｎｔａｉｎｉｎｐｐｐｇ－？ｍｅＤｒｏｓｈａ－ｔｈｅＲＮａｓｅＩｌｌｔｙｐｅｅｎｚｉｅｌｄｉｎａ７０ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｈａｉｒｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｙｙｇｐｒｅｃｕｒｓｏｒｒｅ－ｓｅｒｅ－ｏｅｄ化ｅｃｐｍｉＲＮＡ）．ＴｈｅｍｉＲＮＡｗｅｒｅｅｘｒｔｔｏｙｔｏｌａｓｍｗｈｅｒｅ（ｐｐｐｐｔｈｅｙａｒｅｆｕｒｔｈｅｒｐｒｏｃｅ化ｅｄｂｙａｎｏｔｈｅｒｍｅｍｂｅｒｏｆＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅＩＩＩｆａｍｉｌｙＤｉｃｅｒｆｏｒｍ－ｉｎｇ２１２５ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｄｏｕｂｌｅｃｈａｉｎｍｉＲＮＡｗｈｉｃｈｗｅｒｅｕｎｆｏｌｄｅｄｉｎｔｏｍａｔｕｒｅｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｍｉＲＮＡｂｙｈｅＵｃａｓｅａｎｄｕｌｔｉｍａｔｅｌｙｂｏｕｎｄｉｎｍｏ巧ｃａｓｅｓ化ｔｈｅｕｎｉｏｔｈｅＲＮＡ－ｕｃ－ｃｉｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅｇｏ打ＵＴＲｆｔｈｅｉｒａｒｅｔｍＲＮＡｂｔｉｎｄｅｄｓｉｌｅ打（）ｇｙｇｃｏｍｌｅｘＩＳＣ．Ａ巧ｏｄａｔｉｏ打ｗｉｔｈｔａｒｅｔｍＲＮＡｒｅｓｕｌｔｓｉ打ｅｉｔｈｅｒｔｒａｎｓｌａｔｉｃｍｐ（Ｒ）ｇｒｅｒｅｓｓｉｏｎｏｒｍＲＮＡｄｅｒａｄａｔｉｏｎ．ＥａｃｈｍｉＲＮＡｃａｎｈａｖｅｍｕｌｔｉｌｅｔａｒｅｔｇｅｎｅｓａｎｄｐｇｐｇ，ｓｅｖｅｒａｌｄｉｆｅｒｅｎｔｍｉＲＮＡｃａｎａｌｓｏａｃｔｏｎｔｈｅｓａｍｅｅｎｅｒｅｕｌａｔｉｏｎ，ｒｅｕｌａｔｉｏｎｗｈｉｃｈｇｇｇ，ｍａｋｅｓｔｈｉｓｋｉｎｄｏｆｎｅｔｗｏｒｋｒｅｕｌａｔｅｍｕｌｔｉｌｅｅｎｅｓｂａｍｉＲＮＡｏｒｔｈｒｏｕｈｓｅｖｅｒａｌｇｐｇｙｇｏ－ｍｉＲＮＡｃｏｒｅｕｌａｅｏｎｅｓｅｃｉｆｉｃｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｔｇｔｐｇｐ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ泣ｌｏｔｏｆｍｉＲＮＡｓｗｅｉｒｅｆｏｕｎｄ化ｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｄｉａｂｅｔｅｓｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｍｉＲＮＡｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｒｅｕｌａｔｅｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉ打ｂｅｔａｃｅｌｌ．Ｉ打２００４ｉｓｌｅｔｇ， 博壬学位论文ｓｅｃｍ－ｅｔｐｉｆｉｃｍｉＲＮＡｉＲ３７５ｗａｓｓｈｏｗｎｔｏｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｉｏｎ．ｏｖｅｒｅｘｒｅｓｓ－ｉｏｎｆｍｉＲ３７５ｄｏｅｓｎｏａｆｆｅｃａｄｅｎｏｓｉｎｅｒｉｈｏｈａｒｏｄｕｃｉｏｎｐｏｔｔｔｐｓｐｔｅＡＴＰｔ（）ｐ，２＋ｎｏｒｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＣａｔｒｉｇｇｅｒｅｄｂｙｌｕｃｏ化ｂｕｔｉｔｄｏｅｓａｆｅｃｔ过ｌａｔｅｇ，ｓｔｅｐｉｎｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎ化ｃｒｅｔｏｒａｔｈｗａｙ．Ｉ打ｖｉｔｒｏｌｕｃｏ化ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎａｆｅｃｔｓｍｉＲＮＡｓｙｐ，ｇ－ｍ４－－ｅｘｒｅｓｓｉｏｎｉｎｂｅｔａｃｅｌｌｉｎｃｌｕｄｉｎｉＲ１２ａ，ｍｉＲ１０７ａｎｄｍｉＲ３０ｄｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．ｐ，ｇ－ｒｅｓｓｏｎｍ－ＭｉＲ３０ｄｏｖｅｒｅｘｐｉｔｒｉｇｇｅｒｓｉｎｓｕｌｉｎｅ打ｅｅｘｒｅｓｓｉｏ打ｉｎｄｉｃａｔｉｎｔｈａｔｉＲ３Ｇｄｇｐｇｍａｒｏｍｏｔｅ－ｙｐｉｎｓｕｌｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏ打ｏｆｍｉＲ１２４过ｗａｓｓｈｏｗｎ化ｍｏｄｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｅｖｅｒａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｄｉｒｅｃｔｌｙｏｒｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙｏｆｔｈｅｅｘｏｃｙｔｏｔｉｃｍａｃｈｉｎｅｒｙ．Ｔｈｉｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｉｉａｎｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｂａｓａｌｉｎｓｕｌｉｎｒｅｌｅａｓｅａｎｄａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｉｎｓｕｌｉｎｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅｎｃｅｏｆｓｅｃｒｅｔａｏｕｅｓ．Ｉｎｌａｔｅｒｓｔｕｄｏｘａ２ｐｇｇｙ，Ｆｗａ－ｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓ泣ｄｉｒｅｃｔｔａｒｇｅｔｏｆｍｉ民１２４ａ．ＩｎｄｅｅｄｄｏｗｎｓｔｒｅａｍＦｏｘａ２ｔａｒｅｔ，ｇｅｎｅ－－ｓｉｎｃｌｕｄｉｎｔｈｅＡＴＰｓｅｎｓｉｔｉｖｅＫ１ｃｈａｎｎｅｌｓｕｂｕｎｉｔｓＫｉｒ６．２ａｎｄＳｕｒ１ａｎｄｔｈｅｇ，ｇ，－ｍ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＰｄｘ１ｗｅｒｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｉＲ１２４ａ．Ｓｅｃｏｎｄｌｙ，ｍｉＲＮＡｓｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｉｎｓｕｌｉｎｅｆｆｅｃｔｉｎｅｒｉｈｅｒａｌｔｉｓｓｕｅ．Ｇｌｏｂａｌｒｏｆｉｌｉｎｏｆｐｐｐｇｒｅｖｅａａｒｋｅｄｕ－ｍｉＲＮＡｓｒｅｓｅｎｔｉｎｌｉｖｅｒａｎｄａｄｉｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｌｅｄａｍｒｅｕｌａｔｉｏ打ｏｆｐｐｐｇ－－ｍｉＲ１２５ａｉｎｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃＧＫｒａｔｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍｏｇｌｙｃａｅｍｉｃＢｒｏｗｎｓ－ｔＮｏｒｗａｔｒａｉｎｓ．Ｃｏｍｕｔａｔｉｏ打ａｌｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓｓｕｅｓｔｔｈａｔｍｉＲ１２５过ｏｅｎｔｉａｌｌｙｔａｒ巧ｙｐｐｇｇｐｇｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｍｏｒｅｒｅｃｅｎｔｌｙ，ａｓｔｕｄｙｏｎｓｅｒｕｍｍ－－ｉＲＮＡｓｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏ打ｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｒｅｅｍｉＲＮＡｓ（ｍｉＲ１３２ｍｉＲ２９过ａｎｄｐ，ｍ－ｉＲ２２２ｗｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎＧＤＭｗｏｍｅｎｗｉ化ｒｅｓｅｃｔｔｏ化ｅｃｏｎｔｒｏｌｓ）ｇｙｐｔ－ｉｎｓｉｍｉｌａｒｅｓｔａｔｉｏｎａｌｗｅｅｋｓｉｎａｄｄｉｉｏｎ，ｔｈｅｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆｍｉＲ２９过ｃｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅｇ，ｎ－ｎｄｕｂＩｓｕｌｉｎｉｎｄｕｃｅｄｇｅｎｅ１Ｕｎｓｉｇ。ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌａｓｓｅｑｕｅｎｔｌｙｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＰｈｏｓｈｏｅｎｏｌｒｕｖａｔｅＣａｒｂｏｘｙＫｉｎａｓｅ２ＰＣＫ２ｗｈｉｃｈＫｕｌａｔｅｌｕｃｏ化ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ｐｐｙ（）ｇｇＴｈｅｌａｃｅｎｔａａｓｔｈｅｏｎｌｙｉｎｔｅｒｆａｃｅｃｏｎｎｅｃｔｉｎｍｏｔｈｅｒａｎｄｆｅｔｕｓｌａｓａｃｅｎｔｒａｌｐｇ，ｐｙｒｏｌｅｉｎｏｖｅｍｉ打ｔｈｅｌｏｃａｌｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｓｓｔｅｍａｎｄｉｓａｎｉｍｏｒｔａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎ，ｇｇｙｙｐｏｒｇａｎｔｈｕｓｂｅｃｏｍｅｓｔｈｅｋｅｙｔａｒｅｔｆｏｒｒｅｓｅａｒｃｈｏ打ａｔｈｏｅ打ｅｓｉｓｏｆＧＤＭ．Ｍａｎｙｇｐｇｉｉｉ ＡＢＳＴＲＡＣＴｃｙｔｏｋｉｎｅｓ化ａｔｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｎｓｕｌｉ打ａｃｔｉｏｎｗｅｒｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｓｕｃｈａｓｙｐｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａ，ｖｉｓｆａｔｉｎａｎｄａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ．ＨｏｗｅｖｅｒｒａｒｅｒｅｐｏｒｔｏｎｍｉＲＮＡｓｅｘｐｒｅ巧ｉｏ打ｒｏｆｉｌｅａｎｄｔｈｅｉｒｒｏｌｅｓｉｎＧＤＭｗａｓｄｅｓｃｒｉｂｅｄ．ｐＷ地化ｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｉＲＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏ打ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｈｉｇｈ，ｕａ－ｔｑｌｉｔｙａｎｄｔｉｍｅｓａｖｉｎｇａｐＫｃａｔｉｏｎｏｆｓｅｃｏｎｄｇｅｎｅｒａｉｏｎｓｅｕｅｎｃｉｎｗａｓｕｓｅｄｔｏｐｑｇｍｉＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｃｏｍｂｉｎｄｗｉｔｈ＊ｍｕｌｔｉｌｅｍｅｔｈｏｄｓｍｏｒｅａｎｄｍｏｒｅｍｉＲＮＡｓｆｔｉｎｃｔｉｏ打ｗｅｉｅｖｅｒｉｆｉｅｄ．ｐＴｈｉｓｓｔｕｄｙｉｓ化ｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｅｎｅｒａｌｌｃｌｉｎｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｈｉｓｔｏｌｏｏｆｇｇｙｇｙ－ｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅｆｒｏｍＧＤＭｕｓｉｎＩｌｌｕｍｉｎａｈｉｔｈｒｏｕｈｕｔ化ｕｅｎｃｉｎｌａｔｆｏｒｍｔｏｐ，ｇｇｈｇｐｑｇｐｅｘｐｌｏｒｅ出ｆｅｒｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｍｉＲＮＡｓｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＤＭｐｌａｃｅｎｔａｂｙｑｕａｎｔｉｔｙｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｔｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲＮＡｓ．ＢｙｍｅａｎｓｏｆｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｔａｒｇｅｔｇｅｎｅａｎｄｉｔｓｆＵｎｃ巧ｏｎｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒ的ｓｅｄｍｉＲＮＡｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ化ｒｏｖｉｄｉｎ打ｅｗｉｎｓｉｈｔｓｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄＧＤＭ．，ｐｇｇＣｈａｔｅｒＩＣｌｉｎｉｃａｌｆｅａ化ｒｅｓａｎｄｈｉｓｔｏｌｏｇｙｏｆｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅｉｎＧＤＭｐｐＡｉｍ：Ｔｏｃｏｍｐａｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ挺ａｔｕｒｅｓｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｏｌａｎｄＧＤＭｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｌａｃｅｎｔａｌｈｉｓｔｏｌｏｇｙｃｈａｎｇｅｓｂＤＭ．ｐｙＧＭｅｔｈｏｄｓ：８０ｃａｓｅｏｆｒｅｎａｎｔｗｏｍｅｎｗｉｔｈＧＤＭｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｐｇｙＡｒｍｅｄＰｏｌｉｃｅＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄ化ＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅａｎｄＺｈｕｊｉａｎｇ巧巧Ｈｏ＊ｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｓｍＭｆｅｄｉａａｌＵｎｉｖ６ｉｓｉｔｙｉｎＪａｎｕａｒｙＩ２０１３ｔｏｌａｎｕａｒｙ１２０１４，ｎｏｒｍａｌｒｅｎａｎｔＨａｎｗｏｍｅｎｆｒｏｍＧｕａ打ｄｏｎ＼￥１化〇山ｃｏｍｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎ化ｅｓａｍｅｐｇｇｇｐｐｅｒｉｏｄｗｅｒｅｅｎｒｏｌｌｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌ．Ｔｈｅｉｎｃｌｕｓｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉａｉｓｂａｓｅｄｏｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｃｒｉｔｅｒｉａｐｒｏｐｏｓｅｄｂｙｗｏｒｌｄｈｅａｌ化ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｒｉｉｎ２０１３．Ｅｘｃｌｉｕｌｉｎｇｏｂｊｅｃｔｓｉ打ｅｌｕｄｅｗｉｔｈ化ｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ，ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ，ｐｒｅｍａｔｕｒｅｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｔｗｉｎｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ｔｈｙｒｏｉｄｄｙｓｆｉｍｅｔｉｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｍｅｔａｂｏｌｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｓｗｅｌｌａｓａｃｕｔｅｈａｓｅｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｇｅｎｅｒａｌｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｗａｓｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ｂｌｏｏｄｐｓａｍｐｌｅｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｏｄｅｔｅ巧ｆａｓｔｉｎｇｂｏｏｄｌｕｃｏｓｅＦＢＧｏｓｔｒａｎｄｉａｌｂｌｏｏｄｌｇ（），ｐｐ 博壬学位论文ｌｕｃｏ化ｆａｓｔｉｎｂｌｏｏｄｉｎｓｕｌｉ打ＦＩＮＳａｎｄｏｓｔｒａｎｄｉａｌｂｌｏｏｄｉｎｓｕｌｉｎｗｉｔｈｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｇ，ｇ（）ｐｐｏｆｔ－ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘｂｙｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｍｏｄｅｌｏｆａｓｓｅｓｓｍｅｎ（ＨＯＭＡＩＲ）ａｎｄＨＯＭＡＰ乂ｅｌｌｆｔｉｎｃｔｉｏｎｉｎｄｅｘ（ＨＢＣＩ．Ｐｌａｃｅｎｔａａｆｔｅｒｄｅｌｉｖｅｒｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ化）ｙｐａｔｈｏｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｌｅｖｅｌｓｏｆＦＢＱ２ｈｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌｂｏｓｒａｎａｎ－ｗｅｌｏｏｄｌｕｃｏ化２ｈｔｄｉａｌｂｌｏｏｄｉｎｓｕｌｉｎｄＨＯＭＡＩ民ｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎ讨ｇ，ｐｐｇｙ＝＝＝＝ｈ－＝ｉｈｅｒｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｔ４８．０３６，戶０？０００ｔ２５．５８６，／Ｍ）．０００ｔ１０９．５４３，戶０？０００ｇ（ｙ；；；＝＝＝＝ｔ２９．０７２户０．０００ｔ２９．８９９，戶０？０００ｗｈｉｌｅＦＩＮＳａｎｄＨＢＣＩｉｎＧＤＭｒｏｕｗｅｒｅ，；）；ｇｐ＾＝＝ｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｌｏｗｅｒｔｈａｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ（ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌ８．５３８，Ｐ０．００３ｇｙｇｐｙ＾；＾＾＝＝＝＝２５．６５８，Ｐ０．０００１９．９４８，Ｐ０，０００．ＵｎｄｅｒｌｉｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎＸ；ｘ）ｇｐ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｐｌａｃｅｎｔａｌｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｐｒｅｇｎａｎｃｙ（ＮＴＰ）ａｎｄＧＤＭｒｏｕｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔ：ｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆＶ姐ｏｕｓ，ｎｕｍｂｅ巧ｏｆｔｈｅｌａｃｅｎｔａｌｖｉｌｌｉｗｉｔｈｇｐｇｐｓｙｎｃｙｔｉａｌｋｎｏｔｓａｎｄｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｔｏｔｒｏｈｏｂｌａｓｔｓ．ｐｙｐＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：ＧＤＭｐｒｅｎａｎｃｉｅｓｗｅｒｅｓｈｏｗｎｗｉｔｈｄｅｃｒｅａｓｅｄｂａｓｉｃｉｎｓｕｌｉｎｇｓｅｃｒｅｔｉｏｎ出ｓｏｒｄｅｒｅｄｉｎｓｕｌｉｎｆｌｍｃｔｉｏ打ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｌｅａｄ化ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆａｃｅｎａｓａｎｉｍａｌｆｕｎｉｐｌｔｔｉｓｕｅｄｔｓｃｔｏｎ．Ｃｈａｐ化ｒＩＩＳｃｒｅｅｎｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎ村ａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｋｏｒＲＮＡｓｉｎｐｌａｃｅｎｔａｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＤＭＡｉｍ：ＵｓｉｎｇｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆＩｌｌｕｍｉｎａｐｌａｔｆｏｒｍ化ｅｘｐｌｏｉｒｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅ巧ｉｏｎｒｏｆｉｌｅｏｆｍｉＲＮＡｓｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＤＭｐｐｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：３５ｃａｓｅｓｏｆＧＤＭａｎｄ３５ｃａｓｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｓｕｂｅｃｔｓ．ＰｌａｃｅｎｔａｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒｄｅｌｉｖｅｒｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｔｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｉ化ｊｙＴｒｉｚｏｌ．５ｓａｍｐｌｅｓｏｆｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｒａｎｄｏｍｌｙｉｃｋｅｄａｎｄｍｉｘｅｄａｓＧＤＭａｎｄｎｏｒｍａｌｐｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｙｆｏｒｎｅｘｔｓｔｅ，ｍｉＲＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆＧＤＭａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｗａｓｇｐｐｐｂｕｉｌｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｕｓｅｄｆｏｒｉｎｖｅｓｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｇｐＶ ＡＢＳＴＲＡＣＴｖａｒｉｏｕｓｍｉＲＮＡｓｂｈｉｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｄｅｆｉｎｅｄａｓｍｏｒｅｙｇｔｈａｎｔｗｉｃｅｔｈｒｅｓｈｏｌｄａｎｄｌｅ巧ｔｈａｎｈａｌｆｔｈｒｅｓｈｏｌｄａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＰｕｒｉｆｉｅｄｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｐｌａｃｅｎｔａａｎｄｍｉＲＮＡｌｉｂｒａｒｙ＊ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｒａｎｓｏｎｏｍｒａｗａｅｅｗｅｒｅｏｖｅｒｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ：ｅｄ．Ａｆｔｔｒｉ巧ｆｒｄｔａｔｈｉ１００００，－－ＮＡ０００ｃｌｅａｎｒｅａｄｓｗ地２１２４ｎｔｌｏｎｇｓｍａｌｌＲｔｈｅｍｏｓｔａｍｏｎｗｈｉｃｈｍｉＲＮＡｓｗｅｒｅｇｏｖｅｒ３０％ｉｎｅａｃｈｒｏｕ．ＡｆｔｅｒｒｅｍｏｖａｌｏｆｏｔｈｅｒＲＮＡｂｃｏｍａｒｉｓｏｎｂｅｔｗｅｅｎＲｆａｍｇｐｙｐａｎｄＧｅｎｅｂａｎｋｄａｔａｂａｓｅｏｖｅｒ７０００ｍｉＲＮＡｓｐｅｃｉｅｓｗｅｒｅａｃｃｏｕｎｔｅｄ．ＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＧＤＭｈａｄ１３８ｋｎｏｗｎｍｉＲＮＡｓｈｉｇｈｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｈａｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｉｎｃｌｕｄｉｎｇ－－－－－－－－ｍ－－－ｍｉＲ％－ｍ－－ｈｓａｍｉＲ５４８ａ５ｈ犯ｍｉＲ２９ａｈｓａ５ｈｓａｍｉＲ３７２５ｈｓａｉＲ３７４ａ５、ｐ，，，ｐ，ｐ－－－－＞ｈｓａｍｉ民－５ｈｓａｍｉＲ８８９－３ｌｏ２－ｒａｉｏｌ？＜０ｋｎｏｗｎｍｉＲＮＡｓｉｎ口７７ｔ．０１．１６ｐｐ（ｇ，）－＿ｃ－ｍ－ＧＤＭｗｅｒｅｌｏｗｅｒｅｘｒｅｓｓｅｄｔｈａｎｃｏｎｔｒｏｌｓｕｈａｓｈｓａｉＲ１２６９ａｈｓａｍｉＲ１２４６ｐ，，，－－＜－－ｍ－－＜ｈｓａｍｉＲ６６３ａｈｓａｉＲ７７０４ｌｏ２ｒａｔｉｏｌＰ０．０１．Ｓｏｍｅｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌ，（＾ｇ，）ｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓａｂｏｖｅｈａｖｅｂｅｅｎｖｅｒｉｆｉｅｄ化ｐｌａｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｌｙｋｎｏｗｎｋｅｙ１：ｏｄｉａｂｅｔｅｓ．２７ｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓｗｅｒｅｒｅｄｉｃｔｅｄｂｐｙ＊－ｏ＞Ｍｉｒｅａｗｉｔｈｉｎ９ｏｖｅｒｅｘｒｅｓｓｉｏ打ｌｏ２ｒａｔｉｌ户＜０．０１６ｄｅｃｒｅａｓｅｄｐｐ（ｇ：），－ｅｘｒｅｓｓｏｎｏｒａｔｏ＜－＇＜０？０！ａｎｄ４ｅｕａｌｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｏｕｃｏｍａｒｅｄｉＩ２ｉｌＧＤＭｐ（ｇ，）ｑｐｇｐｐｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ．ｇｐＣｏｎｃ－ｔｔｓｅｔｌｕｓｉｏｎｓ：ＨｉｇｈｈｒｏｕｇｈｐｕｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｍｉＲＮＡｘｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｌａｃｅｎｔａｐ－ｔｉｓｓｕｅｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＧＤＭｗａｓｆｉｒｓｔｌａｎａｌｚｅｄｔｈｒｏｕｇｈｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｃＤＮＡｐｙｙｇｌｉｂｒａｒｙｏｆｍｉＲＮＡａｎｄｉｔｉｓｓｈｏｗｎａｂｎｏｒｍａｌｅｘｐｒｅ巧ｉｏ打ｏｆ泣ｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｍｒｅａｅｄｏｎｉＲＮＡｓａｍｏｎｓｏｍｅｏｆｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｌｔｔｉｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．，ｇＣｈａｐｔｅｒ打ＩＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｐａｒｔｉａｌｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅ邱ｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓａｎｄｔｈｅｉｒｔａｒｇｅｔｒｅｄｉｃｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｓｉｓｐｙ－－ｔ－ｍ－－－Ａｉｍ：Ｔｏｖａｌｉｄａｔｅｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｈｓａｉ民５４８ａｍ５ｈｓａｍｉＲ９５５ｐｐ，ｐ，－－－ｍ－ｔｒｈｓａｉＲ１２４６ａｎｄｈｓａｍｉＲ１２６９泣ｉｎｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅｆｒｏｍｍｏｒｅｎｏｒｍａｌｃｏｎｏｌａｎｄｐＧＤＭａｔ－ｐｉｅｎｔｓｂｙｕａｎｔｉｔｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲａｎｄ化ｐｒｅｄｉｃｔｔａｒｅｔｅｎｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｑｙ＾ｇｇｙｖｉ 博壬学位论文ｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉ民ａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｄｒｆｔｍｃｔｉｏ打．ｐｅｔｈｏｄｓ－Ｍ：ｃＤＮＡｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｆｒｏｍｔｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙＴｒｉｚｏｌｕｓｉｎｇ－ｃｏｍｍｅｒｃａｚｅｄｒｅｖｏｎｋｅｅｘｒｅｓｓｎｏｆａｍ－－ｉｌｉｅｒｓｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｉｔ．ＴｈｐｉｏｈｓｉＲ５４８ａｍ５ｐ，－－－ｍ－－－－ｈｓａｉＲ９５５ｈｓａｍｉＲ１２４６ａｎｄｈｓａｍｉ民１２６９ａｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｕａｎｔｉｔｐ，ｙｑｙｒｅａｌ－ｉｉｔｈｂ－ｒｅｅＲＮＵ６ｉｎｎｌａｎｔｍｅＰＣＲｗＳｙｒＧｎｄｙｅａｎｄａｓｅｒｃｏｎｔｒｏ．ＭｉＲｄａ，ＴａｒｇｅｔｓｃａｎａｎｄＭｉｒｅａｐｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡａｎｄｔａｋｉｎｇｔｈｅｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎａｓｆｉｎａｌｒｅｓｕｌｔｓ．ＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｓｉｓｏｆｙＧＯａｎｄＫＥＧＧａｔｈｗａｂｏｎｌｉｎｅｄａｔａｂａｓｅｗａｓａＵｅｄｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｐｙｙｐｐｐａｔｈｗａｙｓｕｍｍａｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣｒｉｔｅｒｉａｏｆｓｃｒｅｅｎｉｎｇＧＯａｎｄＫＥＧＧｓｉｎｉｆｉｃａｎｃｅｗｅｒｅＰｖａｌｕｅ＜０．０５ａｎｄｔｈｅｆａｌｓｅｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅＦＤＲ＜０．０５．ｇｐ（）－ｍ－Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｌａｃｅｎｔａｌｈｓａｉＲｐ，ｐｐ５４８ａｍ－５ａｎｄｓ－ｍ－－ｓｎｃａｎｎｃｒｅａｓｅｄｎｒｏｕｗｅｒｅｎｃｅｐｈａｉＲ９５５ｉｉｆｉｔｌｙｉｉＧＤＭｉｔｈｄｉｆｐｇｇｐ，＝－＝＝＝ａｔ－ｓｔｉｓｔｉｃａｌｌｓｉｎｉｆｉｃａｎｔ（ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｙｔ１０．２０８，Ｐ０．０００；ｔ１４．８８０，Ｐ０．０００）ｙｇ；＝－－－ｍｉＲａｎｄａ－ｍｉ泣ｈｓａ１２４６ｈｓＲ１２６９ｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｌｏｗｅｒｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｔ１２ｇｙｙ．６５３，（＝＝＝戶０．０００ｔ８．９７３戶０．０００ｉｎＧＤＭｒｏｕｔｈａｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｌｌｏｆｗｈｉ油ｗｅｒｅ；，）ｇｐ；ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｈｈｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ．Ｍｕｃｈｍｏｒｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔａｒｅｔｅｎｅａｎｄｔａｒｅｔｇｇｇｇｅｎｅｌｏｃｉｗａｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄｏｆｄｉｆｅｒｅ打ｔｉａｌｌｙｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓｉｎＧＤＭｇｒｏｕｔｈａｎｐｐ打ｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＧＯａｎｎｏｔａｔｉｏ打巧ｓｕｉｔｓｏｆｔａｒｇｅｔｅｎｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ：ｔａｒｅｔｇｇｇｅｎｅｓｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ＊ｍｅｔａｂｏＫｓｍｓｉｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｉｍｍｕｎｅｒｉａｂｅｔｅｉｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ｅｓｏｎｓｅａｎｄｄｓｅｇ，ｐｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＩｎＫＥＧＧｐａｔｈｗａｙａｎａｌｙｓｉｓ，ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｏｆｄｉｆｅｒｅ打ｔｉａｌｌｙｅｘｒｅｓ化ｄｍｉＲＮＡｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄ化ｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｃｔｉｎｃｔｏｓｋｅｌｅｔｏ打ｐｙｒｅｕｌａｔｉｏｎ，ｌｏｃａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｅｎｄｏｃｔｏｓｉｓｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｓｇ，ｙ，ｇｇｐｙ，ｎａ－ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｙＷｎｔｓｉｌｉｎａｔｈｗａｕｂｉｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｇｇｐ，ｇｇｐｙ，ｑｎｒｔｅｏ－ｌｓｉｓｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａａｏｔｏｓｉｓｅｒｏｘｉｓｏｍｅｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｐｙ，ｇｇｐｙ，ｐｐ，ｐｐａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄａｄｉｐｏｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇａｔｈｗａｙ．ｐｖｉｉ ＡＢＳＴＲＡＣＴＣｏｎｃｓｔｓｔｅｏ打ｏｆｍ－ｔｌｕｓｉｏ打ｓ：ＲｅｕｌｏｆｄｉｓｉｎｃｔｘｐｒｅｓｓｉｉＲＮＡｂｙｈｉｇｈｈｒｏｕｈｕｔｇｐｓｅｕｅｎｃｉｎｏｆｍｉＲＮＡｓｗｅｒｅｒｅＨａｂｌｅ．ＷｈｅｎＧＤＭｗａｓｏｃｃｕｒｒｅｄｂｉｎ出ｎａｎｄｑｇ，ｇｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｓｉｔｅｓｏｆｍｉＲＮＡｓｃｏｕｌｄｂｅｖａｒｉｅｄｉｎｐｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅ．Ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｏｆ出ｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｅｌｌｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｙｐｐｄｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓｉｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｅｉ，，ｇｒｅｓｏｎｓｅｅｔｃ．Ｃａｌｃｉｕｍｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａａｏｔｏｓｉｓａｎｄｐｇｇｐｙ，，ｇｇｐｙ，ｐｐｅｒｏｘｏ－ｔｔｉｓｏｍｅｒｏｌｉｆｅｒａｔｒａｃｉｖａｅｄｒｅｃｅｔｏｒｓｌｏｃａｌｉｚｅｄｃｄｌａｄｈｅｓｉｏ打ａｎｄｃｈｅｍｏｋｉｎｅｐｐｐ，ｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｓｌａｉｍｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎａｔｈｏｅｎｅｓｉｓｏｆＧＤＭｉｎｗｈｉｃｈｇｇｐｙｐｙｐｐｇ，－－ｍ－－－－ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒ的ｓｅｄｍｉＲＮＡｓｓｕｃｈａｓｈｓａｉＲ３７２３ｐ、ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐａｎｄ－ｅｍｉｒ－ａｒｅｋｅｄｏｔｓｏｆｎｏｖｌ２２ｔｇｔｙｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎｇａｔｈｗａａｎｄｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｇｐｙｇ，－－－－ｍｔｔａｎｄｎｏｖｅ＾ｍｉｒｌ４、ｎｏｖｅ＾ｍｉｒ１９ａｎｄｎｏｖｅｌｉｒ２２ｔａｒｅｔｋｅｄｏｓｏｆＰＰＡＲｓａｈｗａｙｇｙｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｌｉｉｄｓｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃａｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｉｎｓｘｉｌｉｎｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．ｐｙＫｅｙｗｏｒｄｓ；Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ，ｐｌａｃｅｎｔａ＾ｍｉｃｒｏＲＮＡ，ｔａｒｅｔｇｅｎｅｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，ＧＱｇｐｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔＫＥＧＧｐａｔｈｗａｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｅｒｏｘｉｓｏｍｅ，ｙ，ｇｇｐｙ，ｐｒｏ－ｐｌｉｆｅｒａｔｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｖｉｉｉ 博击学位论文目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴｉ煎胃１一一第部分ＧＤＭ的般临床特点及胎盘组织病理学分析７１欄７１巧振７３鄉９４Ｗ论１１参考文献１３第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析．．１６１欄１６２方＆１９３结Ｓ２９４職５４参考文献５７第Ｈ部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和铅基因的预测及功能分析６１１刪６１１巧法６２３结果６７４職９０参考文献９８全文总结１０４文献综述１０７ｉ １２４Ｐｉｔ录攻读学位期间成果１１９致谢１２４原创性声巧及版权使用授权说明１２６ 博壬学位论文前言（ｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉ油ｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓＧＤＭ）是指妊妊娠期塘尿病ｇ，娠期发生或首ＷＰ１次发现的糖耐量异常，但不排除糖类不耐受在妊娠前已经存在的可能性，因此不包含部分妊娠前已患有糖尿病但产检时首次被诊断的患者。１９６４年‘０ｓ山ｌｉｖａｎ等首次对该病进行描述，１９７９年世界卫生组织（ＷＨＯ）将ＧＤＭ列一一为糖尿病的个独立类型。ＧＤＭ是妊娠期常见的并发症之，对母儿的影响大，ＧＤＭ孕妇产后发生临床糖尿病的危险性明显増加，易造成胎儿羊水过多、死产、难产、巨大儿、胎儿宫内缺氧及新生儿呼吸窘迫综合症等，而ＧＤＭ持续増长的流行病学趋势已构成严重的世界公共卫生问题，是现今威胁孕产妇及子一个重要疾病一代健康的。ＧＤＭ的发病率因种族不同和采用的诊断标准不统，Ｗ％－世界各国报道相差悬殊．１１，不同人群的发病率有差异，范围在１７．６％之间，Ｗ４％左右ＷＧＤＭ发病率在５％－７％如欧美国家的发病率在，我国调查结果显示，并呈逐年上升趋势。对于ＧＤＭ的病因和发病机制，虽然经历了无数学者的研究和努力，至今仍不甚清楚。经典的观点认为，妊娠早期因排糖量及胎儿获取葡萄糖量增加，雌激素、孕激素分泌增加，使膜岛素分泌增多，导致髙族岛素血症，同时由于、、胎盘分泌的皮质醇雌激素孕丽等多种对抗族岛素的激素，导致周围组织对膜岛素反应的敏感性下降。若膜岛素分泌不足不能补偿膜岛素抵抗（ＩＲ）将。、引起糖耐量异常甚至糖尿病的发生近些年来，随着分子遗传学分子免疫学、分子生物学和临床医学的发展，，对本病病因学的研究愈加深入认为ＧＤＭ可一能是多种因素起作用而引起的种疾病，其发病机制可能与遗传、生活方式、妊娠膜岛素分泌相对减少、族岛素抵抗程度增加、组织对膜岛素敏感性降低、膜岛素受体缺陷、、膜岛素受体结合和受体后信号传导障碍脂肪因子、炎症等因素有关。ｃｒｏ－微小ＲＮＡ（ＭｉｉＲＮＡ，ｍｉＲＮＡ）是长度为１９２５个核巧酸的非编码单链ＲＮＡ分子，具有高度的保守性、表达多样性和基因簇集排列的特点，能够特异１ 前言祀向信使ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）并通过对ｍＲＮＡ剪切或转录后抑制的机制发挥重要的调节功能Ｗ。首先基因组ＤＮＡ在ＲＮＡ聚合酶ＩＩ的作用下产生原始ｍｉＲＮＡ－ｒ－（ｒｉｍｉＲＮＡ）。然后ｉｍｉＲＮＡＲＮＡ面（ＲＮａｓｅ扭）ｒｏｓｈａｐ，ｐ被内切酶家族中的Ｄ－ｍ－在细胞核内加工成约７０个核脊酸的前体ｉＲＮＡ（ｐｒｅｍｉＲＮＡ）。这些ｐｒｅｍｉＲＮＡｍＥｘｏｒｔｎ－５被ｐｉ蛋白分解ＧＴＰ能量的方式从核内运输到细胞质中，并在一ＲＮａｓｅ阻个成员Ｄｃｅｒ－２５个核巧酸长度的双家族的另ｉ的作用下被剪切成约２１链ｍｉＲＮＡ脚。接着双链ｍｉＲＮＡ被解旋酶解化形成成熟的单链ｍｉＲＮＡ。成－熟的ｍｉＲＮＡ结合到ＲＮＡ诱导的基因沉默复合物（ＲＮＡｉｎｄｕｃｅｄｓｉｌｅｎｃｉｎｇ９合物［］ｃｏｍｌｅｘＲＩＳＣ）中，形成非对称ＲＩＳＣ（ａｓｍｍｅｔｒｉｃＲＩＳＣａｓｓｅｍｂｌ）ｐ，复ｙｙ，该复合物结合到目标ｍＲＮＡ上而发挥转录后调控作用。每个ｍｉＲＮＡ可Ｗ有多一ｉ个祀基因，而几个不同的ｍＲＮＡ也可＾对同个基因进行调节，从而使得送（一个种调节网络可利用ｍｉＲＮＡ来调节多个基因的表这、也可Ｗ通过几个ｔＷｍｉＲＮＡ来共同调节某个特定基因的表达。ｍｉＲＮＡ在人类基因組中只占整个基因组基因总数的２％左右，但可能有超过３０％的基因受ｍｉｃｒｏＲＮＡ调控近年来的研究发现ｍｉＲＮＡ在糖尿病的发病过程中起Ｔ重要的作用。ｍｉＲＮＡ２００４Ｐｏ在族岛Ｐ细胞分泌中有重要的调节作用。早在年，ｙ等首次发现膜岛一特异性表达的可＾调节葡萄糖诱导的膜岛素分泌，进步的研究显示其机制与直接影响膜岛素胞吐作用有关，而与葡萄糖代谢及巧信号通路无改变。一ｍ－－Ｍｙｏｔｒｏｐｈｉｎ被证实是ｉＲ３７５的个作用祀点，ｍｉＲ３７５可Ｗ直接结合到’Ｍｙｏｔｒｏｐｈｉｎ的３非翻译区，从而抑制Ｍｙｏｔｒｏｐｈｉｎ基因的表达。通过小干扰ｓ－ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）抑制Ｍｙｏｔｒｏｐｈｉｎ，可Ｗ模拟ｍｉＲ３７５影响膜岛素胞吐，从而抑制膜岛素分泌。Ｔａｎｇ等发现葡萄糖刺激能够改变膜岛Ｐ细胞中ｍｉＲＮＡ的水平，－ｍ－－在高糖情况下，这些ｍｉＲＮＡ绝大多数表达上调，如ｉＲ１２４ａ，ｍｉＲ１０７及ｍｉＲ－３０ｄＲ３０ｄ－，其中的过度表达可增加膜岛素基因表达，说明ｍ化３０ｄ可能促进膜岛素的生成ｓ－ａ。Ｌｏｖｉ等研究表明，族岛Ｐ细胞中ｍｉＲ１２４高表达在基础状态下可增加膜岛素分泌，而在高糖状态下则减少膜岛素分泌２能，其範分子ＦｏｘＡ２ 博去学位论文－－调节ＰＤｘ１、Ｋｉｒ６．２和Ｓｕｒ１等多个与族岛素合成及分泌相关的特异性转录因子ｉｔｑＨＷ。Ａ的表达此外，ｍｉＲＮ与膜岛素在效应组织作用发挥有关。ｅｒｒｅｒａ等发现在膜岛素的主要範组织－肝脏及脂肪组织中，ＧＫ鼠与ＢＮ鼠（正常血糖对照一一ｍｉＲＮＡｓ表达有明显差异ｍ－ａ是唯组）比较，，ｉＲ１２５个在肝脏与脂肪组织中表达均呈显著差异的ｍｉＲＮＡ。ｍｉＲＪ２５ａ的鞭基因涉及到丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号通路，该通路在糖尿病时被激活，提示ｍｉＲＮＡ与膜岛素在靴组织中发挥作用有关。膜腺发育过程中各型细胞的发生依赖于基因表达的连续性变化，ｍｉＲＮＡ可Ｗ功过转录后沉默基因而限制基因表达，从而在膜腺发育中发ｉｌｔｌ挥调控作用。Ｚｈａｏ等研究表明，在孕早期血清ｍｉＲＮＡ的表达可预示妊娠期－－－１１１１民２９３１１１１反２２２３１１＜１１１１１艮１３２糖尿病的发生，主要表现在的表达下降，进而通，过调节膀岛素诱导基因。１和蛋白激酶２的表达调节葡萄糖的代谢一一、胎盘是种多功能的器官在胎儿发育中发挥中多种功能，作为唯连接母儿的界面，对母体与胎儿的气体及营养等物质交换起决定性作用。由于其特殊的位置，胎盘可能会受到两个循环中激素、细胞因子、生长因子的调节影响；同时，它也能产生相关分子Ｗ影响母体和胎儿，因而对研究ＧＤＭ发病机制来一－说个关键组织器官。人类胎盘表达几乎所有的细胞因子，包括如ＴＮＦａ、抵—ｉｓｔＷ且发生ＧＤＭ时多种细胞因子表达异常。相对于机体的抗素和内脂素，并。其他组织，胎盘表达高水平的膜岛素受体表达的部位随着发育而改变。在妊ｐｑ娠的起始阶段，表达位于合体绒毛膜，在后期主要位于内皮层。这提示母体怀孕初期到胎儿成熟过程膜岛素依赖过程的变迁。膜岛素受体的时空改变与功ｐｓｉ能平行，因为膜岛素诱导的基因表达在开始的妊娠滋养细胞最高。在终末期，膜岛素在内皮层的作用强于滋养层。这对于普通、特别是ＧＤＭ怀孕妇女来说非常重要，因为胎儿高膜岛素血症会影响胎盘内皮层。ＧＤＭ发病机制中可能有多种胎盘姐织的细胞因子及膜岛素信号通路异常相互作用的参与。基于Ｈ设ｅ高通量测序技术的小ＲＮＡ数字化分析，采用边合成边测序ｑ二一ｓｅｕｅｎｃｉｎｂｓｎｔｈｅｓｉｓ，泌Ｓ），可减少因级结构造成的段区域的缺失。并（ｑｇｙｙ３ 前言具有所需样品量少，高通量，高精确性，拥有简单易操作的自动化平台和功能一强大等特点，次性获得数百万条小分子ＲＮＡ序列，能够快速全面地鉴定该物种在该状态下的小分子ＲＮＡ并发现新的小分子ＲＮＡ，构建样品之间的小分子ＲＮＡ差异表达谱，为小分子ＲＮＡ功能研究提供有力工具。本实验通过高通量测序技术对ＧＤＭ患者和妊娠期正常女性胎盘组织ｍｉＲＮＡ的表达差异研究，Ｗ得到ＧＤＭ患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ表达谱，运用实时定量ＰＣ民对测序筛选出差异表达的ｍｉＲＮＡ进行验证，结合生物信息学方法预测差异表达ｍｉＲＮＡ的帮基因并分析其功能，为研究ＧＤＭ的发病机制奠定基础。参考文献１ＡｍｅｒｉｃａｎＤｉａｂｅｔｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．ＧｅｓｔａｔｉｏｎａｌＤｉａｂｅｔｅｓＭｅｌｌｉｔｕｓ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．［］ｓｕ－２００４２７ｌｅｌ）：８８９０．，（ｐｐ口］ＭｅｔｚｇｅｒＢＥ，ＯｒｇａｎｉｚｉｎｇＣｏｍｍｉｔｔｅｅ．Ｓｕｍｍａｒｙａｎｄ化〇〇１１１１１１６１１（１＆巧〇１１ｏｆｔｈｅ了ｈｉｒｄＩｎｔｒａａｔｉｏｎａｌＷｏｒｋｓｈｏｐＣｏｎｆｅｍｃｅｏｎｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅ把ｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ．１９９１，４０－：１９７２０１．［３］ＳｃｈｎｅｉｄｅｒＳ，ＢｏｃｋＣ，ＷｅｔｚｅｌＭ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｉｎａｄｖａｎｃｅｄｅｓｒｉｎ－ｅｃｏｎｏｍｉ．ＪＰｅａｔＭｅｄ．２０１２４０５：５１１５２０．，（）４ＡｍｅｒｉｃａｎＤｉａｂｅｔｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｄｉａｎｏｓｉｓａｎｄｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．［］ｇＤ－ｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．２００４２７：Ｓ５Ｓ１０．，５王林琳４０４－红读．妊娠期糖尿病研究进展．新医学．２００９：２７１２７３．［］，侯，（）６ＢａｒｔｅｌＤＲ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ：ｅｎｏｍｉｃｓｂｉｏｅｎｅｓｉｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ［］ｇ，，ｇ，ａ，２００４１１６：２８＾巧７．，ｃｋ－７ＢｏｈｎｓａＭＴＧｚａｌｉｎｓｋｉＫＣｏｒｌｉｃｈＤ．Ｅｘｏｒｉｎ５ｉｓａＲａｎＧＴＰｄｅｅｎｄｅｎｔ［］，ｐ，ｐｐ－ｏｅａ－ｍｄｓＲＮＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｔｉｎｔｈｔｍｅｄｉａｔｅｓｎｕｃｌｅａｒｅｘｏｒｔｏｆｒｅｉＲＮＡｓ．ＲＮＡ２００４ｐｐ，，－１０２：１８５１９１．（）４ 博壬学位论文閒ＫｉｍＶＮ，ＨａｎＪ，ＳｉｏｍｉＭＣ．ＢｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｓｍａｌｌＲＮＡｓｉｎａｎｉｍａｌｓ．ＮａｔＲｅｖＭｏｌｅ－Ｃ：ｌｌＢｉｏｌ．２００９１０２１２６１巧．，（）？－ＰｒａｔＡＪＴｈｅＲＮＡ－ＭａｃＲａｅＩＪｉｎｄｕｃｅｄｓｉｌｅｎｃｉｎｃｏｍｌｅｘ？过ｖｅｒｓａｉｌｅｅｎｅ．ｔ巧］，ｇｐｇｅ－ｓｉｌｅｎｃｉｎｍａｄｉｉｎＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００９２８４７：１７８９７１７９０１．ｇ，口）Ｍ－１０ｉｒａｎｄａＫＣＨｕｎｈＴＴａＹｅｔａｌ．Ａａｔｅｍｂ狼ｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ［］，ｙ，ｙ，ｐｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｈｅｔｅｒｏｄｕｌｅｘｅｓ．Ｃｅｌｌ．２００６１２６ｇｐ，６－：１２０３１２１７．（）１１ｅｒｅｚｉｋｏｖＥＧｕｉｅｖＶｖａｎｄｅＢｅｌｔＪｅｔａｌ．Ｐｈｌｏｅｎｅｔｉｃｓｈａｄｏｗｉｎａｎｄ［］，，ｙ，ｙｇｇｃｏｍｕｔａｔ－ｉｏｎａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｍｉｃｒｏＲＮＡｅｎｅｓ．Ｃｅｌｌ２００５１２０：２１２４．ｐｇ，，。）ｓｓｏ打ｅｅｔ－１２ｏＭＮ，ＥｌｉａＬＫｒｕｔｚｆｌｄｔＪｔａｌ．ＡａｎｃｒｅａｉｃｉｓｌｅｔｓｅｃｉｆｉｃｍｉｃｒｏＲＮＡ［巧ｙ，，ｐｐＫｕ－ｌａｔｅｓｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ．２００４４３２〇１４：２２６２３０．ｇ，（７）ａａｎａｅｎｃａｏ打ｏｆｕｃｏ－ｕｅｄ；３ＴａｎＸＭｕｎｉａｎＬ巧ｌ．Ｉｄｔｉｆｉｔｉｌｓｅｒｅｌａｔ＂］ｇ，ｐｐ，ＴｇＱｇｇｍ－ｉＲＮＡｓｆｒｏｍｐａｎｃｒｅａｔｉｃｐｃｅｌｌｓｒｅｖｅａｌｓａｒｏｌｅｆｏｒｍｉＲ３０ｄｉｎｉｎｓｕｌｉｎ？ａｎｓｃｒｏｎ－ｔｒｉｔｉ：ｐ．ＲＮＡ．２００９１５２２８７２９３．，（）ｖ＊＂ＷＬｏｉｓ巧ＧａｔｅｓｃｏＳＲｅａｚｚｉＲ．Ｒｅｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｘｉｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｍｏｎｅｎｔｓｏｆ，ｇｇｐｐｉｃｍｉｎｅｉｌｉ－ｓｅｃｒｅｉｃｅｌｌｓｂｉｃｒｓＢｉｏｌＢｔｈｅｅｘｏｃｙｔｏｔａｃｈｒｏｆｎｓｕｎｔｎｇｍｏＲＮＡ．Ｃｈｅｍ．２０Ｇｙｙ，３８９３－：３０５３１２．（）ｋｈＮＲａｖ－１５ａｒｏｕｉｅｒＭＡＬｏｄｅｒＭＬ巧ａｌＭｉｃｒｏＲＮＡ１２４ａｒｅｕｌａｔｅｓＦｏｘ２巧，［，，ｇｅｘｒｅｓｓｔｉｏ打ａｎｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｎａｌｉｎｉｎａｎｃｒｅ过ｔｉｃ乂ｅｌｌｌｉｎｅｓ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２００７ｐｇｇｐｐ，，２７－２８２：巧５７５１９５８８．（）－ａｏｖｅ１６ＨｅｒｒｅｒａＢＭＬｏｃｋｓｔｏｎｅＨＥＴａｌｏｒＪＭ，ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ１２５ｉｓｒｅｘｒｅｓｓｅｄ［］，，ｙｐｉｎｉ打ｓｕｌｉｎｔａｒｇｅｔｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｒａｔｍｏｄｅｌｏｆＴｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．ＢＭＣＭｅｄＧｅｎｏｍｉｃｓ２００９２：５４，，ｙ）Ｃ化ａｎｅａ－１７ＺｈａｏＤｏｎＪ，ｔｌ．ＥａｒｌｓｅｃｏｎｄｔｒｉｍｅｓｔｅｒｓｅｒｕｍｍｉＲＮＡｒｏｆｉｌｉｎ［］，ｇｇＴ，ｙｐｇｒｅｄ－ｉｃｔｓｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１６８＾３９２５２３９３３．ｐｇ，（）ｏｕｈ－＂＾ＧｇｉａｎＭＴＯｌｉｖａＫＧｅｏｒｉｏ打ＨＭ巧ａｌ．Ｇｌｕｃｏｓｅｉｎｄｕｃｅｄｒｅｌｅａｓｅｏｆｔｕｍｏｒ，：ｇ，５ 前言－ａｎｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｈａｆｒｏｍｈｕｍａｎｌａｃｅｎｔａｌｄａｄｉｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｉｎｅｓｔａｔｉｏｎａｌｐｐｐｇｄ－ｉａｂｅｅｓｍｅｌｌｉｕｓＤｉａｂｅｔＭ１１８１１：巧１９２７ｔｔ．ｅｄ．２００（．，）１９周月統蒋荣珍ｒｅｓｉｓｔｉｎ［］，宋婚等在妊娠期糖尿病患者胎盘组织的表达及意－义观代妇产科进展：．２００８１７３１６１１６３．，（）［２０］罗佳茜，刘兴会，张力，等．Ｖｉｓｆａｔｉｎ在妊娠期糖尿病患者胎盘组织中的表达－：及意义四川大学学报（医学版）．２０１１４２２２０４２０７．，（）２１ＫｌｅｉｂｌｏｖａＰＤｏｓｔａｌｏｖａｂＩＢａｒｔｌｏｖａＭｅｔａｌ．Ｅｘｒｅ泌ａｄｉｏｋｉｎｅｓａｎｄ［］，，，ｐｉｏｎｏｆｐｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｔｏｒｓｉｎａｄｉｏｓｅｔｉｓｓｕｅａｎｄｌａｃｅｎｔａｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｐｐｐｐｇ－ｌｌｉｔｕｓ．ＭｏｌＣｅｌｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１０３１４１１５０１５６．ｍｅ：，（）２的ｏｅＨａｒｔｍａｎｎＭ，ＪｏｎｅｓＣＪｅｔａｌ．Ｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｔｏｒｓｉｎｔｈｅ［巧ＤｙＱ，ｐ－－ｌａｃｅｎｔａａｎｄｉｔｓｒｏｅｎｉｔｏｒｔｉｓｓｕｅｓ．ＭｉｃｒｏｓｃＲｅｓＴｅｃｈ．ｌ９９７３８ｌ：６３７５．ｐｐｇ，（巧２３ＨｉｄｅｎＵＭａｉｅｒＡＢｉｌｂａｎＭｅｔａｌ．Ｉｎｓｕｌｉｎｃｏｎｔｒｏｌｏｆｌａｃｅｎｔａｌｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎ［］，，，ｐｇｐｓｈｉｆｓｆｒｏｍｍｏｈｅｒｆｏｅｕｖｅｒｈｅｃｏｕＴ化ｒｅａｎｃｉｌｏｉａ：ｔｔ化ｔｓｏｔｏｆｐ．Ｄａｂｅｔｏ．２００６４９ｇｎｙｇ，。）－１２３１３１．６ 博壬学位论文第一部分Ｇ一ＤＭ的般临床特点及胎盘组织病理学分析１材料１．１研究对象：研究对象拟选取于２０１３年１月１日至２０１４年Ｉ月１日在广州医科大学附属武警医院、南方医科大学珠江医院就诊并分娩的孕妇４０例，均为粤籍没族人并且无亲缘关系，将妊娠期糖尿病孕妇作为观察组（ＧＤＭ组），随机选取无妊娠合并症、并发症的正常孕妇，作为对照组。纳入标准为２０１３年世界卫生组织（ｗｏｒｌｄｈｅａｌｔｈｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，ＷＨＯ）妊娠期糖尿病诊断标准：口服葡萄糖耐量试验前禁食至少８ｈ，试验前连续３ｄ正常饮食，５ｍｉｎ内口服含７５ｇ葡萄糖液体３００ｍｌ１、２ｈ３，分别抽取服糖前及服糖后的静脉血：服糖前及服糖后１、２这ｍ一项血糖值应分别低于５．１、１０．０、８．５ｍｍｏｌ／Ｌ９２、１８０、１巧／ｄｌ，任何项血（ｇ）糖值达到或者超过上述标准即诊断为ＧＤＭ。排除对象包括合并存在妊娠期高血压疾病、原有糖尿病、先天性也脏病、双胎妊娠、早产、肝炎、甲状腺功能异常等代谢性疾病、产前发热等炎症急性期孕妇。１．２主要试剂耗材血糖检测试剂盒（葡萄糖氧化酶法）检测试剂盒来自上海荣盛生物技术公司，族岛素检测盒（化学发光法）来自雅培贸易（上觀有限公司，氯化钢、二甲苯、冰醋酸、苯酪、无水己醇、甲醇、碳酸氨钢、盐酸、艺二胺四乙酸钢等购自广州化学试剂厂，均为化学纯。２方法２．１全身体检所有受试者脱鞋、免冠、测定身高、体重、精确到０．１ｃｍ和ＯＪｋｇ，由专人２ｍ＝测量。孕前体重指数（Ｂｏｄｙａｓｓｉｎｄｅｘ，ＢＭＩ）体重（ｋｇ）／身高如），指确定怀孕后一Ｗ第次产前检查巧－口孕周测量的ＢＮｆｌ。）２．２血；５ｌ２ｍｌ加肝液标本的采集与处理检查当日晨，抽取空腹时静脉血ｍ，７ 一一第部分ＧＤＭ的般临床特点及胎盘组织病理学分析一ｍ素抗凝，室温下静置小时，经２０００ｒ／ｉｎ，离也ｌＯｍｉｎ，取血浆采用葡萄糖‘氧化激酶法测定血浆葡萄糖的含量；另外３ｍｌ血不加抗凝，将血样在３７Ｃ水中赔育ｌＯｍｉｎ，用３０００ｒ／ｍｉｎ的转速离也１５ｍｉｎ，取出上层的血清，按照检测的标°－２０Ｃ冰箱储存备用保存成批测定空腹膀岛本需要量分装试管，膜岛，密闭并置素的测定采用化学发光法。餐后２ｈ血糖、餐后比膜岛素和餐后２ｈ族岛素的标本检测同上处理。所有的检测均由医院检验科完成，严格按照《全国临床检验操作规程（第３版）》进行实验。膜岛素抵抗指数采用稳态模型（Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｍｏｄｅｌ巧＝ｘａｓｓｅｓｍｅｎｔｌｔＨＯＭＡ－ＦＰＧＦＩＮＳｓｉｎｓｕｉｎｒｅｓｉｓａｎｃｅＩＲ／２２．５，估计夕ｈ周组织膜岛，）素抵抗程度，由于该指数呈偏态分布，故取其自然对数统计分析。计算ＨＯＭＡ＝ＨＯＭＡ－ＨＢＣＩｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｄｅｘＩＨＢＣ２０Ｘ膜岛口细胞功能指数（ｐ，），Ｗ－ＦＩＮＳ／ＦＰＧ３．５，评价膜岛ｅ细胞分泌功能。（）２．３胎盘组织的获取胎盘的采集：胎盘娩出后，立即在无菌条件下，取母体面中央约１．０Ｘ３ｌ．Ｏｘｌ．Ｏｃｍ的胎盘组织，避开梗塞及巧化化，冰无菌冰生理盐水冲洗后，吸去一水份，分别用锡泡纸包好标记，部分置于标本容器内甲醒固定、用于组织病‘一－－理学研究，１５ｍｉｎ，８０Ｃ冰，另部分立即置于液氮罐中放置ｌ〇后取出置于箱备用。２．４胎盘组织的形态学观察：在胎儿、胎盘娩出后，８小时，ＨＥ，，在胎盘的中央带取材甲嗟固定４染色光镜观察组织形态学变化。ＨＥ染色方法：①１０％福尔马林固定４化后，将标本作常规石蜡包埋，在标本的中间段连续切８张，厚约５．０ｕｍ。②切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇——－＂—至水洗５ｍ５艺醇２ｍ＊：二甲苯ｉｎ二甲苯ＩＩｉｎｉｎ１００％ｉｎ％％己醇Ｉｍｉｎ（Ｉ）（）——８０％乙醇Ｉｍｉｎ７５％乙醇Ｉｍｉｎ蒸馈水洗２ｍｉｎ。③苏木素染色５ｍｉｎ，自来水冲洗。④盐酸乙醇分化（提插数下）。⑤自来水浸泡１５ｍｉｎ或温水约约５０（‘立醇Ｃ）５ｍｉｎ。⑥置伊红液染色２ｍｉｎ。⑦常规脱水，透明，封片：９５％（Ｉ）ｌｍｉｎ８ 博壬学位论文一ｍ——－？二甲９５％乙醇ｌｌｉｎ１００％乙醇Ｉｍｉｎ二甲苯石碳酸（３：１）苯（Ｉ）ｌｍｉｎ（Ｕ一二甲苯中性树脂封固。２．５统计分析．ｘ±Ｓ表示所有检测结果采用ＳＰＳＳ１１０软件进行分析，计量资料，正态！＾分布样本的两两比较采用ｔ检验，非正态分布的样本两两比较采用非参数检验；计数资料采用卡方检验．０５，八〇差异有统计学意义。３结果一３．１ＧＤＭ与对照组么间般临床特点的比较在匹配年龄、孕周、孕前身体质量指数及分娩前身体质量指数后，与正常妊娠妇女相比，ＧＤＭ组临床实验室指标包括空腹血糖、餐后２ｈ血糖、餐后２ｈ－膜岛素、糖化血红蛋白和族岛素抵抗指数（ＨＯＭＡＩＲ）均明显高于正常对照组，＝＝４８０００００＝＝－：８６０４３差异有统计学意义（分别为ｔ．３６，户．；ｔ２５．５，／Ｍ）．００ｔ１０９．５，；＝＝２９２＝＝卢０．０００ｔ．０７，尸０．０００ｔ２９．８９９，卢０．０００）空腹膜岛素、膜岛素分；；；而泌功能指标（ＨＢＣＩ）在ＧＤＭ组明显低于正常对照，差异有统计学意文（分别＝－片０＝－＝为ｔ３９．２３５，．０００ｔ３７．３８９，Ｐ０．０００）（表ＬＩ）。提示ＧＤＭ者基础膜；岛素分泌降低、同时伴有族岛素分泌的奈乱及族岛素功能的抵抗。表Ｍ两组孕妇临床数据的化较（Ｊ＋＾ｙ）Ｔａｂｌｅ１－１ｃｏｍａｒｉｓｏｎｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＤＭ＾＋ｓｐ（）￣检验计量指标正常对照组ＧＤＭ组ｐ值＾ｎ＝＝（４０）（ｎ４０）－年龄（岁）克±５．６８±１０．６８７０．４９４２４．９化１．９３２４．９８－无±５２７６４７７．４孕周（天数）．１０１３．６０２７５．０２１２．８７１．０１４孕前ＢＭｋ／ｍ２２０１．１．．．４５±２２０．５５±０．９６０４５００６５４（ｇ）分娩ＢＭＩ（ｋｇ／ｍ２）ｘ±ｓ２７．９６±０．４６２８．１２±０．６４１．３０４０．１９６ｍｍｏｌ／Ｌｘ±ｓ４．１±．ＦＢＧ．７０±０５７．３６０．３２４８０３６０．０００（）ｍｍｏ文±５±０．±．５餐后化血糖（ｌ／Ｌ）７．５４３９９．８１０．４１２５８６０．０００－ＦＩＮＳｍＩＵ／Ｌｘ±ｓ１８±０７．．．１１．３１５４０±０２４３９．２３５０．０００（）９ 第一部分ＧＤＭ的一般临床特点及胎盘组巧病理学分析２ｍＩ７－Ｕ／Ｌｘ±ｓ６．４１±１．６２．１２±０，３３１０９４餐ＭＮＳ９６．５３０．０００（）ＨｂＡｌｃ（％）５．６０±０．１６７．３６±０．３５巧．０７２０．０００－ＩＲ克±５３．７８±０．１４．０４±０．２３巧．８９９０ＨＯＭＡ５．０００ＨＢＣＩ＋５５－Ｘ３０．４５±３７．２０８０．３７巧．０９３７．３８９０．０００＊计量资料用两独立样本ｔ检验。３２胎盘组．织病理学观察光镜下观察ＧＤＭ组胎盘的病理改变主要为：绒毛水肿，干绒毛小动脉管壁增厚，，，管腔狭窄合体细胞结节増多细胞滋养叶细胞及血管合体膜形成增力口；对照组未见明显上述病理改变（图１）。对比ＧＤＭ和对照组胎盘组织的病理学变化发现，ＧＤＭ组的绒毛管壁增厚、合体细胞结节增多及血管合体膜形成２２＝＝（．５３８户０．００３＝２５．６５８明显要多于对照组，差异有统计学意义分别为Ｘ８，，；ｘ２ｆ＝＝＝－０．０００；１９．９４８，戶０．０００）（表１２）。义Ｊ於為窜＾巧１０ 博去学位论文图１光镜下胎盘组织ＨＥ染色图片（４００Ｘ）Ａ为对照Ｂ为ＧＤＭＦｕｒｅＰｌａｃｅｎｔａｔｉｓｓｕｅｗｉｔｈＨＥｓｅｎｉｎｕｎｄｅｒｔ－ｍｃｒｏｓｃｏｅｉｇ１ｉｇｌｉｇｈｉｐ（４００Ｘ）．ＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＢｒｅｒｅｓｅｎｔｓＧＤＭｒｏｕ．，ｐｇｐ表１－２两组孕妇胎盘组织病理变化比较Ｔ－２Ｈａｂｌｅ１ｉｓｌｔｌｉ：ｏｐａｈｏｏｇｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｒｏｕｓｇｐ分组检验里—－指标戶值７＾正常对照組（％）ＧＤＭ纳（％）Ｘ是２５．０；２３５７．５２５．６５８０．０００合体细胞结节増多（）（）否３８９５．０１７４２．５（）（）绒毛管壁增厚是１９．：！巧（５６．５８．５３８０．００３（））否１０巧０．９）３０（４３．５）１５．６３．９１９．９４８０．０００合体膜形成是（引巧（）否１８巧４．７２２（３６．１））２＊计数资料用Ｘ检验。４讨论一膜岛素抵抗恤ｓｕｅｓｉｓｔａｎｃｅ１民ｌｉｎｒ，）是指定量的膀岛素浓度不能影响预计的Ｗ于营养物质代谢和在铅纪织（主要指肌肉、脂肪和肝组织）的生物反应。Ｂｕｒｔ２４？２８周快速增强１９％年首次提出妊娠期存在膜岛素抵抗的观点，并于孕，３２￣３４周达高峰，胎盘娩出后逐渐消失。正常妊娠期间，最主要的代谢变化是对抗膀岛素作用的增加及巧脏、肌肉和脂肪组织对族岛素敏感性的下降，尤其１１ 一一第部分ＧＤＭ的般惦床特点及胎盘组织病理学分析４５％￣８０％是巧娠晚期对肤岛素敏感度明显下降。膜岛素抵抗是妊娠期生理性的ＷＷ代谢变化。Ｋａｕｔｚｋｙ等的研究也证实：在妊娠晚期出现不同程度的血基础膜一岛素水平、Ｃ肤水平的增高和膜岛素敏感性下降。些研究者认为，ＧＤＭ患者＂＂＂＂一生理性化二化。存在两种，是正常妊娠妇女妊娠晚期表现的，是慢性化后者存在于妊娠前，妊娠中晩期表现明显，并延续至产后，此种患者易发展为７［：＞２型糖尿病。中国学者研究同样发现，ＧＤＭ患者化程度显著超过正常妊娠妇女，超过妊娠晚期生理性化，提示有慢性化。随着妊娠周数增加，ＧＤＭ患者Ｗ一１民指数逐步升高。现在般认为，妊娠早期因排糖量及胎儿获取葡萄糖量増加，雌激素、孕激素分泌增加，使族岛素分泌增多，导致离膜岛素血症，同时由于胎盘分泌的皮质醇、雌激素、孕丽等多种对抗膜岛素的激素，导致周围组织对膜岛素反应的敏感性下降。我们的研究也证实在排除了肥胖因素的基础上ＧＤＭ妇女的膜岛素抵抗明显高于正常妊娠妇女。ＧＤＭ的病因另一方面是膜岛素分泌相对减少Ｍ患。ＧＤ者除空腹膜岛素水平相对増加量减少外，糖负荷后２ｈ血浆膜岛素水平和ＨＢＣＩ都要明显低于正常。，妊娠妇女关于膜岛Ｐ细胞功能缺陷，有研究者认为可能与自身免疫有关在所有ＧＤＭ患者中一，有部分有膜岛细胞抗体的阳性，提示部分患者有自身膜Ｐ’Ｗ１１［］岛细胞的破坏，并且这部分患者更易患上１型糖尿病。李玉钟等对巧娠中晚期孕妇糖耐量正常、糖耐量减低和ＧＤＭ者的化及Ｐ细胞分泌功能进行评价，发现妊娠中晚期孕妇糖耐量减低阶段膜岛素早期分泌功能受损，到ＧＤＭ阶段兼有ＩＲ和Ｐ细胞缺陷。多数学者认为妊娠期膜岛细胞增生胆大，增加膜岛素分泌来代偿孕期普遍存在的膜岛素敏感性下降，如果膀岛分泌功能的增加不足ｔＵ抵消膜岛素敏感性的下降，则表现为ＧＤＭ。化增强导致了膜岛Ｐ细胞分泌功能减退，同时膜岛Ｐ细胞本身储备能力低、膜岛细胞调亡等因素共同导Ｐ致Ｐ细胞功能缺陷。一胎盘是妊娠期个临时性器官，它是胎儿和母体间进行物质交换的场所。细胞器是细胞的功能单位，其结构、功能的正常对维持细胞正常生理功能十分２１ 博去学位论文重要。对于胎盘组织细胞更是如此，尤其是合体滋养细胞。合体滋养细胞微绒一毛的主要功能之是增加细胞与外界物质交换的面积。宏观上来说，在糖尿病ｌＬＷｔ－发生化胎盘的重量和体积会增加从而导致胎盘胎儿重量比值增高，送种变化是与高血糖成比例的，提示在高血糖的情况下胎盘增长促进胎儿生长发育加速，送可Ｗ解释我们经常在ＧＤＭ时发现许多的胎儿体重明显增加、甚至是巨大儿。通过收集ＧＤＭ和正常妊娠孕妇的胎盘组织，我们观察光镜下组织学的改变，发现绒毛水肿，千绒毛小动脉管壁増厚，管腔狭窄，合体细胞结节増多，细胞滋养叶细胞及血管合体膜形成増加。通过比较发现ＧＤＭ组胎盘组织病理学改变明显多于正常对照组。Ｆｏｘ将绒毛的大小、合胞体结的数量及胎儿绒毛毛细血管的位置及大小等评价胎盘的成熟程度，发现在妊娠期糖尿病时有ＳＵｌ１Ｍ约３０％发生早熟，３０％胎盘成熟延迟，只有４０％为正常。Ｔｏｍｉｎａｇａ等通过对离体绒毛组织培养观察，证实低氧条件下合体细胞结节数目増多，细胞滋养层细胞在低氧条件下不但呈增生反应，而且不断分裂形成合体细胞，Ｗ修复由于缺氧而受损的合体细胞层。绒毛成熟不良时胎盘功能及代偿能力较低当临产，宫缩发动时易加重胎儿缺氧而致胎儿窘迫母体－胎儿的高血糖会导致子宫内组织缺氧，反过来胎盘会増加表面积来増加胎儿的氧供。例如妊娠糖尿病的胎儿ｎｔｉ会发生慢性的组织缺氧，并伴有胎儿红细胞和血红蛋白浓度增加。此外，胎ｉｓ一ｔ’Ｗ。盘本身的糖及其他物质的代谢也受影响，形成个不良循环回路综上所述，母体的高血糖及膜岛素抵抗可能会改变胎盘的结构从而影响母体和胎儿的物质交换和物质代谢。结论：ＧＤＭ患者存在明显的膜岛分泌功能的奈乱且存在外周组织膜岛素抵抗，胎盘组织结构重塑，可能会影响母体胎儿的物质交换和代谢。参考文献：１欧阳凤秀沈福民江峰等．妊娠糖尿病患者血清瘦素水平与孕前体质指数［］，，，－和膀岛素抵抗的相关关系．中华糖尿病杂志．２００４口１：３５４３５５．，（）１３ 一一第部分ＧＤＭ的般惦床特点及胎盘组织病理学分析ｕｅＹＲ－ＹｕｅＸｅａ－ｉｂａｏＷ，ｔｌ．Ａｍｅｔａａｎａｌｓｉｓｏｆｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆａｎｉｏｔｅｎｓｉｎ口］Ｙ，，ｙｇｒｅｃｅｔｏｒｂｌｏｃｋｅｒｓａｎｄｃａｌｃｉｘｉｍｃｈａｎｎｅｌｂｌｏｃｋｅｒｓｏｎｂｌｏｏｄｒｅｓｓｕｒｅｌｃｅｍｉａａｎｄｔｈｅｐｐ，ｇｙ－－ＨＯＭＡ－Ｉ民ｉｎｄｅｘｉｎｎｏｎｄｉａｂｅｔｉｃａｔｉｅｎｔｓ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ２０１３６２１２：１８５８１８６６．ｐ，，，（）３ＭａｔｔｈｅｗｓＤＲ，ＨｏｓｋｅｒＪＰＲｕｄｅｎｓｋｉＡＳｅｌａｌ．Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｍｏｄｅｌａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：［］，，ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄＰ乂ｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎｆｒｏｍｆａｓｔｉｎｇｐｌａｓｍａｇｌｕｃｏ化ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｃｏｎｃｅｎ－ｔｒａｔｉｏｎｓｉｎｍａｎ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｉａ．ｌ９８５２８７：４１２４１９．ｇ，（）４ＢｕｒｔＲＬ．ＰｅｒｉｅｒａｌｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｌｕｃｏｓｅｉｎｒｅｎａｎｃｙＩＩＩｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．［］ｐｈｇｐｇｅｃｏ－ＯｂｓｔｅｔＧｌ：６ｙｎ？巧５６７（６５８６６４．，）５－ｄａｔＮａｄａｌＡｌＡｌｏｎｓｏＭａｌｅｎａＰＳｏｒｉａｎｏＳ巧ａｌ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｏｅｓｔｒｏｅｎｓｉｎｈｅ［］，ｇ，，ｇａｄａｔａｔｏｎ－ｏｆｉｓｌｅｔｓ化ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．ｈｓｉｏｌ．２００９５８７１：５１５０３７．ｐｉＪＰｙ，口）０３［６］ＫａｕｔｚｋｙＷＡ，Ｐｒａｇｅｒ，ＷａｌｄｈａｕｓｌＷ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｎｏｕｎｃｅｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄ－ｃｉｎａｄｅｕａｔｅｂｅｔａｃｅｌｌｓｅｃｒｅｔｉｏｎｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｉｎｌｅａｎｅｓｔａｔｉｏ打ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｄｕｒｉｎｑｇｇａｎｄ－ａｆｔｅｒｒｅｎａｎｃｙ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．１９９７２０１：１７１７１７２３１．，（）ｐｇ７ＣｏｌｏｍｉｅｒｅＭＰｅｒｍｅｚｅｌＭＲｉｌｅＣｅｔａｌ．Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎｉｎｌａｃｅｎｔａ［］，，ｙ，ｇｇｐｆｒｏｍｒｅｎａｎｅｉｅｓｃｏｍＵｃａｔｅｄｂｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＥｕｒＪＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ｐｇｐｙｇ２００９－１６０４：５６７５７８．，（）巧］ＥｎｄｏＳ，ＭａｅｄａＫ，ＳｕｔｏＭ，ｅｔａｌ．ＤｉｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎＰｒｅｇｎａｎｔｗｏｍｅｎｗｉｔｈｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔａｎｄｇｅｓｔａｔｉｏｎａＩｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＧｙｎｅｅｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００６，２２３４３－３４９：．（巧［９］王济芳，陈军建．谷氨酸脱戀酶抗体和膜岛细胞抗体在巧娠糖尿病患者中的变化临床内科杂志２００７，２４（巧：８５０．［１０］ＮｉｌｓｓｏｎＣ，ＵｒｓｉｎｇＤ，ＴｏｍＣ，ｅｔａｌ．ＰｒｅｓｅｎｃｅｏｆＧＡＤａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｄｕｒｉｎｇｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｐｒｅｄｉｃｔｓｔｙｐｅ１化ａｂｅｔｅｓ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．２００７，３０８－：１９６８１９７１．（）［ｕ］李玉钟，孙媛，韦先翁，等．膜岛素抵抗和膜岛ｅ细胞分泌功能对妊娠糖尿－病的影响．中国糖尿病杂志．２００７１５１：５６．，（）１４ 博去学位论文ｌ；２ＤａｓｋａｌａｋｉｓＭａｒｉｎｏｏｕｌｏｓＳＩＣｒｉｅｌｅｓｉＶ巧ａｌ．＾Ｐｌａｃｅｎｔａｌａｔｈｏｌｏｉｎｗｏｍｅｎ［］Ｑｐ，，ｐｇｙｗ－ｉｔｈｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ．ＡｃｔａＯｂｓｔｅｔＧｎｅｃｏｌＳｃａｎｄ２００８８７４：４０３４０７．ｇｙ；（）ｌ；３ＧａｕｓｔｅｒＭＤｅｓｏｙｅＴｏｔｓｃｈＭｄ：ａｌｈｅｌａｃｅｎｔａａｎｄｅｓａｉｏｎａｌ出ｓＱ．Ｔｔｔａｂｅｔｅ［］，，ｐｇｍｅ－ｌｌｉｔｕｓ．ＣｕｒｒＤｉａｂＲｅ．２０１２１２：１６２３．ｐ，（ｌ）［ｌ＾Ｐａｔｈａｋ８，Ｈｏｏｋ￡，ＨａｃｋｅｔＧｅｔａｌ．Ｃｏｒｄｃｏｄｉｎｇ，ｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｉｎｓｅｒｔｉｏ打ａｎｄｐｌａｃｅｎｔａｌｓｈａｐｅｉｎａｎｕｎｓｅｌｅｃｔｅｄｃｏｈｏｒｔｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇａｔｔｅｒｍ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｗｉｔｈｃｏｍｍｏｎｐｏｂｓｅｃｕｃｏｍｅｓ－ｔｔｒｉ．ｌａｃｅｎａ．：ｏｔＰｔ２０１０３１１１９６３９６８．，（）［１５］ＦｏｘＨ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａｉｎｍａｔｅｒｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｏｂｓｔｅｔｎｅｃｏ－Ｇｌ巧６９３４６：７９８．ｙ？（）７９２，１６Ｔｏｍｉ打ａａＴＰａｅＬ．Ａｃｃｏｍｍｏｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｌａｃｅｎｔａ化ｈｏｘｉａ．ＡｍＪ［］ｇ，ｇｐｙｐＯｂｓ－ｔｅｔＧｎｅｃｏｌ．１９６６９４５：６７９６９１．ｙ，（）ｅ＊巧ｍ１７ＷｉｄｎｓｓＪＡＴｅｒａｍｏＫＡＣｌｅｍｏｎｓＧＫ，巧ａｌＤｉｉｅｃｔｉａｔｉｏｎｓｈｉｏｆａｎｔｅａｒｔｕ［］，，，ｐｐ－ｌｕｃｏｓｅｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｆｅｔａｌｅｒｔｈｒｏｉｅｔｉｎｉｎｈｕｍａｎＴｅ１ｉｎｓｕｌｉｎｄｅｅｎｄｅｎｔｄｉａｂｅｔｉｃｇｙｐｙｐ（ｐ）ｒｅｎａｎｃｉａｂｅｌｏｉａ９９０－．Ｄｔｏ．１３３：３７８３３３．ｐｇｙｇ，ｓｍｏｎｄＤＴＮｏｌａｎＣＪＫｉｎＲＱｅａｌ．Ｅｆｅｃｔｓｆｓｔａｔｉｏｎａｌ出ａｂｅｔｅｓｏｎｈｕｍａｎ＂＾Ｏ，，ｇｔｏｇｅａｃｅｎａ－ｐｌｔｌｌｕｃｏｓｅｕｔａｋｅｔｒａｎｓｆｅｒａｎｄｕｔｉｌｉｓａｔｉｏｎ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｉａ．２０００４３：５７６５８２．ｇｐ，，ｇ，１９ＳｏｂｒｅｖｉａＬＡｂａｒｚｕａＦＮｉｅｎＪＫ巧ａｌ．Ｒｅｖｉｅｗ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌａｃｅｎｔａｌ［］，，，ｐｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒａｎｄｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｐ－ｌａｃｅｎｔａ．２０１ｌ３２ｓｕｌ２：Ｓ１５９Ｓ１６４．，（ｐｐ）１５ 第二部分接恨期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析１材料１．１研究对象：研究对象选取于２０１３年１月１日至２０１４年１月１日在广州医科大学附属武警医院、南方医科大学珠江医院就诊并分娩的孕妇４０例，均为粤籍没族人且相互间无亲缘关系，，将ＧＤＭ孕妇作为观察組随机选取无妊娠合并症、并发症的正常孕妇作为对照组。纳入标准参照２０１３年ＷＨＯ妊娠期糖尿病诊断碌准。排除对象包括合并存在妊娠期离血度疾病、原有糖尿病、先天性也脏病、双胎妊娠、早产、巧炎、甲状腺功能异常等代谢性疾病、产前发热等炎症急性期孕妇。１．２主要试剂和耗材ＳＹＢ艮ｏｌｄｓｏｌｕｔｉｏｎ、ｓｍａｌｌＲＮＡｍｕｌｔｉＲＴ－Ｐｒｉｍｅｒ、Ｓｅｒｓｃｒｉｔｌｌｌ、ＤＴＴ、５ｘｆｉｒｓｔｇ呼ｐ’Ａｓｔｒａｎｄｂｕｆｅｒ购自广州鼎国生物技术公司，Ｔ４ＲＮＡＬｉａｓｅ２００Ｕ３０Ｕ／、５ＲＮｇ（，阳’Ｍａｄａｐｔｏｒ口５ｉＭ）、３ＲＮＡａｄａｔｏｒ口５ｎ、ＳＭＡＲＴｇＤＮＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓｋｉｔ购自ＴａＫａＲａ）ｐ）？公司，Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ阻ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ、ｌＯｂｐＤＮＡｌａｄｄｅｒ（５０帖）、ＲＮａｓｅＯＵＴ５０００Ｕ购自Ｉｎｖｉｔｒｏｅｎ公司，甲酵、无水Ｚｉ醇、测酸、氯仿、异丙醇、盐（）ｇ酸、王水醋酸钢（ＮａＡ０３胜０）、ＥＤＴＡ二水二钢为国产分析纯，化Ｓ碱、ＮａＣＩ、ＮａＯＨ、ＥＤＴＡ等购自上海生工化学试剂公司，ＤＥＰＣ、Ｔｒｉｚｏｌ、琼脂糖等为Ｓｉｇｍａ公司产品，糖原、ｇｅｌｌｏａｄｉｎｇｄｙｅ、甲醜膀、甘油、漠酪蓝、无ＲＮＡ酶枪头、ＥＰ管、无ＲＮＡａｓｅ水、３６ｂｐｍａｒｋｅｒ、４４ｂｐｍａｒｋｅｒ等其他ＲＮＡ实验所用耗材均购自广州威佳生物科技有限公司。１．３主要仪器设备垂直电泳仪美国ＢＩＯ－ＲＡＤ公司ＵＶ－３０００型紫外分析仪珠海黑马医学仪器有限公司１６ 博击学位论文ＳＷ－ＣＪ－ＩＩ型净化工作台苏州净化设备厂微量电子天平ＪＡ５００３Ａ上海精天电子仪器公司玻璃钢电子恒温水箱北京医疗设备厂德国ＳＧＵｌｔｒａＣｌｅ站超纯水系统德国ＳＧ公司ＧｓＧ凝胶图像分析管理系统（ｖｅｒｓｉｏｎ３．４１）珠海黑马医学仪器有限公司高压蒸汽灭菌锅日本ＨＩＡＹＭＡ公司Ｂ６００型医用低速离必机河北白洋离屯、机厂－台式恒湿振荡器ＩＳＲＤＤ３广州正仪生物科技有限公司Ｓｉｍａ３Ｋ１８微型离速冷冻离也机Ｓｉｍａ公司ｇｇＢｅｃｋｍａ－ＭＣｉｉＪ２高速冷冻离也机Ｂｅｃｋｍａｎ公司－２０ＳａｒｏｒｉｕｓｐＢ标准型ｐＨ计ｔ公司ＷＣＪ－８０２型控温式磁力揽拌器江苏泰县姜塘无线电厂Ａｇｉｌｅｎｔ２１００ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司Ｓ－ｅＵｕｒｐｉｎＸＧｌｏ化ＡｃｅｔａｔｅＦｌｉｔｅ美国巧浊ｅｒ公司１．４溶液配制０．１％ＤＥＰＣ－１０００ｍｌ去离子水中加入１００ｎｌ１０００ｘｌＤＥＰＣ，，室湿下过夜，｜充分揽拌混匀°１２１Ｃ高足灭菌３０ｍｉｎ。＾ＴＢＥ５４．０ｇ打ｉｓ，２７．５酸，２０ｍｌ０．５ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（Ｈ８．ｏ）ＤＥＰＣ水调节至ｇ棚ｐ°１０００ｍｌ，１２１Ｃ高压灭菌２０ｍｉｎ。ｌＯｘＭＯＰＳ电泳缓冲液（２００ｍＭ的ＭＯＰＳ，５０ｍＭ的ＮａＡｃ，１０ｍＭ的ＥＤＴＡ）称取６．８ＮａＡＯ３Ｈ２０放入１０００ｍｌ烧杯中８００ｍｌＤＥＰＣ处理过的去ｇ，加入离子水，加入揽拌子，放在磁力揽拌器上溶解。然后加入４１．８ｇＭＯＰＳ，放在磁力揽拌器上溶解。再加３．７２ＥＤＴＡ二水二钢，放在磁力揽拌器上溶解。用１Ｍｇ灭过苗的ＮａＯＨ调ＰＨ至７．０ＤＥＰＣ处理过的去离子水定容至１０００ｍｌ，用，用１７ 第二部分扭娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析化４５叫ｎ的微孔滤过膜过滤灭菌溶液，装入栋色瓶中，写好标签，室温避光保存。Ｘ５甲酵变性胶加样缓冲液（５ｘｌ〇ａｄｉｎｇｂｕｆｅｒ）预先配制水饱和的漠龄蓝溶液：在１．５ｍｌ离也管中加入约化Ｉｍｇ漠酷蓝，加入１ｍｌＤＥＰＣ水溶解，充分振荡溶解，离也，可见离必管底部有漠酿蓝粉末剩余，上层液体即水饱和的漠酷蓝液。在１５ｍｌ灭菌离也管中，依次加入Ｗ下各种成分：４．０ｍｌ１０ｘＭＯＰＳ电泳缓冲液、３．１ｍｌ甲酷胺、２．０ｍｌ１００％的甘油、７２０叫３７％的甲酵、８０［１１０．５１＾的￡０了乂（ｐＨ８．０）、水饱和的漠酷蓝、１０〇１１１０６口（：水，‘‘－２０Ｃ４Ｃ。混匀，ＥＰ管分叛保存，常用放保存＾甲酸变性胶电泳缓冲液（１ｘｒｕｎｎｉｎｇｂｕｆｅｒ）２０ｍｌｌＯｘＭＯＰＳｂｕｆｅｒ，４．０ｍｌ３７％的甲醒，１７６ｍｌ水，放入电泳槽中使用，一般在３次电泳结束后需更换此电泳缓冲液。－１５％ＴＢＥ尿素ＰＡＧＥ胶（无ＡＰＳ和ＴＥＭＥＤ）混合液尿素２４．０ｇ、４０％两帰酷胺液（两稀醜胺／甲叉双丙巧酷胺１９：１）、＾ＴＢＥ缓冲液。。１０ｍｌ避光放置保存漠化乙锭溶液取ｌＯｍｇ漠化玄锭（ＥＢ），溶于１ｍｌ超纯水，再取５０ＨｉｌＯｍｇ／ｍＬ邸溶液稀释至１ｍＬ．５ｍ／ｍＬ。，配制成工作液浓度０ｇ３％Ｈ２０２用０．１％ＤＥＰＣ稀释３０％Ｈ２〇２配置。，现用现配０ｌ．３ＭＮａＣ９４０叫ＤＥＰＣ水加入６０叫５ＭＮａＣｌ。８０％乙醇、７５％乙醇、７０％乙醇用０．１％ＤＥＰＣ和１００％乙醇配制不同浓度乙醇溶液。１８ 博击学位论文１．５分析软件ｔ重复序列比对：ｔａｇ２ｒｅｐｅａ华大基因开发）（小ＲＮＡ分类注释：ｔａ２ａｉｍｏｔａｔｉｏｎ伴大基因开发ｇ）己知ｍｉＲＮＡ比对：ｍｉＲＢａｓｅ２０．０新ｍｉＲＮＡ预测：Ｍｉｒｅｈｔｔ：／７ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｅ．ｎｅｔ／ｒｏｅｃｔｓ／ｍｉｒｅａ／巧（ｐｇｐｊｐ）２方法２．１胎盘组织总ＲＮＡ的提取与鉴定２丄１胎盘组织的采集一与第部分相同。２丄２胎盘组织匀浆的制备及总ＲＮＡ抽提：１）采集完胎盘组织后迅速放入液氮中冻存，之后可继续在也但中或转入－８（ＴＣ冰箱中冻存备用。＊＊－２）取胎盘中央母体面巧带根部组织ｌｃｍｌｃｍｌｃｍ２４块（约重口Ｏｍｇ），避开巧化和肉眼梗死区，无茵器械转移至标本瓶。３）生理盐水洗两次；４￣）将组织在液氮中磨碎。每３０５０ｍｇ动物组织加１ｍｌ裂解液ＭＺ，用匀一浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液ＭＺ体积的十分之。５）将组织研磨均匀，使匀浆液呈无颗粒半透明状，用移液器反复吹打裂解样品，分解到ｌ．ＳｍｌＥＰ管中。６）核酸蛋白分离：将裂解样品室温静置ｌＯｍｉｎ，口ＯＯＯｒ／ｍｉｎ离也５ｍｉｎ，小必吸取裂解液上清，移入新ＥＰ管中。’７）ＲＮＡ分离；加入２００ｌ氯化剧烈振荡１５ｓ混匀，室湿静置５ｍｉｎ；４Ｃ１２，０００ｐ￣＞＜１１１（１３４０（）也１５１１１１１１，样品会分成＾层；巧，３）离黄色的有机化中间层和无色的水相，ＲＮＡ主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液ＭＺ试剂的５０％。把一水相转移到新管中，进行下步操作。１９ 第二部分接娠期搪尿病患者胎盘组织ｍ化ＮＡ差异表达谱分析８）ＲＮＡ沉淀：小也吸取含有ＲＮＡ的上层水相移至新１．５ｍｌＥＰ管中，加入°等体积异丙醇混匀，室湿静置２０ｍｉｎ，４Ｃ、１２０００ｒ／ｍｉｎ离也２０ｍｉｎ，弃上清，可见ＥＰ管底部有透明胶状ＲＮＡ沉淀。９）ＲＮＡ洗緣：加入ＩｍｌＤＥＰＣ水配制的７５％乙醇洗緣，震荡使管底的沉淀‘脱离管壁，４Ｃ、口ＯＯＯｒ／ｍｉｎ离必５ｍｉｎ、弃上清，再次洗涂离也去上清，室温５－干燥ｌＯｍｉｎ。－１０）ＲＮＡ重溶：加入５０山ＲＮａｓｅｆｒｅｅｄｄＨ２〇，充分溶解ＲＮＡ。１１）所得到的ＲＮＡ溶液经分光光度计定量和甲酸变性凝胶电泳检测总ＲＮＡ’－Ｃ保存备用的质量７０。，予２丄３总ＲＮＡ电泳一１将制胶用具用７０％乙醇冲洗遍，瞭干备用。）巧配制琼脂糖凝胶（１．２％的甲醇变性胶）称０．４克琼脂糖，加入３．３４ｍｌｌＯｘＭＯＰＳ电泳缓冲液，加入３０ｍｌＤＥＰＣ水，‘５０－６０Ｃ微波炉融化，再加入６００，肉眼观察无颗粒状悬浮物。冷却至约叫甲Ｘ醇．．。，室，倒入７５５０ｃｍ的凝胶模具中插入合适长度和宽度的梳子温放置约３０ｍｉｎ后即可使用。３）样品准备：取ＤＥＰＣ处理过的５００叫小离也管，依次加入如下试剂；ｌＯｘＭＯＰＳ缓液．２．，５。，甲酵３５胺（去离子）１０山ＲＮＡ样品４，混匀将离也管置山叫，甲酷叫°于６０（：水浴中保１〇１１１１１１，再置冰上２１１１１１１。向管中加入３１１上样染料，海匀。［４）上样。５）电泳：电泳槽内加入１ＸＭＯＰＳ缓冲液，于７．５Ｖ／ｍｌ的电压下电泳。巧电泳结束后，在紫外灯下检查结果。２．１．４ＲＮＡ浓度和纯度测定取总ＲＮＡ１叫加入到９９１叫无ＲＮＡ酶水，混匀。先分别用无水乙醇及ＤＥＰＣ水１００１叫清洗石英杯２次用１００１叫无ＲＮＡ酶水校准后，将１００１叫待测样本，２０ 博去学位论文加入石英杯中，测量浓度及纯度。测完后再次用ＤＥＰＣ水及无水己醇清洗２遍石英杯。２－ＤＮＡ文．２小ＲＮＡｃ库的制备分别取Ｈ分标本总ＲＮＡ提取物混合均匀，用于下步实验。２．２．１小ＲＮＡ的分离根据核昔酸长度从总ＲＮＡ中分离长度在８－３０ｎｔ１范围内的小ＲＮＡ。２．２丄１凝胶电泳的准备Ｘｘ用无ＲＮＡ酶纯水将５ＴＢＥ冲液稀释至ＩＴＢＥ；将凝胶电泳组件彻底清洗－－ｘ后组装在１５％ＴＢＥ尿素ＰＡＧＥ胶上２００Ｖ预电泳１５３０ｍｉｎ，上ＩＴＢＥ；样前再用进行冲洗电泳槽。２．２丄２样品ＲＮＡ凝胶电泳：凝胶电泳预运行的同时’Ｃ，将２〇Ｍ＿ｇＲＮＡ样品与２叫上样缓冲液混合，６５一加热５ｍｉｎ后置于冰上。将ｍａｒｋｅｒ和样本ＲＮＡ置于同胶上，２００Ｖ电泳６０ｍｉｎ左右，取出凝胶。２．２．３小ＲＮＡ的回收－将凝胶置于无茵容器内ＴＢＥ／漠化艺锭染色２ｍｉｎ；Ｗ２０１００个碱基１０，碱ａｒｋｅｒ为ｎ－基为间隔的ｍ参照，在ＵＶ透照仪上观测凝胶，用无菌刀切下１６ｔ３０ｎｔ的胶块、置于无茜无ＲＮＡ酶微型离也管。室温下台式离也机１４０００ｒｐｍ离也２ｍｉｎ。离也后凝胶中加入３００叫０．３ｍｏｌ／Ｌ氯化钢溶液，轻轻振荡使ＲＮＡ洗脱，室温下放置４ｈ。将洗脱液和凝胶碎块转入ＳｐｉｎＸ醋酸纤维素过管中，１４０００ｒｐｍ于室温下离也２１１１１１１过滤，ＳｉｎＸ３ｌｌ２．５。舍弃碎胶ｐ滤液中加入＾糖原和倍体积‘’－８０Ｃ冰箱３０ｍ立即在４Ｃ的无水乙醇，混合后于内沉淀ｉｎ；取出后离也机内Ｗ１４０００ｒｐｍ离也２５ｍｉｎ；去除上清液；室温下７５％己醇漂洗沉淀；置于室温下－干燥；将获得的小ＲＮＡ沉淀重新溶解在６１０叫无ＲＮＡ酶水中。’２．２．４５端接头的连接２１ ｍＲＮＡ第二部分扭娠期糖尿病患者胎盘组织ｉ差异表达谱分析’－表２１５端ａｄａｐｔｏｒ连接体系’－ｅＴａｂｌｅ２１５ａｄａｔｏｒｌｉｎｋａｍｉｘｐｇ成分体积（叫）ＲＮＡ６－１０’ｏ２－５ａｄａｔｒ２５ｕｍ．０５．０ｐ（）Ｔ４ＲＮＡｌｉａｔｉｏｎｂｕｆｆｅｒｌＯｘ１ｇ（）ＲｎａｓｅＯＵＴ（４０Ｕ／ｎｌ）１总体积１５＂－ｘｎＤＣ温６小时后２８ｒ：过夜ｌＯｅｌＬｏａｄｉｅ终止反应。２０育；加入ｇｇｙＷ纯化回收’５端连接产物°１）向连接产物中加入等体积２ｘｇｅｌＬｏａｄｉｎｇＤｙｅ，６５Ｃ变性５ｍｉｎ，点离后置于冰上。２）配好Ｍａｒｋｅｒ，２００Ｖ预电泳１５％ＴＢＵ２０ｍｉｎ，彻底冲洗胶孔后上样，每孔１５＾１５０ｍ－左右，２００Ｖ电泳约ｉｎ，染胶３ｍｉｎ在ＵＶ透照仪上观测，切下４０６０ｎｔ胶块。转至离也管，保鲜膜包裹离也管盖３）室湿ＨＯＯＯｒｍ２ｍｉｎ离必，加入４０００．３ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ后在混匀器上媪和洗ｐ叫脱４ｈ。４）将胶块和洗脱液全部转移至Ｓｐｉｎ＿Ｘ管内，１４０００ｒｐｍ离也２ｍｉｎ，然后加入’‘－８０（：３０ｍ３ｉｌ糖原和１０００，混匀后于冻存ｉｎ，４Ｃ１４０００ｍ３０ｍｉｎ［叫无水乙醇＾离也后弃上清，７５％乙醇洗絡沉淀，室温ＨＯＯＯｒｐｍ２ｍｉｎ离必，弃上清，置于－１室温下干燥，最后加入９１叫ＤＥＰＣ水溶解ＲＮＡ。’２．２．５３端接头的连接’表２－２３端ａｄａｐｔｏｒ连接体系＇Ｔａｂ－ｌｅ２２３ａｄａｐｔｏｒｌｉｎｋａｅｍｉｘｇ成分体积（〇１））’５端连接产物９－１１山２２ 博去学位论文＊３ａｄａ－ｔｏｒ２５ｕｍ１３ｐ（）Ｔ４ＲＮＡｌｉａｔｉｏｎｂｕｆｆｅｒｌＯｘ１ｇ（）ＲｎａｓｅＯＵＴ（４０Ｕ／片１）１总体积１５‘‘ｘ２０Ｃ湿６２－８ｌ按照顺序加入，混匀后电离，育小时后Ｃ过夜入ｌＯｅＬｏａｄｉｎ；加ｇｇＤｙｅＷ终止反应。’纯化回收３端ａｄａｐｔｏｒ连接产物’步骤类似回收５端连接产物，不同之处在于：１）采用１０％ＴＢＵ预电泳；２）窃胶范围为７０－９０ｎｔ。２２６逆－（ＲＴＰＣＲ．．转录聚合酶链反应）‘１）－逆转录反应体系和条件：首先加入０．５〇１ＲＴＰｒｉｍｅｒｌＯＯｍＭ，６５Ｃ放置ｌＯｍｉｎ，（）｜离也冷至室湿后再依次加入：（ｌ）５ｘｆｉｒｓｔｓｔｒａｎｄｂｕｆｅｒ２．０叫，口）１０ｍＭｄＮＴＰ‘０．６）ｌＯＯｍＭＤＴＴ叫，（４）ＲｎａｓｅＯＵＴ４０Ｕ仙）叫，混匀后离也于４２Ｃ咕Ｇ（讯‘放置３ｍｉｎ，最后加入１叫Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐ（２００Ｕ４ｄ），总体积为２０叫混匀，４２Ｃ’Ｃ反应１个ｈ再７０变性１５ｍｉｎ。２）ＰＣＲ扩增反应体系和条件见下表：－表２－３ＲＴＰＣＲ扩增反应体系Ｔａｂ－－ｌｅ２３ＲＴＰＣ艮ｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｍｐｌｅｘ成分体积（叫）ＲＴ－ｒｅａｃ－ｔｉｏｎｍｉｘ１０２０ｐ５ｌｏｎｒｉｍｅｒ２５ｕＭ０．５ｇｐ（）７ｒｉｍ巧２５ｕＭ０．５ｐｐ（）２ｘＰｈｕｓｉｏｎＨＦｍａｓｔｅｒｍｉｘ２５ＨＯ４－２１４总体秩５０２３ 第二部分妊娠期搪尿病患者始盘组织ｍ化ＮＡ差异表达谱分析＇‘＇９８Ｃ变性ＳＯｓ预！‘Ｃ％１０ｓ变性１５个循环＾’６０Ｃ３０ｓ退火‘７２Ｃ１５ｓ延伸°‘７２Ｃ，反应结束后保存于４Ｃ。２－．２．７民ＴＰＧ民产物回收纯化及检ｉｌ１）准备６％ＴＢＥＰＡＧＥ胶胶置于缓冲液，ＰＣＲ产物中加１０叫ｌＯｘｌｏａｄｉｎｇｄｅ，ｙ■ｅｒ２００Ｖ３０ｍｉｎ３ｍｉｎ胶置于在ＵＶ透照仪上配好ｍａｒｋ，上样后电泳，染胶，观测、切下约ｌＯＯｂｐ的条带置于离也管，室湿下１４０００ｒｐｍ２ｍｉｎ离也，加入２００叫Ｈ２０在ｔｈｅｒｍｏｍｉｘ上洗脱ＤＮＡ沈。２）将胶块和洗脱液转移至ＳｐｉｎＸ管内，ＭＯＯＯｒｐｍ离必２ｍｉｎ，加入ＰｅｌｌｅｔＰａｉｎｔ１叫，１ＡＯ倍的洗脱液体积的３ｍｏｌ／ＬＮａＡＣ，３倍洗脱液体积的无水‘‘己醇－ｍ２０Ｃ冻存。混勻后４Ｃ１４０００巧ｍ离也２５ｉｎ。（）３）弃上清，パ％艺醇５００ｌｌ洗涂沉，踪干，加入１５〇１６８５〇山１；〇１１后用。＾淀｜一Ａ－ｇｉｌｅｎｔ２１００检测小ＲＮＡ的ＤＮＡ产物，般浓度约在１０ｎｇ１００ｎｇ／山，大小在ｌＯＯｂｐ左右。２．３Ｉｌｌｕｍｉｎａ测序及生物信息分析一二代Ｉｌｌｕｍｉｎａ高通量测序技术属于新代测序技术（第）也是固相，其核－ｈａｓｅ桥式扩増反应（ｓｏｌｉｄｂｒｉｄｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）和边合成边测序（ｓｅｕｅｎｃｉｎｂｐｇｑｇｙｓｙｎ也ｅｓｉｓｏｒｌｉａｔｉｏｎＳＢＳ＆ＳＢＬ）。将所建文库得到的ｃＤＮＡ注入表面賴联有大ｇ，一量固定接头的微流池中并在固相表面进行桥式扩増反应，同个ｃＤＮＡ模板经Ｂ’扩增最多可形成１０００个相同的ｃＤＮＡ并排列成簇。ＳＳ基于碱基３端可逆性’的封闭原理，测序时加入带有特定巧光生色团且３端被化学基团封闭的Ａ、Ｇ、Ｔ、Ｃ４种脱氧核糖核酸、与接头互补的引物和ＤＮＡ聚合酶进行单链延伸反应，反应结束后，将游离碱基洗去，用对应４种不同炎光生色团的激光进行激发并用电荷稱合器件（ｃｈａｒｇｅｃｏｕｐｌｅｄｄｅｖｉｃｅ，ＣＣＤ装置记录不同发射波长的巧光信）一号一，根据不同的焚光信号识别这轮反应在每个ｃＤＮＡ簇上的相应碱基。第２４ 博去学位艳文’轮拍照结束后，用化学方法将碱基上携带的巧光基团和３端的封闭基团去除，￣同上进行第二轮测序反应。如上重复进行３０％个反应循环，可测得不同ｃＤＮＡｍａＲＮＡ的大簇上相应长度的核酸序列。从而采用单向末端直接测序，实现Ｓｌｌ规模测序分析。基于ｍｕｒｎｉｎａ高通量测序技术的小ＲＮＡ数字化分析，采用边合成边测序，一可减少因二级结构造成的段区域的缺失。并具有所需样品量少，高通量，高精确性一，拥有简单易操作的自动化平台和功能强大等特点，次性获得数百万条小分子ＲＮＡ序列，能够快速全面地鉴定该物种在该状态下的小分子ＲＮＡ并发现新的小分子ＲＮＡ，构建样品之间的小分子ＲＮＡ差异表达谱，为小分子ＲＮＡ功能研究提供有力工具。运用高通量、高灵敏度的ＩＩ山ｍｉｎａＨ设ｅｑＴＭ２０００高通量测序技术定量分析ＧＤＭ患者和正常对照组所有ｍｉＲＮＡｓ的表达谱。具体操作步骤按照ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳｅｑ２０００测序平台标准流程进行。简述如下：２５ 第二部分妊娠期搪尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析Ｃ－ＤＮＡ的随机打断＾ｆ．—■■ｒ、ＤＮＡ片段的末端修复‘Ａ’碱基加入到将ＤＮＡ片段的＇３末端ＶＪ在ＤＮＡ片段的末端加上特定接头、ＪｉＰＣＲ扩增连上接头的ＤＭＡ片段文库检测、Ｊｒ、ＤＮＡ在ｃＢ如的成簇扩増ＬｒＡＩｌｕｍｉｎａＨｉｓｅ２０００ｌｑ测序ｊ生物信息组装分析／’２．３．１数据处理５，包括：①去除测序质量低的片段去除有接头污染片段；②；’③去除没有３接头序列的片段；④去除没有插入的片段；⑤去除包含ｐｏｌｙＡ片１８ｎｔ段；⑧去除小于的小片段。⑦统计小ＲＮＡ片段长度分布２．２．３信息分析；１）小ＲＮＡ公共和特有序列统计分析２６ 博击学位论文统计两样品间公共序列和特有序列的种类（用ｕｎｉｑｕｅ表示）及数量（用ｔｏｔａｌ表示）分布情况。２）通过与其重复序列的比对，鉴定其与重复序列相关的ｓＲＮＡ。分析己知ｍｉＲＮＡ的表达模式；若数据库中有该ｍｉＲＮＡ信息ｓＲＮＡ与，将ｍｉＲＢａｓｅ２０．０中该己知的ｍｉＲＮＡ前体／ｍｉＲＮＡ成熟序列进行比对，显示其详细情况ｍｉＲＮＡ的、。，包括相应的己知结构样品ＲＮＡ的长度及出现次数等信息３）Ｇｅｎｂａｎｋ及Ｒｆａｍ化对：选取Ｇｅｎｂａｎｋ中的ｒＲＮＡ，ＳＣ民ＮＡ，ｓｎｏＲＮＡ，ｓｎＲＮＡ，ｔＲＮＡ来注释测序得到的小ＲＮＡ序列，尽可能的发现并去除其中可能的ｒＲＮＡ，ｓｃＲＮＡｓｎｏＲＮＡ，ｓｎＲＮＡｔＲＮＡ。选取Ｒｆａｍ（Ｕ．Ｏ数据库来注释测序得到的小，），ＲＮＡ序列的发现并去除其中可能的ｒＲＮＡｓｃＲＮＡｓｎｏＲＮＡ，ｓｎＲＮＡ，尽可能，，，ｔＲＮＡｏ４）按照优先级对小ＲＮＡ进行分类注释：将所有小ＲＮＡ与各类ＲＮＡ的对比、一个注释情况进行怠结。在Ｗ上各注释信息中，有可能存在ｓＲＮＡ同时比对上一两种不同的注释信息的情况。为了使每个ｕｎｉｑｕｅｓＲＮＡ有唯的注释，按照ｒＲＮＡｅｔｃ＞已知ｍｉＲＮＡ＞重复序列＞外显子＞内含子的优先级顺将ｓＲＮＡ遍历，没有比上任何注释信息的ｓＲＮＡ用ｕｎａｎｎ表示。由于ｒＲＮＡｅｔｃ是由ＮＣＢＩＧｅｎｂａｎｋ和Ｒｆａｍ两个数据库比对所得，规定这两个数据库间的优先级为Ｇｅｎｂａｎｋ＞一一Ｒｆａｍ。分类注释结果中的ｒＲＮＡ总量可＾作为个样品的质控标准：＾般情况下质量较好的组织样品中ｒＲＮＡ总量所占比例应低于４０％。５）已知ｍｉＲＮＡ比对：通过与目前世界范围内最新版ｍｉＲＮＡ数据库，即ｍｉＲＢａｓｅ２０．０中指定范围的ｍｉＲＮＡ进行比对，鉴定两组样品中的己知ｍｉＲＮＡ。与ｍｉＲＢａｓｅ２０．０中的ｍｉＲＮＡ前体或者成熟体进行对比，得到样品中己知ｍｉＲＮＡ。ｓ的含量，则将ＲＮＡ与，运用特定统计学方法得出数据若数据库中无该信息ｍｉＲＢａｓｅ２０．０中所有ｍｉＲＮＡ前体Ｗ及其成熟序列进行比对。显示在样品中出现的ｍｉＲＮＡ家族、序列及其数量。２７ 第二部分扭眼期搪尿病患者胎益组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析６）预测新的ｍｉＲＮＡ＇一＇－个磯酸基团成熟的ｍｉＲＮＡ是２１２５ｎｔ小分子ＲＮＡ，５端有，３端为径基，０－９０个碱基大小的ＲＮＡＤ是由具有发夹结构的约７单链前体经过ｉｃｅｒ酶加工后’ＲＮＡ’。生成的，其定位于前体的３端或者５端ｍｉＲＮＡ能与其周围的序列形成ＷｍｉＲＮＡ和ＲＮＡ的重要。标志性的发夹结构，送是区分其它内源小分子特征一通过对截取定长度ｓＲＮＡ比对上的基因组序列，探寻其二级结构及Ｄｉｃｅｒ酶、ＲＮＡｒｅａ切位点信息能量等特征，通过华大基因开发的ｍｉ预测软件Ｍｉｐ预测可能的新ｍｉＲＮＡ，并根据基因组序列信息确定候选新ｍｉＲＮＡ的基因组位置，利用ｍｆｏｌｄＲＮＡ结构分析软件获得ｍｉＲＮＡ的二级结构信息，利用统计软件对获得ｍｉＲＮＡ进行各位点碱基偏向性分析，综合相关信息获得ｍｉＲＮＡ信息。通过在ｍｉＲＢａｓｅ上对己知ｍｉＲＮＡ序列进行比对，确定ｍｉＲＮＡ特征。通过前体序列分析，确定其茎环结构及最低折叠自由能（ＭＦ巧，通过成熟的ＲＮＡ序列计算（Ｇ＋Ｃ）％含量，再根据前体长度计算调整最低自由能，从而计算出最低折叠自由＝ｘ＝。能系数（ＭＦＥＩ）计算方法如下：ＡＭＦＥＭＦＥ／ＰＬｌ〇〇ｌ，ＭＦＥＩＡＭＦＥ／Ｇ％＋Ｃ（）（％。）７）样品间的ｍｉＲＮＡ差异分析：对两个样品中表达的已知或未知ｍｉＲＮＡ统计，－ａｏｃａｅｒ判断在两样品之间的表达量是否存在显著性差异，并分别使用ｌｏｇ２ｒｔｉ、Ｓｔｐｌｏｔ图比较两者共同表达的己知ｍｉＲＮＡ表达量的差异。具体步骤如下：（１）首一一ｃｏｎｏ一先将两个样品（ｔｒｌ和ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）归化到同个量级。公式；归化的表达一＝ｍ＊量ｉＲＮＡ表达量／样品总表达量归量级（２）然后使用标准化后的结果统计－ｖａ仿ｌｄｃｈａｎｅ和Ｐｌｕｅ及做图Ｆｏｌｄｃｈａｉｉｅ公式；＿ｇ＿ｇ＝Ｆｏｌｄｃｈａｎｇｅｌｏｇ２（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／ｃｏｎｔｒｏｌ）＿Ｐ－ｖａｌｕｅ公式；空＝？记虹Ｉ句苦；州马＂Ｖ／、，地帕＝兮……（苦声觀１却町〇妙兰丸Ｓ＊例对１掉心．２８ 博去学位论文一归化后，如果两个样品的某个已知ｍｉＲＮＡ基因表达量为零０．０１，则修改为；如果两个样品的某个已知ｍｉＲＮＡ基因表达量都小于１，由于其表达量过低，不参与差异表达分析。３结果３．１总ＲＮＡ质量鉴定－经紫外可见分光光度计检测，所有胎盘组织提取的总ＲＮＡ的Ａ２６０／２８０均－在１．９２．１之间。１％甲酸变性琼脂糖凝胶电泳中可见Ｈ条明显的电泳条带在，自上而下分别为；２８ｓ、１８ｓ和５ｓ的ＲＮＡ，而且２８ｓ带巧光强于１８ｓ，二者之比约－为２：１见图２１。结果表明所有样品总ＲＮＡ的质量可靠（），没有降解或ＤＮＡ、蛋白质污染一，得到的总ＲＮＡ纯度高可入选进行下步ｍｉＲＮＡ遊片等后续实验。表２－４胎盘组织样本总ＲＮＡ质量检测结果Ｔａｂ－ｌｅ２４ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｔｏｔａｌＲＮＡｕａｌｉｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｑｙ编号组别ＯＤ２６０／ＯＤ２８０总ＲＮＡ含量（帖）质检结１＾ｉｚ４＾２ＮＣ１．９７１５．６合格３ＮＣ１．９０１１合格４ＮＣ１．９３１０．２合格５ＮＣ２．００１５．６合格６ＧＤＭ１．９９１３．１合格７ＧＤＭ１．９０１７．３合格８ＧＤＭ１．９８１２．９合格９ＧＤＭ２．的１１．３合格１０ＧＤＭ合格ＮＣ：对照组，ＧＤＭ：妊娠期糖尿病组；０Ｄ：ｏｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔ。ｐｙ巧 第二部分化娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析ＥＷＨＷＩＩｍｒｎＨｍ－１图２胎盘组织总ＲＮＡ电泳图，９、１０泳道为对照组，１３、１４泳道为ＧＤＭ组。ｒｅ２－１ｌｅｍａｗｅｒｅｎｏＦｉｇｕＧｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｉｇｅｏｆｔｏｔａｌＲＮＡＬａｎｅ９ａｎｄ１０ｒｍａｌ（ｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕｌ１３ａ１４ｗｅｒｅｒｏｕｇｐ，ａｎｅｎｄＧＤＭｇｐ）３．２ｍｉＲＮＡ文库的建立’ＲＮＡ’抽提出来的ｍｉ首先连接５接头连接，切胶回收，再连接３，最后ＰＣＲＯＯｂ处的目的条带２－２处条带最亮扩增后切胶回收ｌｐ见图，ｌＯＯｂｐ。（）＾ｍ笔哨：与；’竿齊ｆＶ；■ｈＨ？Ｉ確：ｊ．碟－－２－ｃＤＮＡ图２ｍｉＲＮＡ电泳图Ａ为对照组Ｂ为ＧＤＭ组Ｆ－－ｉｅ２２ＧｅｌｅｔｒｉＲＮＡＧｄ打ａＡｗｇｕｒｌｅｃｏｐｈｏｒｅｓｉｓｉｍａｇｅｏｆｍａｓｆｒｏｍ打ｏｒｍａｌ（ＣＯ打化〇１ｒｏｕａｎｄＢｗａｓｆｒｏｍＧＤＭｒｏｕｇｐｇｐ）３．３ｍｉＲＮＡ高通量测序处理和统计分析３．３．１小ＲＮＡ片段长度分布统计３０ 博击学位论文’标本测序得到的原始图像经过转化得到数据，去除测序质量较低、有５接’Ａ头污染３、ｏｌ１８ｎｔ的小片段等，得到干净序列、没有接头序列包含ｐｙ和小于一（２－５２－－－统计小ＲＮＡ片段的长度分布６，３２４）在定程。Ｗ下列圓表表图２度上反映出高通量高质量的的数据，如图显示，对照组和ＧＤＭ组大部分的小ＲＮＡ０－ＲＮＡ２４加，峰值出现在２２ｎｔ，符合ｍｉ的长度特征长度主要集中在２，与ＤＭ样本的ｍｉＲＮＡｓ数量明显要多（所占比例８７．３６從７７对照相比Ｇ．７％）。ＬｅｎｇｔｈＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ３〇％１２５乂＾２０括１７．７６■ｍｍＨ＂ＸＵ－ＩｆｔＥｉｉＩ１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０Ｌｅｎｔｈｎｔｇ（）團２－３对照组胎盘组织小ＲＮＡ片段长度分布Ｆｉｕｒｅ２－Ｌｅｎｃｏｎｔｒｏｇ３ｇ也ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌＲＮＡｓｉｎｎｏｒｍａｌｌ３１ 第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析表２－５对照组胎盘组织小ＲＮＡ序列生物信息学统计－ｒｍａｔｏｎａｎａｌｓｍａｃｏｎｔｒｏｓｃｂｉｓｉｎｎｏｒｌｌＴ油ｌｅ２５Ｂａｉｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｆｏｉｙ〇片段类型Ｍ百分比（／〇）民ｅａｄｓ总量１０２５７４４８〇１０２５０７５２！００／〇高质量ｒｅａｄｓ，０３接头缺失ｅａｄｓ４６６９５．４６％ｒ插入片段缺失ｒｅａｄｓ１３３９１４１．３１％＇５接头污染ｒｅａｄｓ１１５０６０．１１％小于１８ｎｔｒｅａｄｓ３６７４２１３．５８％Ａ２４４０．０１％含有ｏｌｒｅａｄｓ１ｐｙ干净ｒｅａｄｓ９６８９９７２９４．５３％ＬｅｎｇｔｈＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ４０％－ｊ３１．８９％Ｈ３０２２．６９Ｈ—％—ｇ２０ＢＨＯ■１ＩＩＩＩＩｉ■ＳｉＳＳＳｉ２２２＾１ｊｇ０１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０Ｌｅｎｔｈｎｔ）ｇ（－４图２ＧＤＭ组胎盘组织小ＲＮＡ片段长度分布＂ＲＮＡＤＭ－ｏｆｓｍａｌＦｕｒｅ２４Ｌｅｎ也ｄｌｓｉｎＧｉｇｇｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ３２ 博去学位论文表２－６ＧＤＭ胎盘组织小ＲＮＡ序列生物信息学统计Ｔａｂ－ＢｔＤＭｌｅ２６ａｓｉｃｂｉｏｌｏｉｃａｌｉｎｆｏｒｍａｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎＧｇ片段类型数量百分比（％）Ｒｅａｄｓ怠量１０３２２７３７高质量ｒｅａｄｓ１０３１６９５０１００％’３接头缺失ｒｅａｄｓ３６１８９０．３５％插入片段缺失ｒｅａｄｓ２０４９６４１．９９％５１ｒｅａｄｓ１０％６０．１０％接头污染小于ＩＳｎｔｒｅａｄｓ２４０１２１２．３３％，ｉｏＡ含有ｐｌｙｒｅａｄｓ５８９０．０１％〇干净ｒｅａｄｓ９８２４５２１％．２３／〇３．３ＤＭ与对照胎盘组织小ＲＮＡ公共和特有．２Ｇ序列统计分析ｕｎｉｕｅ表ｔｏｔａ统计两样品间公共序列和特有序列的种类（用ｑ示）及数量（用ｌ表示）分布情况（如下图表所示）。３３ 第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析ＶｅｎｎｃｈａｒｔｆｏｒｕｎｉｓＲＮＡｓｑ＿■Ａｓｐｅｃｉｆｉｃ（６９９４８２）产補Ａ＆Ｂ１８４４４２■（）Ｂｓｐｅｃｉｆｉｃ４２０９５７■（）．１３％３２．２６％ＶｅｎｎｃｈａｒｔｆｏｒｔｏｔａＬｓＲＮＡｓ－ＡＳ賴巧７１诚■Ｂｓｐｅｃｉｆｉｃ（４７１２１７）９３．５６％２．４ｌｉｌ－正常对照图２５（Ａ）和ＧＤＭ（Ｂ）小ＲＮＡ公共及特有序列Ｆｕｒｅ２－５ｏｍｍｏ打ａｎｄｅｃｉｉｃｓｅｕｅｎｃｅｓｏｆｓｍａＲＮＡｂｅｔｗｅｅ打ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｉｇＣｓｐｆｑｌｌｌＡａｎｄＧＤＭＢ（）（）３４ 博壬学位论文－Ｍ表２７正常对照（Ａ）和ＧＤ（Ｂ）公共及特有序列统计－ｎｄＴａｂｌｅ２７ＣｏｍｍｏｎａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌＡａＧＤＭ（）巧）类型ＵｎｉｑｕｅｓＲＮＡｓ百分比（％）ＴｏｔａｌｓＲＮＡｓ百分比（％）小ＲＮＡ总数１３０４８８１１００．００％１９５１４４９３１００．００％Ａ＆Ｂ１８４４４２１４．１３％１８２５７１３８９３．５６％＿—Ａｓｐｅｃｉｆｉｃ的９４８２Ｗ．６１％７８６１％４．０３％＿Ｂｓｐｅｃｉｆｉｃ４２０９５７３２２６％４７１２１７２．４１％＿两样品小ＲＮＡ种类数总和为１３０４８８１，小ＲＮＡ总数１９５１４４９３。Ａ＆Ｂ两样＿＿爲共有的小ＲＮＡ种类数为１８４４４２，所占百分比是１４．１３％；Ａ＆Ｂ两样品共有＿＿的小ＲＮＡ总数为１８２５７１３８１４．１３％ＡｓｅｃｉｆｉｃＡ，所占百分比是；ｐ样品特有的＿小ＲＮＡ种类数为６９９４８２，所占酉分比是５３．６１％；Ａ样品特有的小ＲＮＡ总数是７％１３８４．０３％。ＢｓｅｃｉｆｉｃＢＲＮＡ，所占百分比是样品特有的小种类数为＿ｐ４２０９５７，所占百分比是拍．２６％；Ｂ样品特有的小ＲＮＡ总数是４７１２１７，所占百２。分比是．４１％３．３．３小ＲＮＡ重复序列比对研究发现，部分小ＲＮＡ来源于高重复区域和转座子区域，可！细分为不同类型，主要包括核糖体ＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、核小ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核仁内小ＲＮＡ（ＳｎｏＲＮＡ）等。将小ＲＮＡ同重复序列比对得到重复相关的小ｒＲＮＡ２－６ＲＮＡ，结果提示在种类数和总数分析中都是最高的（图）。３５ 第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＭ差异表达谱分析＾■■—７０ｅｔ４，０＾１■￣——Ｓ．６ｅ＋４０—￣２—．８Ｃ＋０４－１．４ｅ＋０４ｊＩｊ，’一’＊、片，；。ｙ＇ｖ络；鶴＼＼Ａ＾有＼乂＼ｙｖ綠￣＇—ｔ３．Ｓｅ０６１Ｂ■２．８＋６ｅ０．４ｔ０６１ｅ—０哪＇＇．。＇。。＇。＼＼￥＼＼＼。＼图２－６为不同类型的小ＲＮＡ重夏序列统计。Ａ为化对到各类重复序列的小ＲＮＡ的种类数，Ｂ为比对到各类小艮ＮＡ的总数。－６Ｒｅｅａ化ｄｓｅｕｅｎｃｅｏｆｔｔｅｓｏｆｓｍａｌｌＲＮＡｓｉｎｎｏｒｍａｌＣ０凸ｔｒｏｌＡ巧ｇｕｒｅ２ｐｑｄｉｆｆｅｒｅｎｙｐ（）ａｎｄＧＤＭＢ（）３．３．４Ｇｅｎｂａｎｋ及Ｒｆａｍ比对分别选取Ｇｅｎｂａｎｋ和选取民ｆａｍ（ｌ１．０）数据库来注释测序得到的小ＲＮＡ序ＮＡ２－７ｒＲＮＡｓｎＲ、ｔＲＮＡ和ｓｎｏＲＮＡ（图，、歹，尽可能的发现并去除其中可能的１１一ＲＮＡ中ｒＲＮＡ总量２－靠８），般认为动物样品中总表。为了使注释结果的可４０％２－８ＲＮＡＧＤＭ组所占的比例，ｒ所占比例低于。如表所示在正常对照组及４００．０３％，分别为１．％和６说样品质量很好。３６ 博去学位论文Ｐ－－ｉｅｃｈａｒｔｆｏｒｎｃｂＡｕｎｉＰｉｅｃｈａｒｔｆｏｒｎｃｂｔｏｔａｌｇ＿ｑｇ＿ＡＮＡＩｓｃＲ６７９１］ｓｃＲＮＡ７６４（｜（９Ｓ）ｒＲＮＡＩ（２０５６１７）ｒＲＮＡ３８４９１８｜（４）ｏｔｈ＂１５３１４９１。■Ａ４４Ｎ４ｓｎｏＲＮ（０２）ｓｎｏＲＡ（２６２１）■ｔｆｔＮＡＮＡ４（２４２３６）■ｔＲ（３１Ｓ３１）隱…ＲＮＡＵ＾？２４９Ｓ）ｓｎＲＮＡ（１０５０８）ＶＰ－－ｉｅｃｈａｒｔｆｏｒｎｃｂＢｕｎｉＰｉｅｃｈａｒｔｆｏ「ｎｃｂｏｌｇ＿ｑｇ．ＢｔｔａＡ４ｓｃＲＮ（９０７ｓｅＲＡ５■）■Ｎ（９６８７）ｒＲＮＡＵ■３３＂Ｓ，｜ｒＲＮＡ（１９３０８７２）ｏ４４■ｔｈｅｒ（３化巧■ｏｔｈｅｒ（７５６２５４扣ＡＮｓｎｏＲＮ（３３５２）ｓｎｏＲＡ（ｌ７巧货ｔＲＮＡ■（２１１９３）■ｉＲＮＡ（２０５０３４）？■ｓｎＲＮＡ（７５５３｝ｗｓｎＲＮＡ＂的８４）２－７正常对照（Ａ）和ＧＤＭｅｎｂａｎ图（Ｂ）比对Ｇｋ中非编码ＲＮＡ的小ＲＮＡ统计Ｆｕｒｅ－７Ｍａｎｏｆｎｏｎ－ｃｏａＲＮＡｓｔｏｔＡｉｇ２ｐｐｉｇ出ｎｇｓｍｌｌＧｅｎｅｂａｎｋｉｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｒｏｌ（）ａｎｄＧＤＭＢ（）２－８表正常对照和ＧＤＭ比对Ｇｅｎｂａ址中非编码ＲＮＡ的小ＲＮＡ统计２－ｔ－ＲＮＡＴａｂｌｅ８Ｄａａｏｆ！凸ｏｎｃｏｄｉｎｓｍａｌｌｓｍａｐｐｉｎｇ；〇Ｇｅｎｅｂａｎｋｉｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇ（Ａ）ａｎｄＧＤＭ（巧类型ＵｎｉｑｕｅｓＲＮＡｓＴｏ化１ｓＲＮＡｓ对照ｒＲＮＡ５０９４４１１４８５１７ｓｎＲＮＡ７８４５１０１５７３ｓｎｏＲＮＡ７１１５３８７８７３７ 第二部分接娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＭ差异表达谱分析ｔＲＮＡ２２９４３１９８５０６ｏｔｈｅｒ７９５０７７８２０２５８９ｔｏｔａｌ８８３９２４９６８９９７２ＧＤＭｒＲＮＡ３５３３２６１９１７４ｓｎＲＮＡ４８９６４２５９２ｓｎｏＲＮＡ５４９９２巧１２ｔＲＮＡ１９９７０１４１８８９ｏｔｈｅｒ５３９７０２８９９５５５４ｔｏｔａｌ６０５３９９９８２４５２１３．３．５小ＲＮＡ的分类注释一ＲＮＡ一ＲＮＡＮＡ的为了使每个ｕｎｉｑｕｅｓ有唯的珪释，将所有小与各类Ｒ比对、注释情况进行总结。在种数和总数上将各样品中的ｍｉＲＮＡ和总的ｓＲＮＡ－进行比对表２９２１－２４ｎｔ的ｍｉＲＮＡｓ量约占所有小ＲＮＡ总量的（，长度区间在）３０％Ｗ上，种类约占总小ＲＮＡ种类的１％左右，体现了ｍｉＲＮＡｓ在ｓＲＮＡ种类保守而数量分布广泛的特点。表２－９对照及ＧＤＭ组各类小ＲＮＡ的分布－ｍａＴａｂｌｅ２９ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｙｐｅｓｏｆｓｌｌＲＮＡｓ山ｎｏｒｍａｌＣ０凸仕〇１ａｎｄＧＤＭ对照ＧＤＭｓＲＮＡ种数８８３９２４６０巧９９ｍｉＲＮＡ种数７１０２７５４９ｍｉＲＮＡ％）０５种数百分比（．８０％１．２％３８ 博壬学位论文ｓＲＮＡ总数９６８９９７２Ｗ２４５２１ｍＲＮＡｉ总数２Ｗ３２０２４９７１４５５ｍｉＲＮＡ总数百分比（％）３０．２７％５０．６０％３．４已知ｍｉＲＮＡ鉴定及表达分析３．４１．已知ｍｉＲＮＡ比对及表达谱为了得到样品中ｍｉＲＮＡ的信息，我们将数据与ｍｉＲＮＡ数据库（ｎｉｉＲＢａｓｅ２０）中的ｍｉＲＮＡ前体（若ｍｉＲＢａｓｅ中无该物种ｍｉＲＮＡ前体序列则用成熟ｍｉＲＮＡ的序列魄行比对，得到样品中已知ｍｉＲＮＡ的含量、不同长度ｍｉＲＮＡ的首位点碱基分布及鉴定得到的所有ｍｉＲＮＡ的各位点碱基分布统计。在ＧＤＭ近中筛选－ｍ－出１８９个成熟的ｍｉＲＮＡ、４６５个ｍｉＲＮＡ５ｐ、４４３个ｉＲＮＡ３ｐ，共有７９９０种小ＲＮＡ共４９＾０２１条片段能与发现的８４９条ｍｉＲＮＡ前体匹配上。通过总结发ｍ－－－ｉＲＮＡ的表达频ｈｓａｍｉＲ４２４５。现不同组间率差别很大，表达量最高的是ｐ具－－－体结果见表２１０、表２１１及图２１１。－ｍ表２１０样品中已知ｉＲＮＡ统计－ｅｃｏｎｅｄｍｎｆｏｒｍａｏｎＴａｂｌｅ２１０ＲｇｉｚｉＲＮＡｉｔｉｉｎｓａｍｐｌｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＤＭ匹配上ｍｉＲＮＡ前ｍｉＲＮＡ匹配上ｍｉＲＮＡ刖．＊ｍ－－ｉＲＮＡｍｉＲＮＡｍｉＲＮＡ５ｍｉＲＮＡ３体的肥罕ｐｐ前体体的当ｇ醒ｓＲＮＡｍｉＲＢａｓｅ中的８２９０８７－－１８７８１８７２ｎ己知ｍ…ｉＲＮＡ对照１６８０４３２４３０１９５７７１１２９４３３６４ＧＭＤ１８９０４６５４４３８４９７９９０４９７５０２１３９ 第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析ｍｉＲＮＡｆｉｒｓｔｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓＰｅｒｃｅｎｔｓＡ咖ｍｍｉｉ１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０Ｌｅｎ化（ｎｔ）ｇｍｉＲＮＡｆｉｒｓｔｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓＰｅｒｃｅｎｔ㈱Ｂ７巧６３扣＜１１２０３巧８４Ｉ１７１１Ｍ５５］５９２４Ｓ２８１１３１（）ｉ（１０１ＩＩ４７４ｌ１０５）ＩＪＩ（１１Ｈ；Ｉ圓圓圓Ｉ圓Ｉ■Ｉ圓Ｉ圓Ｕ■■．．■０ＩＳ１９２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０Ｌｅｎｎｌｈ（ｔ）ｇ２－９已知ｍＲＮＡ的首（图ｉ位点碱基偏向性Ａ为对照样品，Ｂ为对ＧＤＭ）Ｆｕ２－ＲｅｃｏｎｅｒｓｔｃｅｏｔｅｓｎｓａｍｅｎｏｍａｌｎｔｒｏＡａｎｄｉｇｒｅ９ｇｉｚｄｍｉＲＮＡｆｉｎｕｌｉｄｂｉａｉｐｌｓｏｆｒｃｏｌ（）ＧＤＭ脚ｍｌｉＲＮＡｎｕｃｅｏｔｉｄｅｂｉａｓａｔｅａｃｈｐｏｓｉｔｉｏｎ、Ｐｅｒｃｅｎｔｅｒ）６。■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■１２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５１６１７１８１９２０２１２２２３２４ｎｔＰｏｓｔｏｎｉｉ４０ 博去学位论文ｍｌｉＲＮＡｎｕｃｅｏｔｉｄｅｂｉａｓａｔｅａｃｈｐｏｓｉｔｉｏｎＢＰｅｒｃｅｎｔｓ）ｉ—ｐ１２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５１６１７１８１９２０２１２２２３２４ｎｔＰｏｓｉｔｉｏｎ２－１０已ＲＮＡ的各位点碱基偏向性（Ａ为对照样品ＧＤＭ图知ｍｉ，Ｂ为对）－ｔｔｉＡＦｉｇｕｒｅ２１０民ｅｃｏｇｎｉｚｅｄｍｉＲＮＡｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓａｅａｃｈｐｏｓｉｉｏｎ打打ｏｒｍａｌＣＯ打化〇１（＿）ａｎｄＧＤＭ巧）２－１）表１已知ｍｉＲＮＡ的表达量（部分结果－ｉｌｌｆＴａｂｌｅ２１１ＰａｒｔａｒｅｓｕｔｓｏｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｒｅｃｏｎｉｚｅｄｉＲＮＡｐｇｍｍＲＮＡＤＭｉ对照Ｇｈ－ｍ－１－３４８ｓａｉＲ９４ｐ－－－ｈｓａｍｉＲ３６８８３４１０ｐｈ－－－ｓａｍｉＲ６２４３５２５ｐｈｓａ－ｍｉ民－９５－３ｐ５４２－ｍ－－ｈｓａｉＲ１５３３ｐ５１２ｈｓａ－ｍｉＲ－３７５６４８ｈｓａ－ｍ化－７７０－５ｐ６１４－－ｈｓａ－ｉｒｄＲ５４８ａｉｉ５ｐ６２４ｈｓａ－ｍｉ民－３７５６４８ｈ－－５４８－５７１３ｓａｍｉＲｊｐｈｓａ－－８ｍ化１２７０７４１ 二ｍＮＡ第部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｉＲ差异表达谱分析－ｍ－－ｈｓａｉ民１０６ａ５ｐ８８－ｈｓａ－４６６２ａ－５９ｍｉＲｐ１６－ｍ－－５２０ｈｓａｉ艮４８７ａｐ１１ｓａ－ｍ－３３２８ｌｉｉＲ１２６化－－ｍｈｓａｉＲ４２１３８５５ｓａ－ｍ－－ｈｉＲ１２７７５ｐ４７３％ｈｓａ－－巧－５５６４８ｍｉ民９ｐｈｓａ－ｍ－－ｉＲ２００ａ３ｐ７０１１３－－ｍ－ｈｓａｉＲ２７ｂ５ｐ８８１０７－ｍ－ｈｓａｉＲ１２６９ｂ１０８１１１－－－ｍ－１ｈｓａｉＲ１６２３ｐ３３２０９ｈ化－－４ｍｉＲ５２１１５７１９５－ｍ－－ｈｓａｉＲ２１８５ｐ１９９３１３ｈｓａ－ｍ－４３３－３４０８４８２ｉＲｐ－ｍ－２９ａ－４７６ｈｓａｉＲ５１１９１ｐ－ｍ－－ｈｓａｉＲ４２３５ｐ６７５７０４ｈｓａ－－７ｂ－ｌｅｔ５ｐ３９１９５１５４ｈｓａ－－－ｌｅｔ７ａ５ｐ３７７５１５１５４７ｈｓａ－－１２６－５４００７ｍｉＲｐ１４２３６ｈｓａ－ｍ－－ｉＲ５２２５ｐ３３４５１５１９％－ｍ－－ｈｓａｉＲ２３ａ３ｐ５２３５２６７０２１－－－ｍｈｓａｉＲ２９ａ３ｐ２９１６５１０５５８８ｓａ－ｍ－ａ－ｈｉＲ１２５５ｐ９１２０８１４８９０２－－－８ｈｓａｍｉＲ４２４５ｐ３巧５７６１９２２８４２ 博去学位论文对照组－－ＴＧＧＧＡＴＧＡ说ＴＡＧＴＡＧＧｎＧＴＡＴＡＧＴＴＴＴＡＧＧＧＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＣＡＣＴＧＧＧＡＧＡＴＡＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣｒＴＴＣＣＴＡｈ－８０ｓａｌｅｔ７ａ１－（（（（．．．．．．．．．．．．．．（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（）））））））））））））））））））））））））））））））））ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ３４，２０（（幸本幸本本ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴ本幸本幸＊幸本幸幸幸本幸幸幸幸幸幸幸本本幸本幸幸本＊幸本幸幸年幸本幸幸本本本本幸幸幸本本丰本本本幸幸幸本４ｈｓ过———ｌｅｔ７ａ日ｐ２２＂－－－本＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊：ｃ：ｃＭｊ＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴｒｃ＊＊＊ｈｓａｅｔ７ａ３ｌｐ２１ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔ００００００１９２２３０１４２ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴｔ０００００１９９２１４７０７ＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴＴＧＡＧＧｔ０００００５４１２３１６２４ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧ：ｔＯＯＯＯｌＯＯＳ２０８１８１９２６ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡ００００８７８３１１ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴｔ０００２５０９２巧４０ＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧｒＴＴｒ１ＴＧｔ０００３７９４２４２８ＴＡＧＴＡＧＧｒＴＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧｒｒ１０００２９６０７２１３２ＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴ１００１０９２１０２０３ＧＴＴＴＯＯｌ１６８９６２２３ＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡｔＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔ０００５６７８７２０１０ＴＡＧＴＴ１７ＧＧＴＡＧＴＡＧＧｎＧＴＡｔ０００６９７０１９ＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴｔ００８４４６６３１８１ＧＴＡＧＴＡ祐ＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔ００４６０７７４１８１ＴＴＡＧＧＧＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＣＡＣＴＧＧｔ００７６０５３０２２１．．．．ＡＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴｔ００８６巧３２２２１ＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣ．．ｔ０００８５２２巧ＣＴＡＴＡＣＡＡＴ１９１ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣ．．．ｔ０００２５６２８２１：Ｂ９．．．．ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴ１０００３６０７６２０２３ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴ．１０００６２３８５６４２．ＴＡＴＡＣＭＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴｔ０００４３５９２２２１７．．１ＴＡＴＡＯＶＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣｔ００Ｍ３８０２１２ＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣ．．．ｔ００５６巧巧２０１．ＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴｔ０００８９９９５２１４ＣＣ．１００２１２０ＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴ．５２５０１ＧＤＭ组说ＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴＡｈｓａ－－－ＴＧＡＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴＴＡＧＧＧＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＣＡＣＴＧＧＧＡＧＡＴＡＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡｌｅｔ７ａｌ８０４３ 第二部分妊娠期搪尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析ｕｒｅ－（．（．．．．．．．．ｓｔｒｕｃ３４．２０（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（）））））））））））））））））））））））））））））））））ｔ本幸本本冰ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴ寺本本半木味本本车本＊本本本幸本４幸幸本本本＊本冰本＊味＊＊本本＊本本幸＊本本本夺本本木幸幸本本本本本木本ｈｓａ———Ｉｅｔ７ａ５ｐ２２—一一ｉ：幸幸幸幸幸本本本半本＊味：；｝水求木本水本求东本＊本本本水水本幸来味朱ｉ本＊木本本本冰本本水＊来来朱幸本＊来＊幸本求ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣ来朱＃ｈｓａｌｅｔ７ａ３ｐ２１ＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴ１１．．．．ＡＴＧＡＧＧＴＡＧＴｔ００３６２４２２３ＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔ００００００２７２２４０７４日ＴＧＡＧＧＴＧＴＡＴＡＧＴｌＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴｔＯＯＯＯＯＺＯ２１６５２７ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴｔ０００００３８５２３巧１９ＴＧＴＡＴＡＧＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴｔ０００００６９１２０１２５１ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡ１００００４４６５１９１４８ｌＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴＴｔＯＯＯｌｌＴｌ２４５８ＴＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴｔＯＯ日３７１４５１１４８ＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔＯＯＯｌ巧０７２１巧１３ＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴｔ０００４９６２０９ＧＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧｔ００５１５０６３１９１ｔ０００２８１２６２０２０ＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴｔ００２７３３００２１１ＡＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴｔ００４７５０００１９１ＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔＯＯＯ日８０００１９７ＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴ１００１２９７８７２０２ＧＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴｔ００５８０３８３１８１ＧＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴｔ０００９３９８３１８３ＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴＴＡＧｔ００２８８８７９２１１ＴＡＧＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＴｔ００３４５２１４１８１ＧＡＴＡＡＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴｔ００３８８７４１２３１ＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴ１ＡＴＡＡＣＴｔ００５７８３８５２２ＴＡＡＣＴＡＴＡＣＭＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴｔ００３０８５３１２２１ＡＴＡＣＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴ．．１ＡＡＣＴＭ．．ｔ００５９４８３２２１ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣ．００００８０９６２２８４ＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣ．ｔ．．ｔ００００９４２０２１７３ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣ．ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴ．．０８７日０３６．．ｔ００１７２．ＣＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴｔ０００５８５７３２３７ＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴ．ｔ０００３０９５２２２１８．ｔＯＯＯ日２４０２２１８ＴＡＴＡＣＭＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＣ．４４ 博壬学位论文．．．ｔ０００９６８６９２０３ＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＣＴ．ｔ００１２００４４１ＡＴＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣ２２ＡＴ．．．４８ＡＣＡＡＴＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣｔ００５０１５１９１２－－－－－－图１１对照组及ＧＤＭｈｓａｌｅｔ７ａ５匹配上的ｈｓａｌｅｔ７ａ的详细情况ｐｕｒｅ－－－－Ｆｉｇ２１１ｈｓａｌｅｔ：７ａ５ｐｍａ化ｈｉ打ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＤＭ呂３．４．２不同组间ｍｉＲＮＡ表达差异分析与正常对照相比，ＧＤＭ姐中有１３８个ｍｉＲＮＡｓ表达显著上调，包巧ｓａ－－５４８ａｍ－－ｍ－－－－－－－－－ｍ－－ｈｍｉＲ５ｐ、ｈｓａｉ民９５５、ｈｓａｍｉ艮３７２５ｐ、ｈｓａｍｉＲ３７４ａ５ｐ、ｈｓａｉ民１２７７５ｐ－－－１ＲＮＡ－－－－，１２６ｍ１２４ｈｓａｍｉＲ８８９３等６个ｍｉｓ如ｈｓａｍｉＲ９ａ、ｈｓａｉＲ６、ｐ；明显表达下调ｈｓａ－－６６３ａ－－７７０４２－１２２－１２ｍｉＲ、ｈｓａｍｉＲ等（图，表）。一我们的研究发现与往在高糖刺激下细胞姐织ｍｉＲＮＡ表达差异致的有：２口４［］［］－－－ｍｉＲ２９ａ、ｍｉ民１２５ａ哺ｍｉＲ１４６。Ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔ（ｃｏｎｔｒｏｈｘ｜ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：ｙ）１００００００１１１１１１－■ｕｐｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡ－■ｄｏｗｎｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡ—■ｉＲＮ片ｅｑｕａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍ１０００００５１１？？１００００之？－■站王０００占系；Ｓ＇…。—Ｉ１忌１＾？？？０．１０．１１１０１００１０００１００００１０００００１００００００ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｌＡ）ｌｅ（图２－１２对照与ＧＤＭ组己知ｍｉＲＮＡ差异表达的散点图斗５ 第二部分妊娠期搪尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析Ｆｉｇｕｒｅ２－１２ＳｃａｔｔｅｒｌｏｔｍａｆｏｒｒｅｃｏｎｉｚｅｄｍｉＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｉｎｎｏｒｍａｌｐｐｇｃｏｎ－ＡｔｒｏｌａｎｄＧＤＭｒｏｕｒｅｄｄｏｔｍｅａｎｓｕｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮｒｅｅｎｄｏｔｍｅａｎｓｇｐ（ｐｐ，ｇｄｏｗｎ－ｅｘｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡａｎｄｂｌｕｅｄｏｔｍｅａｎｓｅｕａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｐｑ）－２共ｍ表２１同表达的部分ｉＲＮＡ表达差异分析结果Ｔａｂ－２ＤｔＮＡｌｅ２１ｉｆｅｒｅｎｉａｌｅｘｒｅｓｓｉｏ打ｏｆｃｏｍｍｏｎｍｉＲｉｎｔｗｏｒｏｕｓｐｇｐｆｂｌｄ－ｃｈａｎｇｅｌｏ２（ｇ－ｍ－ｓ－－ｉＲｎａｍｅＡｔｄＢｓｔｄｐｖａｌｕｅＢ／Ａ）－ｍ－－＜０Ａ书ｈｓａｉＲ３６９３３３１．３７３５７２１．３５８３１．１２２２５７８０００１ｐ．－－－Ａ书ｈｓａｍｉＲ１９０８５０．３０４１．３５８０．０ｐ．７２２４１７２６０２４６９６５９－Ａ－Ｂｈ－ｍｉ民－１２４９１２３８４０ｓａ．４０７１１６０５０２２３０．０４５８７５２．．Ａ－Ｂｈｓａ－－１１７９０ｍｉＲ．６１９２１．６２％１．３９５１５４９００３７６０９７．－－－－．ＡＢｈｓａｍｉＲ１４６ａ３ｐ０．３０９６１．１１９６１名５４５０６００３７５１８２－－－－ｍ．．ＡＢｈｓａｉＲ３９１２３ｐ０３０９６１．１１９６１．８５４５０６００３７５１８２－－ｍ－ＡＢｈｓａｉＲ９４４０．７２２４１．８３２２１．３４２７０７２０．０３１６２６８－－ｍ－－ＡＢｈｓａｉＲ４７３２３ｐ１．３４１６２．７４８２１．０３４５３２４０．０３０７８０１Ａ－Ｂｈｓａ－－１１８５－２－３ｉｍｉＲｐ．２３８４２．６４６４１．０９５５％８０．０２６４８２５－－－００ＡＢｈｓａｍｉ２１７６２．巧０４１．４８．Ｒ．１９１２６２８２０２４７２４２Ａ－Ｂｈ－－ｓａｉ民７７０５１．１３５２２．５４４７１１６４５４９１００２２４１４７ｍ．．－－ｍ－％９９－－ＡＢｈｓａｉＲ５１０３２０．２０％２．３４１６３３５００２１０５５９ｐ．．Ａ－Ｂｓａ－－－ｈｉＲ５０９３１．１３５２２６４６４１２２１０８４７０．０１５５６９６ｍｐ．．－－－ＡＢｓａｍ民６２８，３ｈ．７２２４２０３５７１．４９４６５５２０（Ｈ％７７ｉｐ０．．－－ｍ－－ＡＢｈｓａｉ民１４６ｂ３ｐ０．４１２８１．５２６８Ｌ８８６９％２０．０１２８７６９－－－－ＡＢｈｓａｍｉＲ６６３ａ１．．１％２０．２ＣＢ６２．４７９１３７００１２０４８４－－－－－ＡＢｈａｉＲ２１１６３３．ｓｍｐ．６１２１．７３０４１．０６１６於３００１０Ｗ６４－－－－ｍ．ＡＢｈｓａｉＲ３４０３ｐ２．０６４４．１７３２１０１５７１１１０．００巧９２２－－－－ＡＢｈｓａｍｉＲ３７３５０．２０６４１．ｐ．２２１４２ｊ６５０２０９０００７９７９９ｈ－－－０ｍ．Ａ书ｓａｉＲ１４９３ｐ．８２％２３４１１１．５０％７１７０．００７８５４－－ｍ－－ＡＢｈｓａｉＲ４５４５０５１６１．８３２２１８２８１３４０００７３０５ｐ．．．Ａ－Ｂｈｓａ－ｍｉＲ－６５－－１６３２．１６７２０．７１２５１．６０４８７０４０００７２８９５ｐ．－－ｍ－ＡＢｈｓａｉＲ５４８ａｗ１．８５７６３．９６９７１０９５５９０１０００６２８１．．－－ｍ－ＡＢｌｉｓａｉＲ５４８ａｋ２０６４４．２７５１．０５０４８１５０．００６０８８３．－－－－ＡＢｈｓａｍｉＲ３７９３０．３０％１．ｐ．５２６８２３０２０３３７０００４％０１４６ 博去学位论文－－－４８ｈ－０４２８７３０４２７５９０７ＡＢｈｓａ５３．ｍｉＲｐ．１１．，０６０００４７９６３Ａ－－－ＢｈｓａｉＲ５４４１２８１７３０４２９０７４７９６３ｍ化０．．．０６７５０．００Ａ－Ｂｈｓａ－ｍＲ－－１５ａ０．９２４６４５１５９１３０００４４７４２ｉ３ｐ８８２．６１．０．－－－－ｍＲ－ＡＢｈｓａｉ１３０ａ５ｐ１．５４８０．３０５４２．３４１６巧５０．００４０３巧－－Ａ－Ｂｈ－５０１０３２１１１ｓａ．４；３ｍｉＲ％ｐ．．９６３３９４６８５０．００６８９８－－－－ＡＢｈｓａｍｉＲ＾５０ａｌ３２ｐ．５８５．１９１１１．００８６６９２０．００３４０１８－－－ｍ－ＡＢｈｓａＲ５４８ｅ１．ｉ３ｐ２．４７６８５．０８９３，０３８９８９９０００２９６９５－－－ＡｍＲ５４８ａ－１３９５１５４９Ｂｈｓａｉ３００．００２ｑｐ．３０９６．化化２．８４３４－－－－１ＡＢｈｓａｍ５４８ｃ５０．３０９６？化８６２．３９５１５４９０．００２８４３４ｉＲｐ－ｉ－８６５１５４９Ａ－ＢｈＲ－５４８ｏ５０３０９６１於２０胆８４３４ｓａ．３９０ｍｐ．．．－－－ＡＢｍＲ５９８－１３４１６４６０７００２４４ｈｓａｉ３ｐ．３．ｌ．％７１０９３０．３９－－ｍ－－ＡＢｈｓａｉＲ１５４５ｐ２．２７０４４巧１．１０％１８８０．００２２１．８８－Ａ－ＢｈｓａｍＲ－２４６４４４－０００２１４３９ｉ１１．８０．２０％２．８２７０如３．－－－－ＡＢｈｓａｍｉＲ３化３４．０２４８１．化８６１．３０巧８４８０．００１５４６９－－－Ａ－Ｂｈ７ｅ２８３２５５９８２ｓａｌｅｔ３ｐ．６．１．０６１００８４０．００１５１３２Ａ－Ｂｈ－－－３１５２６８２０１４４７ｓａｍｉＲ６６４ａ０．２０６４．；２．８８６９９６０．０ｐ－－－ｍ－８ＡＢｈｓａ．ｉＲ４９９ａ５ｐ１．４４４８３．７６６１１．３２２０１５０００１４１８１Ａ－Ｂｈ－ｍＲ－５４４ａ８２５６２４８２ｓａｉ０．．７１．７３４９７２１０．００１３７４９－－－ｍ－ＡＢｈｓａＲ５４８ａ．１１６１ｉｍ５ｐ００３２１．３２３２３．６８０５３０．０００６８７－－－－ｍＡＢｈｓａＲ４２８６．１１４２５１．４２２１ｉ３８８４．００６３０．００００４９－－４－ｍ－ＡＢｈｓａｉＲ５４８ａｕ５０．６１９２２１．９８０１１７０．００１００３７ｐ．４４２９－－－－ＡＢｈｓａｍｉＲ５８４３ｐ０．２０６４１．化８６２．９８０１１７４０．０００８０８９－－－７５１３７２４０９５０００７０７９ＡＢｈｓ－ａｌｅｔ７ｉ３ｐ１．６５１２４．２．０．－Ａ－Ｂｈ－－．ｓａｍｉＲ３８１５ｐ１４４４８３．９６９７１．４５８１６０２０．０００６４３８－－－－ＡＢｍＲ６２４５．４１２１００００６０５２ｈｓａｉｐ０８２．３７５２．３７２４０９５．－－－－ＡＢｍＲ４．４２８６１３６００００２７９５ｈｓａｉ３ｃ３ｐ３３０２７．０２３Ｌ０８．－－－－－ｍＡＢｈｓａｉＲ７ｌ３３．３０２４７０２３２１０８８６１３６０．０００２７９５ｐ．．－－－－ＡＢｈｓａ１４７ｂ５．７７９２２２４２２７５０００２５０１ｍｉＲ．４４２９１．．０－－Ａ－Ｂ－６２４３０５１６２ｈｓａ．５４４７２５２６２２２６ｍｉＲｐ．．３胆００．０００－－－－－ｍＡＢｈｓａＲｌ３３１１．１３４４１７１７２４ｉ３０ｃｐ．９９２７．０２３２３０．０００－－－巧－ＡＢｈｓａｍＲ．７２２４５３６２７９６４１３０．０００１３７４ｉ６３ｐ０３．０．０－－－－ＡＢｈｓａ３６４８３１２１．００１ｍｉＲ．１９９２０．７２５．６６７４９３＜００－＜－－－４５０８ＡＢｈｓａ．．０ｍｉＲ５．７７９２２．１３７５１４３４９４５４０００１４７ 第二部分接娠期據尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析－Ｂ－－－＜ＡｈｓａｉｎＲ６４３２．１６７２６．００５４１．４７０４２１ｉ％ｐ８０．０００－Ｂｈ－４－ｍ－．４３７６９５６７９１．１０８４２２７＜０ＡｓａｉＲ５４８ｏ３ｐ．．０００１－－－ＡＢｈｉ－１２１０１ｓａｍＲ５ｂ３．３１９９２００＜０ｐ．７６４４．０％８３２．０００１－－Ｂｈｓａ－７ｄ－３Ａｌｅｔ５．４６％１１６ＣＢ６１．０８５０６５２＜０００１ｐ．．０－－－－ＡＢｈａ＞ｓｉＲ３４ａ３３６１２５５４１．２９３７５６＜０１ｍｐ．８．８Ｓ．０００－－－－ｍ＞＜０ＡＢｈｓａｉＲ１５４３４．８５０４１０７８Ｓ３１．１５３４２５６０００１ｐ．．－－ＡＢｈ－ｍＲ１２７－３２．．＜０ｓａ．３７３６０２３２１１７．０００１ｉ７ｐ７５６５０５－Ｂｈ－－Ａｓａ－ｉＲ３４ｂ５６１％３３３４１１０６６３２３＜ｍｐ．１．．０．０００１Ａ－Ｂｈｓａ－Ｒ－５４８－４ｍ．３３４４１０７８９３１．引５６９７１＜０００ｉｂ３ｐ．．０１－－＜０－－ＡＢｈｓａｍｉＲ２１６ａ５０．４１２８３３．１５００２２８００１ｐ．６６４３．０－＜－－－ＡＢｈｓａ３７２５０１２．５４４７．１１８００００１ｍｉＲｐ．０７９９３５．－－＜０－％＾３ＡＢｈｓａｍＲ．４１ｌ．５０．０１ｉｐ３．巧９２９６６％巧００－－－ＡＢｈ－ｍＲ＾５ｓａ．８８２４１３７４１１１．２２４０２０７＜０ｉ巧ｂ５ｐ．．０００１＊一－ｓｄ为ｍ＜Ａ为对照组、Ｂ为ＧＤＭ细，ｔｉＲＮＡ的归化表达量，Ｐ０．０５差异显著。３．５新ｍｉＲＮＡ的鉴定及分析一ｉＲＮＡ前体的标志性发夹结构ｍ，能够用来彌测新的ｍｉＲＮＡ。通过对截取定长度小ＲＮＡ比对上的基因绝序列，根据Ｄｉｃｅｒ酶切位点信息、能量、主次要ｍｉＲＮＡ的间姫、侧翼序列等特征，利用华大基因开发Ｍｉｒｅ巧软件对没有注释的小ＲＮＡ进行预额！Ｉ、预测新的ｍｉＲＮＡ，分祈差异表达谱。３ｉ．５．１新ｍＲＮＡ表达量及碱基偏向性通过分析，在对照组发现２６种新ｍｉＲＮＡ，总表达量达３６２；ＧＤＭ组中发现２７种新ｍｉＲＮＡ，总表达量达４５５。由于逸些ｍｉＲＮＡ中有８种新ｍｉＲＮＡ的表达量在对照一组及ＧＤＭ组表达均很低ｉＲＮＡ，不纳入进步的分析。测得到的新ｍ的统计信息包，含了对不同长度新ｍｉＲＮＡ的首位点碱基分布及所有新ｍｉＲＮＡ各位点碱基分布的统计一。根据已知ｍｉＲＮＡ的碱基偏好性的统计，序列中不同位点碱基具有定的偏好性，－－Ｍ）。这些特征有助于ｍｉＲＮＡｆＥ基因识别和预测。（图２１３、２４８ 博去学位论文ｔｉｉｉＲＮＡｆｉｆｓｔｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓＰｅｒｃｅｎｔ（樹ＩｎｉｌＤ１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０Ｌｅｎｇｔｈ（ｎｔ）ｍｆｒｓｔｌｅｏｉｄｅｂｉａｓｉＲＮＡｉｎｕｃｔＰｅｒｃｅｎｔ㈱ｉｌｉｉ１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０Ｌｅｎｈｔｎｔｇ（）２－１３ＮＡ的Ａ为ＢＤＭ）图新ｍｉＲ首位点碱基偏向性（对照样品，为对ＧＦ－ＲＮＡ巧ｔＡＤＭｉｇｕｒｅ２１３ｎｏｖｅｌｍｉｒｓｔ打ｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓｉｎｓａｍｐｌｅｓｏｆ打ｏｒｍａｌｃｏｎｒｏｌａｎｄＧ（）Ｂ（）４９ 二织ｍｉＲＭ差异表达谱分析第部分妊娠期糖尿病患者胎盘组ｍｉＲＮＡｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓａｔｅａｃｈｐｏｓｉｔｉｏｎＰｅｒｃｅｎｔ㈱ｉ—０１１１２１３１４１５１６１７１８１９２０２１２２２３ｎｔ１之３４５６７８９１ＰｏｓｉｔｉｏｎｄｅｂａｔｅａｃｈｓｉｏｎｉｔｍｌｅｏｔｉｉａｓｐｏｉＲＮＡｎｕｃＰｅｒｃｅｎｔｉ％）３１４１２０２１２２２３２４ｎｔ６７８９１０１１１２１弓１６１７１８１９１２３４５Ｐｏｓｉｔｉｏｎ图２－１４新ｍｉＲＮＡ的各位点碱基偏向性（Ａ为对照样品，Ｂ为对ＧＤＭ）ｏｎｔｒｏｌ－ｔｉｎｓａｍｌｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｃｒｅ２１３ｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉａｓａｔｅａｃｈｏｓｉｉｏｎｐＦｉｇｕｐＡａｎｄＧＤＭＢ（）（）ＮＡ的一－－３．５．２新ｍｉＲ级结构为了预测和鉴定对照和ＧＤＭ胎盘组织新发现的ｍｉＲＮＡ，我们在人类基因组数据库和ＥＳＴ数据库中进行比对，将比对得到的少于４个错配的序列作为分１ｉＲＮＡ进行二级结构预测。分析结果表，用Ｍｒｅａ９个预测的ｍ析序列ｉｐ软件对二２－１５。明ｉＲＮＡ级茎环结构（图），预测ｍ具有代表性的５０． 博壬学位论文－ｍ瓜－－ｍ－－－ｎｏｖｅｌ０００１ｎｏｖｅｌｉ民０００２ｎｏｖｅｌｍｉＲ０００３ｙ§Ｉ８ＱｐＵ１９ＩｉＩ５台邊這图２－１５新ｍｉＲＮＡ二级结构预测图Ｆ２－１５ｔｒｔｉｇｕｒｅＳｅｃｏｎｄａｒｙｃｏｎｓｕｃｕｒｅｏｆｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡ３．５．３新ｍｉＲＮＡ的差异表达对两品中表达的预测得到的新ｍｉＲＮＡ统计，判断在两样品之间的表达量是－否存在显著性差异，并分别使用ｌｏ２ｒａｔｉｏ、Ｓｃａｔｔｅｒｌｏｔ图比较两者共同表达的ｇｐ新ｍｉＲＮＡ表达量的差异。分析结果显示，与对照组相比ＧＤＭ组有９种新ｍｉＲＮＡ表达显著上调，６种新ｍｉＲＮＡ显著下调。４种新ｍｉＲＮＡ表达在对照巧５１ 第二部分妊娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析２－１２－１）。ＧＤＭ中无明显差别（图６和表３Ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔ（ｃｏｎｔｒｏｈｘ｜ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：ｙ）１００００００Ｔ１１１ｊ１—ｓｓｅ■ｉＲＮＡｕｐｅｘｐｒｅｄｍ－ｅｘｒｅｓｓｅ■ｄｏｗｎｄｍｉＲＮＡｐ－ｅｓｓｅｄｅｑｕａｉＲＮＡ■ｌｌｙｅｘｒｍｐ１０００００１１１００００１０００妄芝里ｃｏ．１７Ｓ？ＣＬ？。１０．１０．１１１０１００１０００１００００１０００００１００００００Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ（Ａ）２－ＲＮＡ表达散点图横轴为对照纪ｍｉＲＮＡ表达水平，纵轴为图１６新ｍｉ＜＝ＧＤＭｍｉＲＮＡ表达水平红色代表ｒａｔｉｏ＞２的ｍｉＲＮＡ，藍色代表ｌ／２ｒａｔｉｏ２的；ｍｉＲＮＡ，绿色代表ｒａｔｉｏ＜ｌ／２的ｍｉＲＮＡ。－Ａ巧３８〇１１ｅｖｅｌｓｉｎｎｏｒｍａｌＦｒｅ１６ＳｃａｔｔｅｒｌｏｔｍｒｎｏｖｅｌｍｉＲＮ６义１ｌｉｇｕ２ｐ巧化口ＧＤＭｏｕｒｅｄｔ－ｅｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｅｅｎｄｏｔｍｅａｎｓｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｒｐ（ｄｏｍｅａｎｓ叩邓，巧ｇ－ｅｘｒｅｓｓｅｄｍｏｔｍｅａｎｓｅｕａｌｌｅｒｅ巧ｅｄｍｉＲＮＡｄｏｗｎｉＲＮＡａｎｄｂｌｕｅｄｑｙ邱）ｐ５２ 博壬学位论文表２－３１新ｍｉＲＮＡ差异表达分析Ｔ－ｒｅｓｓａｂｌｅ２１３ＥｘｐｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｉｎｉｎｓａｍｐｌｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌＡａｎｄ（）ＧＤＭＢ（）－ｃｈａｅ－妃ｌｄｎｇ（ｌｏｓｉｇ１－－－－ｐａｉｒｗｉ犹ｍｉＲ打ａｍｅＡｓｔｄＢｓｔｄｐｖａｌｕｅｇ２Ｂ／Ａ）ａｂｌｅ－－Ｂ凸ｏｖｄｍｒ－－ＡｉｌＯ２．１６７２１．６２８６０．４１２２０．巧３５７２１＊＊－－Ａ－Ｂｎｏｖｅｋｍ－ｉｒ１２１．５４８０．０１７．２７衫６１７２．７３Ｅ０５－＊＊－－－－Ｂｎｏｖｅｌｒ１４１６５１２０１７ｍｉ．％７３７１１１Ａ．．０．３６Ｅ０５＿－－－－ｅｌ２７０４４２０ＡＢｎｏｖｍｉｒ１５２．６７６０．１．５１９８４．１７４０３４－－－ＡＢｉｏｖｄｍｉｒ＞ｉ１６１．５４８２．２３Ｓ３０．５３２６４２４０．２７４１５８７－－－ＡＢｎｏｖｅｌｍｉｒ１７０．６１％１．３２３２１．０９５５５３８０．１２２６２８４－＊＊－－ｍ－－ＡＢｎｏｖｅｌｉｒ１９１．５４８０．０１７．２７４２６１７２．７３Ｅ０５＿＊＊－－ｍ－－ＡＢｎｏｖｄｉｒ２２１．８５７６６．２０９１．７４０％１１ｌ．ｌｌＥ０６＿＿＿－－Ｂｎｏｖｍ－２４４３４４８０４３８９７９７Ａｅｌｉｒ．３４．５０．０７９６４１０．７９－＊＊Ａ－－％０Ｂｎｏｖｅｋｍｉｒ．０１２．４４２９７．巧２４５１７．０８Ｅ０８＿－－＊＊ＡＢｎｏｖｅｍｒ－－ｌｉ２８０．０１１．８３２２７．５１７４３３２４．３５Ｅ０６＿＊＊－－－－Ｂｎｏｖｅｌｍｒ３００５．２１Ａｉ．０１６．９２１９４３４９４０９５．４４Ｅ＿＊＊－ｅｋｎｉｒ－６６６９４巧０１０巧ＡＢｎｏｖ３１０．０１１．０１７９．．００２＿＊＊－－－ＡＢｎｏｖｅｋｍｉｒ％０．０１１．５２６８７．２５４３６７３３．４１Ｅ０５＿＿＊＊－－－％０－ＡＢｎｏｖｅｌｍｉｒ．０１１名３３９７．巧５３６９４２．１９Ｅ０６＿＿＿－－＊＊－ｍ－ＡＢｎｏｖｅｌｉｒ３９Ｑ．Ｑｌ１．９３３９７．５９５３６９４２．１９Ｅ０６＿＊＊－Ａｅ－－－－Ｂｎｏｖｌｍｉｒ４１．９６０８０．０１７．６１５２９８６１．６６Ｅ０６＿＊＊－－－－Ｂｎｏｖ－ｍ５１４０Ｅ１９Ａｅｌｉｒ６．３９８４０．０１９．３２１５６７４．＿－－＊＊ＡＢｎｏｖｅ＾ｍ－－ｉｒ６１．９６０８０．０１７．６１５２９８６１．６６Ｅ０６＿＊＊Ａ－－＞－＜－为对照、Ｂ为ＧＤＭ，ｓｉｇ１油ｌｅｆｏｌｄｃｈａｎｇｅ（ｌｏｇ２）ｌ或者ｆｏｌｄｃｈａｎｇｅ（ｌｏｇ２）ｌ，－ｖａｌ并且ｌｕｅＯ．Ｏ。ｐ５３ 第二部分在娠期搪尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析４讨论：一Ｍｃｒｏ２０－２５ｉＲＮＡ是在真核生物中发现的类长度在个核昔酸非编码小ＲＮＡ分子，能够通过与範基因ｍＲＮＡ特异性的碱基配对引起祀ｍＲＮＡ的降解Ｗ或者抑制其翻译，从而对基因表达进行转录后调控。Ｌｅｅ等最先在秀丽隐杆线一ｍ虫（Ｃａｅｎｏ出ａｂ地ｉｓｅｌｅｇａｎｓ）中发现了个可时序调控胚胎后期发育的ｉＲＮＡＷ－－ｎ。ｉｎｈａｒｔｅ。ｌｉ４２０００年Ｒｅ等发现了具有转录后调节功能的小分子ＲＮＡＩｔ７至２００１年，研究者在线虫（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）、果蛹（Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）和人体中发现了近百个Ｐ一１ｍｃｒｏ这样的小ＲＮＡ分子，国际上统将这类小ＲＮＡ正式命名为ｉＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ），其研究也成为新的热点。随着小ＲＮＡ深度测序技术的发展，越来越多的ｍｉＲＮＡ被发现鉴定，截至２０１３年ｍｉＲｂａｓｅ２０已收录２０６个物种的２４５２１Ｗ个位点及３０４２４条成熟的ｍｉＲＮＡｓ序列ｎＭｉＲＮＡ与鞭基因间是多对多的关系，一ｍ即个ｉＲＮＡ可Ｕａ周控多个祀基因，反之，Ｉ个祀基因也可同时被多个？７０％ｍｉＲＮＡｓ调节。因此，据保守估计，约６０％的人类蛋白编码基因受到ｍｉＲＮＡｓ的调控气ｍｉＲＮＡｓ参与很多重要的生理和越来越多的证据表明，病理过程，例如发育、器官形成、调亡、细胞增殖、肿瘤发生等。近年来的研究显示，ｍｉＲＮＡ在糖尿病的发生进展中起重要作用。研究表明ｍｉＲＮＡ也参与了ＧＤＭ的发病，在孕早期血清ｍｉＲＮＡ的表达可预示妊娠期糖－－－２９ａ２２２ａｎｄｍ尿病的发生，ｍｉＲｍｉＲｉＲ１３２的表达下降与妊娠期糖尿病有关，ｔＷ。血清ｍｉＲＮＡｓ来源于多种组织与细胞，循环中ｍｉＲＮＡ的差异表达并不能充分说明其在组织中所起到的作用，因为ｍｉＲＮＡ作用的部位主要为组织细胞内。胎盘组织在ＧＤＭ发生发展中起重要作用，但是目前尚罕见关于ｍｉＲＮＡ在ＧＤＭ胎盘组织表达谱的研究。如何准确、迅速定量检测ｍｉＲＮＡｓ基因的表达，是明确ｍｉＲＮＡｓ在基因调控中作用的关键。传统ｍｉＲＮＡｓ的检测方法主要包括Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ、定量ＰＣＲ和基因巧片技术等一。第代测序技术Ｓａｎｇｅｒ法在人类基因组图谱的绘制中发挥一了重要的作用。自２００５年发展起来的新代测序平台取得了突破性的进展大，一大增加新ｍｉＲＮＡ的检出和鉴定。新代测序技术，并且极大地降低了测序成本５４ 博去学位论文除了获取已知ｍ一ｉＲＮＡ的表达谱外还有检出ｍｉＲＮＡ的编辑等方面的优势。新Ｍ代测序最常使用的３种平台是Ｉｌｌｕｍｉｎａ的基因组分析仪、Ｒｏ沈ｅ４５４基因组测ｉｓｔＷ序仪化及ＡＢＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ的ＳＯＬｉＤ系统，Ｉｌｌｕｍｉｎａ基因组分析仪采用爸成测序法，单次运行可产生３０ＧＢ的数据量、平均读长５０ｂｐ，具有所需样品少数据误差小，操作流程简单等特点。组织内的ｍｉＲＮＡｓ分子片段小、种类多，，要探讨在ＧＤＭ和正常妊娠情况下胎盘组织ｍｉＲＮＡ的表达差异及后续研究等，Ｉｌｌｕｍｉｎａ高通量测序技术无疑是最好的选择。高质量的组织标本是获得准确的ｍｉＲＮＡ特征性表达谱的强有力保证。本研究首先提取胎盘组织的总ＲＮＡ，经过分光度计和琼脂糖凝胶电泳鉴定，结果、－表明总ＲＮＡ的质量可靠未降解，可用于后续实验。构建小ＲＮＡ的ＣＤＮＡ文库，而后采用Ｈｉｓ巧高通量测序技术分析正常妊娠及ＧＤＭ胎盘组织的小ＲＮＡ信息并筛选和比较两者差异表法的ｍｉＲＮＡｓ。各样本的小ＲＮＡ高质量ｒｅａｄｓ达１０００００００９５％Ｗ上Ｉｌｌｕｍｉｎａ，占总序列的，体现了测序技术高通量高质量的特点。这些高质量的序列长度分布图有助于判断小ＲＮＡ的种类，样品中长度区间＾１－ｍ主要集中在２０２４ｎｔ的小ＲＮＡｓ，峰值在２２ｎｔ，符合ｉＲＮＡ长度特泌，其量约占所有小ＲＮＡ总量的上，种类约占总小ＲＮＡ种类的１％左右，体现了ｍ２－ｒａｔｉｏｉＲＮＡｓ在种类保守而数量分布广泛的特点。ｌｏｇ是用于描述正常对照组和ＧＤＭ患者ｍｉＲＮＡ表达谱两两比较中判断其ｍｉＲＮＡｓ表达量是否存在差异的指标，而Ｐ值表示ｍｉＲＮＡｓ在两样品间表达差异的显著程度，Ｐ值趙小差异越显著。通过这两者分析数据可Ｗ发现与正常对照相比，ＧＤＭ组有１３８个己知ｍｉＲＮＡｓ表达显著上调、１６个已知ｍｉＲＮＡｓ明显表达下调。本研究中ＧＤＭ患者存在明显的膜岛素抵抗。膜岛素抵抗是膜岛素作用的主要祀器官姐织对一定剂量的膜岛素产生的生理效应低于正常水平的一种状态，即外周组织对族岛素敏感性下降，葡萄糖利用降低及抑制肝葡萄糖输出作ｔｗ、用减弱，对糖脂和蛋白质代谢的调节作用降低甚至无作用。许多研究已经证实ｍｉＲＮＡｓ参与调控外周组织对膜岛素的反应。之前的研究报道ＧＤＭ患者５５ 第二部分赶娠期糖尿病患者胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析－－２９ａ水平显著低于正常妊娠者血清ｍｉＲ，体外实验证实ｍｉＲ２９ａ表法下降后可Ｗ增加膜岛素诱导基因１（／ｎｓ皆０的表达，导致蛋白激酶２表达上调从而使血糖水平升高－２９家族表。有研究报道２型糖巧病模型大鼠脂肪和骨骼肌组织ｍｉＲＷ达上调。本实验的结果显示ＧＤＭ胎盘组织的，可能与外周组织化有关ｍ－２９ａ表达増髙可能与其抑制胎盘组织对膜岛素刺激的葡萄糖摄取作用ｉＲ，这－有关。ｍｉＲＮＡ测序结果显示胎盘组织有ｍｉＲ１２５ａ表达，并且ＧＤＭ组胎盘组一一－织的表达明显高于正常。有文献发现ｍｉＲ１２５ａ是唯个在ＧＫ小鼠（糖尿病－）的巧脏和脂肪组织表达均显著差异的ｍｉＲＮＡｍｉＲ１２５ａ的模型小鼠；範基因涉及到丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号通路，该通路在糖尿病时被激活，在糖Ｗ尿病及并发症发生、发展中发挥重要作用。据此我们推测ＧＤＭ胎盘組织中的高表达的ｍ－ａｉＲ１２５也可能是通过调控ＭＡＰＫ信号转导通路中的某些祀基因而－发挥作用。我们的初步实验结果还发现ＧＤＭ组胎盘组织ｍｉＲ１４６ａ的表达明显Ｗ高于正常对照组。Ｋｏｖａｃｓ等发现，ＳＴＺ诱导的糖尿病大鼠的视网膜和视网膜ｍＮＦ－ｉＲＮＡ的表达发生变化ｋＢ内皮细胞中有大量的，其中与信号通路相关的－－ｍｍｉ民－ｋＢ的ｉＲ１４６等表达上调，他们还发现，１４６对ＮＦ负反馈抑制作用可能是治疗搪尿病视网膜病变的潜在祀标。另有研究发现，高糖刺激的内皮细胞ｆＷｍ－ｉＲ１４６ａ表达降低，其祀基因纤维连结蛋白的表达增加。在研究帕金森大脑纪织的差异表达ｍｉＲＮＡ在多己胺神经元即帕金森氏症发病机制中的作用时，ＰＧ］Ｒ－－－拉ｍ等发现高表达的ｍｉ１２６会下调ＩＧＦ１／ＰＩ３Ｋ，而ＩＧＦ１／ＰＢＫ信号通路与－细胞的分化发育相关。在饮食诱导肥胖小鼠的子代脂肪组织中，ｍｉＲ１２６表达也是升高的，而膜岛素信号通路的蛋白包括膜岛素受体、ＰＩ３Ｋ亚单位和膜岛素ＰＵ受体底物１等表达显著地下降。ＰＩ３Ｋ、膜岛素受体及受体底物是膀岛素信号。传导的关键，当这些蛋白表达下降后会影响信号的下传本研究发现ＧＤＭ胎－－Ｕ６可能与盘组织ｍｉＲ１２６表达明显高于正常对照，提示ｍｉＲ膀岛素抵抗有关系。除了已知的ｍｉＲＮＡｓ有表达差异外，我们还利用Ｍｉｒｅａｐ软件预测新的５６ 博去学位论文一ｍｉＲＮＡ并分析表达差异。Ｍｉｒｅ巧是深圳华大基因开发的专用于新代测序平台Ｐｓｉ数据分析的软件，主要功能是检测新ｍｉＲＮＡ及后续分析。新ｍｉＲＮＡ需满足经Ｒｆｏｋｐｌｌ二级结构Ｗ下３个条件；。软件或ｍｆｏｌｃＰ软件预测的ＲＮＡ符合）一－ｍ且存在ｒｅｉＲＮＡ的ｍｉＲＮＡ的ｐ发卡结构，条臂无内环或凸起，并包含成熟－二级ｌ／ｍｏｌ序列，巧结构稳定，杂交的自由能小于２０ｋｃａ３的编码；（巧发卡结构基因位于基因间区或内含子区。通过分析计算，本实验在ＧＤＭ患者胎盘组织预测出２７种新ｍｉＲＮＡ，由于有８种新ｍｉＲＮＡ在两组样本中的表达均过低，不参与差异表达分析。对其ｍｉＲＮＡ前体进行预测，均有明显二级茎环结构。差异分析显示９种新ｍｉＲＮＡ表达明显上调、６种新ｍｉＲＮＡ表达明显下调、４种新ｍｉＲＮＡ表达在对照和ＧＤＭ中无明显差别。ｍ一ｉＲＮＡ自发。现至今，己经被公认为基因表达调控的核也因子之ＧＤＭ发病机理错综复杂，正常妊娠与ＧＤＭ胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱的筛选有望为ＧＤＭ的发病机制研究提供新的线索一。然而，高通量测序分析结果有定局一限性，获得的ｍｉＲＮＡ差异表达谱有假阳性的可能。因此，我们在下部分进行筛选结果的验证及差异表达ｍｉＲＮＡ的后续分析。结论；通过构建ＧＤＭ和正常妊娠妇女胎盘ＲＮＡ的ｃＤＮＡ文库和Ｈ设ｅｑ鳥通量测序技术，首次进行了ＧＤＭ胎盘组织ｍｉＲＮＡ的高通量测序研究，发现有１３８种己知ｍｉＲＮＡ表达上调，１６种已知ｍｉＲＮＡ表达下调，部分表达上调的ｍｉＲＮＡ可能与膀岛素抵抗有关。通过软件预测出１９种新ｍｉＲＮＡ，其中有９种新ｍｉＲＮＡ表达明显上调、６种新ｍｉＲＮＡ表达明显下调、４种新ｍｉＲＮＡ表达在对照和ＧＤＭ中无明显差别。参考文献…ＣａｒｉｎｇｔｏｎＪＣ，ＡｍｂｒｏｓＶ．ＲｏｌｅｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｐｌａｎｔａｎｄａｎｉｍａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．－ｉｅｎｃｅ．２００３３０：巧巧８Ｓｃ，１（５６３１）６．５７ 二ｍｉＲＮＡ第部分妊娠期據尿病患者胎蟲：组织差异表达谱分析ｅａｅａｌ．ｖｅｒｅｘｒｅ；ｓｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃｉｄｈｉｈｌＡＺｈｕＬＧｕｔＮ，ｔＯｓａｃ２９口］Ｈ，，，ｐｐｇｙ－－ｕｒｅｕｌａｔｅｄｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ，ｌｅａｄｓ化ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎ３Ｔ３ＬＩａｄｉｐｏｃｙｔｅ．ＭｏｌｐｇＥｎｄｏｃｒｉｎｏ－ｌ２００７２１：２７８５２７９４．，，ｅｒｒｅｒａｃｋｓｏｎｅＨＥＴａ－３ＨＢＭＬｏｔｌｏｒＪＭｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ１２５ａｉｓｏｖｅｒｅｘｒｅｓｓｅｄ［Ｊ，，ｙ，ｐｉｎｉｎｓｕｌｉｎｔａｒｇｅｔｔｉｓｓｕｅｓｉ打ａｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｒａｔｍｏｄｅｌｏｆＴｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．ＢＭＣＭｅｄＧｅｎｏｍｉｃｓ：．２００９２１５４．，（）［４］ＫｏｖａｅｓＢ，ＬｕｍａｙａｇＳ，ＣｏｗａｎＣ，巧泣１？ＭｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｅａｒｌｙｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ－－ｉｎｓｔｒｅｐｔｏｚｃｒｔｏｃｉｎｉｎｄｕｃｅｄｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ．ＩｎｖｅｓｔＯｐｈｔｈａｌｍｏｌＶｉｓＳｃｉ．２０１１５２：４４０２，４４０９．５ＬｅｅＲＣＦｅ－－ｉｎｂａｕｍＲＬＡｍｂｒｏｓＶ，ＴｈｅＣ．ｅｌｅａｎｓｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｎｉｃｅｎｅｌｉｎ４［］，，ｇｇｅｎｃｏｄｅｓｓｍａＡｔ化－１４１ｌｌＲＮｓｗｉｈａｎｔｉｓｅｎｓｅｃｏｍｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｌｉｎ．Ｃｅｌｌ．９９３ｐｙ，－７５５：８４３８５４．（）民ｅｉｎｈａｒｔＢＢａｓｓｏｎ幻２１－ｎｕ－ｒｅｕａｅｓＪＳｌａｃｋＦＪＭａｉ．Ｔｈｅｃｌｅｏｔｉｄｅｌｅｔ７ＲＮＡｌｔ阀，，，ｇｄｅｖｅ—ｌｏｐｍｅｎｔａｌ巧ｍｉ打ｇｉｎＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｄｅａｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００，４０３（６７７２）：９０１９０６．ｇａｏｓ－ｕｔ［７］ＬＱｉｎｔａｎａＭ，ＲａｕｈｕｔＲＬｅｎｄｅｃｋｅｌＷ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌｅｎｅｓｇ，ｇｍａ－ｃｏｄｉｎｇｆｏｒｓｌｌｅｘｐｒｅｓｓｅｄＲＮＡｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２００１２９４５５４３）：８巧８５８．，，（ｓ－ｍａｓｅ８ＫｏｚｏｍａｒａＡＧｒｉｆｉｔｈＪｏｎｅｓＳ：ａｎｎｏａｉｎｆｅｎｃｅ．ｉＲＢｔｔｉｈｃｏｎｉｄ［］，ｇｈｇｄｅｅｓｅｕｅｎｃ－ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｕｓｉｎｉｎｇｄａｔａ．ＮｕｃｌＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０１４４２Ｄｌ：Ｄ６８７３．ｇｐｑ，（）９Ｖａｎ－［］ＲｏｏｉｊＥ．ＴｈｅａｒｔｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｒｅｓｅａｒｃｈ．ＣｉｒｃＲｅｓ，２０１１１０８２：２１９２３４．，（）－ｍ１０ＺｈａｏＣＤｏｎｇＪＪｉａｎＴｅｔａｌ．ＥａｒｌｓｅｃｏｎｄｔｒｉｍｅｓｔｅｒｓｅｒｕｍｉＲＮＡｒｏｆｉｌｉｎ［］，，ｇ，ｙｐｇｒｅｄ－ｉｃｔｓｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂ別ｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１６８：２３９２５２３９３３．ｐｇ，（）１１ＮｅｗｂｅｍＤ，ＦｒｅｅｍａｒｋＭ．Ｐｌａｃｅｎｔａｌｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆｍａｔｅｒｎａｌ［］ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｆｅｔａｌｇｒｏｗｔｈ．ＣｕｒｒＯｐｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＤｉａｂｅｔｅｓＯｂｅｓ．２０１１，１８巧）：４０９－４１６．。２ＣｏｌｏｍｉｅｒｅＭＰｅｒｍｅｚｅｌＭＲｉｌｅｅｔａｌ．Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎｉｎ］，，ｙＣ，ｇｇｐｌａｃｅｎｔａｆｒｏｍｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄｂｙｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＥｕｒＪ５８ 博壬学位论文ｏｃｒｎｏ－：巧Ｅｎｄｉｌ．２００９，１６０（４）５６７８．１３ＧｕｎｎａｒｓｄｏｔｔｉｒＪＳｔｅｈａｎｓｓｏｎＯＣｎａｔｔｉｎｉｕｓＳ巧ａｌ．Ｒｉｓｋｏｆｌａｃｅｎｔａｌ［］，ｐ，ｇ，ｐ－ｍｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｄｉｓｏｒｄｅｒｓａｆｔｅｒｒｉｏｒｍｉｓｃａｒｒｉａｅｓ：ａｏｉｉｌａｔｉｏｎｂａｓｅｄｓｔｕｄ．ＡＪＯｂｓｔｅｔｐｇｐｐｙＧ２－ｙｎｅｃｏｌ．２０１４１１ｌ：３４．ｅｌ８．，（）［１４］陈洁林海建，潘光堂，等．利用深度测序技术检测玉米根系和叶片中已知，－的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ？遗传？２０１０３２１１：１１乃１１８６．，（＾）１５ＭａｒｕｌｉｅｓＭＥｈｏｌｍＭＡｌｔｍａｎＷＥｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅｓｅｕｅｎｃｉｎｉｎ［］ｇ，ｇ，，ｑｇ＊－ｍ－ｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｅｄｈｉｈｄｅｎｓｉｔｉｃｏｌｉｔｒｅｉｅａｃｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２００５４３７７０巧：３７６３８０．ｇｙｐ，（）－［１６］ＳｍｉｔｈＤＲｕｉｎｌａｎＡＰｅｃｋｈａｍＨＥｅｔａｌ．ＲａｉｄｗｈｏｌｅｅｎｏｍｅｍｕｔａｔｉｏｎａｌｊＱ氏，ｐｇｒｏｆｎｕｓｎｎｅｘ－ｎｅｒａｎｕｅｎｎｎｏｅｓｅｎｏｍｅｅｓｅａｒｃｐｉｌｉｇｉｇｔｅｔｉｏｓｅｃｉｔｅｃｈｌｏｉ．ＧＲｈ．２００８ｇｑｇｇ，巧—１０：１６３８１６４２．（）－－１７ＲｕｂＪＧＪａｎＣＰｌａｅｒＣ巧ａｌ．Ｌａｒｅｓｃａｌｅｓｅｕｅｎｃｉｎｒｅｖｅａｌｓ２１ＵＲＮＡＳａｎｄ［］ｙ，，ｙ，ｇｑｇａｄｄｉｔｉｏ打ａｌｍｉｃｒｏＲＮＡｓａｎｄｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｓｉＲＮＡｓｉｎＣ．ｅｌｅｇａｎｓ．Ｃｅｌｌ．２００６１２７：，（巧－１１９３１２０７．１ｏｒｉｎｏＳＫｏｎｄｏＴＳａｓａｋｉＫｅｔａｌ．Ｍｉｌｄｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｈｅａｔｓｈｏｃｋ［巧Ｍ，，，ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｉｎｓｕｌｉｒｉＫｓｉｓｔａｎｃｅｖｉａｅｎｈａｎｃｅｄｉｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＰＬｏＳＯＮＥ．２０Ｇ８，３。２）：ｅ４０６８．巧－－ＭｅｄＦｅｎＢＣｈｅｎＳＭｃＡｒｔｈｕｒＫｅｔａｌ．ｍｉ民１４６ａｉａｔｅｄｅｘｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ［］ｇ，，，ｒｏｅ－ｔｉｎｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｈｒｏｎｉｃ化ａｂｅｔｅｓｃｏｍｌｉａｔｉｏｎ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ；．２０１１６０：２９７５２９８４．ｐｐｐ，ｉ０Ｋｅｅｃｅｎｎａｅａｌｍｉ－ＣＯ打ｒｉｂｕｅｋｉｎｎｓｄｉｓｅａｓｅ口ｉｍＷ，ＬＹＭＫＮＤｔ．ｎ１２６ｔｔｓ化Ｐａｒｓｏ］，，－ｂｄｓｒｅｕ－ｙｙｌａｔｉｎｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ／ｈｏｓｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ３ｋｉｎａｓｅｓｉｎａｌｉｎ．ｇｇｇｐｐｇｇｅｕｒｏｂ－ｉｏｌｉｎ：ＮＡｇｇ．２０１４３５７１７１２１７２１．，（）－－ｅｍａｎｄｅｚａａｄｈＭａｒｔ－ｒｏｎｅｕＦＴｗｉｎｎＤＳｌＡｌｆｒｉＭＺｌｉｎＧｒｔＭＳｅｔａｌ．Ｄｏｗｎｒｅｌ口。，，，ｇａ－－－ｔｉｏｎｏｆＩＲＳ１ｉｎａｄｉｐｏ化巧ｓｓｕｅｏｆｏｆｓｐｒｉｎｏｆｏｂｅｓｅｍｉｃｅｉｓｒｏｒａｍｍｅｄｃｅｌｌａｕｔｏｇｐｇｏｕ－ｃｎａｃｅａｂ－ｎｏｍｏｕｓ：ｌｔｈｒｈｏｓｔｔｒａｎｓｒｉｔｉｏｌｍｅｈａｎｉｓｍｓ．ＭｏｌＭｔ．２０１４３３２５３３３．ｙｇｐｐ，口）２２ＹａｎＬ－－［ＷｉａｎＪＦｅｎｅｔａｌ．ＧｅｎｏｍｅｗｉｄｅｍｉＲＮＡｒｏｆｉｌｉｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎ］ｇ，，ｇ乂ｐｇ５９ 第二部分妊娠期搪尿病患者胎蟲组穀ｍｉＲＮＡ差异表达谱分析－ＴｏｘＢ１ｉｎｄｕｃｅｄｈｅａｔｉｃｉｎｕｒｕｓｉｎｄｅｅｓｅｕｅｎｃｉｎ．ｉｃｏｌＬｅｔｔ．２０１４２２６２：ｐｊｙｇｐｑｇ，（）１４０－４９１．２３ＫｉｉｙｕＨＫｉｎＴ：ｉｈｍｆｏｒｕｔｉｎ，ＡｓａｉＫ．Ｒｆｏｌｄａｎｅｘａｃｔａｌｇｏｒｔｃｏｍｌｏｃａｌｂａｓｅ［］，ｐｇａ－ｉｒｉｎｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００８２４：；３６７３７３．ｐｇ，口）ｐ２４ＺｕｋｅｒＭ．Ｍｆｏｌｄｗｅｂｓｅｒｖｅｒｆｏｒｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｆｏｌｄｉｎａｎｄｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ［］ｇｏｎｅｃｃｓｅｓ－ｒｅｄｉｃｔｉｕｃ；．ＮｌｉＡｉｄＲ．２００３３１１３３４０６３４１５．ｐ，（）６０ 博壬学位论文第Ｈ部分ｍｉＲＮＡ差异表迭结果的验证和鞭基因的预测及功能分析利用ｍｉｃｒｏＲＮＡ高通量测序，我们初步筛选出了ｍｉＲＮＡｓ在ＧＤＭ的差异－ｍ－－表达谱，分析发现了１３８个已知ｍｉＲＮＡｓ表达显著上调，包括ｈｓａｉＲ５４８ａｍ５ｐ、－－－－ｍ－％－、ｓａ－ｍ－－、ｍｉＲ－、－ｍｉＲ－ｈｓａｉＲ５ｈｉＲ：３７２５ｐｈｓａ３７４ａ５ｐｈｓａ１２７７５ｐ－－－ｈｓａ－ｍｉＲ－８８９３１６ｍｉＲＮＡｈｓａｍｉＲｌ：２６９、ｐ等；个ｓ明显表达下调，如ａ－－－ｍ－ｈｓａｍｉＲｓａ－ｍｉＲ－ｅａｈｓａｉＲ１２４６、６的ａ、ｈ７７０４等；另外，Ｍｉｒｐ软件分析预测出２７种ｍｉＲＮＡ，其中有９种新ｍｉＲＮＡ表迭明显上调、６种新ｍｉＲＮＡ表达明显下调、４种新ｍｉＲＮＡ表达在对照和ＧＤＭ中无明显差别。尽管测序检测ｍｉＲＮＡ通量离、可测动力学范围较宽、检测时间较短并且是检测基因组内特异性ｍｉＲＮＡ表这及调控水平改变最有效的手段，但是这种方法也有它的局限性：错。误率随着读长增加而累积，需要对其结果进行验证ＰＣＲＲｅａ－－实时定量ｌＴｉｍｅｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ，ＲＴＰＣＲ是在ＰＣＲ指数扩増期（Ｑｑ）间通过连续监测每次循环中巧光信号强弱的变化来即时测定将异性产物的量，并据此推断特定模板ＤＮＡ初始量。该技术利用巧光信号积累实时监测整个ＰＣＲ一＂＂ｃｅｈｒｅｓｈｏｌｄＣ进程，ｌｔ，ｔ），使每个循环变得可见最后通过循环闽值（Ｃｙ和标准曲线对样品中ＤＮＡ／ｃＤＮＡ的起始浓度进行定量。目前己被广泛应用于分子生物学研究的各个领域。预测及发现ｍｉＲＮＡ的祀基因是研究ｍｉＲＮＡ功能及后续研究的基础，ｍｉＲＮＡ及其報ｍＲＮＡ之间的互补配对具有极高的保守性，利用生物信息学代替筛选铅基因的传统方法既可获得大量候选範基因还有很好的目的性。因此，生物信息学成为ｍｉＲＮＡ祀基因预测的首选方法。本部分研究采用高灵敏、高特异性的、检测范围宽的实时萊光定量ＰＣＲ方法对ｍｉｃｒｏＲＮＡ高通量测序结果验证，利用生物信息学预测差异表达ｍｉＲＮＡ的祀基因并分析其功能。１材料６１ 第王部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和喪基因的顽测及功能分析１１．研究对象标本取材与保存同第一部分。１．２主要实验仪器及试剂１．２１．、实验仪器一－Ｒｅａ－ｉｍｅ（ａｄｌＴＰＣＲ仪ＢｉｏＲＣＦＸ９６），其余同第部分。２试剂ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｔＩＩ１ｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡ凸也ｅｓｉｓＫｉｔ（日本ＴａＫａＲａ公司）、ｐ巧ｍｉＳｃｒｉｐｔＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲ拉ｔ（日本ＴａＫａＲａ公司）、弓Ｉ物由伯信生物科技有限公司设计并由吉格生物公司合成。２方法２．１总ＲＮＡ提取一同第部分。２－．２ＲＴＰＣＲｑ２－２．１ｍｉＲＮＡ逆转录逆转录步骤参考ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＩＩ１ｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ拉ｔ（Ｄ６２１０Ａ）试剂盒说明进行：１）在Ｍｉｃｒｏｔｕｂｅ中配制下列混合液。３－表１逆转录反应体系Ｔａｂ－ｌｅ３１ｍｉＲＮＡｓｃｒｉｔｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｍｉｘｐｐ试剂体积如１）－ｍ－ｉＳｃｒｉｐｔｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｍａｓｔｅｒｍｉｘ１（０．４２）ｍｉＳｃｒｉｐｔＲＴＢｕｆｆｅｒ４ｔｅｍｅｌｔｅＲＮＡｌｕｐｇＲｎａｓｅＦｒｅｅｄＨ２０Ｕ化２０ｊ１ｐ｜°２）在３７Ｃ下解育６０ｍｉｎ。。３）在化Ｃ下解育５ｍｉｎ＂灭活ｍｉＳｃｒｉｐｔＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅＭｉｘ。°４Ｒｃ－Ｃ保存）进行ＰＣ，剰余ＤＮＡ２０。拍 博去学位论文２．２．２ｍｉＲＮＡ实时定量ＰＣＲ引物Ｉ根据目的基因的种属及名称，在ＮＣＢ数据库查询参考核昔酸序列，采用ｅｒ０设ｅａ－Ｐｒｉｍ３．计ＲｌＴｉｍｅＰＣＲ弓顺，引物序列经ＮＣＢＩｎＢｌａｓｔ比对无非特异性ＲＴ－ＰＣＲ实验。扩増，用于ｑ表３－２实验内参基因及目的基因引物序列－Ｔａｂ－ｌｅ３２ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｒｉｒｆｔａｒｅｔｅｎｅｍｅｏｐｇｇ’，ＧｅｎｅＰｒｉｍｅｒＳｅｕｅｎｃｅ（５ｔｏ３）ｑＵ６ＣＴＣＧＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣＧＴｈｓａ－－－ｉｎｉＲ５４８ａｍ５ＡＡＡＡＧＴＡＡＴＴＧＣＧＧＴＴＴＴＴＧＣＣｐ－ｍ－－ｈｓａｉＲ９５５ｐＴＣＡＡＴＡＡＡＴＧＴＣＴＧＴＴＧＡＡＴＴ－ｈｓａ－ｍｉＲ１２４６ＡＡＴＧＧＡＴＴＴＴＴＧＧＡＧＣＡＧＧ－ｍ－ｈｓａｉＲ１２６９ａＣＴＧＧＡＣＴＧＡＧＣＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧ２．２．３实时定量ＰＣＲ使用ＴａＫａＲａ公司的试剂盒，反应体系的配制，反应参数参考ＴａＫａＲａＴＭＳＹＢＲ？ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＩＩＰｅｒｆｅｃｔ艮ｅａｌＴｉｍｅ试剂盒说明进行，Ｗ对照组和（）ＧＤＭｃＤＮＡ为ＲＮＵ６－２ＤＮＡ胎盘组织的模板，设为内参照、无酶水代嘗ｃ的－－－ａ－、－ｍ－－、ｈｓ－、阴性组为平行对照，检测ｈｓｍｉＲ５４８ａｍ５ｐｈｓａｉＲ９５５ｐａｍｉＲ１２４６－－－ｍｈｓａｉＲ１２６９ａ。ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ的扩增曲线和融解曲线应用ＢｉｏＲａｄＣＦＸ９６民ｅａ－ｅｌＴｉｍＰＣＲＳ巧ｅｍ的操作方法进行。ｙ３－３－表ＲＴＰＣＲ反应体系口０山）－Ｔａｂｅ－ｒｅｉｏｉｎｍｘｌ３３ＲＴＰＣＲａｃｔｉ试剂体积（山）ｑａｎｔｉＴｅｃｔＳＹＢＲｇｒｅｅｎｍａｓ化ｒｍｉｘ（２ｘ）５ｕｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｉｍｅｒ（１０ｘＭ）１｜ｍｉＲＮＡＰｒｉｍｅｒ（ｌＯＭ）１ｐｃＤＮＡ模板１ｄＨ２０２Ｔｏｔａｌ１０６３ ｍＲＮＡ第互部分ｉ差异表达结果的验证和耗基因的预测及功能分析注：反应液配制在冰上进行－ｅａ－ＢｉｏＲａｄＣＦＸ９６ＲｌＴｉｍｅＰＧＲ扩增标准程序参数如下；°Ｃ起始激９５．０活ｌＯｍｉｎ１个循环，；°９５．０Ｃ１０ｓ变性，’６０．０Ｃ退火，２０ｓ‘７２Ｃ延伸￣。．０，３化扩増２４４个循环；进行一一仪器设定在个循环变性期结束后，自动记录上个循环最后１０％时间的巧光值一，Ｗ此代表上个循环结束时的扩增产物量。当所有反应完成，可得到各个标本的萊光曲线，软件将自动分析数据、调整巧光曲线的基线，设定阔值（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）。每个反应管的巧光信号达到设定阔值时所经历的扩増循环数称一为Ｃｔ值。每次反应均设阴性平行对照组。实验重复Ｈ次。°‘°７２一溶解曲线．０Ｃ到９４．０Ｃ０．４Ｃ递增，每０．５ｓ读，Ｗ次数据，绘制温度与巧光值关系曲线。本实验采用法分析目的基因在对照组和ＧＤＭ组的差异表达。该方法Ｗ内参基因为参照系，分别获得（对照组和病例组）目标基因的Ｃｔ值和（对照ＡＡｎ－＝组和病例组）内参基因的Ｃｔ值，计算ｊ。计算公式ＡＡＣｔ（ＧＤＭ组目标：－－对照组目标基因Ｃ－基因Ｃｔ值ｔ值）（ＧＤＭ组内参基因Ｃｔ值对照组内参基因Ｑ值）。２３祀基因预测及功能分析ｍｉＲＮＡ的祀基因的寻找主要通过利用生物信息学方法和生物学实验方法。将生物信息学与生物实验相结合来寻找範基因可Ｗ很大提高准确率。生物信息学方法主要是利用某种算法对祀基因样本进行评分及筛选。虽然预测方法各有不同一定规律性但由于ｍｉＲＮＡ和範基因间的作用具有：ｍｉＲＮＡ与其祀位点，的互补性ｍｉＲＮＡ靴位点在不－ｍＲＮＡ巧链之间；同物种之间的保守性；ｍｉＲＮＡ二’的热稳定性；ｍｉＲＮＡ祀位点处不应有复杂级结构；ｍｉＲＮＡ５端与鞭基因的’Ｍ结合能力强于３端。本实验利用对ｉｒｅａｐ预测出的ｍｉＲＮＡ进行帮基因预测，６４ 博击学位论文得到可预测出範基因的ｍｉＲＮＡ数量Ｗ及这些ｍｉＲＮＡ的预测祀基因数量。为了降低祀基因预测结果的假阳性，我们同时使用了ｍｉＲａｎｄａ，ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ，ＭｉｒｅａｐＨ个软件，并取Ｈ个结果的交集作为祀基因预测结果。参照Ａｌｌｅｎ等人２００５年发表于Ｃｅｌｌ，Ｗ及Ｓｃｈｗａｂ等人２００５年发表于ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＣｅｌｌ的相关文献我们使用如下规则进行ｍｉＲＮＡ的祀基因预测；（１）小ＲＮＡ与靴基因间的错配不－Ｕ配对认为０ｍ得超过４个（Ｇ．５个错配２ｉＲＮＡ／）；（）在祀基因复合体中不得有超’过２处发生相邻位点的错配；（３）在ｍｉＲＮＡ／祀基因复合体中，从ｍｉＲＮＡ的５－４ｉ／端起第２１２个位点不得有相邻位点都发生错配；（）ｍＲＮＡ｜Ｅ基因复合体的第’－ｍ１０１１个位点不得发生错配例在ｉＲＮＡ／靴基因复合体中，从ｍｉＲＮＡ的５端－ｍ起第１１２个位点不得有超过２．５个错配６ｉＲＮＡ／；（）祀基因复合体的最低自由能（ＭＦ巧应不小于该ｍｉＲＮＡ与其最佳互补体结合时ＭＦＥ的７５％。Ｇ一＾ｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙ（基因本体论，简称ＧＯ）是国际标准化的基因功能分一ｃｏｎｏｅｄｖｏｃａｂｕ（ｔｒｌｌｌａｒ）类体系，提供了套动态更新的标准词汇表ｙ来全面描ｏｌｏ述生物体中基因和基因产物的属性。ＧＯ总共有Ｈ个ｏｎｔｇｙ，分别描述基因的ｍｏｌｅｃｕａｒｍｃｏｎ、ｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｏｎｅｎ、分子功能（ｌｆｉｔｉ）所处的细胞位置（ｐｔ）参与的生物过程（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｏｃｅｓｓ）。ＧＯ功能分析针对的是己知的ｍｉＲＮＡ的候ｐ＂＂选祀基因下简称候选祀基因）。该分析可Ｗ提供与参考基因比较后，在候选鞭基因中显著富集的ＧＯ功能条目，并筛选出候选祀基因与哪些生物学功能显著相关。该分析首先把所有候选祀基因向ＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙ数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ／）的各个ｔｅｒｍ映射，计算映射到每个ｔｅｒｍ的祀基因数目，然后应用超几何检验，找出与整个参考基因背景相比，在候选祀基因中显著富集的ＧＯ条目：，其计算公式为山Ｊ戶＝－ｉｓｙｎ、＞６５ 第王部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和拓基因的预测及功能分析其中，Ｎ为所有基因中具有ＧＯ注释的基因数目；ｎ为Ｎ中被预测为候选祀基因的数目；Ｍ为所有基因中注释为某特定ＧＯｔｅｒｍ的基因数目；ｍ为注释为某ｅｒｍ－ｖａ特定ＧＯｔ的候选範基因数目。计算得到的ｐｌｕｅ通过Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ校正之后，ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ－ｖａｕｅｒｍＷｌ凶）．０５为闽值，满足此条件的ＧＯｔ定义为在候选铅基因ｐ中显著富集的ＧＯｔｅｒｍ。通过ＧＯ功能显著性富集分析能确定候选祀基因行使的主要生物学功能。一（和ＧＯ分析样，ＫＥＧＧＫｏｔｏＥｎｃｃｌｏｅｄｉａｏｆＧｅｎｅｓａｎｄＧｅｎｏｍｅｓｙｙｐ，京都基因与基因组百科全书）通路分析针对的也是候选祀基因。在生物体内，不同一基因相互协调行使其生物学功能，基于ｐａｔｈｗａｙ的分析有助于更进步了解基Ｗ因的生物学功能。ＫＥＧＧ是有关通路的主要公共数据库，通路显著性富集分，析ＷＫＥＧＧ中的通路为单位，应用超几何检验找出与整个参考基因相比较在候选祀基因中显著性富集的通路。该分析的计算公式同ＧＯ分析，在送里Ｎ为所有基因中具有通路注释的基因数目；ｎ为Ｎ中的候选祀基因的数目；Ｍ为所有基因中注释为某特定通路的基因数目；ｍ为注释为该特定通路的候选祀基因数目。通过通路显著性富集分析能确定候选祀基因参与的最主要生化代谢途径和信号转导途径。筛选ＧＯ及ＫＥＧＧ显著性的标准是戶＜０．０５、假阳性率（Ｆａｌｓｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｒａｔｅ，ＦＤＲ）＜０．０５。２．３统计分析－－ＲａｄＣＦＸ９６Ｒｅａ－运用ＢｉｏｌＴｉｍｅＰＣＲ仪配套的ＢｉｏＲａｄＣＦＸＭａｎａｇｅｒ‘ＡＡａＳｏｆｔｗａｒｅｌ．６数据分析软件进行分析，且采用２法来计算目标基因的表达量。采用ＳＰＳＳ１１．０统计软件储存和分析数据。计量资料Ｗ均数±标准差；±ｓ表示。（）＜０每个ｍｉＲＮＡ对应的２组样本采用独立样本Ｔ检验进行分析．０５为差异有，Ｐ统计学意义。６６ 博去学位论文３结果３１ＲＴ－ＰＣＲ扩增ｍＲＮＡ的特异性．ｑｉＲＴ－ＰＣ民Ｕ６－－４８ａｍ－口－－ｑ实验扩增、ｈｓａｍｉＲ５５ｐ矛ｈｓａｍｉＲ１２４６等得溶解曲线、－－－扩增曲线，分别见图３１、图３２和图３３。扩增曲线均可分为巧光背景信号阶一段－、扩增期和平台期，并且溶解曲线为单峰，可见ＲＴＰＣＴ扩增效果好、无引物二聚体及其它非特异性扩增。ＭｅｌｔＣｕｒｖｅＭｅｌｔＰｅａｋ，功。＇’…．：；／＼；………誦＇；ｉ＇＼，加ｉ＾ｊＩ勝…产一＼；；Ｖ－？？？？－？？＇？＇？＇？？；￣———￣Ｉ￣￣Ｉ￣￣Ｉ—Ｉ—＂—￣一一—一＿Ｉ。ｒｒＩＩＩＩ一ＩＩｉＩＩ￣—Ｉ？ＩＩＶｉ■ＶｉＶＩＩｉ＞Ｘ，，ｔＩｊｉ７０巧的妨如７日巧８０￥５９０Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，Ｃｅｌｓ山ａｒａｔｕｒｅｉＴｅｍｐｅ，ＣｅＵｕｉＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ■■■？？？．．．．．？■？？Ｉ４１Ｉ１．２。。。…；＇■’１５００：Ｉ警－’？１０００丽；．－－－？－？■？Ｍ／ＳＯＤ０１０２０３０４０Ｃｙｃｌｅｓ图３－ＤＮＡ为模板ＲＴ－ＰＣＲ１＾＾样品ｃ，ｑ扩增内参基因１］６的溶解曲线和定量曲线。Ｆｒｅ３－１ＭｔｔｅＵｉｇｕｅｌｉｎｇｃｕｒｖｅａｎｄａｍｌｉｆｉｃａｉｏｉ打ｃｕｒｖｅｏｆｒｅｆｒｅｎｃｅ６ｐ６７ 第互部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验巧和把基因的预测及功能分析ＭｅｌｔＰａｋｅＭｅｔｒｅｔＣｕｖ￣￣￣￣＂＂＂￣￣￣＇＇，￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣＇＇＇＇＇＇＇＇＇＇＇＇＇■！■－？？■？？？＇－？？－－－？ｉ＾：６００Ａｆ１ｆ…＂０。……？：；ｇ感．．．．．＇＇…＂。＾：！槪３。。３５００ｉＩ；＇……＇２。。＇．…．．．．＇………．：．．：３０００：＼；／ＶＶＶ－■■■■■■■■－■．．■．．－２５００＇：．‘．ＴＶ■＾■！：；；；＼日ｊ１；；Ｉ８日８５的巧８０８５的巧ＴｅｍｅｒｌｓｉｕｓＴｅｍｒａｔｕｅ，ＣｅｔｕｒｅＣｌｓｉｐｐ＾，ｅｕｓＡｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ￣￣—＇＇＇＇＇＇＇＇＇１＇１＇＇＇ＩＩ！ｆ■？■：；１０－￣０＇．ＪＩＴＩＩＩＩＩ４＼ｉ２０４００１０３曰Ｃｙｃｌｅｓ－－－－－２ｃＤＮＡＲＴＰＣ反扩増目的基因ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５图３Ｗ样品为模板，ｑｐ的溶解曲线和定量曲线。－－－４５－２Ｍｔｃｕｒｖｅａ凸ｄａｍｌｉｆｉｃａｔｅｏｆｓａｍｉＲ５８ａｍ打ｇｕｒｅ３ｅｌｉｎｇｉｏｉｎｃｕｒｖｈｐｐＭＭＷｔｕｉｖｅｌｉＷＣ￣￣￣￣￣￣＂￣＇￣￣￣￣－丄＇．＇＇ｔ个；诚ｆ１．．．．５卵－：：ｉＭ！．．．￣１Ｉｚ■ｊ＼ｑｉ：＼＾￡Ｅ：肪抑巧叫巧９０巧助Ｔ抑ｅｎ化ｅＵｉｕｔＴ？ｍ＞ｅｒｔｕｒｅ．Ｃｅｌｓｉｕｓｐ扣Ｃ６８ 博去学位论文Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ？占．．■■Ｉ＇Ｉ？Ｉ■ＩＩＩＩｊ－－Ｉ－—ｎ０１０２０３０４０Ｃｙｃｌｅｓ－３３ｃＤＮＡＲＴ－ＰＣ民扩增目的基因ｈｓａ－ｍ－２４６图Ｗ样品为模板，ｑｉＲ１的溶解曲线和定量曲线－Ｍ－－巧ｇｕｒｅ３３ｅｌｔｉｎｇｃｕｒｖｅａ凸ｄａｍＵｆｉｃａｔｉｏｉｎｃｕｒｖｅｏｆｈｓａｍｉＲ１２４６ｐ３－．２ＲＴＰＣＲ验证ＧＤＭ和正常妊娠妇女胎盘ｍＲＮＡｑｉ差异表达一为了进步对高通量测序结果进行验证，从测序得到的１５４个差异表达的ｍｉＲＮＡ中选取了４个表达差异较高但表达量较低的ｍｉＲＮＡ采用恃异引物、合－－ｍ－－－－－适的反应体系及条件进行ｑＲＴＰＣ民检测：ｈｓａｉＲ５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａｍｉＲ％５ｐ、ｓａ－Ｒ－２４６－－－－ｈｍｉ１、ｈｓａｍｉＲ１２６９ａ，内参基因使用Ｕ６ｓｎＲＮＡ。结果表明ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ－５ａ－ｍ－９５－５ＧＤＭ组表达量明显高于对照组和ｈｓｉＲｐｐ在，差异有统计学＝－＝－＝－－意义（分别为ｔ１０，片．ｔ１．，尸ｈｓａｍＲ１２４、．２０８００００４８８００．０００）；ｉ６；而－ｍ－１２ＤＭｈｓａｉＲ６９ａ在Ｇ组的表达量明显低于对照组，差异有统计学意义（分别＝一＝＝为ｔ１２．６５３，护０．０００ｔ８．９７３，戶０．０００）。与高通量测序得到的结果致（表；３－４）。６９ 第王部分ｍｉＲＭ差异表达结果的验证和把基因的预测及功能分析－４ＲＴ－ＰＣＲＧＤＭ及对照组胎盘组织４种ｍ表３ｑ检测ｉＲＮＡ表达水平（；±ｓ）比较Ｔ－ＲＴ－ＰＣＲｍａｂｌｅ３４Ｃｏｍａｒｉｓｏｎｏｆ４ｍｉＲＮＡｓａｆｔｅｒｂｅｔｗｅｅｎｎｏｒａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｐｑＧＤＭｒｏｕｇｐ分網检验计呈指标对照组ＧＤＭ组＾ｐ值ｔ值＝＝（ｎ３０）（ｎ３０）－ｍ－－±－ｈｓａｉＲ５４８ａｍ５ｐｘ±ｓ１．１２０．４１３．３紅１．１３１０．２０８０．０００－－－－１ｈｉＲ９５５ｘ±ｓ．２１主０．６１４５０±．４．ｓａｍｐ．１０４１８８００．０００－－±０ｈｓａ１２４６无±５２．７９±０．８１０．８３．２５１２．６５３０ｍｉＲ．０００ｈｓａ－ｍｉ民－１２６９ａｘ＋ｓ１．９５主０．７７０．５壯０．３０８．９７３０．０００＊计量资料用两独豆样本ｔ检ｉ。３．３ｍｉＲＮＡｓ的範基因预测一条基因经过内含子的不同剪切可Ｗ产生一个或者多个可供编码蛋白质的成熟ｍＲＮＡ，因此，ｍｉＲＮＡ的某个範基因可能会有多个位点。对ＧＤＭ和对照组的已知及新的ｍｉＲＮＡ进行靴基因预测，结果显示ＧＤＭ组可预测出帮基因的ｍｉＲＮＡ数量Ｗ及这些ｍｉＲＮＡ的预测祀基因位点数量均要多于对照组，提示发生ＧＤＭ时有许多ｍｉＲＮＡ表达异常并且有ｍｉＲＮＡ结合调控点发生改变。表３－５己知ｍｓｉＲＮＡ祀基因位点预测结果Ｔａｂ－Ｔｌｅ３５ａｒｅｔｅｎｅａｎｄｌｏｃｉｃｄｉｃｔｉｏｎ纪ｒＫｃｏｎｏｉｚｅｄｍｉＲＮＡｓｇｇｐｇ￣範基因数量靴基因位点数量ＩｍＲｎＮ、ＴＡ．数解量ＩｉｊＴＩ（ＥＮＳＧ）（ＥＮＳ）对照组１０３０７０３％２７０３８７１ＧＤＭ组１０９７７０５２３２９５１９２１７０ 博去学位论文表３－６新ｍｉＲＮＡ祀基因位点预测结果Ｔａｂ－ｌｅ３５ＴａｒｅｔｅｎｅａｎｄｌｏｃｉｒｅｄｉｃｔｉｏｎｆｏｒｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓｇｇｐ￣￣觀基因数量郎基因位点数量ＩｍｉＲＮＡ数量（ＥＮＳＧ）（ＥＮＳＴ）对照组２４３巧８４５７１８９ＧＤＭ组２４３２１４７巧５４４所有用Ｍｉｒｅａｐ预测出的新ｍｉＲＮＡ中，有２４种可Ｗ预测到報基因。由于预－－ｍ－测到ｍｉＲＮＡｓ祀基因的数量庞大，我们只挑选了ｈｓａｉＲ３７２５ｐ、－－－－－－－－ｈｓａｍｉＲ－５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ％５ｐ、ｎｏｖｅｌｍｉｒ２４、ｎｏｖｄｍｉｒ２２等差异表达最显著的８种已知ｍｉＲＮＡ和７种新ｍｉＲＮＡ的铅基因分别进行总结。－－－－－－－ｈｓａｍ－ｍ、ｈ－ｍ－、ｈｓａｍｉＲｎｏｖｅｌｍｉｒｌｍｉｒｉＲ５４８ａｓａｉＲ３７２３７４巧２２、ｎｏｖｅ１２等所－－预测到的帮基因有共同的部分（３７和３８）。－ｍ表３７８种差异表达己知ｉＲＮＡ範基因统计Ｔａｂ－ｔａｌｅ３７Ｔａｒｅｔｅｎｅｏｆ８ｄｉｆｅｒｅｎｉｌｌｅｘｒｅｓ化ｄｍｉＲＮＡｓｇｇｙｐ報基因位点ＩＩｍｉＲＮＡ长ｍｉＲＮＡ名称ｍｉＲＮＡ序列（ＥＮＳＴ）数祀基因度（ｎｔ）旦里稱脂醜化醇３激酶调节亚单位２，’３ＣＣＵＣＡＡＡＵＧ锋指蛋白，鸟嘿岭核巧酸结合蛋－－ｍ－ｈｓａｉＲ３７２ＵＧＧＡＧＣＡＣＵＡ２３３４９１白，ｍＲＮＡ前体加工因％Ａ，低５Ｐ’ＵＵＣＵ５８密度脂蛋白受体相关蛋白，葡萄糖６磯酸酶，热休克蛋白８等ａＤＰ－核糖基化样因子６相互作用＾＾ＡＡ．ＡＡＡＡｒＴＴｒｒ｜＾ＡＡＡＡＧＵＡＡＵｈｓａ－ｍ－５４８ａｉＲＵＧＣＧＧＵＵＵＵＵ２２６４９１蛋白，麟脂醜肌醇３激酶调节亚－ｍ５，ｐ＾ＧＣＣ５单位１，绵胞周期蛋白Ｇ２，泛素７１ 第王部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和捉基因的预测及功能分析结合酶Ｅ２Ａ，转录因子Ａ，化１１相互作用蛋白，溶质载体家族２（促进葡萄糖转运体）等膜岛素样生长因子２受体，溶质载体家族２，非受体型蛋白酪氨酸’３ＵＣＡＡＵＡＡＡＵ－ｍ－－ｈｓａｉＲ９５５憐酸酶１，ＴＲＡＰ家庭成员相关的ＧＵＣＵＧＵＵＧＡＡ２１７０３９’ＮＦｋＢ激ＳｆＰＵＵ，Ｇ￥自偶联受体５－－６３－，磯脂醜肌醇４磯酸３激酶，小窝蛋白２等脂连素受体１，转化生长因子Ｐ受体ＩＩ，酱醇载体蛋白２，肿瘤坏３＾ＡＡＵＣＵＣＡＧｈｓａ－ｍ－ｉＲ２１６ａ死因子受体超家族成员１ＩＢ，ＣＵＧＧＣＡＡＣＵＧ２２３２８１－５ｐＩＫＢＫＢ相互作用蛋白，多礙酸肌ＵＧＡ，５醇－４－憐酸酶己爾酶２，组蛋白脱等微管相关蛋白ＲＰ／ＥＢ家族成员１，热休克蛋白的７０ｋＤａ家族成员’３ＡＣＵＣＡＡＡＣＵｓａ－ｍ－ｈｉＲ３７１ａ１３，血小板源性生长因子Ｄ，周ＧＵＧＧＧＧＧＣＡＣ２０２１９３－５期蛋白依赖性激酶３ｐ１，甘露糖结，Ｕ５合凝集素１，ＩＩ型电皮口控性钢通道，ＬＤＬ受体相关蛋白等ｃＡＭＰ反应元件结合蛋白样２，＇３ＡＡＵＧＧＡＵＵＵＵＤＰ葡萄糖糖蛋白葡萄糖基转移－ｍ－ｈｓａｉＲ１２４６ＵＵＧＧＡＧＣＡＧＧ１９１７３７酶１，巧指蛋白４３１，全细胞色素，５Ｃ合酶，胆碱激酶（Ｘ，ａ型蛋白酶！Ｉ１１７２ 博去学位论文体亚基，丝氨酸／苏氨酸／酪氨酸相互作用蛋白等１膜岛素样生长因子，膜岛素样生’３ＣＵＧＧＡＣＵＧＡ长因子结合蛋白５，原巧粘附蛋白ｈｓａ－－ｎｄＲ１２巧ＧＣＣＧＵＧＣＵＡＣ２３－１２１９Ｃ５ＲＮＡｙ，固醇去饱和酶，结合ａＵＧＧ’５基序单链相互作用蛋白３，ＳＯＧＡ家庭成员１等表３－８７种新ｍｉＲＮＡ報基因统计ｅ－８Ｔａｂｌ３Ｔａｒｇｅｔｅｎｅｏｆ７ｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓｇ祀基因位点ＩＩｍｉＲＮＡ长ｍｉＲＮＡ名称ｍｉＲＮＡ序列（ＥＮＳＴ）数祀基因度（ｎｔ）量膜岛素样多肤４，酸脱氨酶家族３，’３ＡＧＵＧＵＧＡＧＵ蛋白憐酸酶１，ｔｏｌｌ样受体８，－ｍ－ｎｏｖｅｌｉｒ２４ＧＵＧＵＧＵＧＵＧＵ２３１２８６ＲＥＲＧ／ＲＡＳ样调节因子Ｘ，丝／苏ＧＡＧＵ’５３８氨酸激酶，醜基辅酶Ａ硫酷酶等膜岛素受体，溶质载体家族１６，’３ＡＧＵＵＵＧＧＵＡ活化转录因子７，溶酶体ＶＯ亚基ｎｏｖｅ－ｍｒ－ｌｉ２２ＡＵＡＣＡＣＧＡＣＧ２１４６２６Ａ２，蛋白激酶Ｃ，肌醇多磯酸５’ＡＵ５憐酸酶Ｊ，受体型蛋白酪氨酸磯酸酶Ｍ等’３ＵＵＵＵＧＵＣＣＧＣＤ４，亮氨酸拉链转录调节因子ｎｏｖｅｌ－ｍｉｒ－１９２０１１９１ＵＧＧＡＵＣＧＵＣＵ１，磯酸化蛋白相关糖脂微结构域７３ 第互部分ｆｌｉＲＮＡ差异表达结果的遊池和把基因的顿测及功能分析Ｃ’５１氨酶ＡＩＶ，乳酸脱，胶原酶，内向整流钟通道亚家族Ｊ成员１３，血管内皮巧指蛋白１等膜岛素样生长因子结合蛋白５，溶质载体家族２，脂肪细胞特异的，３ＣＧＡＧＵＣＣＧＧ８－径基鸟嘿吟ＤＮＡ糖昔酶，过氧－ｎｏｖｅ－１７ＧＣＧＵＣＡＡＧＧＧ２３２２３５ｌｍｉｒ化物酶体增殖物激活受体５，泛素ＡＡＡＡ，５样修饰活化酶３，ｃｏｎｓｏｒｔｉｎ蛋白，Ｅ选择素等ＭＡＰＫＫ５，类硫氧还蛋白１，孕３＾ＧＡＧＡＣＧＵＣ丽受体膜组件１，巧调蛋白依赖性－ｎｏｖｅ－ｌｍｉｒ１５ＣＧＧＣＡＣＡＣＧＡ２３２２１４憐酸二醋酶１Ｂ，蛋白酶体抑制因ＡＡＣＧ’５子１，２３ｋｄ突触相关蛋白，１型半腕氨酸双加氧酶等＇＾（Ｃ－Ｃ基序６趋化因子）配体２，，转位相关膜蛋白２，脂连素受体２，３ＵＵＵＣＵＡＣｉＵＣ；１ｎｏｖｅ－－糖皮质激素调节激酶，视黄醇脱ｌｍｉｒ１２ＧＣＵＧＣＧＧＡＧＡ２２％０了，３ｃｅｅ氨酶１，ＡＴＰ结合盒亚家族Ａ，５肌球蛋白Ｘ等葡萄糖６磯酸酶，ｐｉ半乳糖基转’３ＡＣＧＧＵＧＵＣＵ移酶４２，膜岛素样生长因子，瘦－ｎｏｖｅｍｉｒ－１１ｌ４ＣＡＣＡＡＣＧＡＡＣ２３１１素，生长因子受体结合蛋白０，ＧＵＵ’５泛素蛋白连接酶扮，整合素３６｜等７４ 博去学位论文３．４差异表达ｍｉＲＮＡｓ祀基因ＧＯ富集分析为了探讨ｍｉＲＮＡ通过範向作用于其報基因在ＧＤＭ时可能发挥的生物学功能，本实验对所有已知差异表达ｍｉＲＮＡ祀基因ＧＯ富集分析，结果显示，这些（囊泡、内体帮基因功能主要涉及细胞内物质转运通路、过氧化物酶体、离尔基体、内质网、离子通道）、体液调节、信号转导、营养物质代谢、外界刺激一的反应、细胞调亡等：第，这些基因可大致分为Ｗ下几类类为调控细胞增遺分化相关的基因，参与了细胞周期的调节、染色质的修饰、染色体的裂解、光受体细胞的分化和程序性细胞调亡等，如半化氨酸型内肤酶、Ｆａｓ活化的丝氨酸／苏氨酸蛋酶、核酸酶、组蛋白乙醜转移酶、ＲＮＡ聚合酶ＩＩ等。第二类为物、质代谢相关的基因：如金属离子转运、糖蛋白的生物合成核巧酸代谢、胆汁酸的生物合成、蛋白质的组装、氨基酸的代谢和ＲＮＡ转运及剪切相关的转运体。和代谢酶等第Ｈ类为各种信号转导因子相关的基因：如憐脂醜肌醇介导的信－姐信号通路号、ｗｎｔ信号通路、ＮＦｋａｐｐ、ＭＡＰＫ级联的调节、表皮生长因子－受体通路、转化生长因子Ｐ信号通路、ｔｏｌｌ受体、ＧＴＰ酶等。第四类为免疫反－应相关的基因：ＭＨＣＩ类受体、ＣＤ８、免疫球蛋白受体活性、趋化因子受体等。第五类为糖尿病密切相关的基因：包括膜岛素样生长因子、膀岛素激活受体、－－磯脂酶朋＞醇３激酶（ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ３ｋｉｎａｓｅ，ＰＩ３Ｋ）、非受体型蛋白酪氨酸ｒ－－磯酸酶Ｉ（ｏｔｅｉｎｔｒｏｓｉｎｅｈｏｓｈａｔａｓｅｎｏｎｒｅｃｅｔｏｒｔ１，ＰＴＰＮ１）销离ｐｙｐｐ，ｐｙｐｅ葡萄糖－－－磯酸酶ｌｕｃｏｓｅｓｈａａｓｅａｓｅ。子共转运体、葡萄糖６（ｇ６ｐｈｏｐｔＧ６Ｐ）等，对差异表达的新预测ｍｉＲＮＡ祀基因进行分析：，发现这些靴基因在细胞（成分分类中，大部分参与形成细胞内组分占８７．４％），其次是参与形成细胞〇器（６５．５／〇）；在分子功能上，绝大部分为分子结合（８３．３％），膜岛素（０．１０％）及膜岛素受体（０．３０％）占小部分，绝；在生物过程分类中大部分基因参与了生－、３９、物调节，其次是代谢过程，接下来是对則激的反应细胞之间的交流等（表－－。３１０及３１１）与膜岛素作用有关的基因有：电压口控性巧离通道ＫＱＴ样亚－－ｍｅｍｂｅｒ家族成员ｏｔａｓｓｉｕｍｖｏｌｔａｅａｔｅｄｃｈａｎｎｅｌ，ＫＱＴｌｉｋｅｓｕｂｆａｍｉｌ１）、１（ｐｇｇｙ，７５ 第王部分ｍＲＮＡ羞异表达結果的遊诚和把基因的预测泉功能分折受体型蛋白酪氨酸磯酸酶Ａ（ｒｏｔｅｉｎｔｒｏｓｉｎｅｈｏｓｈａｔａｓｅｒｅｃｅｔｏｒｔｅＡ）、ｐｙ，糖ｐｐｐｙｐ原瓣酸化酶（ｇｌｙｃｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ）、麟脂醜肌醇３激酶调节亚单位２－ｈｏｈｏ－ｓｉｔ、（ｓｉｎｏｓ扣ｄｅ３ｋｉｎａｓｅｒｅｕｌａｔｏｒｕｂｕｎ２，ＰＩＫ３Ｒ２）糖原合成酶激酶ｐｐ，ｇｙ３（ｇｌｙｃｏｇｅｎ巧ｎｔｈａｓｅｋｉｎａｓｅ３ａｌｐｈａ）、ＡＭＰ激活的蛋白激酶等。表３－９差异表达新ｍｉＲＮＡｓＧＯｃｏｍｏｎｅｎｔｓＩＥ基因ｐ富集分析Ｔａｂ－ｏｎｅｎｅｎｒｃｈｍｅｎｔｏｒ巧ｌｅ３９ＧＯｃｏｍｔｓｉｆｔａｒｅｎｅｏｆｅｒｅｎｔａｅｘｒｅｓｓｅｐｇ姐ｆｉｌｌｄｇｙｐｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓＧＯｃｏｍｐｏｎｅｎｔ条目Ｃｌｕｓｔｅｒ频率戶值＜〇？〇〇！细胞组分８７．４０％＜０．００１细胞器６５．５０％＜０．００１细胞浆５６．７０％＜０－００１膜系统４６．３０％＜０．００１细胞核３７．４０％＜〇％？〇〇！细胞外周组分２４．９０＜０’００１２．３０％细胞骨架１＜０－００１细胞核浆８．７０％Ｏ’ＯＯｌ细胞突起８．７０％＜０．００１内质网７．７０％Ｃｋｉｓｔｅｒ频：ＧＯ细胞定位相关基因所占的比例Ｐ值＜０．０５为显著率範基因中在；富集。巧 博去学位论文表３－ｉｆｕ１０差异表达新ｍＲＮＡｓ祀基因ＧＯｎｃｔｉｏｎ富集分析ａｂ－Ｔｌｅ３１０ＧＯｆｌｍｃｔｉｏｉｎｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｆｏｒｔａｒｇｅｔｅｎｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒ的ｓｅｄｇｙｐｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓＧＯ扣ｎｃｔｉｏｎ条目Ｃｌｕｓｔｅｒ频率户值分子结合８３．３０％＜０．００１蛋白质结合５９．００％＜０．００１＜３８．离子结合．４０％０００１３４％＜０．００１有机循环化合物结合．００杂环化合物结合３３．７０％＜０．００１核巧酸结合２０．８０％０．０１４２２＜ＤＮＡ合１４．０分子结．２０％００１０％０．０４１９７转移酶活性１２．６腺囑吟核巧酸结合１０．３０％０．０４４７９＜酶物质结合７．５０％０．００１〇＜受体结合７．００／〇０．００１序列特异性ＤＮＡ分子结合转录因子活＜０．００１６．９０％性蛋白质二聚化活性５．４０％＜０．００１＜０５．００１酶调节因子活性．３０％细胞骨架蛋白结合５．１０％＜０．００１５％＜０．００１脂质结合．００＜０３．００１蛋白结构域特异性结合．７０％＜０３－００１蛋白酪氨酸激酶活性．５０％＜Ｃｈｉｓｔｅｒ频率；帮基因中在ＧＯ生物功能相关基因所占的比例；Ｐ值０．０５为显著富集。７７ 第互部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和艇基因的预测及功能分析３－表１１差异表达新ｍｉＲＮＡｓ帶基因ＧＯｐｒｏｃｅｓｓ富集分析－ｒｏｅｅ巧ｅｎｒｉｃｈｍｅｎＴａｂｌｅ３１１ＧＯｔｆｏｒｔａｒｇｅｔｅｎｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｒｅ巧ｅｄｐｇｐｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓＧＯｒｏｃｅｓｓ条目Ｃｌｕｓｔｅｒ频率Ｐ值ｐ＜０．００１生物调节６０．３０％＜０５６．００１代谢过程．５０％＜０刺激反应４２．２０％．００１＜０３０．００１细胞通信．７０％８．００１发育过程２．６０％＜０信号转导２６．５０％＜０．００１氮化合物代谢调节２５．９０％＜０．００１＜０５．００１核昔酸化合物代谢调节２．６０％＜０解剖结构的发育２５．００１．５０％＜生物合成过程２５．３０％０．００１＜细胞分化１７．２０％０．００１＜大分子修饰１５．９０％０．００１细胞死亡调节８．３０％＜０．００１＜激酶活性调节４．５０％０．００１＜０蛋白酪氨酸跨膜受体信号过程４．００１．１０％＜０生长因子反应３．００１．９０％＜０分泌３．００１．５０％＜０凝血３．００１．００％Ｃ＜ｌｕｓｔｅｒ频率：帮基因中在ＧＯ生物过程相关基因所占的比例Ｐ值０．０５为显著；富集。７８ 博壬学位论文在妊娠搪尿病发生发展过程中一些显著富集的祀基因会作用于组织的葡萄糖代谢、应激反应、细胞内物质形成和转运、细胞增殖分化Ｗ及免疫反应等，而这些祀基因都是受ｍｉＲＮＡ调控的，因此我们推测ＧＤＭ发病过程中胎盘组织ｍｉＲＮＡｓ所帶向的基因表达调控可能是由上述多种生物学途径参与，这些生物学途径不仅仅对表达调控功能有作用，甚至导致细胞组织结构的变化。３．５差异表达ｍｉＲＮＡ的祀基因ＫＥＧＧ通路生物是一个完整的有机整体，基于ＫＥＧＧ通路分析能使我们对基因的功能的了解更加清楚透彻，并且整体性更好。ＫＥＧＧ通路分析中，ＧＤＭ胎盘组织差异表达的已知ｍｉＲＮＡ对应的範基因显著性富集的通路共有６８条。它们有：肌动蛋白细胞骨架的调节、局部细胞粘附、细胞內吞作用、巧离子信号通路、趋化因子信号通路、Ｗｎｔ信号通路、泛３－－素介导的蛋白水解、膜岛素信号通路、细胞调亡等（详见表１２，图３４和图－３５）。对差异表达的新ｍｉＲＮＡ对应的範基因ＫＥＧＧ通路富集分析显示，新ｍｉＲＮＡ鞭基因显著富集的通路有５０条，但是参与通路的祀基因数量明显少于已知ｍｉＲＮＡ。有３１条ＫＥＧＧ通路是与已知ｍｉＲＮＡ祀基因相同的通路，如肌动蛋白细胞骨架的调节、局部细胞粘附、细胞内吞作用、巧离子信号通路等，一另部分为其他通路如膜腺癌、ＶＥＧＦ信号通路、脂肪细胞因子信号通路和过－３－１３３６）。氧化物酶体增殖物激活受体信号通路等（见表，图－ｍ表３１２胎盘组织差异表达已知ｉＲＮＡ祀基因ＫＥＧＧ通路分析－ａｈｗａｎａｓＴａｂｌｅ３１２ＫＥＧＧｔａｓｌｉｓｆｏｒｔａｒ幻ｅｎ的ｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｐｙｙｇｇｙｐｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｍｉＲＮＡｓ範基因与祀基因与该通路该通路相通路Ｐ值通路相关的ＩＤ关的基因基因数目所占比例７９ 第王部分ｍｉＲＮＡ羞异表达结果的验征和始基因的预测及功能分析Ｒｅｕｌａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｎｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ＜０．００１ｋｏ０４８１０４６８２．２６％ｇＦｏｃａｌａｄｈｅｓｉｏｎ０．００７７２４ｋｏ０４５１０４５１２．１８％Ｅｎｄｏｃｔｏｓｉｓ０．０４１２８ｋｏ０４１４４４５１２．１８％ｙＣａｃｉｕｍｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａ０．００１４０２ｋｏ０４０２０４１８２．０２％ｌｇｇｐｙＣｈｅｍｏｋｉｎｅｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｙ０．０１３４９３ｋｏ０４０６２３５４１．７１％ｇｇｐＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇａｔｈｗａｙ０．０１１３３９ｋｏ０４３１０３４０１．６４％ｐＵｂｉｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｒｏｔｅｏｌｓｉｓ＜０．００１ｋｏ０４１２０３３１１．６０％ｑｐｙＩｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇａｔｈｗａｙ０．００７１２８ｋｏ０４９１０２７９１．３５％ｐＧｔａｍａｔｒｉｃｓｎａｓｅ＜０．００１ｋｏ０４７２４２６５１．２８％ｌｕｅｇｙｐ〇Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｍｉｇｒａｔｉｏｎ０．００６８４４ｋｏ０４６７０２％１．２５／〇Ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ０．００１０％ｋｏ０４２７０２５８１．２４％Ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ０．０１８３０９ｋｏ０４１１０２５７１．２４％ＧｎＲＨｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｙ＜０．００１ｋｏ０４９１２２２６１．０９％ｇｇｐＡｐｏｐｔｏｓｉｓ０．００１９８４ｋｏ０４２１０２２３１．０８％Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ０．０００４９４ｋｏ０４１４６１６００．７７％Ｖ－ｎ０．５４％ａｓｏｐｒｅｓｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｗａｔｅｒｒｅａｂｓｏｒｐｔｉｏ．００５４７２ｋｏ０４９６２１１１０－ｍＫＥＧＧ通路分表３１３ＧＤＭ胎盘组织差异表达新ｉＲＮＡ部分祀基因析Ｔａｂ３－１ｔａａｓｓｏｔａｅｔｅｎｅｓｏｆｌｅ３ＫＥＧＧａｈｗｓｉｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｅｘｒｅｓｓｅｄｎａｌｆｒｒｇｇｙｐｙｙｐｎｏｖｅｌｍｉＲＮＡｓ祀基因与郎基因与该该通路相通路Ｐ值通路阻通路相关的关的基因基因数目所占比例Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．０００４７６ｋｏ０４６６０１２３１．４５％Ａｄｈｅｒｅｎｓｕｎｃｔｉｏｎ＜０．００１ｋｏ０４５２０１１８１．３９％ｊ８０ 博壬学位论文Ａｄｉｐｏｃ；ｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔ；ｈｗ巧０．００１００８ｋｏ０４％０８５１．００％ｍＴＯ民ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａ化ｗａｙ０．０００８９２ｋｏ０５２１２８１０．９６％ＶＥＧＦｈｗｓｉｇｎａｌｉｎｇａｔａ０．０００８０５ｋｏ０４３７０７８０．９２％ｐｙＰＰＡ民ｓｉｎａｌｉｎａ化ｗａ０．０３７４２２ｋｏ０３３２０７６０．９０％ｇｇｐｙＴＧＦ－ｋｂｅ１．０３３２２：ａｓｉｎａｌｉｎａ化ｗａ０７ｏ０４３５０６５０７７％ｇｇｐｙ．Ｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎ比ｅｓｉｓ０．００４０７６ｋｏ０００６１１００．１２％ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＯＦＡＣＴＩＮＣＹＴＯＳＫＥＬＥＴＤＮＩＪ＇ｔｏＣ３ｉｅＭ〇＜ｄｃａｉ６ｃＣｈｅｎｗｔｅｆｅｆｔｒｔＫ。°甲甲；臘私＾—ＲＴＣＩＩＴＣｔｉ—［ＦＣＴｌｉＩＩＩＩ画￣靈犀严＿ＤｏｃＵ３Ｄ／＾ＩＰｌｌｌＲｃｌＧＥ＾｜｜｜ＩＩ｜）和＾ｙＩｌｉＩ：ＡｃｍｏｌｍｎｎａＤｉＣ幸ｐｙＡ／／！因－－極马去就／＼＼毎呈Ｄ７ＩＭ＾Ｉ］Ｍ＼Ｉ内ＩｆｌＩＩＩｌｉＩ＾千＾户＾１ｉｐ＾Ｉ５＊ｅｍ；＾齒ＪＳ赖Ｉ／，甲ＩＰＳＳＨＩＰ２ＩＩｊｊ宁ＩＪＬ营Ｊ八Ｉｄ＾＾＞ａｒｏｍｂｂｃｏ＾＾点ｉＴｆＩ｜ｉ｜０４Ｓ１０６Ｑ４／１ＪＫｈＬ（ｃ）ｕｎｉＭａｂｏｒａｔｏｎｗ图３－４肌动蛋白细胞骨架调节Ｆ－ｉｕｒｅ３４Ｐａｔｈｗａｏｆｒｅｕｌ＆ｔｉｏ打ｏｆｔ打ｃｔｏｓｅｅｔｏ凸ｇｙｇａｃｉｙｋｌ８１ 第王部分ｍｉＲＭ差异表达结果的验化和艳基因的预测及功能分析ＩＮＳＵＬＩＮＷＧＮＡＬＩＮＧＰＡＴＨＷＡＹＩＧｔｃｏｅｌｓＩＩｈｅｓｉｏｎｏｓｔａｓ—ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｔＩＩＡ、■■＾Ｘ胃ｊＴＩＩ＾＝＝＿＿？ｉ／／ＡＭＰＫＫ邮册ｓｓＩ排ＩＰＩＩＩ、ｊｊ励？Ｉ／／＼应迂Ｉ＞ｓｏｃｓ〇ＡＩ＼ＡＩｒ＾Ｉ／／，｜＾！／／＼／Ｉ严。０＾＼—＊■祕齡）Ｉ＼Ｉ／Ｉ爭ＩｌｊＯＯ＊－ＩＦＳＩｉ＿４＾４＾，Ｐ＿，，，］————￣—－￣－〇ｙｓ？〇。峽？犯ｉＨｓＷＭＳＲ＾ｎｉｎ？〇１ｈｉｉｉ呕亟巧畢固区画Ｉｉｎｉ、、、ｅＯＴＭ＼７Ｆ＾、、戶厂ｆｓ姑邮把阳）！＂附端直扣＾－—／＼＼ＰＰｌＶ－＾ＰＨＫＪ＼１＾ＰＹＧＩＬ＼ＸＮ＼／ｖｊｍｏｓｏＰｔｏｓＭｄｉｌｌ＼ｆＴＳＣ２ｉ＼／ｉｊｌ＼＼／｜｜Ｗｍ啡肉刪Ｌ）１．＼＼＼／圖＼＼叮‘－－＼ＤＥ３￣—ＰＫＡ＞Ａａｔｉｏ、ｌｉ＼＼、ＰｌｌＱＨｐ賊ｙｙＩｊ－ＡＭＰ＼＼＼：ｓｒｎｅｉｉｋｉｔｉｏｎ＼＼．．ｉｊ．—＼ｃ／巧ｅｉｐｏｓｐ钟ｆｊＩ．ｒ１＼５１？柳邮化Ｒｈｅｂ：卿１＼Ｉ＼Ｉ＼嘴龄＼／＼＼ｆ－ｏ：ｔ？＾ｊ？ｇｐｂ．ｇ！＾＼＾－？Ａｎｔｏ＼＼｜｜ＮＷｏｔｅＬＩ＾ｌｐｐＰ＇刊咕取Ｅ＿（）＼＼Ｈｔ＼，，，ｒａｘ爲严＿＿＼＼＼（Ｔ）＿，，，，１、＾ＪｌＦ４ＥＰｆｉｉ＼－Ｎ４ＥＥＰｌＩｅ？ｒｏｔｅｉｎｓｎｔｅｓｓｆｌ１Ｉ｜ｙ、＼ｊ＊竹口口口厂此？黯離Ａ巧６。ＤＮＡ０４９１０３ｍｌｋｈｉＵｂｌｏｒｉｅｓ切ａｔｆｅｓａｏ巧—图３－５膜岛素信号通路图ｅ３－４ｎｓｕｌｔＦｉｕｒＩｉ打ｓｉｇｎａｌｉｎｇａｈｗａｇｐｙ８２ 博壬学位论文ＰＰＡＲ別ＧＮＡＬＩＮＧＰＡＴＨＷＡＹ［、Ｋｉ＇巧ＬＤＬＩｅｔｏｇｅｎｅｓｓＣ．ＬｉｒｅｒＤＭｉｃｍｎＳｋｔｌｌ居ｅｋａｍｕｓｃｅ｜ｈＭ３＾￣叩卢ｊＦＡＢＰＵｎｓａｕｒａｅｄｆａａｃｉｄ０ｔｔｔｙｆＩＩ；ｉＬａｉｄｔ－ｒａｎｓｏｒｔＩ｜ｐｐ（ＩＩ—ｆ？ＳａｆｔｄＱｖ＂ａａｃｉｄｄｅｒａｄａｔｉｏｎ户＞ｔｕｒａｔｅｄ町ａｃｉＩＦｔｙｇ，／Ｉ亡Ｉ（）一＿＿＿＿一Ｉｒ防＿出。Ａ匹互１．．．、（巧觸觀）／－闇Ｉ车串ｉＦｉｂａｔｅｄｍＯ／Ｂ化Ｗｂｉｈｇｉａｃｏｓｎｔ細ｉ＇一ｆＦＥＴｊｆｙ）ｉＩ化°ＡＩＤＪＩｒ、ｉ１ｊ＊，。如邮ＣＭｌ？ｆａＩ５＾？？ｅ．？離黯／Ｉ［Ｊ［ｃ＾ｒｉｘＲ＾ＩＩ乂＼＼＞Ｉ＼＼＼／应量３应固］卢Ｉ—￣？Ｕｐｄｍ＼／／Ｆａｆｉｔ＊ｏｌｉｓｍｔｔｙａｃｉｄｔｒａｎｓｐｏｒｔ＞Ｉ［跳ｍ＂，ｋ＂ｉ＾ｉｉｄｉＵ曲蟲》？＝。心方一ｙ？义ＩｒＸ／＾＊＇國—＇．盖品Ｉ一—＿］ＩＩ：＾ｉｂ叫山／＾ｇＶ＼＾ｎｐｎｍ一鄉坤舰■曲多＿：ｊ剛；」Ｉ巧９－泌－Ｒｅｔｉｎｍｃａｃｉｄ〇？Ａ＆Ｉｐｔｅ＾ｔｔｅａａｏ＾ｓｒｉｉｇ＾－－＼ＩＬＫ？Ｃ＾．ａｒｖｉｖａｌｉＩｌＰＤＫｌＩ＾＊＼＾Ｕｂｉｉ．ＣｍｌｍａｔｋｉｉＩＵＢＩｑＮ＊ＣＫ＊ｉＰＥＰｉ，，１Ａ０Ｐ７Ｉ？Ｇｌｏｃｏｎｅｗｅ怕ｓｉｓＩ０娘ＩＴｂｎＥｒＴＬｉａｎｄｒｕｓｃｒ＾ｔａｃｔｏａｒｅｔｅｎｅｇｇｇ０３３２０８００／１３ｃＫｍｅｈｉｓａＬ＜ｆｃｏｒ＞ｔｏｒｉ？（）图３－６过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路－－ｈｗＦｉｕｒｅ３６ＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒａｃｔｉｔｅｄｒｅｃｅｔＰＰＡＲｓｉａｌｉｎａｔａｇｐｖａｐ；ｏｒ（）ｇｎｇｐｙ一鉴于差异表达ｍ，步分析了ｉＲＮＡ祀基因数量在正常与ＧＤＭ组有差别我们进相同ＫＥＧＧ通路在不同组别ｍｉＲＮＡ靴基因汇集的数量，发现ＧＤＭ组ＫＥＧＧ通路的汇集的靴基因数量（ＥＮＳＴ）总体上要多于正常对照组。如族岛素信号通路中，ＧＤＭ３４８３１３（表３－１４。组共有个，而正常对照组只有个基因参与其中）８３ 第王部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和把基因的预测及功能分析３－ＥＧＧＲＮＡ表１４Ｋ通路不同組别ｍｉ靴基因汇集数量分析－Ｔａｂｌｅ３１４ＮｕｍｂｅｒｏｆｅｎｅｓｃｏｎｖｅｒｅｄｉｎＫＥＧＧａｔｈｗａｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｒｏｕｓｇｇｐｙｇｐ通路名称通路ＩＤ对照组ＧＤＭ组戶值肌动蛋白细胞骨架的调节ｋｏ０４８１０５１０５６９０．０００２５４巧离子信号通路ｋｏ０４０２０４７０５２２０．０００１５２泛素介导的蛋白质水解ｋｏ０４１２０３６０３９０＜０．００１膜岛素信号通路ｋｏ０４９１０３１３３４８０．００２１８５白细胞跨内皮细胞转移ｋｏ０４６７０２８９３２２０．００４３１９细胞调亡ｋｏ０４２１０２４４２７２０．００８８８４过氧化物酶体ｋｏ０４１４６１７５１８９０．０００６７５近端小管碳酸盐重吸收ｋｏ０４９６４４３４３０．０００７％我们挑选了膜岛素信号通路及过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路这两条与膜岛素抵抗（公认的糖尿病发病机制中也环节）紧密相关的通路进行祀基因的分析。－－－－－－－－ｈａｓ－ｍｉＲ－％、ｈｓａｍｉＲ１４６ｍ差异表达的、ｈｓａｉＲ６６４ａ如、ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ邱及－ｍ－－ｈｓａｉＲ３７２化等调节膀岛素信号通路的关键鞭点，包括己糖激酶、葡萄糖６磯酸酶、Ｐ巧Ｋ、－－－－－ＰＴＰＮ。ｍＲＮＡｎｏｖｅ－ｍｒ１、凸ｏｖｅｉｎｒ、ｎｏｖｅｍｒ１等（表３１５）而新ｉ中，ｌｉ４ｋｉ１９和ｌｉ２２等作用于ＰＰＡＲｓ通路中的ＰＰＡＲａ、ＰＰＡＲ６、ＰＰＡＲＹ、径甲戊爾辅酶Ａ还原酶、脂３－蛋白脂肪酶等，参与了膜岛素敏感性调节Ｗ及脂质的合成与分解代谢巧程（表１６）。３－表１５膜岛素信号通路ｍｉＲＮＡ及鞭基因分析Ｔａｂｌｅ－３１５ｍｉＲＮＡａｎｄｉｔｓｔａｒｅｔｅｎｅｉｎｖｏｌｅｄｉｎｉｎｓｕｌｉｎｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｇｇｇｇｐｙ￣￣ｍｉＲＮＡ差异倍＾该範基因的其他ｍｉＲＮＡ細甘巧戶值视基因名称数ｌｏｇ值－－－－－３－１．４３９４６０．００３６９ｈｓａｍｉＲ１４９３ｈｓａｍｉＲ８ａ５尴；ｐ；－９５－５離ｐ地ｐ寺－－－－－－ｈｓａｈｓａ－ｍｉＲ糖原合成酶ｌｅｔ７ａ３ｈｓａｍｉＲ１０１３ｐｈｓｐ；－－－－－－９５－５ａ３０ｄ３激酶３ａｍｉ民１１７９ｈｓｍｉＲ等ｐ；ｐ－－－－－－ｍｈｓａｍｉＲ１０１５ｈｓａｉＲ１０５５ｐ；ｈｓａ－ａ－ｍ－ａ－ｓａ－ｍＲ－９８－ｍｉＲ磯月旨醜肌醇ｐ；ｈｓｉＲ１０３ｐ；ｈｉ３－９５－５ｐ二磯酸３激酶８４ 博壬学位论文催化亚单位Ｐ等處盛－ｍｈｓａｉＲ礎酸化酶激汽－ｒ；３－－－－ｍｉＲ５４８ｔ３ｈｓａｒｍ艮％ｐ；ｐ；＿＿９５５ｐ酶竹貴础Ｐａ－姑０－ｍｈｓａｉＲ麟酸化酶激产－打－ｆｓｉｆ打－文－－ｍｈｓａｍｉＲ１２５ａ５ｈｓａｉＲ１２５ｂ施ｐ；－－９５５ａｐｉｆｌ＿５ｐ；等－ｍ－－－－－ｈｓａｉＲ３７２３ｓａｍｉＲ６５５３，ｐ出ｓ－－－－ｈｓａｍ－１；ｉＲ６５６３ｐｓａｍｉＲ６７２Ｗ三节己糖激酶ｐ；ｈｊＰ〇－５等ｐｓａ－－ｈ１７ａ地ｈｓａＲｈｓａ诚核糖体％蛋苦产节￣ｍ‘’ｓａｉＫ４０６ａＪｉｓａｍｉＩＭ０ａ３ｐａ＿＿９５５ｐ白激酶Ｐ等－－－－ｈｓａ－－－－ｍｉ民、ｈｓａｌｅｔ７ａ３）ｈｓａｌｅｔ７ｂ３）ｈｓａ斌巧萊白ｊ；ｉ；Ｋ－－ｍ－－－－９５５ｐｉＲ１２６５ｐｈｓａｍｉＲ１２８４等；－ｍ－－－－－ｈｓａｉＲ蛋白磯酸酶１ｈｓａｌｅｔ７ａ３ｈｓａｍｉＲ１２８３ｓａｐ；出－－－－９５５化亚单位－ｍ－ｓａｍ－ｐ催ｉＲ１３０５ｈｉＲ１３０ａ５等；ｐ；－－ｍ－－－－ｈｓａｉＲ１０ａ５ｐｈｓａｍｉＲ１Ｏｂ５；－－－ｍ－－蛋白激酶ＣｏｈｓａｉＲ１２７７５ｈｓａｍｉＲｌ２ｐ；ｐ；Ｐ－ｍ－－８４ｈｓａｉＲ１３０ａ５；ｐ；等－－－ｍ－ｍ－ｈｓａｉＲ１０６ｂ５ｈｓａｉＲ１２７５？ｐ；ｓ－ｖ－－－－ｍ－－二ｃｒｋ同系物出ｓａｍｉＲ１２８７５ｐｈｓａｉＲ５３９－－％５Ｐ５ｐ等－－－Ｒａ鸟囑吟核ｈｓａ－ｍｉＲａｓａ－ｍ１０３３ｈｉＲ１０７ｐｐ；；ｓ？－－ｍ－－－－巧酸交换因ｈｓａｉＲ１０ａ５ｈｓａｍｉＲ１Ｏｂ５二ｐ；－９５－５ｐ坐子１ｐ等－－－－ｍ－－－－ｈｓａｉ民ｈｓａｌｅｔ７ａ５ｐ出ｓａｌｅｔ７ｃ５ｈｓａｌｌｕａｐｋｐ；ｑ－－－－－－－５ｅｓａｍｉＲ等％ｐｔ７５１０６ａ５ｇｐ；ｈｐ－－－－－－ｍＡＭＰ激活蛋ｈｓａｌｅｔ７ｂ３ｈｓａｉＲ１００３ｐｐ；出ｓ－－－－白激酶ａｍｓａｍ－Ｙ非催ｓｉＲ１２２４５ｐ；ｈｉＲ１２４６化亚单位等－－－－－ｓａｅｓｍ－ＡＭＰ激活蛋ｈｌｔ７ｃ５ｐｈｈａｉＲ３７０５；ｐ；ｓ１－－－－－白激酶ｃｔ２ｈｓａｍｉＲ３７１ａ５ｈｓａｍｉＲ３７４ａ為气催ｐ；Ｐ化亚单位－３等ｐ－－－ｍ－－－１型调节性ｈｓａｉＲ１００３ｈｓａｍｉＲ１０６ａｐ；－－－ｌ－ｍ－ｃＡＭＰ激活蛋３ｐｈｓａｍｉＲ〇６ａ５ｈｓａｉＲｌ；ｐ；白激酶〇６ｂ－５ｐ等－－－－－ｍ－ｈｓａｌｅｔ７ｆ５ｈｓａｉＲ１０ｂ３ｈｓｐ；ｐ；－３１－ｍｉＲ－－ａ－ｍｉＲ－ａ－．０５０４８．７８Ｅ０８帮调蛋白１ａ１２２９３ｐ出ｓ１４８３－－％３Ｐ＾８５ 第互部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和把基因的预测及功能分折－ｍ－－－－－礎脂酷肌醇ｈｓａｉＲ１２８７３ｈｓａｉｎｉＲ１８６ｐ；－ｍ－－－－１３４２７００．０３１拍６二稱酸３酶５ｈｓａｉＲ３１３ｈｓａｍｉＲ３１２激ｐ；ｐ；催化亚单位ｙ－３ｐ等ｌ－－－－－－磯酸帰醇式ｈｓａｍｉＲ１８３５ｈｓａｍｉＲ２２７６ｐ；－－－－２ｓａｍｉ民ｓ－ｍ－．６１巧６１．１７Ｅ５３丙丽酸幾激３ｐ３１２１３ａｉ民５出ｐ出￣８８９￣３Ｐ酶２４４ａ等－－－－－－－ｈｓａｔｎｉＲｈｓａｌｅｓａｌｅｓａ－ｔ７ａ３ｐ出ｔ７ｂ３ｐ出－－－－－－－ｍ－６６４ａ３己糖激酶２ｍｉＲｌｌ％ｌ３ｓａｉＲ１１８５２ｐ出－３ｐ等ｐ－－－－－－ｍ－－ｈｓａｉＲ调节型ｃＡＭＰｈｓａｌｅｔ７ａ３ｓａｌｅｔ７ｂ３ｓａｐ由ｐ出－－－６６４ａ－３ｍ－ｓａｍ化ｉＲ口７３ｅｈｉ民１３０５依赖的蛋白；出－－Ｐ激酶ｍｉＲ１３５ａ５ｐ等－－－－－－ｈｓａｍｓａｍｉＲａｍｉ民－ｉＲ巧赚ｈ１８６５ｐ由ｓ１９７３龄酪ｉ－－－－－－ｍ－６６４ａ３２．８８６９９０．００１４４６ｈｓａｉＲ３１３８ｈｓａｍｉＲ４１２３ｐ；；等ＰＰ－－－－－－ｍ－ｈｓａｍｉＲＡＭＰ薇活蛋ｈｓａｌｅｔ７３ｈｓａｉ民１２４７３ｇｐ；ｐ；－－－－－－６６４ａ３白ａｍｓａ－ｍ鐵［酶ｐｉ非ｈｓｉＲ１３７ｈｉＲ１４１３等；ｐｐ催化亚单位－－－－－ｍｓａｍ２００ｂ－ｓａｍ２００ｃｈｓａｉＲ２型调节性ｈｉＲ３ｐｈｉＲ；－－－－－－ｍ－－６６４ａ３ｃＡＭＰ激活蛋３ｈｓａｉＲ２１１５３ｓａｍｉＲ２ｐ；ｐ出ｐ白激酶２３－３ｐ等－－－－ａ－受体型蛋白ｈｓｍｉＲｌｈｓａｍｉＲｌ０６ａ３ｓａ；ｐ出？－－－－ｍ－－酪氨酸麟酸ｉＲｌ２５ａ５ｈｓａｍｉＲｌ２５ｂ５ｐ；ｐ—＾６—ｊＰ２．３０２０５０．０００２２２酶Ｆ等ｈｓａ－１６二鱗ｈｓａ－－－５－－ｍｉＲ果糖ｍｉＲ１３０ａｈｓａｍｉＲ％１６，ｐ；－６２４－３酸酶２－３ｈｓａ－ｍｉＲ＂３６８－５ｐｐ１等；ｐ－ｍｈｓａｉＲ细胞因子信－－－＾ａｍｉＲｈｓａｔｍ－２４６１１７９Ｒ１；－５９０－３Ｐ号抑制素ｇ２－．４１９５１２．９５Ｅ２５－－－－１ｍｉＲ－ｍｉＲ１０５ｈｓａｌｈｓａ３２３ｐ；；－－－－ｍ５－１－ｈｓａｉＲｎ６ｈｓａｍｉ民１８ａ糖原合成酶ｐ；＾’５９Ｄ’３ｐ５ｐ等’－－ｍ‘－－ｈｓａｉＲ２２１ｓａｍｉＲ５８２５；－１．２１３１５１．１７Ｅ１０蛋白漏Ｃ；－－－＾＾－＾５８２５ｈｓａ－ｍｐｐｉＲ６８７５５ｐ；－－－－－－２ＡＭＰ激活的ｈｍｉＲ１４３ｈｓａｎｉｉ民３４ｂ５．ｓａｐ；ｈＲ－－－－－－％－ｌ．％５０５２．２６Ｅ０８蛋白激酶非ｓａｍｉＲ３４ｃ５ｐｓａｍｉＲ１ｐ出出Ｐ傕化亚单位３ｐ等－－ｈａｍ－ｍ－－－ｓｉＲｈｓａｉＲ１０Ｇ３）ｈｓａｍｉＲ１２５５ａｉ；－－－ｍ－－－－５４８ａｑ２．０６７５９０．００４７９６３己糖激酶４出ｓａｉＲ１２５化５ｓａｍｉＲ１２ｐ出３６０ｂ等ｐ８６ 博去学位论文－－－－ｈｓａｍｉＲｈｓａｍｉＲ１２８７３ｈｓａ－ｍｉＲ－８６－１真核生物翻ｐ；－－－－－ｍ－－５４８ａｍ译起始因子３ｈｓａｉＲｌＷ０５ｈｓａｍｉＲ２ｐ；ｐ；５ｐ４Ｅ家族化４－３ｐ等－－－－－ｍ－－ｈｓａｉＲｈｓａｍｉＲｌｈｓａｍｉＲ１０５５）ｈｓａ７；ｉ；耐错敞ａ－－－－－－口－５４８ａｍｍｉＲ１２７３ｈ５ｈｓａｉｎｉＲ８５３錢化ｐ；５ｐｐ等－－ｍ－－－－－－ｈｓａｉ民ｈｓａｌｅｔ７ｅ５ｓａｍｉＲ７５ｈｓａｐ；巧冉妾巧化＾出ｐ－－５４８ａｍ－ｍ９３４ｈ－－９４４ｉＲｓａｍｉＲ底物；等２＜５ｐ－－－ｍ－－－－ｈｓａｉＲｈｓａｌｅｔ７ｆ５ｐｈｓａｍｉＲｌ０６ａ５；ｐ；－－－－－５４８ａｍｈｓａｍ－ｓａ－ｍ－ｉＲ９５５ｈｉＲ９９ａ３膜岛素受体ｐ；ｐ５ｐ等－－－ｓａ－ｍｓａｍａ－ｍ－－ｈｉＲ葡萄糖６磯酸ｈｉＲ１０５ｈｓａｉＲ１０ｂ３ｐ；－－－－ｍ－－５４８ａｍｈｓａｉＲ１２７３ｅｈｓａｍｉＲ１２巧酶催化亚单ｐ；；５ｐ位－３ｐ等－ｍ－ｍ－－－－－ｈｓａｉＲ非受体型蛋ｈｓａｉＲ１２９２３ｈｓａｍｉＲｌ３５ｐ；－－－－－－－５４８ａｍ５ｈｓａｍｉＲａａ－ｍ白酪氨酸稱ａ１４６５ｐｈｓｉＲｐ；；５－ｐ酸酶１１４８ｂ５ｐ等－－－ｈｓａｍｉＲｈｓａｍｉＲ－２９ａ－３ｈｓａ－ｍｉＲ３２８－３ｐ；－－－－－－ｍ－５４８ａｍｈｓａｍｉＲ４７５８３ｓａｉＲ９４化／二ｃｐ；ｐ；ｈ＾＾５５ｐ２－５ｐ等－－ｍ－－－－－ｈｓａｉＲ、ｈｓａｍｉ艮ｌｈｓａｍｉＲ１０５５）ｈｓａｐｎｉ＊；Ｉ；ｒ巧耳ｒｎ；－－－５４８ａｍ－ｍ－ａ－ｓａｍ－ｉＲ１０６３ｈｉＲ１２８３单占ｐ；ｐ１５ｐ等－－ｍ－－－－－ｈｓａｉ民ｈｓａｍｉＲ１１８５ｌ３ｐｓａｍｉＲ１２由－－ｍ－－ｍ－－－５４８ａＭＡＰＫＫｌ６９ａｈｓａｉＲ１２７７５ｓａｍｉＲ；ｐ出５－ｐ１３０ａ３ｐ等－－ｍ－ｍ－－－－ｈｓａｉＲｈｓａｉＲ１１８５ｌ３ｈｓａｍｉＲｌ１ｐ；－５４８ａｍ－－２－３ｈｓａ－ｍ－－ｓａ－ＭＡＰＫＩＯ８５ｉＲ１２２４５ｈｐ；ｐ；ｍ－－５ｐｉＲ１２５ａ５ｐ等－ｈｓａｍｉＲｈ－－－－－ｍ－ｓａｍｉＲ１２９２３ｈｓａｉＲ４１１＾ｐ；－－－－－５ｍ－－－－３７４ｂ５２．６５５９２１．３５Ｅ９５ｈｓａｉＲ５４８ｆ３ｈｓａｍｉＲ９＾ｐ；ｐ；３３４等ｐ－－－－－ｍ－－ｈｓａｉ民ｈｓａｍｉＲ１３０１３ｈｓａｍｉＲ１３２ｐｎＫｐ；－－－－－－ｍ－－３７４ａ３２．５Ｗ５１７．１２Ｅ１３０３ｈｓａｉＲ１３６５ｈｓａｍｉＲ１３单位ｐ；ｐ；１－８－ｐｌ３ｐ等－－－－ｍｉＲ－■ｈｓａｍｉＲ２７３３ｈｓａ３４２．１，甘圧ｇｐ；ｎ店拍１－ｍｈｓａｉＲＣｂｌ原癌基因，－－－ｍ－－－２Ｊ６５０２０．００７９７９８３ｈｓａｉＲ５８０３ｈｓａｍｉＲ％ｐ；ｐ；Ｅ３－３ｐ等－－３－－－－．３４７２８６．５１Ｅ１７６ｈｓａｍｉＲ１０６ａ５ｈｓａｍｉＲ１０６ｂｐ；－…ＨＩｌｉｓａ化长因了巧８７ 第互部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和把基因的预测及功能分析－－－３７２－３２５ｐｈｓａ－ｈ－－ｍｉＲ１２６９ａｓａｍｉＲ５４；ｐ；ｌ－５ｐ择和－－ａｍ－ａ－ｓａｍ－溶质载体家ｈｓｉＲ１０６５ｐ；ｈｉＲ１０６ｂ－－－－ｍ－－ｈｓａｉ民族２成员４５ｐ出ｓａｍｉＲ１２７０出ｓａｍ化１２７－－３７２３ａｐ（葡萄糖转３等运体）－ｍｈｓａｉＲ巧化调节亚－－－－－ｈａ－ｂ２３ｈｓａｓｍｉＲ１２５ｉｍＲ１２；ｐ；ｉ＾ｋ２６－３ｐ等－－ｓａ－ｍ民ｈｓａＲ－－－－ｈｉｍｉ１２２５口出汾１１１１民１４０３觸胃胃殿－＜－－－ｓ－巧３ａ－－１９３ｂ３１．３４Ｗ００．００００１ｐｈａｍｉＲ３ｓａｍｉＲ１９常；ｐ出ｐ３ｂ－３ｐｄｅｎｇ－－－－－ｓａｍ－．ｈｉＲ１２２５ｈｓａｍｉＲ１４９３，ｎ曲姑舱ｐ；－ｈｓａｍｉＲ．．葡萄糖６鱗酸．ｎｎａｏｃ＾，ｄ－ｉ。／－；ｕ－ｉ〇ｉ０－－１．５０３６７．００７８５４ｈｓａｍｉＲ１８５５ｐｈｓａｍｉＲ１９１ｐ；；－４９－３１Ｐ酶〇－３ｐｄｅｎｇ－－－－－－ｍｈｓａｍｉ民ｈｓａｍｉＲ１２７０ｈｓａｉＲ１２７３ｈ５ｂ乂；目月日齡肪驗口成成－－－－－－－－ｍ１４６ｂ３１．８８６９９０．０１２８７６ｐ出ｓａｍｉＲ１２８ｌ５ｈｓａｉＲ１４Ｊｐ；－－６ｂ－３ａｍ－ａｄｅ打ｐｐｓｉＲ１５５出ｐｇ－－－ｍ－－－－ｈｓａｉＲｈｓａｍｉＲ１２２６３ｐｓａｍｉＲ１２７；ｈ－－－－－－ｍ－１４６ａ３１．８５４５００．０３７５１８赎岛素受体５ｐｓａｍｉ民１３６５ｐｓａｉＲ１４由出６ａ－３ｐ等ｐ３－表１６过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路ｍｉＲＮＡ及帮基因分析ｅ－Ｔａｂｌ３１６ｍｉＲＮＡａｎｄｉｔｓｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｉｎｖｏｌｅｄｉｎＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｐａｃ－ｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｔｏｒＰＰＡＲｓｉｎａｌｉｎｇａｔｈｗａｐ（）ｇｐｙ￣￣＇ｍｉＲＮＡ差屏暑最名称ｌｏｇ值戶值祀基因该祀基因的其他ｍｉＲＮＡｎｏｖｅ－－——ｌｍｉｒ１１ｎｏｖｅｌｍｉｒ１２：＊—ｎｏｖｅｌ－—－－－．．．１７４０９２１１ｌｌＥ０６ＰＰＡＲａｎｏｖｅｌ阳ｉｒ１３ｎｏｖｅｌｍｉｒ１７；ｍ－２２ｉｒ＞ｔ—－ｎｏｖｅ—－ｌｍｉｒ２２ｎｏｖｅｌｍｉｒ３；ＮＡＤＰ（＋）依－ｍ－赖的苹果酸ｎｏｖｅｌｉｒ２２酶３ｎｏｖｅ－－甘油激酶ｌｍｉｒ２２ｉ－—ｎｏｖｅｌ－—－肉碱掠桐醜ｍｉｒ２１；ｆｉｏｖｅｌ扭ｉｒ２２８８ 博去学位论文转移酶１Ｂ醜基辅酶Ａ合ｎｏｖｅ－－成酶长链家ｌｍｉｒ２２族成员５醜基辅酶Ａ合ｎｏｖｅ－－－－成酶长链家ｌｍｉｒ２２；ｎｏｖｅｌｍｉｒ５族成员４－－ｎａｖｅｌｍｎｗｅ￣ｉｒｌ＝ｌｍｉｒ２２成酶长链家ｎＤｖｅ＾－＾：Ｈｎｕ：４誠员３合ｎｏｖｅ—－－ｍ－ｌｍｉｒ１２；ｎｏｖｅｌｉｒ２０票認茲ｎａｖｅ＊－：Ｈｎｉｉ２２：族成员２ｎｏｖｅ－－－－醜基辅酶Ａ合ｌｍｉｒ１５ｎｏｖｅｌｍｉｉ：２２；成酶长链家：ｎｏｖｅｌ－ｍ－９族成贵１ｉｒ－－－ｎｏｖｅｌｍｒｎｏｖｅ－ｍｒＡｉ１２；ｌｉ１４醜基辅酶氧３ｖｅ－－ｌｍｉｒ２２化酶：ｎｏ醜基辅酶Ａ氧．ｎｏｖｅ１－＇＾。。ｌｍｉｉ２２化酶１ＰＰＡＲ－－Ｖｎｏｖｅｌｍｉｒ１９脂蛋白脂肪．１—ｍ－化ｎｏｖｅｌｉｒ１９酶ｎｏｖｅ－ｌ－－－－－ｍ－７．２７４２６２．７３Ｅ０５Ａｎｏｖｅｌｍｉｒ：ｌ９ｎｏｖｅｌｉｒ２４婦醇基辅酶；＿ｍｉｒ－ｍｒ－３水解酶；ｎｏｖｅｌｉ３哲甲戊醜辅．１－－１。ｎｏｖｅｌｍｉｒ１９ｉ酶ＫｆｅＡ么船〇２Ａ合成酶－７－－－－ｍ－．３６７３７．３６Ｅ０日ｎｏｖｅｌｍｉｒ１４ｎｏｖｅｌｒ８１；ｉｍ－胃ｉｒ１４转移酶１Ｃ视黄素Ｘ受体．打ｏｖｅ１－ｍ－１。ｌｉｒ１２，ｂｅｔａｎｏｖｅ－－－－ｌｍｉｒ１２；ｎｏｖｅｌｍｉｒ１６ｎｗｉ＿ＰＰＡＰＳ－７－－－－－．２７４２６２．７３Ｅ０５ｎｏｖｅｌｍｉｒ１７ｎｏｖｅｌｍｉｒ３三＾：：３磯酸肌醇依－ｌ－－ｍ－赖性蛋白激ｎｏｖｅｍｉ：ｒ１０ｎｏｖｅｌｉｒ１２；酶１３哲甲戊酷辅．丽１－－１。ｅｍｉｒ酶：ｌ１２Ａ合成酶１８９ 第王部分ｍＲＮＡ差异表达结果的验语和熱基因的爾测及功能分析－－－－盛醇载体蛋ｎｏｖｅｌｍｉｒ２３ｎｏｖｅｌ阳ｉｒ３；；２打ｏｖｅ＿－白ｌｍｉｒ５硬脂離辅酶Ａ．－－－－ｎａｖ１Ｃｅｌｍｉｔ１７ｉｍ）ｖｅｌｍｕ５去饱和酶日ｎｏｖｅ－ｎｏｖｅ－ｌｍｉ＾－９－．３２１５７１．４０Ｅ１９ｍ－至器葉结耐Ａ日６ｉｒ５醜基辅酶Ａ脱－Ｕ２ｎｏｖｅ－－ｌ－ｉ－氨酶Ｃ４ｌｍｉｒ１；ｎｏｖｅｍｒ５直链艺醜辅酶Ａ酌＿．ｎａｖｅ１－ｍｕ４ｌ基转移酶１溶质载体家ｎ°ｖｅ－－－ｍｉ－２３－ｉ－７．６１５３１．６６Ｅ０６ｎｏｖｅｌｒｎｏｖｅｌｍｒ４：手ｍ－４ｉｒ（脂肪酸转运体）４讨论４．１高通量测序筛选ＧＤＭ胎盘组织差异表达ｍｉＲＮＡｓ实验的可靠性一尽管新代的Ｉｌｌｕｍｉｎａ高通量测序技术有很多的优点，但是筛选出的一一ｍｉＲＮＡ有定的错误率，故而需要另外种方法对测序结果验证。常用的验证方法有克隆测序、ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ、原位杂交和实时定量ＰＣＲ等。克隆测序虽然可提供准确的ｍｉＲＮＡ表达信息，但操作繁琐，效率较低。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ虽然精一是需要使用放射性元素掠记探针确性高，但也有其缺点：，对实验操作人员有一定危害二Ｈ是对样品的需求量；是难Ｗ检测到低丰度的ｍｉＲＮＡ；较高才能避免假阴性。原位杂交曾广泛用于ｍＲＮＡ表达的检测，由于ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子太小传统的原位杂交技术容易使ｍｉｃｒｏＲＮＡ在杂交及随后的洗脱过程中丢失。近一Ｗ一年来种新的杂交方法锁定核巧酸原位杂交ＬＮＡ－（ＩＳＨ）克服了上述困难，具有高度灵敏性且由于主要使用地高辛标记ＬＮＡ探针较放射性标记系统安全，缺点是费用稍高。实时定量ＰＣＲ检测方法具有高度特异性、高灵敏度及检测范围宽等特点，广泛应用于基因表达的研究，被认为是包括ｍｉＲＮＡ在内的核酸定量检测的金标准可应用于检测商通量测序筛选出的差异表达ｍｉＲＮＡｓ。针对而ＲＮＡｓ９０ 博去学位论文ｍ种类多，链长较短等问题，考虑现有ｉＲＮＡ检测技术的特点，本实验采用茎＾环结构实时定量ＰＣＲ检测ｍｉＲＮＡ检测方法，ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ染料，不需巧光探奸，具有高灵敏度和特异性的优点。该检测方法包括两个步骤：①基于茎凸环结构引物的逆转录反应。②进行实时巧光定量ＰＣＲ。茎田环结构的逆转录ｍｉ引物与ｉＲＮＡ３端部分结合，在逆转录酶作用下进行逆转录反应，特异的正向引物、通用反向引物及ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ巧光染料进行定量扩増，实现逆转录产物实时定量检测。本法既克服了ＮｏｒｔｈｅｍＢｌｏｔｓ方法的繁琐操作、费时费力、灵敏度低等问题，又实现了验证高通量测序数据的高灵敏度。ｍｉＲＮＡ分子链长较小，９－２５ｂｓＰＣＲ方法只有１ｐ，不能采用常规的实时定量检测，需要设汁特殊的引物。ｍ－ｍ本实验根据ｉＲＮＡｓ前体特异的茎环结构，设计出具有ｉＲＮＡｓ特异性的逆转录引物和ＰＣＲ引物，对高通量测序分析出ＧＤＭ组明显高表达的－－－－－－－－ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａｍｉＲ９５５ｐ和明显表达下降的ｈｓａｍｉＲ１２４６、ｈｓａ－ｍ－ａ进ｍｉＲ１２６９行定量检测，送四种ｉＲＮＡｓ的表达量低但是差异表达较高，ＧＤＭ二一致结果表明对照组和族比较的数据与第部分测序结果，结论相同。因此，高通量测序筛选结果是准确可靠的，证实正常妊娠与ＧＤＭ胎盘组织之间ｍｉＲＮＡ表达有差异，提示差异表达的ｍｉＲＮＡ可能在ＧＤＭ发生发展中起重要作用。一些研究证实了正常与Ｗ往有２型糖尿病时外周组织有ｍｉＲＮＡ表达差异，但是不同的研究结果所报道的ｍｉＲＮＡ表达及其作用有争议，原因可能与所用模型不同、ｍｉＲＮＡ研究技术手段差异、数据分析方法等有关系。目前ｍｉＲＮＡ在ＧＤＭ表达谱的研究仍罕见、不足。另外，虽然ＧＤＭ与２型糖尿病有许多相似之处，如膜岛素抵抗、脂肪因子作用、炎症因子参与等，但是ＧＤＭ有其特有的性质、特别是胎盘组织在ＧＤＭ发生发展起到重要作用，不能普遍地将２型糖尿病ｍｉＲＮＡ研究得到的结论直接套用于ＧＤＭ。因此，应用高通量测序技－术和ｑＲＴＰＣＲ技术进行胎盘组织的ｍｉＲＮＡｓ表达谱研究显得非常有必要。ｍ－本研究ＧＤＭ与正常妊娠胎盘组织ｉＲＮＡ差异表达结果中，有ｍｉＲ１２５ａ、９１ 第王部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和把基固的预测及功能分析一－－２化及ｍ４６ＲＮＡ。ｍｉＲｉＲ１等ｍｉｃｒｏ与Ｗ往的糖尿病研究文献报道致其余大部分所发现的差异表达ｍｉＲＮＡ均为ＧＤＭ首次报道。４．２差异表达ｍｉＲＮＡ靴基因预测ｓ现阶段，由于技术等原因有关ｍｉＲＮＡ生物学功能的研究还比较欠缺。ｍｉＲＮＡ发挥表达调控作用是通过与祀基因结合，通过寻找其祀基因不但可Ｗ了解ｍｉＲＮＡ的作用机制和途径，还可Ｗ通过郎基因的生物学功能来推测ｍｉＲＮＡＰ１的功能。目前，ｍｉＲＮＡｓ祀基因的预测主要是通过生物信息软件来实现的，常一用些预测软件有ｍｉＲＤＢ（ｈｔｔ：／／ｍｉｎｉｂ．ｏｒ／ｍｉＲＤＢ／）、ｍｉ艮ａｎｄａｐｇ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｃｒｏｍａ．ｏｒｇ／）％Ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ．ｏｒｇ）ＳｉＭｉｒｅａｐ（ｈｔｐ：／／ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ｉｎｉｒｅａｐ／）等。目前的预测方法各不相同，但是主要遵循Ｗ下几个常用原则：①ｍｉＲＮＡ与其祀位点的碱基互补性；②ｍｉＲＮＡ鲍位－ｍＲＮＡ双链的热稳定性ｍ点在不同物种么间的保守性ｍｉＲＮＡｉＲＮＡ範；③；④’’位点处不应该有复杂的二级结构；⑤ｍｉＲＮＡ５端与帮基因的结合能力强于３端一。ｍｉＲａｎｄａ是最早的个利用生物信息学对ｍｉＲＮＡ祀基因进行预测的软件，８９’’ｈｔｌｍａｎｄａ对由Ｅｎｒｉｇｔ等人于２００３年设计开发，ｉＲ３ＵＴＲ的筛选主要是从序列匹配、ｍｉＲＮＡ与ｍＲＮＡ双链的热稳定性Ｗ及範位点的保守性Ｈ方面进行分化取ｍｉＲＮＡ对应的前１０位基因作为铅基因，对于存在多个ｍｉＲＮＡ对应于一ｍ同祀位点的情况ｉＲａｎｄａ则使用，贪也算法选取其中得分最高且ＭＦＥ最低的一ｉｉｎｔ’一ｔＷ那对。Ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ是Ｌｅｗｉｓ等人巧２００５年开发的款用于哺乳类动物ｍｉＲＮＡ祀基因的软件，该软件将ＲＮＡ之间的相互作用热力学与序列比对分析结合起来，预测不同物种之间保守的ｍｉＲＮＡ结合点。与ｍｉＲａｎｄａ不同的是’’—Ｔａｒｅｔｓｃａｎ要求ｍ－８３ＵＴＲｇｉＲＮＡ５端的２碱基与ｍＲＮＡ完全互补这屯个核＂＂昔酸称为ｍｉＲＮＡ种子区；另外Ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ中还引入了信号噪声比来评估预测结果的准确性。所谓信号噪声比即用己知（信号组）和随机生成的ｍｉＲＮＡ（噪声组）分别对ｍＲＮＡ的３＾ＴＲ进行预测，所得祀基因数目的比值。为了降低Ｕ３祀基因预测结果的假阳性，我们利用ｍｉＲａｎｄａ、ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ和Ｍｉｒｅａｐ哦件对差９２ 博去学位论文异表达的ｍｉＲＮＡ報基因进行预测，并取Ｈ个结果的交集作为祀基因预测结果。发现ＧＤＭ组已知ｍｉＲＮＡ和新ｍｉＲＮＡ的预测到的祀基因和範基因位点数量均要多于对照组，提示ＧＤＭ胎盘组织ｍｉＲＮＡ结合点发生改变。从ＫＥＧＧ通路一不同组别ｍｉＲＮＡ祀基因数量汇集分析也可Ｗ发现同条通路中，正常妊娠妇女胎盘組织与ＧＤＭ妇女胎盘组织ｍｉＲＮＡ祀基因通路有不同数量的祀基因参与，总体上看为ＧＤＭ组多于对照组。４３差异表达ｍｉＲＮＡ及其靴基因整合功能分析为了丰富我们对ＧＤＭ胎盘组织差异表迭ｍｉＲＮＡｓ祀基因细胞和亚细胞定位、行使功能和参与的生物学过程等认识，我们对差异表达的ｍｉＲＮＡ祀基因进行ＧＯ富集分析。差异表达ｍｉＲＮＡ的祀基因广泛地参与组成细胞成分、细胞的增殖分化和调亡、大分子物质的代谢、免疫反应等。ＫＥＧＧ通路分析显示ＧＤＭ胎盘组织差异表达的已知ｍｉＲＮＡ对应的铅基因显著性富集的通路共有６８条，新ｍｉＲＮＡ靴基因显著富集的通路有５０条，但是参与通路的帮基因数量明显少于己知ｍｉＲＮＡ。其中有３１条ＫＥＧＧ通路是与已知ｍｉＲＮＡ範基因相同的通路，如肌动蛋白细胞骨架的调节、局部细胞粘附、一细胞内吞作用、巧离子信号通路等，另部分为其他通路如Ｔ细胞信号通路、ＶＥＧＦ信号通路、脂肪细胞因子信号通路和过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路等。提示己知ｍｉＲＮＡ及新ｍｉＲＮＡ共同参与了Ｗ上重要通路，部分新ｍｉＲＮＡ还在其他通路调节上有调节作巧。整合帮基因功能和通路分析显示：①许多与族岛素作用和糖代谢密切相关的基因被显著富集－，如膜岛素激活受体、ＡＭＰ活化的蛋白激酶、葡萄糖巧离子共转运体、Ｇ６Ｐａｓｅ、ＰＩ３Ｋ、糖原憐酸化酶和ＰＴＰＮ１等。②多种与过氧化物酶体增殖物激活受体相关的基因也被显著富集，如过氧化物酶体增殖物激活受体ａ、过氧化物酶体増殖物激活受体Ｙ、甘油激酶和ＣＤ３６（凝血酶敏感素受体）—些与组织结构重塑相关的基因也被显著富集等。３），如４．３．１差异表达ｍｉＲＮＡ对糖代谢及膀岛素信号通路的调节巧 第五部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的數证和把基因的预测及功能分析膜岛素信号及糖代谢中ＷＧ６Ｐａｓｅ、ＰＩ３Ｋ和ＰＴＰＮ１为例。Ｇ６Ｐａｓｅ在肝组织－６－中通过水解葡萄糖磯酸释放释放葡萄糖入血，是肝脏糖异生的两个关键酶之一一一一。些研究证明内源性葡萄糖的产生与肝脏糖异生两种关键酶密切相关ｗｉｓｔ’ＧＧｉ雜酸丙丽酸簽激酶和ｐａｓｅ。膜岛素增敏剂可通过抑制稱酸丙厕酸綾激酶ｔＷ和Ｇ６ｐａｓｅ减少肝脏葡萄糖产生。大量的研究表明，Ｇ６Ｐａｓｅ的活性及其基因表达水平在膜岛素抵抗、糖尿病中均明湿増加。因此，该酶同膀岛素抵抗、糖１７１［尿病高血糖有着密切的关联。祀基因预测发现与Ｇ６Ｐａｓｅ相关的差异表达－－－－ｍｍ－－－－－－－ｉＲＮＡ有：ｈｓａｉＲ１２５ａ５ｐ、ｈｓａｍｉＲ１３０ｂ３ｐ、ｈｓａｍｉＲ１４９３ｐ、ｈｓａｍｉＲ－－－－－－－－－、－ｍ、ｓ、ｓａｒｆｔｅｍ、－３７４ｂ３ｈｓａｉＲ３１０ｈａｍｉＲ５２０ｂｈｉＲ３７２３ｐ和ｎｏｖｌｉｒ２２ｎｏｖｅｌｐ－－ｍ２－ｉｒ１等。在Ｔ２ＤＭ大鼠的肌肉组织中发现ｍｉＲ２０表达明显升高，而ｍｉＲ１３０ｔＷ－２０ａＮＡ－ＧＤＭ的胎盘组织则发现ｍｉＲｉＪ３０的表迭下降，我们在ｔｌ及ｍｉＲ１表达明显高于对照组。膜岛素和膜岛素受体结合后通过２条途径调节代谢，经典的是ＩＲＳ／ＰＩ３Ｋ／ｔｗＡＫＴ通路，促进糖原合成，抑制糖原分解，促进葡萄糖转运子（ＧＬｌＴＴｓ的表）－二Ｃｂ－达，最终调节糖、脂肪、蛋白质代谢等；第是ＣａｐｌＣｒｋ通路，该通路主ＰＷ要促使ＧＬＵＴ４向细胞膜转化促进细胞对葡萄糖的摄取。其中ＩＲＳ／ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴＰ１１通路是膜岛素作用于大部分葡萄糖代谢的通路。ＰＩ３Ｋ作为膜岛素信号转导通路的焦点，，引起。通表达减少或活性降低将导致膜岛素信号转导异常ＩＲ发生过ｍｉＲＮＡ鞭基因预测发现，７种ｍｉＲＮＡｓ可Ｗ分别祀向ＰＢＫ的４种调节性亚－－－－巧－－－－单位。祀向ＰＩＫ３Ｒ１的有ｎｏｖｅｌｍｉｒ、ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａｍｉＲ３７４ａ３ｐ；－－－－ｍｉｒ２２、ｈｓａ－ｍ－３７２－２２、祀向ＰＩＫ３Ｒ２的有ｎｏｖｄｉ民３祀向ＰＩＫ３Ｒ３有ｎｏｖｅｌｍｉｒｐ；－－－ｈｓａｍ－ｅ－ｍ－ｓａ－ｍ－ｍｉＲ３７４ｂ５祀向ＰＩＫ３Ｒ５的有ｎｏｖｌｉｒ５、ｈｉＲ５４８ａ５。这些ｐ；ｐｍｉＲＮＡ既有ＧＤＭ时表达上调的、也有表达下调的。在胶质瘤细胞和组织中，－ｍｉＲ３７２表达上调－３７２，而敲低ｍｉＲ会抑制的ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ通路的主要组分，包括ｓ－－Ａｋｔ、ｍＴＯＲ和Ｐ７０Ｓ６Ｋ的磯酸化水平可见ＧＤＭ组商表达的ｈａｉｎｉＲ３７２确实在ＰＩ３Ｋ的调节上起作用，可能抑制膜岛素受体激活后的信号。９４ 博去学位论文ＰＴＰＮ１通过膜岛素受体或其底物上的酪氨酸残基去憐酸化作用对膜岛素信３Ｐ’Ｗ号转导进行负调节。有研究虽示，ＰＴＰＮ１可使膜岛素受体在合成期间保持去磯酸化的状态，而且在肥胖及糖尿病的人类及哺乳动物的肌肉及脂肪组织中ＰＴＰＮ１的表达明显增高数种蛋白酪氨酸磯酸酶参与膜岛素信号转导，但Ｗ口６］－－－ＰＴＰ旧作用显著。１１３３１１化－１－、－本研究实验结果表明，１５４８〇１１５口１１８３１１１１民１１８５－－－－－－－ｌ３ｐ、ｈｓａｍｉＲ２１６ａ５ｐ和ｈｓａｍｉＲ２９等表达在ＧＤＭ组明显表达升高，ｎｏｖｄ－ｍｉｒ１４表这下降，而Ｗ上差异表法的ｍｉＲＮＡ预测到的報基因均有ＰＴＰＮ１。高－－－－－－－－－－－－巧等表达ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａｍｉＲ１１８５ｌ３ｐ、ｈｓａｍｉＲ２１６ａ５ｐ和！ｉｓａｍｉＲｖｌ－可能会使ＰＴＰＮｌ蛋白表达降低，促进族岛素信号传导，而表达下调的ｎｏｅｍ－ｉｒ１４则会促进ＰＴＰＮ１的表么抑制膜岛素信号转导，但是作用于ＰＴＰＮ１的这些差异表达ｍｉＲＮＡ综合作用在ＧＤＭ时究竟是促进还是族岛素信号传导仍需一进步深入的研究。－－ｍ－－－－－－综上分析推测ｈｓａｉＲ３７２３ｐ、ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ和ｎｏｖｅｌｍｉｒ２２等差异表达的ｍｉＲＮＡ交互作用调节糖代谢及膜岛素信号通路关键範点，可能在ＧＤＭ的发病过程中起了重要的作用。４．３．２差异表达新ｍｉＲＮＡ对过氧化物酶体增殖物激活受体通路的调节过氧化物酶体増殖物激活受体（ｅｒｏｘｉｓｏｍｅｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｔｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｔｏｒｓｐｐｐ，ＰＰＡＲ一）是类由配体激活的核转录因子，属于ＩＩ型核受体超家族，参与许多的生理功能调控：糖脂代谢、脂肪形成、抗炎及膜岛素敏感性等。目前己发现有Ｈ种亚型ａ、Ｓ和Ｖ。ＰＰＡＲａ主要是调控脂。ＰＰ，即类代谢及参与免疫应答ＡＲ７一Ｐｌ６在脂肪酸的分解代谢能量代谢及胆固醇逆向转运中起定作用Ｄ：ＰＰＡＲｙ可Ｗ调控糖代谢及脂肪细胞的分化。其祀基因参与ＰＰＡＲ信号通路的差异表达ｍｉＲＮＡ主要是Ｗ下６种新－ｍ－ａｍｉＲＮＡ。ＧＤＭ组高表达的ｎｏｖｅｌｉｒ２２，铅基因有ＰＰＡＲ、甘油激酶、酷基辅酶Ａ合成酶、醜基辅酶Ａ氧化酶、肉碱踪禍醜转移酶等。ＧＤＭ组低表达的－ｎｏｖｅ－ｌｍｉｒ１２，報基因有视黄素Ｘ受体ｅ、３搔甲戊醜辅酶Ａ合成酶１、３憐酸９５ 第玉部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验证和化基因的预测及功能分析肌醇依赖性蛋白激酶１和ＰＰＡＲ６；ＧＤＭ组低表达的ｎｏｖｅｌ－ｍｉｒ－１９，祀基因有ＰＰＡＲｙ、脂蛋白脂肪酶、３哲甲戊醜辅酶Ａ合成酶２和矫醇基辅酶Ａ水解酶；－ＧＤＭ组低ｎｏｖｅｌ－４表达的ｍｉｒ１，其视基因有肉碱栋搁醜转移酶１Ｃ；ＧＤＭ组低－ｍ－ｉｒ５２、硬脂、、表达的ｎｏｖｅｌ，範基因有酱醇载体蛋白醜辅酶Ａ去饱和酶５ＣＤ３６Ｃ４－Ｃ醜基辅酶Ａ脱氨酶１２直链和乙醜辅酶Ａ醜基转移酶１；ＧＤＭ组低表达的－ｍ－ｎｏｖｅｌｉｒ５２７成员１。，祀基因有溶质载体家族（脂肪酸转运体）其中，为３哲甲戊醜捕酶Ａ洽成酶为胆固醇合成的关键酶，肉碱栋搁蘭转移酶为脂肪酸Ｐ氧化的限速酶，３磯酸肌醇依赖性蛋白激酶１为ＡＫＴ的上游激酶、联系着膜岛素信号通路。ＰＰＡＲａ、ＰＰＡＲ５（＾＞１及ＰＰＡＲＹ是ＰＰＡＲｓ信号通路的关键云节点。ＩＲ与甘油Ｈ酷、胆固醇和游离脂肪酸水平升高等脂代谢奈甜相关。ＰＰＡＲｓ的Ｈ种亚型均可Ｗ通过不同的祀点参与１民的调节。研究显示脂联素信号通路中ａ－，激活ＰＰＡＲ可化增加与脂肪酸摄取及０氧化相关的关键基因表达，这些基因包括脂醜辅酶Ａ（ａｃ－－ｌＣｏＡ）、脂肪酸转运蛋白ｆａｔｔａｃｉｄｔｒａｎｓｏｒｔｒｏｔｅｉｎｙ（ｙｐ，ｐＦＡＴＰ）、解偶联蛋白２（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ２，ＵＣＰ２）Ｗ及肉毒碱栋搁醜转移酪－剛－ｃａｍｉｉｎｅａ－ｌｔｌｍａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｌ，ＣＰＴ等。ＰＰＡＲａ的激活还可（ｐ〇使得用于合成的ＦＦＡｓ和ＶＬＤＬ减少。另外贝特类药物可通过脂肪组织中的ＰＰＡＲａ提ＰＳｌ高脂联素的表达ｏＰＰＡＲａ激动剂通过増强脂联素作用和上调脂联素受体表达一ａ在调节肥胖诱导的糖尿病小鼠ＨＩ中起着定的作用。此外，ＰＰＡＲ还可能通ＰＷ－ｍ－过炎症因子途径参与膜岛素转导。ＧＤＭ组胎盘组织ｎｏｖｅｌｉｒ２２表达增高，可能会降低ＰＰＡＲａ的作用，导致脂肪酸合成及转运受阻、分解减少、脂联素作用受狙，从而降低膜岛素的作用。ＰＰＡＲｙ激动剂如嗟哇婉二丽类可Ｗ增加膜岛素敏感性来降血糖、同时促进脂肪形成一些研究试图分析ＰＰＡＲｙ。鉴于ＰＰＡＲＶ在糖脂代谢等方面的作用，Ｐｗｓｉ基因多态性在ＧＤＭ发病机制作用，但得到的结果不尽相同。机体的膜岛素敏感性可Ｗ通过ＰＰＡＲｙ的憐酸化调控其转录活性来调控。实验表明，ＰＰＡＲＹＳ１１２Ａ转基因小鼠在高脂喂食下能够维持较高的膜岛素敏感性，体重却不会９６ 博击学位论文ＰＷ。ｙ明显增加，这与ｐｐａｒｙ能有效上调脂联素的表达相关激活ＰＰＡＲ核受体直接通过增加ＰＰＡＲＹ及其祀基因的表达，増加脂联素的表达与释放，进而增加膜岛素受体底物－ａ１基因的表达并抑制炎症因子ＴＮＦ生成，増加膜岛素敏感Ｐｙｑ性并促进脂肪细胞对葡萄糖的摄取和处理。在２型糖尿病动物模型中，有ＰＭ９效的选择性的ＰＰＡＲ６ＩｐＰＡＲ５激动所激动剂也可Ｗ改善ＩＲ并降低其血糖引起的膜岛素信号转导情况的改变可能发生在其降低血清和肝脏脂质水平之后，研究证实，体外环境下肝细胞摄取富含甘油Ｈ醋的脂蛋白后会明显诱导ＩＲ的发展ｆＷ，Ｔ２ＤＭ患者肝脏及脂肪组织膀岛素抵抗也随肝脏脂肪沉积増加而加＂［］５－－－ｍ－重。分别帮作用于ＰＰＡＲ和ＰＰＡＲｙ的ｎｏｖｅｌｍｉｒ１２和ｎｏｖｅｌｉｒ１９在ＧＤＭ胎盘组织表达均明显下调，相应地ＰＰＡＲ８和ＰＰＡＲｙ表达可能是上调的，。使得组织膜岛素抵抗改善，此作用也可能需要在脂质降低发生之后当然，这需要相关的实验来验证。－－－－－综上可见ｏｖｅ－ｍ－ｍｉｒ＞ｅｋｍｉｒ、ｎｏｖｅｌｍｉｒ＞，ｎｌｉｒ４、ｎｏｖｅｌ５ｎｏｖ１２１４－－ｍｒ－ｅ－ｍｒｓｎｏｖｅｌｉ１９、和ｎｏｖｌｉ２２通过综合作用于ＰＰＡＲ通路中多个关键酶！＾及受体等，参与了脂质的合成与分解代谢调节、（脂联素相关的）膜岛素敏感性调节，在ＧＤＭ的发病机制起重要作用。４．３．３差异表达ｍｉＲＮＡ参与胎盘组织小血管重构４２［］Ｇｉｂｂｏｎｓ和Ｄｚａｕ将血管重塑定义为血管壁在局部生长因子、血管活性物质及血流动力学刺激等的共同作用下，管壁结构发生改变的主动过程，至少包括细胞增生细胞调亡细胞迁移及细胞外基质合成降解等过程。差异表达的ｍＡ範基因ＧＯ细一ｉＲＮ胞组分富集分析显示有部祀基因表达定位于细胞外周组分，铅基因ＫＥＧＧ通路中有细胞骨架调节、血管内皮生长因子和白细胞跨内皮迁移，结合在ＧＤＭ胎盘组织观察到的小动脉血管壁绒毛壁増厚，合胞体结节明显增多一、合体膜形成等病理变化，我们推测部分差异表达的ｍｉＲＮＡ参与一了小血管重构。血管重构后对胎盘组织会产生多种不良影响、其中之就是缺氧，形成恶性循环。。局部缺氧反过来又可Ｗ促进血管重构９７ 第五部分ｍｉＲＮＡ差异表达结果的验征和艳基因的预测及功能分析一Ｔ－ＰＣＲＲＮＡ结论：检测前部分高通量测序筛选出的差异表达ｍ，通过ｑＲｉ一。扩增结果与高通量测序结果致，说明高通量测序结果可靠对差异表达的ｍｉＲＮＡ进行帮基因的预测，发现ＧＤＭ组差异表达ｍｉＲＮＡ辆基因数量多于正常对照组。差异表达ｍｉＲＮＡ，提示ｍｉＲＮＡ的结合调节位点在ＧＤＭ时发生改变的粗基因主要参与细胞増殖分化、刺激反应、信号转导、免疫反应及糖尿病密－－－－ｍ－－切相关物质转运代谢等生物过程和功能。ｈｓａｉＲ３７２３ｐ、ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ和－ｍ－ｎｏｖｅｌｉｒ２２等差异表这的ｍｉＲＮＡ交互作用调节糖代谢及族岛素信号通路关键－－－－－ｏｖｅ－１ＰＰＡＲｓ鞭点，ｎｌｍｉｒ４、ｎｏｖｅｌｍｉｒ１９、和ｎｏｖｅｌｍｉｒ２２等作用于通路中的一ｍ脂质的合成与分解代谢调节、膜岛素敏感性调节等。部分差异表达的ｉＲＮＡ还参与了ＧＤＭ胎盘组织小血管的重构。研究的局限性与下步工作展望：本研究通过结合在线软件及数据库预测分一析差异表达ｍｉＲＮＡ的祀基因功能，但是这种方法预测出的帮基因存在定的一假阳性ｔｗ且各种预测方法所应用的算法不，并样，得到的结果也有差异，需一－、ＲＳＣ。要生物实验方法进行验证，如蛋白质组学分析Ｉ免疫共沉淀技术等下步我们将在本研究的基础上对差异表达的ｍｉＲＮＡ进行生物学功能的验证。参考文献：巧ａ－ＡｌｌｅｎＥＸｉｅＺ，ＧｕｓｔａｆｓｏｎＡＭｌ．ｍｉｃｒｏＲＮＡｄｉｒｅｃｔｅｄｈａｓｉｎｕｒｉｎ［。，，ｐｇｄｇ－ｏｅｎｅａｓｌ－口：ｔｒａｎｓａｃｔｉｎｇｓｉＲＮＡｂｉｓｉｓｉｎｌｎｔ．Ｃｅｌ．２００５１２０７２２１．ｇ，口）ｐ口］ＳｃｈｗａｂＲ，ＲｉｅｓｔｅｒＭ，幻ａｌ．ＳｐｅｃｉｆｉｃｅｆｅｃｔｓｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｏｎｔｈｅｐｌａｎｔｒａｎｓｃｒｉ００４－ｔｐｔｏｍｅ．Ｃｅｌｌ．２５：５１７２７．石（）３ＫａｎｅｈｋａＭＡｒａｋｉＭＧｏｔｏＳｅｔａｌ．ＫＥＧＧｆｏｒｌｉｎｋｉｎｅｎｏｍｅｓ化ｌｉ反ａｎｄｔｈｅ［］，，，ｇｇｅｎｖ－ｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ２Ｄａｔａｂａｓ４８４．００８３６ｅｉｓｓｕｅ：Ｄ４８０．，（）［４］ＫｌｏｏｓｔｅｒｍａｎＷＰ，ＷｉｅｎｈｏｌｄｓＥ，ｄｅＢｒｕｉｊｎＥ，ｅｔａｌ．ＩｎｓｉｔｕｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓ－ｍｏ出巧ｅｄｏｉｎａｎｉｍａｌｅｍｂｒｙｏｓｕｓｉｎＬＮＡｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｒｏｂｅｓ．ＮａｔＭｅｔｈｏｄｓｇｐ，２００６３－１：１２１３．，（）９８ 博壬学位论文５Ｓｃｈｍｅｎ－ａｎｔｉｔｔｅｎＴＤＬｅＥＪＪｉａＪｅｔａｌ．ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｕｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｕｒｓｏｒ［］ｇ，，ｇ，ｑｐａｎｄａｕｒｅ－ｎｉｉｃｒｏＲＮＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００８４４１：３１３８．ｍｔ，（；）６ＳＳＲａｎｉＳＢ－［］ＲａｔｈｏｄＫｈａｎＭｅｔａｌ．ＴｕｍｏｒｓｕｒｅｓｓｉｖｅｍｉＲＮＡ３４ａｓｕｒｅ巧ｅｓ，，，ｐｐｐｐｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｏｆｌｉｏｍａｓｔｅｍｃｅｌｌｓｂｙｔａｒｅｔｉｎＡｋｔａｎｄＷｎｔｇｇｇｓ－ｉａｌｉｎｇａｔｈｗａｙｓ．ＦＥＢＳＯｅｎＢｉｏ．２０１４４：４８５４％．ｇｎｐｐ，［７］Ｐｒａｋａｓｈ巧Ｇｈｏｓｌｉｙ泣Ｄ，ＧｕｐｔａＶ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｓｅｒｖｅｄａｎｄｎｏｖｅｌｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｂｙｄｅｅｐｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌｒｅｄ－ｉｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｏｔｅｎｔｉａｌｔａｒｅｔｓ．Ｇｅｎｅ．２０１５５５４２：１８１１９５．ｐｐｇ，（）战ｎｒｉｈｔＡＪＪｏｈｎＢＧａｕｌＵｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｔａｒｅｔｓｉｎＤｒｏｓｏｈｉｌａ．Ｇｅｎｏｍｅ］Ｅｇ，，，ｇｐＢｉｏｌ２００３５１：民１．，，（）ａｎａ＊ＸＥｌ．ｉｅｄｉｃｉｏ凸ｏｓｅｒｖｅｓｅｒｖｅｃｒｏ口ＮａＩＭＰｔｆｂｏｔｈｃｏｎｄａｎｄｎｏｎｃｏｎｄｍｉＲＮＡ］Ｗｇ，ｑｔ－ｔａｒｅｓｉｎａｎｉｍａｌｓ？目ｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００８２４：３２５３３２．ｇ，口）０ＪｏｈｎＢＥｎｒｉｈｔＡＪＡｒａｖｉｎＡｅｔａｌ．ＨｕｍａｎｍｉｃｒｏＲＮＡｔａｒｅｔｓ．ＰＬｏＳＢｉｏｌ－。］，ｇ，，ｇ２００４２１：ｅｌ３６３．，（）Ｈ－１１ＬｅｗｉｓＢＰＳｈｉｈＩＪｏｎｅｓＲｈｏａｄｅｓＭＷｅｔａｌ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｍａｍｍａｌｉａｎ［］，，，ｅ－ｍｉｃｒｏＲＮＡｔａｒｔｓ．Ｃｅｌｌ２００３１１５７：７８７７９８．ｇ，，（）口２ＧｒｉｍｓｏｎＡＦａｒｈＫＫＪｏｈｎｓｔｏｎＷＫ巧ａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｔａｒｅｔｉｎｓｅｃｉｆｉｃｉｉｎ］，，，ｇｇｐｔｙｍａｍｍａｓ－ｌ：ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｂｅｏｎｄｓｅｅｄｍｒｉｎｇｅｌｌ．２００７２７１：９１１０５．．ＭｏｌＣｙｐ，（）［１３］ＬｉｕＺ，ＸｉａｏＨ，ＬｉＨ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｏｎｓｅｒｖｅｄａｎｄＮｏｖｅｌｍｉｃｒｏＲＮＡｓｅ）ｅ：ｉｎＣａｓｈｍｅｒｅＧｏａｔＳｋｉｎｂｙＤＳｕｅｎｃｉｎ．ＰＬｏＳＯＮＥ．２０１２７１２ｅ５０００１．ｑｑｇ，（）－－［１４Ｆｏｓｔｅｒ瓜１ＰｅｄｅｒｓｏｎＢＡＮｏｒｄｌｉｅＲＣ．Ｇｌｕｃｏｓｅ６ｏｓｈａｔａｓｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ］，，ｐｈｐ，ｒｅａ－ｕｌｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ；ａｎｕｄａｔｅ．ＰｒｏｃＳｏｃＥｘＢｉｏｌＭｅｄ．１９９７２１５４：３１４３３２，ｇ，），ｐｐ（［１５］ｖａｎｄｅＷｅｒｖｅＱＬａｎｇｅ乂，ＮｅｗｇａｒｄＣ，ｅｔａｌ．Ｎｅｗｌｅｓｓｏｎｓｉ打ｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏ打ｏｆ－ｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔａｕｇｈｔｂｙｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅ６ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓｙｓｔｅｍ．ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ．２０００２６７６－：１５３３１５４９．，（）。巧Ｘｉ泣Ｘ，ＹａｎＪ，Ｓｈｅｎ义ｅｔａｌ．Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｉｍｐｒｏｖｅｓｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏ化ｓｍｉｎｄｉａｂｅｔｉｃ９９ 第五部分ｎｄＲＮＡ差异表达结果的验部和把基齊的頭测及功能分析ｒａｔｓｂｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｈｅａｔｉｃｌｕｃｏｎｅｏｅｎｅｓｉｓ．ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１３６：ｅｌ６５５６．ｙｐｇｇ，；口）１７ＭａｒｔｉｎｅａｕＬＣ．Ｌａｒｅｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｌｕｃｏｓｅｕｔａｋｅａｎｄ［］ｇｇｐｓｕｒｅｓｓ－－ｔｔｗｅａｋｕｎｃｏｕｐｐｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｌｕｃｏｓｅ６ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｉｖｉｙｂｙｐｌｅｒｓｏｆｏｘａｖｅｓｈｏｒ－ｉｄｔｉｈｏｌａｔｉｏｎ．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｈｓＡｃｔａ．２０１２１８２０：１３３１５０．，口）ｐｐｙｐｙ［１８］杨崇哲，刘丰，银孟卓，等．２型糖尿病发病过程中ｍｉｃｒｏＲＮＡ２７ｂ、１３０的－表达水平及调节．中国老年学杂志．２０１４３４１１：３０巧３０４１．，（）ｎ－。刊ＨａｉｔａｏＷａｎｇＱｉｓｈａＺｈａｎｇｉａｎＷｅ打ｅｔａｌ．Ｐｒｏｌｉ打ｅｒｉｃｈＡｋｔｓｕｂｓｔｒａｔｅｏｆ４０，Ｑｇ，，ｋＤａＰＲＡＳ４０：ＡｎｏｖｅｌｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｔａｒｅｔｏｆＰ巧ｋ／Ａｋｔｓｉｇｎａｌｉｎａｔｈｗａ．Ｃｅｌｌ（）ｇｇｐｙＳ１２２４１７－ｉｎａｌ．２０：２４．ｇ，０Ｇｏｖｅ＾口ｉｓＲ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＧＬＵＴ４ｒｅｕｌａｔｉｏ打ｉｎａｄｉｏｃｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ］ｇｐｙ４４０６４００－４１０Ｍｅｔａｂ．２０１：．，（）２１ＴａｎｉｕｃｈｉＣＭＥｍａｎｕｅｌｌｉＢ，ＫａｈｎＣＲ．Ｃｒｉｔｉｃａｌｎｏｄｅｓｉｎｓｉｎａｌｌｉｎａｔｈｗａｓ：［］ｇ，ｇｇｐｙｎｓｎ－ｉｉｇｈｔｓｉｎｔｏｉｎｓｕｌｉａｃｔｉｏｎ．ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００６７２：８５９６．，（）２２ＣｈｅｎＸＨａｏＢＨａｎｅ－ｔａｌ．ｍｉＲ３７２ｒｅｕｌａｔｅｓｌｉｏｍａｃｅｌｌｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄ［］，，Ｑｇｇｐ－ｉｎｖａｓｉｏｎｂｄｉｒｅｃｔｌｔａｒｅｔｉｎＰＨＬＰＰ２．ＪＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ．２０１５１１６２：２２５２３２ｙ．ｙｇｇ，（）－－２３ＨａＦＺａｂｏｌｏｔｎＪＭＫｉｍＹＢｅｔａＬＬｉｖｅｒｓｅｃｉ行ｃｒｏｔｅｉｎｔｒｏｓｉｎｅ［］ｊＱｙ，，ｐｐｙｏｓｈａｔａｓｅ－ｉｏｆ－－ｐｈＩＢＰＴＰＩＢ化ｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｌｔｅｒｓｌｕｃｏｓｅｈｏｍｅｏｓｔａｓｓＰＴＰｌＢ／ｍｉｃｅ．ｐ（）ｐｇ－ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００５２８０１５：１５０３８１５０４６．，（）［２４］ＧｕｒｚｏｖＥＮ，ＳｔａｎｌｅｙＷＪ，ＢｒｏｄｎｉｃｋｉＴＣ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｗｉ化ｈｅｓｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄ出ａｂｅｔｅｓ．ＴｒｅｎｄｓＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ．２０１５，２６ｌ－：３０３９．（）２ＬｏｒｅｎｚｏＭＦｅｒｎａｎｄｅｚ－－［５，ＶｅｌｅｄｏＳＶｉＩａＢｅｄｍａｒＲｅｔａｌ．Ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄ］，：ｂｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓ－ｙｔｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｉｎｍｙｏｃｙｔｅｓａｎｄｂｒｏｗｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｓＪＡｎｉｍＳｃｉ．２００８８６１４４－１：９０４．，（）２６ＫｏｒｅｎＳＦａｎｔｕｓＩＧ．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰｒｏｔｅｉｎｒｏｓｉｎｅＰｈｏｓＰｈａｔａｓｅＰＴＰ化：［］，ｔｙＰｏｅｎ－ｔｔｉａｌ化ｅｒａｆｏｒｏｂｅｓｉｔｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｅ２ｄａｉｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｂｅ巧ｐｙｙ，ｙｐ００１ 博去学位论文ｎｏ－ＰｒａｃｔＲｅｓＣｌｉｎＥｎｄｏｅｒｉｌＭｅｔａｂ．２００７２１４：６２１６４０．，（）２７］ＢｅｎｅｔｔｉＥ，ＰａｔｅｌＮＳ，ＣｏｌｌｉｎｏＭ．ＴｈｅｒｏｌｅｏｆＰＰＡＲＰ／８ｉｎｔｈｅｍａｎａｅｍｅｎｔｏｆ［ｇｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅａｎｄｉｔｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＥｎｄｏｃｒＭｅｔａｂ－ＩｍｍｕｎｅＤｉｓｏｒｄＤｒｕａｒｅｔｓ．２０１１１１（４：２７３２８４．ｇＴｇ，）口８］ＧｏｔｏＴ，ＴｅｒａｍｉｎａｍｉＡ，ＬｅｅＪＹ，ｅｔａｌ．Ｔｉｌｉｒｏｓｉｄｅ，江ｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃｆｌａｖｏｎｏｄ，ａｍｅ－ｌｉｏｒａｔｅｓｏｂｅｓｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｍｅｔａｂｏｌｉｃ化ｓｏｒｄｅｒｓｖｉ过ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｓｉｇｎａｌｉ打ｇｆｂｌｌｏｗｅｄｂｙｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｏｘｉｄａｔｉｏｎｉ打化ｖｅｒａｎｄｓｋｅｌｅｔａｌ－ｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ－ｍｕｓｃｌｅｉｎｏｂｅｓｅ．ＪｕＢｉｏｈｅｍ０２２３：．Ｎｔｒｃ．２１，７７６８７７６（）９Ｈ－ｉｕｅＡ，Ｔｅ打ｅｎｂａｕｍＡ，ＭａｅｄａＮｅｔａｌ‘Ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｒｏｘｉｓｏｍｅｒｌｉｆｅｒａｔｒ口］ｇ，ｓｏｏｐｐａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｇａｎｄｓ，ｂｅｚａｆｉｂｒａｔｅａｎｄｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ，ｏｎａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｌｅｖｅｌ．Ａｒ－ｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｅＢｉｏｌ２００７，２７（３）：６３５６４１．０ｆｏｕｅｂｏ－ＹｅｓｓｏｕＡＡｔＪＭＡｔａｋ泣Ｅｄ；ａｌｌｉｆｒｒｉ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｒｏｅａｔｏａｃｔｖａｔｅｄ口］，ｇ，ｐ，ｐ－ｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｌｐｈａｍｏｄｕｌａｔｅｓｉ打ｓｕｌｉｎｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏ打ｆａｃｔｏｒｓａｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｄｏｓｅｓｕｅｓｉｎｍｏ－ｉｐｔｉｓｉｃｅ．ＭｌＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ．２００乂３２３１２：１０１１１１．（）［３１］ＺｈａｎｇＣ，ＢａｏＷ，艮ｏｎｇ义ｅｔａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｎｔｓａｎｄｔｈｅｒｉｓｋｏｆｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ：ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗ．ＨｕｍａｎＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＵｄａｔｅ．２０１３ｐ，４－巧：３７６３９０．（）口３ＴａｌｏｒＫＬｉｍａＰＧｅｌａｌｅｔｉＲ巧ａｌ．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰｒｏ１２Ａｌａｏｌｍｏｒｈｉｓｍｙ，，，ｐｙｐｏｆＰＰＡＲａｍｍａ２ｗｉｔｈｍｉｌｄｅｓｔａｔｉｏｎａｌｈｅｒｌｃｅｍｉａａｎｄｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ．Ａｍｇｇｙｐｇｙｇｂｓｅ－ＪＯｔｔＧｎｅｃｏｌ．２０１３２０８１）：Ｓ１２５Ｓ１２５ｙ（，，３３－文惠晓红张元珍．ＰＰＡＲｙ［］刘，杨，基因多态性与妊娠期糖尿病相关性的巧－：步探讨？武汉大学学报（医学版）．２０１４３５１６９７２．，（）［３４］ＹａｎｇＹＹ，ＷａｎｇＬＨ，ＣｈｅｎＴ，ｅｔａｌ．ＡｃｔｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＹｌｙｐｈｏｃｙｔｅｓｉｓｍｅ－ａｉｎｈｉｂｂｅｒｏｘｒｏｒｒｅｅａｍｍａａｍｍａｉｔｅｄｙｐｉｓｏｐｌｉｆｅｒａｔｏｃｔｉｖａｔｅｄｔｏｒｇＰＰＡＲｐ（ｇ）ａｏｎ－ｇｉｓｔｓ．ＦＰＡＲｇａｍｍａｃｏａｓｓｏｃｉａｔｉｏ打ｗｉｔｈｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＮＦＡＴ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２０００２方７：４５４＾４５４４．，（）１０１ ｍＡ第互部分ｉＲＮ差异表达结果的验棘和於基因的球測义功能分析ＧａｏＹａｎＭＦ，ＳｕＹＰｅｔａｌ．Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｒｅｄｕｃｅｓｉｎｓｕｌｉ打Ｋｓｉｓｔａｎｃｅｔｈｒｏｕ口引乂ｇ，ｇｈ－－ａｃａ－ｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＰＰＡＲＹａｔｈｗａａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＴＮＦｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．ＪＥｔｈｎｏｈａｒｍｐｙｐｐａｃｏ２０１３－ｌ．１４７：５０９５１６．，（巧＊ｃｒｃａｎａｎ－ｎｓｕ３６ＨａｎＳＨＳａｋｕｍａＩＳｈｉｎＥＫ巧ａｌ．Ａｎｔｉａｔｈｅｒｏｓｌｅｏｔｉｄｔｉｉｌｉｎｉｅｓｉｎｃｅ［］，ｓｔａ，，ｅｆｅｃｔｓｏｆａｄｉｏｎｅｃｔｉｎ：ｂａｓｉｃａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓ．ＰｒｏｇＣａｒｄｉｏｖａｓｃＤｉｓ．ｐ－２００９５２２：１２６１４０．，（）－ｒｉｕｅｚ－ａｌｖｏＲＳｅｒｒａｎｏｒｃｏｅａｌＴｈｅ３７ＢａｒｒｏｓｏＥ，ＲｏｄＣＭａＬｔ．ＰＰＡＲｂｅｔａ／ｄｅｌｔａ［］ｇ，，－ｔ５ＱｔｓｔｏｗｎｒｅｕａｏｎｏｆＡＭＰＫａｕｓｅｄ泣－ａｃｉｖａｔｏｒＧＷ１５１６ｐｒｅｖｃ打ｈｅｄｇｌｔｉｃｂｙｈｉｇｈｆａｔ－姐巧－－ｉｎｌｉｖｅｒａｎｄａｍｌｉｆｉｅｓ化ｅＰＧＣｌａｌｈａＬｉｉｎ１ＰＰＡＲａｌｈａａｔｈｗａｌｅａｄｉｎ１：０ｐｐｐｐｐｙｇｎｃｒｅａｓｅｄ－ｆａｔａｃｉｄｏｘｉｄａｔｉｏｎ．ｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ．２０１１１５２：１８４８１８５９．ｉｔＥｙｇｙ，口）－ｅｒｅａｎｅＪＭＴｌｄＡｎｇＪＴｕｒｎＲｅｌａａｏｎｉｓｈａｅｏｏｓｉｎｅｆｅｃＮｔｌ．ＦＰＡｄｔｔｓｖｔｓｏ口巧Ｙ，ｇｐｐｇ，：＾＊ａ－ｓａｎｃｅｅｅｒｅｎｍｅａｂｏｃｉｅｓｏｎｓｅｉｎｓｕｌｉｎｉｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｈｉｇｈｆｔｆｅｄｒａｔｄｍｉｄｕ化ｄｉｆｔｔｌｉｐｓｉｎ１－ｍｕｓｃｌｅ．ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ．２０１１６３３：５％５６６．，（）＂口９ＷｕＨＴＣｈｅｎＣＴ，ＣｈｅｎＫＣ，巧ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｅｒｏｘｉｓｏｍｅ］，ｇｐｏＫｆｅｏｒ－ａｃｐｒｒａｔｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｄｅｌｔａｉｍｐｒｏｖｅｓｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｈｅｐａｔｉｃｓｔｅａｔｏｓｉｓ－－ｉｎｈ：ｉｈｆａｔｄｉｅｔｉｎｄｕｃｅｄｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ．ＨｏｒｍＭｅｔａｂＲｅｓ．２０１１４３９６３１６３５．ｇ，（）４０Ｔａ－ｔａｒｃｚｋＴＣｉａｒｄｉＣＮｉｅｄｅｒｗａｎｅｒＡｅｔａｌ．Ｐｏｓｔｒａｎｄｉａｌｔｒｉｌｃｅｒｉｄｅｒｉｃｈ［］ｙ，，ｇ，ｐｇｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｄｕｃｅｈｅｐａｔｉｃｉｎｓｕｌｉｎ巧ｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｉｎｄｅｐｅ打ｄｅｎｔｌｙｏｆｔｈｅｉｒｒｅｃｅｏｒ－ｍｅｄａｅｄｃｅｕａｒ－ｔｉｔｌｌｌｕｔａｋｅｏｅｌｃｒｉｎｏ：．ＭｌＣｌＥｎｄｏｌ．２０１１３４３１２７１７８．ｐｐ（，＾）［４１ＫｏｔｒｏｎｅｎＡＪｕｕｒｉｎｅｎＬ，ＴｉｉｋｋａｉｎｅｎＭｅｔａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｌｉｖｅｒｆａｔ，ｉｍａｉｒｅｄ］，，ｐｉｎｓｕｌｉｎｃｌｅａｒａｎｃｅ，ａｎｄｈｅｐａｔｉｃａｎｄａｄｉｐｏ化ｔｉｓｓｕｅｉｎｓｕｌｉｎｉｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．ｒｏｅｎｔｅｒ－Ｇａｓｔｏｌｏｇｙ．２００８１３５（１）：１２２１３０．，昨］Ｃ＆ｂＧｎｓＧＨ，ＤｚａｕＶＬＴｈｅｅｍｅｒｇｉｎｇｃｏｎｃｅｐｔｏｆｖａｓｃｕｌａｒｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ．ＮＥ打ｇｌＪ３３０２０－Ｍｅｄ．１９９４：１４３１１４３８．，（）［４３］李福勤，王雪清，王治英，等．妊娠糖尿病胎盘绒毛体视学研究．实用妇产００４－：科杂志．２２０４２１７２１９．，（）１０２ 博壬学位论文４４ＳｅｔｈｕａｔｈＭｅｒａｗＭＨａｔｚｉｅｏ巧ｉｏｕＡｅｔａｌ．Ａｕｉｄｅｔｈｒｏｕｈｒｅｓｅｎｔ［］ｐｙ巧ｇ，ｇＱｇｇｐｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌａｐｐｒｏａｃｈｅｓｆｏｒ化ｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍａｍｍａｌｉａｎｍｉｃｒｏＲＮＡｔａｒｇｅｔｓ．ｅ－ｔｈｏｄｓ：ＮａｔＭ．２００６３１８８１８８６．（，７）１０３ 全文总结全文总结一＞１妊娠糖尿病是妊娠期常见并发症之，在妊娠期及分娩结束后都可对母（＾。儿健康产生严重影响，并且其发病率逐年上升，成为世界性的公共卫生问题经典的观点认为妊娠期期间膜岛素抵抗是发病的关键环节，对于其发病原因及一些的进展相关因素的研究也取得了，但具体的机制仍不清楚。已有的研究发ｃ一现ｍｉｒｏＲＮＡ作为种内源性产生的小ＲＮＡ分子，在细胞增殖分化、器官组织发育、肿瘤发生、炎症反应及免疫应答等方面起重要的转录后调控作用，被认为是基因调控的重要环节一些与疾病密切相关。近年来在２型糖尿病也发现了一一的ｍｉＲＮＡｓ。胎盘组织作为唯连接母儿的界面，本身又是种可Ｗ产生多种细胞因子的内分泌器官，对母体与胎儿的物质交换起决定性的作用，成为研究ｓ妊娠期糖尿病的热点。然而，目前关于ｍｉＲＮＡ在妊娠期搪尿病患者胎盘组织表达谱及其功能作用的研究尚未见报道。基于于Ｗ上问题，本研究通过收集正常妊娠和妊娠期糖尿病病例，获得胎盘组织和血液标本，分析临床特点及胎盘二代ｍｎａ组织病理学改变，利用第Ｉｌｌｉ高通量测序平台对提取到的组织总ＲＮＡ进行ｍｉＲＮＡ的测序，得到发生巧娠糖尿病时胎盘组织ｍｉＲＮＡ差异表达谱，结合在线软件及数据库预测差异表达ｍｉＲＮＡ的祀基因、祀基因的ＧＯ功能分类和ＫＥＧＧ通路。本研究是对妊娠糖尿病时胎盘组织ｍｉＲＮＡ表达谱及功能研究的。初步探讨，可为妊娠糖尿病的发病机制的研究提供新线索及新视点下面将各部分的研究结果总结如下：１．正常妊娠妇女４０例及妊娠期糖尿病妇女病例４０例，检查孕前及分娩后、的身高体重等指标，收集血液标本胎儿分娩后的胎盘组织，检测空腹及餐后的血糖、膜岛素，妊娠糖尿病组空，检测胎盘组织病理学。发现与对照组比较－腹血糖、餐后２ｈ血糖、餐后２ｈ膜岛素、糖化血红蛋白和ＨＯＭＡＩＲ均明显升高，差异有统计学意义（ｆ均小于０．０１）；而空腹膜岛素、ＨＢＣＩ组明显低于正。常对照，差异有统计学意义均小于化０１）光镜下妊娠糖尿病者胎盘组织１０４ 博壬学位论文、发生小动脉血管壁绒毛壁增厚，合胞体结节明显增多合体膜形成等。统计分＜析显示妊娠糖尿病胎盘组织的结构变化与对照组相比有明显的差别（ｆ０．０５）。可见ＧＤＭ者基础膜岛素分泌降低伴有膜岛素分泌的棄乱及族岛素功能的抵抗，会导致胎盘组织结构变化、进而影响其功能。２．胎盘组织用Ｔｒｉｚｏｌ法进行总ＲＮＡ的提取，选取３对样本经过质量和纯度分析鉴定合格后，采用逆转录法构建小ＲＮＡ文库，使用第二代Ｉｌｌｉｍｉｎａ高通量测序平台陆Ｓｅｑ２０００测序仪采用边合成边测序的方法对ｍｉＲＮＡ测序并分析结果。Ｌｔ为上－设定阐值大于２倍ｉ调，小于０．５倍为下调。１０３５ｎｔ文库数量最多的小ｌｔ－ｍＲＮＡ长２１ｎ２４ｎｔｉＲＮＡ量ＲＮＡ总量的３０％Ｗ上度在，占所有小，最终获得洁净的片段超过１０００００００。将得到的片段与Ｇｅｎｅｂａｎｋ及Ｒｆｒａｍ数据库比对去除其他小ＲＮＡ筛选出ｍｉＲＮＡ的种类数达７０００多种。ＧＤＭ组的ｍｉＲＮＡ种类及总量都要多于正常对照。通过与正常对照相比，妊娠糖尿病胎盘组织有１３８种－－－－ｍ－－－％－己知的ｍｉＲＮＡ表达明显上调，包括ｈｓａｉＲ５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａｍｉ民５、ｈｓａｍｉＲ－－－－－－－－ｍ－－－－－３巧５ｐ、ｈｓａｉＲ３７４ａ５ｐ、ｈｓａｍｉＲ１２７７５ｐ、ｈｓａｍｉＲ２９ａ３ｐ、ｈｓａｍｉ民８８９３ｐ－＞＜ｓａ－－口６９ａ等（ｌｏｇ２ｒａｔｉｏｌ，尸０．０１）；１６种己知ｍｉＲＮＡｓ明显表达下调，如ｈｍｉ艮、－－－－＜－ｍｉＲｍ－－－＜ｈｓａ１２４６、ｈｓａｉＲ６６３ａ、ｈｓａｍｉＲ７７０４等（ｌｏｇ２ｒａｔｉｏｌ；Ｐ０．０１）。这些差异表达的ｍ一ｉＲＮＡ与妊娠糖尿病有密切关系，并且部分ｍｉＲＮＡ包括ｍ－、ｍ－ｍ－ｉＲ２９ｉＲ；Ｉ２５ｉＲ１２６等被证和实参与膜岛素信号传导通路的关键成分，与族岛素抵抗有关。３．ｍｉＲＮＡＧＤＭ的差异表达利用高通量测序方法，我们初步筛选出了ｓ在谱一，但是高通量测序的方法结果可能存在定的假阳性，必须对其进斤验证。使用目前被广泛应用的高灵敏度高特异性的实时定量ＰＣＲ法，我们对测序结果－－－－－ｍ－中发现的差异表达富但是表达量较低的ｈｓａｍｉＲ５４８ａｍ５ｐ、ｈｓａｉＲ％５ｐ等进行了检测一，定量结果与测序结果致，说明高通量测序结果可靠。为了了解差异表达ｍｉＲＮＡ的功能，利用目前流行的生物信息学法结合在线软件及数据库，我们对差异表达ｍｉＲＮＡ的祀基因进行预测并分析基因本体论和代谢及信号通１０５ 全文总结路分析。预测差异表达的ｍｉＲＮＡ祀基因数和祀基因位点数在ＧＤＭ组都要多于－－－ｓａｍｉＲｍｉ民－－ｍ－ｎｏｖｅ－ｍ－正常对照。ｈ５４８ａｍ、ｈｓａ３７２、ｈｓａｉＲ３７４和Ｉｉｒ２２等预测到的範基因有共同的部分。差异表达的ｍｉＲＮＡ範基因ＧＯ富集分析显示送些祀基因的功能涉及到细胞增殖分化、大分子物质代谢、信号转导、免疫反应及糖尿病密切相关物质转运代谢等生物过程和功能。ＫＥＧＧ通路分析发现ＧＤＭ，组ＫＥＧＧ通路的汇集的祀基因数量要多于正常对照组，差异表达ｍｉＲＮＡ对应的祀基因主要参与了化动蛋白细胞骨架的调节、局部细胞粘附、细胞内吞作用、巧离子信号通路、趋化因子信号通路、Ｗｎｔ信号通路、泛素介导的蛋白水解、膜岛素信号通路、细胞调亡、过氧化物酶体增殖物激活受体和脂肪细胞因子信号通路等，说明这些通路在ＧＤＭ发病过程起重要作用，甚至参与胎盘组织小血管重塑。１０６ 博去学位论文文献综述妊娠期糖尿病的发病机制研究进展一搞要：妊娠期糖尿病（ＧＤＭ）作为妊娠期常见的并发症之，是指在妊娠期间首次发现或发生的糖代谢异常，其发病率逐年上升，严重危害母婴健康。ＧＤＭ发病机制仍不清楚，虽然经典的观点认为其主要与膜岛素抵抗相关，近年来的大量研究发现遗传因素、生活方式、膜岛Ｐ细胞功能缺陷、炎症因子及脂肪细一胞因子等多种因素参与其中。现就ＧＤＭ的发病机制研究进展做总结。：妊娠期糖巧病关键词；家族史；生活方式；炎症因子；脂肪因子妊娠期糖尿病（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ，ＧＤＭ是指妊娠期首次发生或发）现的任何程度的糖耐量受损，包含了部分妊娠前已患有糖尿病但孕期首次被诊－Ｗ断的患者。不同人群的发病率有差异．１．６％，范围在１７％１之间，如欧美国家ＷＰｌ的发病率在４％左右ＧＤＭ发５％－，我国调查结果显示病率在７％，而且有逐年上升的趋势。ＧＤＭ对母婴有严重的危害甚至有长远的影响，尽管大多数的ＧＤＭ妇女会于分娩后返回至正常的一些个体后期的生活发展为糖耐量，２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）的危险性升高出生于ＧＤＭ的幼儿生长异常或超重，并可能出现其他的问题＞、，这些孩子在其１＾１后的成人生活中更可能出现肥胖了２０１＾１或Ｗ糖耐量异常。因此对妊娠糖尿病的研究受到的国内外的高度重视。关于ＧＤＭ的发病机制尚不清楚，经典的观点认为，妊娠早期因排糖量及胎儿获取葡萄糖量增加，雌激素、孕激素分泌增加，使膀岛素分泌増多，导致高族岛素血症，同时由于胎盘分泌的皮质醇、雌激素、孕酬等多种对抗膜岛素的激素，导致周围组织对膀岛素反应的敏感性下降。若膜岛素分泌不足不能补偿膜岛素抵抗（ＩＲ）将引起糖耐量异常甚至糖尿病的发生。Ｗ下我们将从遗传易感因素、生活方式、６细胞功能缺陷、炎症因子及脂肪因子等方面进述。遗传易感性：１０７ 文献综述Ｗ在遗传方面，糖尿病家族史是ＧＤＭ明显的相关因素。Ｗｏｉｌ等调查的６０３２名妊娠妇女中３１３名确诊为ＧＤＭ，结果糖尿病家族史的ＯＲ值为７．１。相似地，韩国的一项研究也发现Ｐ１一级亲属患有糖尿病的妇女发生ＧＤＭ的危险性明，第显增高。我国北方人群的报道显示，ＧＤＭ家系中母亲患有Ｔ２ＤＭ的家族中ＧＤＭ８［］的发生率明显增高。并且最近发现母系糖尿病史比父系的糖尿病史可Ｗ更好９［］地预测ＧＤＭ。一基因的多态性是家族史的背景体现之。目前，己经发现了十多种的基因－ｎ与ＧＤＭ的发生相关，主要是与Ｔ２ＤＭ密切相关的遗传易感基因，包括ＨＬＡ、转录因子７类２、ｅ肾上腺能受体基因、尾加压素ＩＩ基因、过氧化物酶増殖体激活受体基因、横腺类受体基因、葡萄糖激酶（ＧＣ巧基因、甘露聚搪结合凝集素基因Ｇ５４Ｄ、膀岛素样生长因子２、巧蛋白酶１０基因和膜岛素底物受体基因等一。最近的些报道还发现ＧＣＫ基因突变与ＧＤＭ的发生也有关系。－－ＷＨＬＡＩＩ和ＧＣＫ为例。由于地域、民族、人种等因素均能影响ＨＬＡＤＱＡ１一。的基因频率，因此国内外的报道存在差，结论也不统法国学者观察到ｔＷ＊＊ＨＬＡ－ＤＲＢ１０７０１／ＤＱＡ１０２０１在ＧＤＭ组出现的频率高于正常糖耐量组。我Ｗ－ＤＱＡ国的学者发现北方人群的ＧＤＭ发病与ＨＬＡ１基因的遗传易感性相关，＊ＨＬＡ－ＤＱＡ１０２０１基因在天津及秦皇岛地区汉族ＧＤＭ患者中频率较离，研究一一。者认为这位点可作为ＧＤＭ易感基因的候选基因类似地，南方地区的项－ＤＱＡ１与ＧＤＭ的相关人群调查也报道了ＨＬＡ，但是不同的是＊ＨＬＡ－ＤＱＡ－１０５０１基因可能为广西地区汉族ＧＤＭ的易感基因。关于ＨＬＡＩＩ基因具体如何参与ＧＤＭ的发病，还不是很清楚，可能与免疫反应有关，因为ＨＬＡ－。ＩＩ类分子的主要功能是呈递外源性抗原和将自身抗原呈递给Ｔ细胞ＧＣＫ是调节人一种酶体血液中葡萄糖水平的非常重要的，主要作用是监控血液中的葡萄糖水平。ＧＣＫ仅在膜岛ｅ细胞和肝细胞上表达，被视为葡萄糖感受器和代谢信号转导发生器。ＧＣＫ的基因结构决定蛋白质的结构，进而决定酶的活性。因此，，若ＧＣＫ的活性降低，正常代谢平衡化现奈甜则导致血糖升高。１０８ 博壬学位论文３Ｕ大量的研究证实ＧＣＫ的基因多态性与Ｔ２ＤＭ密切相关。韩紅敬等骑ＧＣＫ基＞＇因３和５端的微卫星ＤＮＡ多态标记（ＧＣＫＫＧＣＫ２）研究发现ＧＣＫ２是ＧＤＭ。的相关因素，ＧＣＫ的不同等位基因对膜岛素分泌调节能力的不同我们研究组Ｍ分析了单位点ＧＣＫ基因多态性与ＧＤＭ的关系，发现ｇＣＫ基因２５９位点单核巧酸多态性可能在ＧＤＭ遗传易感性中起重要作用，Ｔ等位基因可能与ＧＤＭ发生有关。Ｓｈａａｔ等的研究也显示，葡萄糖激酶基因启动子３０Ｇ／Ａ多态性可一。能与ＧＤＭ发病有关，等位基因Ａ是其发病的危险因素己西的最新项研究发现，ＧＣＫ内含子和非翻译区内的突变不影响血糖控制并与ＧＤＭ没有相关性，而低ＧＣＫ突变的ＧＤＭ妇女血糖水平控制更好［１６］。鉴于ＧＤＭ与Ｔ２ＤＭ一定的作用有许多的相似性，我们推测ＧＣＫ基因ＧＤＭ发病中起。实际上，鉴一些研究者已经着手进行葡萄糖激酶基因于ＧＣＫ在血糖调节上的重要地位，有治疗Ｔ２ＤＭ。生活方式：流行病学的研究证实包括饮食、运动等生活方式与ＧＤＭ的发病密切相关。、高龄、妊娠前超重或肥胖及经产妇的ＧＤＭ发病率升高，ＧＤＭ与孕前低纤维一高脂肪摄入、少运动等有关。美国项大样本的调查研究发现孕中期的饮食中，在摄入总能量不变的情况下Ｗ碳水化合物每增加１００千卡热量与ＩＧＴ相对危险度降低１２％、ＧＤＭ相对危险度降低９％有关；而用脂肪代替碳水化合物则使得ＩＧＴ和ＧＤＭ的相对危险度升高（均提高０．１倍）。研究者推荐ＩＧＴ和ＧＤＭ患者的曰常一饮食可将碳水化合物比例提高－１０％，脂肪比例降低我国的项病例对、照研究显示过量进食水果喜欢吃釉食等饮食与ＧＤＭ发病相关，而较多地进食白肉为ＧＤＭ的保护因素。孕妇增加多不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的摄入量、减少蛋白质（尤其是动物蛋白质）及饱和脂肪酸摄入量，可Ｗ降低ＧＤＭ的发一ｔＷ病风险。项对２１７６５名妇女的前瞻性研究表明，在校正了孕前体重指数、饮食等因素的影响后，孕前规律性的体力活动可降低ＧＤＭ的发生。每周坐着看电视超过２０小时且没有规律运动的妇女，其发生ＧＤＭ的危险性是每周看电视小于１０９ 文献综迷ＰＷ２小时且有规律运动妇女的２．３倍。为此，健康教育和生活方式干预（包括膳食管理和制订运动计划），可有效地控制妊娠糖尿病病人的血糖水平，减少妊娠ＰＵ和围产儿并发症的发生率。膜岛Ｐ细胞功能缺陷：ＬＡ－除了上述的ＨＩＩ和ＧＣＫ在糖尿病发病中所起的作用，某些研究对膜岛素分泌、外周膜岛素作用的遗传效应做了探索，发现基因对膜岛素分泌的作用Ｐｑ比起环境所起的作用要大。ＧＤＭ患者膜腺目细胞受损也受遗传易感性的影响在在所有的ＧＤＭ患者中一，有部分有膜岛细胞抗体阳性者，提示部分Ｐ４２５’ｌ这部分患者更易患上患者有自身膜岛细胞的破坏，并且１型糖尿病。李玉ｐｙ钟等对妊娠中晚期孕妇糖耐量正常、糖耐量减低和ＧＤＭ者的ＩＲ及ｅ细胞分泌功能进行评价，发现妊娠中晚期孕妇糖耐量减低阶段膜岛素早期分泌功能受损，到ＧＤＭ阶段兼有Ｉ民和目细胞缺陷。多数学者认为妊娠期膜岛细胞増生肥大，增加膜岛素分泌来代偿孕期普遍存在的膜岛素敏感性下降，如果族岛分泌功能的増加不足Ｗ抵消膜岛素敏感性的下降，贝祿现为ＧＤＭ。化增强导致了目细胞分泌功能减退、膜岛，同时膜岛Ｐ细胞本身储备能力低膜岛目细胞调亡等因素共同导致ｅ细胞功能缺陷。炎症因子：一－－ｒｅａｃＣ反应蛋白（ＣｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎＣＲＰ）是由肝脏产生的种急性时相反应，蛋白，已被广泛用作炎症的标记物。ＣＲＰ浓度与肥胖、吸烟和高血压等也血管。ＩＲ疾病的危险因素密切相关，糖尿病的高血糖也与炎症反应相关与血浆中ＣＲＰ水平有明显相关关系。Ｓａｌｍｉ等的研究显示，ＧＤＭ患者的血清超敏ＣＲＰＰ７１明显升高。在糖耐量发生受损之前ＣＲＰ与服胖程度相关，后期糖代谢异常Ｓ９ＰｉＰ１ＧＤＭ主要与孕晚期的ＣＲＰ而不是孕中期ＣＲＰ相关ｌａ。ＤＡｉｍ等认为，虽然ＣＲＰ在ＧＤＭ中明显升高但是不能作为ＧＤＭ的早期预测指标。有文献报道口Ｗ、，调整了体重指数Ｔ２ＤＭ家族史后，患上ＧＤＭ的危险性在离ＣＲＰ水平时仍显著高于低ＣＲＰ水平者；同时对于ＣＲＰ＞５．３毫克／升的瘦体型妇女患上１１０ 博壬学位论文ＧＤＭ的风险比ＣＲＰ＜５．３的妇女增加３．７倍，研究者认为高ＣＲＰ水平作为ＧＤＭ的危险因素与肥胖无关。ｏａｃ－ａ肿瘤坏死因子ａ（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｓｉｓｆｔｏｒａＴＮＦ）是脂肪组织中最早发现的，－炎症因子。在正常妊娠时低水平的ＴＮＦａ对生殖过程有多方面的调节作用。通过比较ＧＤＭ和正常妊娠妇女的血清肿瘤坏死因子ａ水平，发现ＧＤＭ组孕妇空腹血清ＴＮＦ－ａ水平明显升高，且与膜岛素敏感指数呈显著负相关，提示ＧＤＭ１１－１抄－孕妇ＴＮＦａ参与了。此结果还与目前大多数Ｔ２ＤＭＴＮＦａ与化关系的研一－究结果相致。ＴＮＦａ可由母体的单核巨隧细胞、脂肪细胞＾＞１及胎盘组织产生。ＰＮ却－ｉｓｈｉｍｕｒａ等开究发现祀胖者脂肪细胞可产生大量的ＴＮＦａ，而在身体质量减－ＴＮＦａ的重要场。轻后其浓度降低，认为脂肪细胞是产生所妊娠期问脂肪细胞－ａ－ａ増加，可产生过量ＴＮＦ。ＴＮＦ与细胞表面的受体结合后会干扰膜岛素受体后信号传导，从而导致膜岛素敏感性降低，同时抑制脂肪细胞摄取葡萄糖，使Ｐ３血糖、血脂代谢异常。Ｃｏｕｇｈｌａｎ等顿究发现在正常葡萄糖刺激时，正常孕妇胎盘与脂肪组织释放ＴＮＦ－ａ高于ＧＤＭ患者浓度葡萄糖刺激时ＧＤＭ患，而髙－ａ４倍者胎盘与脂肪组织的ＴＮＦ释放量比正常孕妇高。ＧＤＭ患者的血糖调节能力下降继发高血糖－ａ的升高。ＴＮＦ－ａ与ＧＤＭ之间可能互为，从而导致ＴＮＦ因果关系。一－６－－血清白细胞介素（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６正６是种多功能细胞因子，可由Ｂ细，）胞、Ｔ细胞、单核细胞、脂肪细胞等多种细胞产生，在免疫和炎症反应中起重－。。要作用多个研究表明，正６可能通过增加化参与ＧＤＭ发病如ＧＤＭ早期，一－６促进正－６忙族岛素分泌，导致高膜岛素血症，当增加到定程度，则抑制膜ｔＷ。岛素的分泌，损害目细胞分泌功能，导致糖尿病的发生脂肪因子：脂肪组织不仅是能量储存器官，而且还是功能非常活跃的内分泌器官。由脂肪组织分泌的生物活性分子统称为脂肪因子，包括Ｗ下几种因子：瘦素、脂联素、抵抗素、白介素、内脂素等。Ｗ往的观点认为瘦素等脂肪因子只能由脂１１１ 文献综达肪组织分泌，近年来，人们在胎盘组织发现了脂肪因子的存在，如瘦素、脂联素、抵抗素等，它们被认为是参与孕妇成形成的重要因素，在妊娠期糖尿病化ＰＳ１发生过程中发挥重要作用。瘦素（ｌｅｐｔｉｎ）是肥胖基因的蛋白产物。妇女妊娠后，椎二醇、皮质醇和膀一定量的瘦素岛素水平的升高可刺激脂肪细胞产生。另外，妊娠妇女胎盘滋养一。层细胞也合成大量瘦素并分泌入血，使母体瘦素水平进步升高研究发现，存在膀岛素抵抗的ＧＤＭ妇女与正常搪耐量孕妇及健康未孕妇女比较，其具有Ｐｄ较高的血浆瘦素浓度。Ｍｃｌａｃｈｌａｎ等研究证实，ＧＤＭ妇女体内的瘦素水平无论是在妊娠期间还是在产后均与膜岛素的敏感性呈负相关，即体内瘦素水平越高，机体对膀岛素的敏感性越低，提示瘦素和膜岛素之间可能存在洁抗作用。ａ－ａ还瘦素与ＩＮＦ可能在化中起愤同作用。瘦素、ＴＮＦ可能与孕期增加的雌孕激素、皮质醇等协同作用，参与孕期膜岛素抵抗的发生，加重ＧＤＭ的病理生理变化。一脂联素（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）是脂肪组织产生的对抗膜岛素抵抗与炎症反应的种，减少血浆甘油三醋蛋白质，通过刺激脂肪酸的氧化，増加膀岛素敏感性而改Ｐｓ善葡萄糖的代谢。Ｓｏｈｅｉｌｙｋｈａｈ惭研究显ＧＤＭ患者血清中的脂联素明显低于正常妊娠妇女。对正常糖耐量（ＮＧ１＞糖耐量减低（ＩＧＴ）和ＧＤＭ者脂联素与ＩＲ关系的研究发现血清脂联素由ＮＧＴ组到ＩＧＴ组和ＧＤＭ组呈显著下降，脂联素与空腹膜岛素、孕晚期体重指数、膜岛素抵抗指数呈显著负相关，研究者认为脂联素水平与ＧＤＭ患者ＩＲ程度密切相关，其水平可作为预测妊娠期糖尿病ＷＷ膜岛素敏感性的指标。Ｒｅ也ａｋａｒａｎ等还指出脂联素也是衡量族岛目细胞功能的重要指标，是妊娠期ＩＲ发展为糖尿病的关键因素。ｎ一抵抗素ｒｅｓｉｓｔｉ是由白色脂肪组织特异性分泌的种多肢激素，妊娠时胎盘（）组织也可分泌，其主要作用于外周祀组织（巧脏、脂肪和骨骼肌）影响膜岛素的信号通路而引起膜岛素抵抗研究证实ＧＤＭ孕妇的抵抗素水平较正常孕妇明显增高，而且抵抗素与膜岛素抵抗呈正相关有观点认为胎盘分泌的１２１ 博去学位论文ｆＷ抵抗素也可能是孕晚期孕妇血清抵抗素升高的主要来源。ＧＤＭ妇女循环中升高的抵抗素可Ｗ枯抗膜岛素信号，进而影响葡萄糖的代谢，参与ＧＤＭ的进程。内脂素（ｖｉｓｆａｔｉｎ）由Ｆｕｋｕｈａｒａ在２００５年Ｉ月发现，在小鼠和人的内脏脂肪组ＷＳ织中高度表达，具有类膜岛素特性而产生降糖作用。内脂素与膜岛素受体结合，诱导膜岛素受体（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ）、族岛素受体底物脚ｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓｕｂ－ｓａｅ－－ｔｒｔ，ＩＲＳ）１和ＩＲＳ２的络氨酸残基磯酸化，激活蛋白激酶Ｂ和丝裂原活一ｔＷ。Ｓｔｈｉ化蛋白激酶信号转导通路，这与族岛素的信号传导通路致ｅ认为，内脂素可能有双重作用；通过自分泌和旁分泌促进分化和脂肪在内脏脂肪组织的沉积；经内分泌来调整外周组织的膜岛素敏感性。ＧＤＭ患者的血清内脂素水平高于ＮＧＴ妊娠妇女和ＩＧＴ妊娠妇，妊娠女性内脂素高水平表达増加了组织ＩＲ４８［程度另外Ｆａｓｓｈａｕｅｒ等惭研究则提示高水平的内脂素可能通过増加化及引发的炎症状态参与妊娠期高血压疾病的发生。综上所述，ＧＤＭ是环境与遗传因素共同作用的多基因复杂疾病，对其病因的深人了解有助于临床的防治工作开展，Ｗ减少母婴并发症。目前的研究已经一取得了很多的成果，但是相关研究可能仅仅揭露了冰山的角，还有许多问题仍待阐明，如母系糖尿病家族史ＧＤＭ高发病率的分子机制、ＧＣＫ等基因多态性和胎盘分泌的脂肪因子在ＧＤＭ发病中的具体作用等。参考感ＳｃｈｎｅｉｄｅｒＳＳｏｃｋＧＷｅｔｚｅｌＭｅｔａｌ．Ｔｈｅｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｅｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｉｎ［＂，ｓ，，ｐｇａｄｖａｎｃｅｄ－ｅｃｏｎｏｍｉｅｓ．ＪＰｅｒｉｎａｔＭｅｄ．２０１２４０５：５１１５２０．，（）口］ＡｍｅｒｉｃａｎＤｉａｂｅｔｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｄｉａｎｏｓｉｓａｎｄｃｌａｓｓ巧ｃａｔｉｏｎｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ｇｅｓ－ＤｉａｂｔｅＣａｒｅ２００４２７：Ｓ５Ｓ１０．；３王林琳侯红巧－．妊娠期糖尿病研究进展．新医学．２００９．４０４：２７１２７３．［］，（）１１３ 文献综述［４］ＪａｒｖｅｌａＩＹ，ＪｕｕｔｉｎｅｎＪ，ＫｏｓｋｅｌａＰ，ｅｔａｌ．Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓｗｏｍｅｎａｔｒｉｓｋｆｏｒｐｅｒｍａｎｅｎｔｔｙｐｅ１ａｎｄｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｉ打ｆｅｒｔｉｌｅａｇｅ：ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｒｏｌｅｏｆａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄ－ｉｅｓ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．２００６２９：６０７６１２．，５ＡｔｅｂｏＪＭＧｒｉｓｓａＯＹｅｓｓｏｕｆｏｕＡ，ｅｔａｌ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆａｄｉｏｋｉｎｅｓａｎｄｃｔｏｋｉｎｅｓ［］ｇ，，ｐｙｅｓａｉｏｎａｌｄｉａｂｅｅｓａｎｄｍａｃｒｏｓｏｍｉａｌｉｎｏｃｒｉｎｏｌｅａｂ：ｉｎｇｔｔｔ．ＪＣＥｎｄＭｔ．２００６９１，４－１３７４１４３．ｔｌＷｏｉｌＭ，ＳａｕｋＪ，ＳｈａｈＡ，ｅａ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ；ａ［巧ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．２００４，２７１：２１．（）［７］ＲｈｅｅＳ乂ＫｉｍＪＹ，ＷｂｏＪＴ：巧ａｌＦａｍｉｌｉａｌｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇｏｆｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｉｎＫｏｒｅａｎｗｏｍｅｎｗｉｔｈｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＫｏｒｅａｎＪＩｎｔｅｒｎＭｅｄ，２０１０２５３：ｇ，（）２６９－２７２．－巧邱巧瓶妊娠期糖尿病的固产期护理及健康指导河北医学．２０１０１６８：１００４］，（）１００５，巧ＴａｂｄｋＡＱＴａｍｄｓＰ知ｅｒｆａｌｖｉＡｅｔａｌ．Ｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆａｔｅｒｎａｌａｎｄｍａｔｅｒｎａｌｈｉｓｔｏｒ］Ｇ，ｐｙｏｆｄｉａｂｅｈｓｍｅｌｌｉｔｕｓｏｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｊｐｇｃｌｎｖｅｓｔ－Ｅｎｄｏｒｉｎｏｌ．２００９３２７：６０６６１０．，（）０ＶａｍｂｅｒｕｅＡＦａａｒｄＩＢｉａｎｃｈｉＦｅｔａｌ．ＧｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｉｌｉｔｕｓａｎｄＨＬＡ。］ｇ，，ｊｙ，－－ｔｃｌａｓｓＩＩＤＱＤＲａｓｓｏｃｉａｉｏ打：ＴｈｅＤｉｅｓｔＳｔｕｄｙ．ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｅｎｅｔ．１９９７２４：（，）ｇ呂，口）３８５－３９４Ｕ－］牛秀敏征常颖，等．妊娠期糖尿病与ＨＬＡＤＱＡｌ基因多态性相关性的［，常，－研究．天津医科大学学报２００６１２２：２１１２１３．，（）－［１２］梁敏贺瑜，罗佐杰．广西汉族妊娠期糖尿病与ＨＬＡＤＱＡ１基因相关，性研－８：５４５５４７．苑临床内科杂志．２００９．２６（）１３韩红敬，王山米，纪立农等．葡萄糖激酶基因与妊娠糖尿病的关系．中华妇［］１９９９３４－产科杂志．，（１）：２３２６．［１４］李伟，唐波．萄糖激酶基因多态性与妊娠期糖尿病遗传易感性的关系．山东１１４ 博去学位论文９－医孰２００４９１５：３４．，（）ＳｈａａｔＮＫａｒｌｓｓｏｎＥＬｅｍｍａｒｋＡ巧ａｌ．ＣｏｍｍｏｎＶ狙ｉａｎｔｓｉｎＭＯＤＹｅｎｅｓ＂ｙ，，，ｇｉｎｃｒｅａｔｈｒｉｓｋｏｆｓｔｔｉｏｎａｌ出ａｂｅｔｅｓｌｌｉｔｕｏｌｏｉ－ｓｅｅｅａｍｅｓ．Ｄｉａｂｅｔａｇｇ．２００６４７：１５４５，％）１５５１．１６ＦｒｉｅｒｉＨＲＳａｎｔｏｓＩＣＲｅａＲＲｅｔａｌ．Ｌｏｗｒｅｖａｌｅｎｃｅｌｕｃｏｋｉｎａｅｎｅ［］ｇ，，，ｐｏｆｇｓｅｇｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｅｓｔａｔｉｏｎａｌ出油ｅｔｉｃａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｏｏｄｌｃｅｍｉｃｃｏｎｔｒｏｌ．ＧｅｎｅｔＭｏｌｇｐｇｇｙＲｅｓ－．２０１２ｌｉ：４３３４４１．，ｐ）ｌｄａｎａｉｅａ－ｚｅｃｆｍａｃｒｏ１７ＳａＴＭＳＲｉＡＭＡｄａｉｒＬＳ．Ｅｆｆｔｏｎｕｔｒｉｅｎｔｉｎｔａｋｅｏｎｔｈｅ［］，ｇ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｇ山ＣＯ化ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅｄｕｒｉｎｇｐｒｅｇｎａｎｃｙ．ＡｍＪＣｌｉｎＮｕｔｒ．２００４，－７９３：４７９４８６．（）１８景小凡乔蓉李鸣．妊娠期糖尿病与孕妇饮食生活方式病例对照研究卫生［］，，－研究．２０１０３９：２０９２１１．，口）［１９］周晓彬梁惠．、脂肪及碳水化合物的摄人与妊娠糖尿，姜雪芹孕期蛋白质，－病发病的关系．中国糖尿病杂志．２０１０１８６：４１１４１３．，（）口０］ＺｈａｎｇＣ，ＳｏｌｏｍｏｎＣＱＭａｎｓｏｎ压，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｐｒｅｇｒａｖｉｄｈｓｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔａｎｄｓｅｄｅｎｔａｒｙｂｅｈａｖｉｏｒｓｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｔｈｅｌｉｓｋｆｏｒｔａｔｉｏｎａｌｐｙｙｇ的ｄ－ｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｓ．ＡｒｃｈＩｎｔｅｒｎＭｅｄ．２００６１６６５：５４３５４８．，（）［２１］梁成强，潘妹霞，王鸿．生活方式干预对妊娠糖尿病病人认知、血糖控制Ｗ－巧及巧娠结局的影响．肠外与肠内营养．２０１１１８２Ｗ．：，（）２２］ＰｏｕｌｓｅｎＰＬｅｖｉｎＫＰｅｔｅｒｓｅ打Ｉｅｔａｌ．ＨｅｒｉｔａＷｌｉｔｙｏｆｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏ打ｅｒｉｈｅｒａｌ［，，，，ｐｐａｎｄｈｅｐａｔｉｃｉｎｓｕｌｉｎａｃｔｉｏｎａｎｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｕｃｏｓｅａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｉｎｏｕｎａｎｄｏｌｄ，ｇｐｇｙｇＤａｎ－ｉｓｈｔｗｉｎｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００５５４ｌ）：２７５２８３．，（；３ＬａｍｂｒｉｎｏｕｄａｋｉＩＶｌａｃｈｏｕＳＡＣｒｅａｔｓａｓＧｅｔｉｃｓｎｅｏｎａａｂｅｅｓ口．Ｇｅｎｉｓｔａｔｉｌ出ｔ］，，ｇｍｅｌｌｉｔｕｓ：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，ｓｅｖｅｒｉｔｙ，ｐｒｅｇｎａｎｃｙｏｕｔｃｏｍｅａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅ化ｔｒｅａｍｅｎｕｒｒａｂｅｅｓｅｖ－ｔｔ．ＣＤｉｔＲ．２０１０６６：！３９３３９９．，（）２４ＮｉｌｓｓｏｎＣＵｒｓｉｎＤＴｏｍｅｔａｌ．ＰｒｅｓｅｎｃｅｏｆＧＡＤａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［］，ｇ，。５１１ 文献综述ｄｕｒｉｎｅｓｔａｔｉｏｎａｌ出ａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｐｒｅ出ｃｔｓｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．２００７ｇｇ，３０８－（；１９６８７１．）２５王济芳陈军建．谷氨酸脱變酶抗体和膜岛细胞抗体在妊娠糖尿病患者中［］，．２００７．２４１：８５０的变化．临床内科杂志（巧２６李玉钟孙媛韦先翁等．膜岛素抵抗和膜岛ｅ细胞分泌功能对妊娠糖［］，，，２００７１５５－尿病的影响．中国糖尿病杂志．１：６．，（）２７ＳａｌｍｉＡＡＺａｋｉＮＭＺａｋａｒｉａＲｅｔａｌ．Ａｒｔｅｒｉａｌｓｔｉｆｆｉｉｅｓｓ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒａｎｄ［］，，，ｙｏ－ａｔｈｅｒｏｅｎ－ｒｇｉｃｍａｒｋｅｒｓｉｎｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｖａｓａ．２０１２４１（２：９６１０４．ｐｇ，）［２８］ＬｅｉｐｏｌｄＨ，ＷｏｒｄａＣ，ＧｒｕｂｅｒＣＪ，ｅｔａｌ．Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄ－ｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｅｄＣｒｅａｃｔｉｖｅｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｔｈｉｒｄｂｕｔｎｏｔ化ｃｏｎｄｔｒｉｍｅｓｔｅｒ．ｐＥｕｒ２５２－ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ２００５３５１：７７巧．，（）’ａｒａｅ－２９ＤＡｎｎ艮ＢａｖｉｅＤＶｉｖｏＡｅｔａｌ．Ｃｒｅａｃｔｉｖｅｒｃｒｔｅｉｎａｓａｎｅａｒｌｒｅｄｉｃｔｏｒｏｆ［］，Ｇ，ｐｙｐｅｓａｔｉｏｎａ－ｇｔｌ出ａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＪＲｅｐｒｏｄＭｅｄ．２００６５１１：巧５８．，（）［３０］ＱｉｕＣ，ＳｏｒｅｎｓｅｎＴＫ，ＬｕｔｈｙＤＡ，ｅｔａｌ．ＡｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｍａｔｅｒｎａｌｓｅｒｕｍＣ－ｒｅａｃｔｒｔｉｖｅｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）ｃｏｎｃｅｎａｔｉｏｎｓａｎｄｒｉｓｋｏｆｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．ｐｇＰａｅｄ－ｉａｔｒＰｅｒｉｎａＥｉｄｅｍｉｏｌ．２００４１８５：４．ｔ３７７３８ｐ，（）［３１］王胜蓝，刘佩秋，Ｔ锭，等．妊娠期糖尿病孕妇血清肿瘤坏死因子ａ水平变３９１－化与膜岛素抵抗关系的研究．中华妇产科杂志．２００４１：７３７７４０．，（）［３２］ＮｉｓｈｉｎｍｒａＦ，ＬｗａｍｏｔｏＹ，ＭｉｎｅｓｈｉｂａＪ，ｅｔａｌ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｄｉｓｅａｓｅａｎｄｄｉａｂｅ把Ｓｕｓ－－ｗａｍｅｌｌｉｔ：ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｈａ至ｎｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｅｒｉｏｄｏｎｏｌ．ｐａ２ｙｐ．ＪＰｔ－２００３７４１：９７１０２．，（）＾３－；３ＣｏｕｈｌａｎＭＴＯｌｉｖａＫ，ＧｅｏｉｉｏｎＨＭｅａｌ．Ｇｌｕｃｏｓｅｉｎｄｕｃｅｄｒｅｌｏｆｔｕｍｏｒ［］ｇ，ｇ，ｔｅａｓｅｎｅｃｒｏｓ－ｉｓｆａｔｏｒａｌｐｈａｆｒｏｍｈｕａｍｌａｃｅｎｔａｌａｎｄａｄｉｏ化巧ｓｓｕｅｓｍｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｐｐｇｍｅ－ｌｌｉｔｕｓ．ＤｉａｂｅｔＭｅｄ．２００１１８ｌｌ：９２１９２７，，（）３４ＢａｃｈａＦＳａａｄ民ＧｕｎｏｒＮｄ：ａｌ．Ａｄｉｏｎｅｃｔｉｎｉ打ｏｕｔｈ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｖｉｓｃｅｒａｌ［］，，ｇ，ｐｙｐ化ａｄｉｐｏｓｉｔｙ，ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄｂｅｔａｃｅｌｌｆｉｍｃｔｉｏｎ．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ．２００４，２７口）：１１６ 博去学位论文－５４７５５２．口；５ＨａｒｉｅｖＡ，ＷｉｚｎｉｔｚｅｒＡ．Ｎｅｗｉｎｓｉｈｔｓｏｎｇｌｕｃｏ化ａｔｈｏｓｉｏｌｏｉｎｅｓｔａｔｉｏｎａｌ］ｇｐｐｈｙｇｙｇ－出化ｅｔｅｓａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．ＣｕｒｒＤｉａｂＲｅ．２０１０１０：２４２２４７．ｐ，口）３Ｙｉｌｍａｚ０ＫｕｃｕｋＭＩｌ虹Ａｅｔａｌ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｌ／ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［巧，，ｇ，ｙａｎｄｔｈｄｒｒｃｌ过ｔｉｏｎｓｗｉｔｈｌｅｐｔｉ打ｃｏｎｃｃｎｔｒａｔｉｏｉｉｓａｎｄａｎｔｈｒｏｐｏｍｅｔｒｉｃｍｅａｓｕｒｅｓｉｎ过ｒｅｎａｎｔｐｏｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈａｎｄｗｉ化ｏｕｔｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓｍｅＵｉｔｕｓ．ＪＤｉａｂｅｔｅｓｐｇｐｇｏｍ－Ｃｌｉｃａｔｉｏｎｓ．２０１０２４２：１０９１１４．ｐ，（）－ｎ７ＭｃｌａｃｈｌａｎＫＡＮｅａｌＯＤＪｅｎｋｉｎｓＡ巧ａｌ．ＤｏａｄｉｏｎｅｃｔｉｎＴＮＦａｌｈａＬｅｔｉ口］，，，ｐ，ｐ，ｐａｎｄＣＲＰｒｅｌａｔｅｔ；ｏｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｒｅｇｎａｎｃ？Ｓｔｕｄｉｅｓｉ打ｗｏｍｅｎｗｉｔｈａｎｄｐｙｗｉｔｈｏｕｔｅｓｔａｔｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ，ｄｕｒｉｎａｎｄａｆｔｅｒｒｅｎａｎｃ．ＤｉａｂｅｔｅｓＭｅｔａｂＲｅｓＲｅｖ．ｇｇｐｇｙ００６－２２２〇２：１３１１３８．，）Ｐ＾Ｓｏｈｅｉｌｙｋｈａｈ８ＭｏｈａｍｍａｄｉＭＭｏ化ｉａｎＭｅｔａｌ．Ｍａｔｅｒｎａｌｓｅｒｕｍａｄｉｏｎｅｃｔｉｎ，，ｊ，ｐｎｅｃｏ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｅｓｔａｔｉｏｎａｌ出ａｂｅｔｅｓ．ＧｙｌＥｎｄｏｃｒｉ打ｏｌ２００９，２５（９）：５９３５９６．ｇ［３９］管淑梅，王静．瘦素、脂联素与妊娠期糖尿病膜岛素抵抗关系的研究．中国－优生与遗传杂志：．．２０１１．１９９８１８２（）４０ＲｅｔｎａｋａｒａｎＲＨｎｌｅＡＪＲａｉｆＮ，ｅｔａｌ．Ａｄｉｏｎｅｃｔｉｎａｎｄｂｅｔａｃｅｌｌｄｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎ［］，ａｙ，ｐｙｅｓｔａｔ－ｉｏｎａｌｄｉａｂｅｔｅｓ：ａｔｈｏｈｙｓｉｏｌｏｉｃａｌｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｉａ．２００５４８５：９９３ｇｐｐｇｇ，（）１００１．４１ＬｉｕＦＹａｎＴＷａｎｇＢｅｔａｌ．Ｒｅｓｉｓｔｉｎｉｎｄｕｃｅｓｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｂｕｔｄｏｅｓｎｏｔ［］，ｇ，，ａｅｃｓｅｔｉ－ａｃｔｓｃａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｆｆｔｇｌｕｃｏｏｕｔｕｎｒａｔｄｅｒｉｖｅｄｈｅｐｔｏｙｅ．Ａｔｉｎ．２００８ｐ，２９－：９８１０４．（１）＂４２ＦａｎＨＧｕＮＬｉｕＦｅｔａｌ．Ｐｒｏｏｎｅｅｘｏｓｕｒｅ化ｒｅｓｉｓｔｉｎｉｎｈｉｔｕｃｏｓｅｌｄｉｂｓｌ［］Ｑ，，，ｇｐｇｔｔｓｋｓｃｃａｈａｎｎａｃｏｌＳｉｎ－ａｋｅｉｎ：．ｕｐｒａｅｌｅｔａｌｍｕｌｅｓ．ＡｔＰ．２００７２８４１０４１６，４３．．［朱亚莉，孙袁抵抗素与妊娠期糖尿病膜岛素抵抗的关系广］，王彥德，等－东医学：．２０１１３２６７３６７３８．，（）［４４ＹｕｒａＳ，ＳａａｗａＮ，ＩｔｏｈＨ，ｅｔａｌ．Ｒｅｓｉｓｔｉｎｉｓｅｘｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａ．Ｊ］ｇｐ１１７ 文献综述ｃｅａｂ－ＣｌｉｎＥｎｄｏｒｉｎｏｌＭｔ８８３：１３９４１％７．．２００３，（）［４５］ＦｕｋｎｈａｒａＡ，ＭａｔｓｕｄａＭ，ＮｉｓｈｉｚａｗａＭ，ｅｔａｌ．Ｖｉｓｆａｔｉｎ；ａｐｒｏｔｅｉｎｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙｍ－ｖｉｓｃｅｒａｌｆａｔｔｈａｔｉｍｉｃｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００５３０７：４２６４３０．４６ＳｅｔｈｉＪＫＡＶｉｄａｌＰｕｉ．Ｖｉｓｆａｔｉｎｔｈｅｍｉｓｓｉｎｌｉｎｋｂｅｔｗｅｅｎｉｎｔｒａａｂｄｏｍｉｎａｌ［］，ｇｇＴ－ｏｂｅｓｉｔａｎｄｄｉａｂｅｔｅ巧ｒｅｎｄｓＭｏｌ－２００５ｌｌ８：３４４３４７．ｙ，（）４７华绍芳韩玉环匡德凤．妊娠期糖尿病患者内脏脂肪素水平与膜岛素抵抗［］，，２０－１７：５７７５７的关系．天津医药．１３９乂，（）４ＦａｓｓｈａｕｅｒＭＷａｌｄｅｅｒＳｅｅｅｒＪｅｔａｌ．ＳｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅａｄｉｏｋｉｎｅＶｉｓｆａｔｉｎ［＾，ｙＸｇ，ｐａｒｅ－ｌ６９－ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｒｅｅｃｌａｍｓｉａ．ＣｌｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＯｘｆ．２００８６９：７３．ｐｐ（），（＾）１１８ 博去学位论文附录己知差异表达ｍｉＲＮＡｓ觀基因ＫＥＧＧ通路Ｔａｒｇｅｔｇｅ打ｅｓｗｉｔｈｎ１Ｐａｔｈｗａｙ，Ａ１＾ＰａｔｈｗａｙＲｖａｌｕｅｐａｔｈｗａｙ％巧ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ巧０７２巧ｓｅｒ３－Ｐａｔｈｗａｙｉｎｃａｎｃ．９６Ｅ０７ｋｏ０５２００７３３３．５４％－Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｎｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ５．ｌｌＥ０６ｋｏ０４８１０４６８２．２６％Ｆｏｃａｌａｄｈｅｓｉｏｎ０．００７巧３５８１ｋｏ０４５１０４５１２．１８％Ｃａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．００１４０２４１ｋｏ０４０２０４１８２．０２％如ｅｍｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０，０１３４９２９８ｋｏ０４０６２３５４１．７１％Ｗｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．０１１３３９１１ｋｏ０４３１０３４０１．６４％ｕｎｍｅｄａｔｅｄｒｏｔｅｏ－Ｕｂｉｉｔｉｉｐｌｙｓｉｓ３．９１Ｅ０７ｋｏ０４１２０３３１１．６０％ｑＮｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０？００巧２９９６８ｋｏ０４７２２２９８１．４４％－０ＪａｋＳＴＡＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．０１６５５０６２ｋｏ０４６３０２８５１．３８％ｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗ０．％Ｉｎｓｕｌｉｎｇｇｐ巧？００７１２７７５２ｋｏ０４９１０２７９１３５ｃａｓｅ３－Ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉ巧ｎｐ．７２Ｅ０５ｋｏ０４７２４２６５１．２８％Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｅ打ｄｏｔｈｅｌｉａｌａ，證。ａ２５９１．２５％？０．００６８４４１８３ｋｏ０４６７０．ｍｉｒａｔｉｏｎｇ２５８１’２４／ｉｓｃｃｏｎｔｒａｃｔｏｎＯｏ０４２７０Ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｌｅｉ．００１０３６２１７ｋ记〇Ｃｈａｇａｓｄｉｓｅａｓｅ（Ａｍｅｒｉｃａｎ５Ｕ３／〇〇．０１６２８３３５ｋｏ０５１４２ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）ＥｒｂＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．００５９６０２６５ｋｏ０４０１２２２６１．０９％ＧｎＲＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．０００９７６９０１ｋｏ０４９１２２２６１．０９％Ａｐｏｔｏｓｉｓ０．００１９８４１９３ｋｏ０４２１０２２３１．０８％ｐＤｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ０．０１３３５７６７ｋｏ０５４１４２１７１．０５％Ｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ０？００（Ｕ８４００５ｋｏ０４９１６２１４１．０３％ＦｃａｍｍａＲ－ｍｅｄ％ｇｉａｔｅｄｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ０．０００２０２０１ｋｏ０４６６６１９４０．９４Ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ０．０１５３０８０６ｋｏ０５２２２１８８０．９１％Ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎ０．０００７９６２２ｋｏ０４５４０１８７０．９０％〇’８８／〇Ａｒｒｈｙｔｈｍｏｇｅｎｉｃｒｉｇｈｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ０？０１２８１４５１ｋｏ０５４１２１１９ 附录ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ（ＡＲＶＣ）Ｓａｌｉｖａｒｙｓｅｃｒｅｔｉｏｎ０．００２４９０４３３ｋｏ０４９７０１８１０．８７％Ｂａｃｔｅｒｉａｌｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ１８１０．８７％＾３－．ｌＯＥ０７ｋｏＯｏｌＯＯ１１ｃ台１１ｓ〇Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌｓｉｇｎａｌｉｎｇ〇．８２／°〇．〇〇〇ｉ２ｉ９６１ｋｏ０４０７０ｓｙｓｔｅｍＧａｓｔｒｉｃａｃｉｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎ０．０００１６２３７８ｋｏ０４９７１１６８０．８１％Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒ０．０００３２４９６４ｋｏ０５２１２１６７０．８１％Ｃｈｒｏｎｉｃｍｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ０．００１１９３９４４ｋｏ０５２２０１６１０．７８％ｙＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅ０．０００４９３７８８ｋｏ０４１４６１６００．７７％Ｒｅｎａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ０．００４３８６４８３ｋｏ０５２１１１５４０．７４％Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ０．００４３８６４８３ｋｏ０５２１０１５４０．７４％Ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ０．００２５９０１５５ｋｏ０５２２１１５１０．７３％Ｓｈｉｅｌｌｏｓｉｓ０．０００７７２６４ｋｏ０５１３１１４１０．６８％ｇＩｎｏｓｉｔｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０．０１％５９２３ｋｏ００５６２１２２０．巧％Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅａｎｄｏｔｈｅｒ１１９０．５７％ｆａｃｔｏｒ－ｒｅｕｉ１ｇｌａｔｅｄｃａｌｃｕｍ０．００８３２３９７３ｋｏ０４９６ｒｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｓｏｒｅｓ－Ｖａｐｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｗａｔｅｒ０’５４％〇．〇〇５４７１５２６ｋｏ０４９６２ｒｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎＤｒｕ－ｃｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５００１ｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｙ．０００３１０８０ｋｏ００９８２１１００．巧％Ａｒｇｉｎｉｎｅａｎｄｒｏｉｓ－１１％ｐｌｉｎｅｍｅｔａｂｏｌｍ１．０９Ｅ０６ｋｏ００３３００６０．５Ｂａｓａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ０．００１１３３９４３ｋｏ０５２１７１０２０．４９％〇Ｈｅｄｇｅｈｏｇｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．０００１１９＾２ｋｏ０４３４０％０．４５／＾Ｎ－ＧｃａｎｂｏｓｎｔｈｅｓｏＯＯＳｌｙｉｙｉｓ０．００５巧５０１５ｋｌＯ８８０．４２％Ｍｉｎｅｒａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ０．００７９７４９４２ｋｏ０４９７８８５０．４１％〇Ｖａｌｉｎｅ，ｌｅｕｃｉｎｅａｎｄｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ〇．３６乂〇．〇〇２９９２８８４ｋｏ００２８０ｄｅｇｒａｄ过ｔ１０打＾５０．３６／〇ＣｓｔｅｉｎｅａｎｄｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍＯ．０００６１６７８ｋｏ００２７０ｙＳＮＡＲＥｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎｖｅｓｉｃｕｌａｒ６９０．３３％＾０．００７９４４６８２ｋｏ０４１３０ｔｒａｎｓｐｏｒｔＨｉｓｔｉｄｉｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０．００６０７４１９２ｋｏ００３４０５８０．２８％〇Ｇｌｙｃｉｎｅ，ｓｅｒｉｎｅａｎｄｔｈｒｅｏｎｉｎｅ〇．２６／〇〇．〇ｉ２１〇４２８ｋｏ００２６０ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０－２４／〇Ｐｅｎｔｏｓｅａｎｄｌｕｃｕｒｏｎａｔｅ０．０００８３６２７１ｋｏ０００４０ｇ１２０ 博去学位论文ｉｎｔｅｒｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｓＣ－ｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｍａｍｍａｌ０．００１０４４２６４ｋｏ０４７１０４８０．２３％化ｏｔｅｉｎｅｘｐｏｒｔ０？０００２９３巧ｋｏ０３０６０４８０．２３％Ｎｉｔｒｏｇｅｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０．００９１００５２９ｋｏ００９１０４７０．２３％－Ａｓｃｏｒｂａｔｅａｎｄａｌｄａｒａｔｅ阳ｅｔａｂｏｌｉｓｍ２．８０Ｅ０５ｋｏＯＯＱ５３４４０．２１％Ｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌｅｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ＾〇‘１９％〇．〇〇ｉ９ｌ５７９３ｋｏ０４９６４ｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ〇Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙ３８０．１８／〇０．０００７９６８０５ｋ〇〇ｉ〇４〇ａｃｉｄｓｃｏｓ－加ｌｉｎｙｅａｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ％化腸严皆００００１４胤滅０５３４ｈｅａｒａｎｓｕｐｌｆａｔｅＰａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅａｎｄＣｏＡｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ０．００１６７０２８ｋｏ００７７０３５０．１７％Ｓｕｌｆｕｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０．００４４００２６ｋｏ００９２０３１０．１５％Ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｂａｃｋｂｏｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ０？０００１９２０７６ｋｏ００９００巧０．１４％－ｃｏｍｏｎｅｎｔｓｅｍ〇Ｔｗｏｐｙｓｔ０？００４９３９９３日ｋｏ０２０２０１８０．０９／ｉ差异表达新ｍｉＲＮＡｓ祀基因ＫＥＧＧ通路Ｔａｒｇｅｔ呂ｅ打ｅｓｗｉｔｈ＆ＰａｔｈｗａｙＰｖａｌｕｅｐａｔｈｗａｙ％ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ（２０７巧）Ｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃａｎｃｅｒ０．０００２８２３６５ｋｏ０５２００３２２３．８０％－Ｆｏｃａｌａｄｈｅｓｉｏｎ８．９９Ｅ０５ｋｏ０４５１０２１６２．５５％Ｅｎｄｏｃｔｏｓｉｓ０．０００３５０５９９ｋｏ０４１４４２１５２．５４％ｙＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｎｃｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ０．０００２５０１２８ｋｏ０４８１０２１２２，５０％ｙＷｎｔ－ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ７．３４Ｅ１０ｋｏ０４３１０１９０２．２４％Ｃａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．００４２６６７４８ｋｏ０４０２０１８７２．２１％Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．００８７１２５巧ｋｏ０４０６２１６０１．８９％－Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ６．０３Ｅ０７ｋｏ０４７２２１５８１．８７％Ｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｉｎｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ１５７１．８５％。０．００２１８６０４６ｋｏ０４１４１．１ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ－Ｉｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ１．０２Ｅ０６ｋｏ０４９１０１４８１．７５％Ａｘｏｎｇｕｉｄａｎｃｅ０？０００７１４７９９ｋｏ０４３６０１４５１．７１％Ｕｂｉｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｒｏｔｅｏｌｓｉｓ０．００６１７３１６２ｋｏ０４１２０１４２１．６８％ｑｐｙ２１１ 附录ａｋ－ＳＴＡＴｓＪｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０？（Ｕ８２６５０３ｋｏ０４６３０１２８１．５１％Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ＾２５１．４８％ａａａａ７ｃ：〇ｉ〇ｅ：ｉ０．０００７５２１８５ｋｏ０４６７０．．ｍｉｇｒａｔｉｏｎＴｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０？０００４７６１０４ｋｏ０４６６０１２３１．４５％－％ＥｒｂＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ９．４０Ｅ０６ｋｏ０４０１２１１９１．４１－Ａｄｈｅｒｅｎｓｎｃｔｉｏｎ１，ｌＯＥ０５ｋｏ０４５２０１８３９％１１ｊｕＧｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃｓｙｎａｐｓｅ０．００９３４５１９８ｋｏ０４７２４１１６１．３７％ｏｓ－Ａｐｏｐｔｉｓ６．０６Ｅ０５ｋｏ０４２１０１１３１．３３％４－Ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．２１Ｅ０７ｋｏ０５２２２１０７１２６％．ＧｎＲＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０？０３２１６６４日ｋｏ０４９１２９８１．１６％Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｌｉｎｏｓｉｔｏｌｓｉｎａｌｉｎ９５１．１２％ｙｇｇ－２＇０祀０７ｋｏ０４０７０ｓｙｓｔｅｍＰｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ０．０２９５３６６７ｋｏ０５２１５９４１．１１％ＦｃａｍｍａＲ－ｍｅｄｇｉａｔｅｄｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ０？０００４６７２巧ｋｏ０４６６６９４１．１１％Ｃｈｒｏｎ－ｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ２．５６Ｅ０７ｋｏ０５２２０９２１．０９％－Ｃｏｌｏｒｅｃｔ；ａｌｃａｎｃｅｒ３．８９Ｅ０６ｋｏ０５２１０８６１．０２％Ａｄｉｐｏｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．００１００８６５ｋｏ０４９２０８５１％Ｂａｃｔｅｒｉａｌｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ８２０．９７％＾…ａａ０．００１８２０３４４ｋｏ０５１００ｃｅｌｌｓＭｅｌａｎｏｍａ０．０００７７１４５８ｋｏ０５２巧８２０．９７％Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒ０．０００８９２８９６ｋｏ０５２１２８１０．９６％Ｇｌｉｏｍａ０．０００１００６７８ｋｏ０５２１４８１０．９６％－ｒｍｏＬｏｎｇｔｅｐｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ０．０２６９７７７６ｋｏ０４７２０７８０．９２％ＶＥＧＦｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．０００８０５１３７ｋｏ０４３７０７８０．９２％Ｒｅｎａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ０．０００巧２０６５ｋｏ０５２１１７８０．９２％Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒ０．００３０８４巧４ｋｏ０５２１３６４０．７６％Ｉｎｏｓｉｔｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０．００１９７７１５３ｋｏ００５６２６２０？巧％Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃｌａｔｅｒａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（ＡＬＳ）０．０３２４８５５１ｋｏ０５０１４５９０．７０％ｍＴＯＲｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ０．０２０６３２８７ｋｏ０４１５０５４０．６４％Ｂａｓａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ０．００２１６６９９２ｋｏ０５２１７５１０．６０％Ａ－ｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅｒｅｇｕｌａｔｅｄｓｏｄｉｕｍ＊９〇’５８％〇．００１５２９４５６ｋｏ０４９６０ｒｅａｂｓｏｒｐｔｉｏ打Ｄｒｕｍｅｔａｂｏ－ｏｔｈｅｒｅｎｚｍｇｌｉｓｍｙｅｓ０．０２巧４０４８ｋｏ００９８３４３０．５１％Ｈｅｄｅｈｏｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａ０．０１１５５１２４ｋｏ０４３４０４３０．５１％ｇｇｇｇｐｙＳＮＡ民Ｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎｖｅｓｉｃｕｌａｒ．＾１，門广＂，３４０．４０％０．０１４５７５１１ｋｏ０４ｌ３０ｔｒａｎｓｐｏｒｔＰｏｒｐｈｙｒｉｎａｎｄｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ０？０１１１１５２９ｋｏ００８６０３３０．３９％１２２ 博壬学位论文ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍＢｕｔａｎｏａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ０＊０巧３９０４８ｋｏ００６５０２７０．３２％Ｂｉｏｓｎｔｈｅｓｉｓｏｆｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔ＿２００ｙｙ．２４％０．００７３６０％ｋｏＯＫＭＯ．ａ，ｃｉｄｓＧ－〇ｌｙｃｏｓａｍｉｎｇｌｙｃａｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ２０〇’２４／〇＾〇．〇〇５ｉ２８〇ｉ２ｋ〇〇〇５３４ｈｅｐａｒａｎｓｕｌｆａｔｅＧｓｎｓｎｔｈｅｓｓ－〇ｌｙｃｏｐｈｉｇｏｌｉｐｉｄｂｉｏｙｉ１９〇．２２／〇０．０１７０９９８５ｋｏ００６０４呂过ｎｇｌｉｏｓｅｒｉｅｓ－〇Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｂｉｏ巧ｎｔｈｅｓｉｓ－１８０．；２１／〇ｎｎｎｃｃｏｃ１ＡＡｃｏｏ０．０２０６６９５ｋｏ００５３２．．，，１。ｃｈｏ打ｄｒｏｉｔｉｎｓｕｌｆａｔｅ－〇Ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｂｉｏ巧ｎｔｈｅｓｉｓ１６〇．巧／〇化０２２１７４２６ｋ〇〇〇６〇３呂ｌｏｂｏｓｅｒｉｅｓ１２３ 附录攻读学位期间成果一、主持完成２０１３年广东省卫生厅医学科研基金１项（Ａ２０１３４５２）。二、发表学术论文共６篇，均为核也期刊，其中４篇为中文核也期刊，３篇为科技核也期巧，尚有２篇文章被中国现代医学杂志和武警医学杂志录用。１．．李伟个性化饮食治疗对妊娠期糖尿病患者糖代谢的影响．山东医，胡宝春５２－药２０１２，（４１）；６６６７．－－２．．、ｍｉ李伟，蔡德鸿妊娠期搪尿病妇女外周血ｍｉＲ２９Ｒ３７５的表达及略床意－义：．南京医科大学学报（自然科学版）．２０１４，３４（３）３３４３３６．３ａ－．李伟．．，胡宝春硫辛酸联合多潘立丽改善老年性糖尿病性胃捏擁的疗效－．２０１４３４８）２２２８２２３０．中国老年学杂志，（：４．李．也理２型伟，胡宝春干预对糖尿病伴抑郁患者糖代谢及生活质量的影响．－３中国老年学杂志．２０１４，３４（１１）；３１４０１４１．ｍ－５．李伟，胡宝春．瘡尿病合并肺癌癌组织及正常肺组织中ｉＲＮＡ２１的差异性－表运．．２０１４２３５６１．武警后勤学院学报（医学版），（７）：５６３６．李伟．沙格，陈宏列汀单用或联合替米沙坦对２型糖尿病肾损害患者血清肺抑素Ｃ和白细胞介素１８水平的影响．中国新药临床与新药杂志．２０１４３３（１１）；，－８１３８１６．１２４ 博壬学位讼文致谢首先，请允许我和我的师兄师姐师弟师妹们对前任导师蔡德鸿教授的深切怀念。，他对我们的惇淳教导让我们终身受益攻读博±学位期间，感谢导师陈宏教授对我的教诲、批评与帮助，感谢珠江医院的各位教授、内分泌科的各位同口对我的关必和指导，感谢单位的各位领、导对我的求学愿望给予强有力的支持，感谢科室主任各位同事对我的包容和帮助，感谢家人对我工作和学习的支持，感谢同学之间的信息互通。在此，重点感谢我的好战友胡可胜医生在我的课题申报、论文撰写等诸多方面给予的无私帮助，让我能够顺利答辩及毕业。一最后！，给予因本人考虑不全而遗漏的的好友们并致谢５１２ 附录南方医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加Ｗ标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集。体，均己在文中Ｗ明确方式标明除与外单位合作项目将予Ｗ明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均旧属南方医科大学。本人承诺承担本声明的法律效果。作者签名：日期：２０１５年０３月０９日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南方屋科大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和Ｃ编本学位论文。＂＂本学位论文属于（请在下相应方框内打Ｖ）：１、保密□，在年解密后适用本授权书。＿２、不保密因作者签名：日期：２０巧年０３月０９日导师签名：日期０巧０３０９：２年月日ｇ＾１２６
此文档下载收益归作者所有
