visfatin对内皮祖细胞凋亡的影响及其机制探讨

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122514HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位Visfatin对内皮祖细胞凋亡的影响及其机制探讨研究生：孙丽娜导师：陈树春教授宋光耀教授专业：内科学二级学院：河北省人民医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科

2、大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归?可北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。//:•-.......*’、1•.；-r*‘...‘•--•*.*：‘‘“i！1»•““-研宄生签名导师签章二级^院领导盖章：[X年》月W日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研宄成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研宄生签名导师签章:：W年？月乂0目录中文摘要…………………………

3、……………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写………………………………………………………………………8研究论文Visfatin对内皮祖细胞凋亡的影响及其机制探讨前言……………………………………………………………………9材料与方法……………………………………………………………10结果……………………………………………………………………24附图……………………………………………………………………27讨论……………………………………………………………………35结论…

4、…………………………………………………………………38参考文献………………………………………………………………39综述Visfatin与血管功能研究现状………………………………………44致谢…………………………………………………………………………52个人简历……………………………………………………………………53中文摘要Visfatin对内皮祖细胞凋亡的影响及其机制探讨摘要内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）是Asahara在1997年首次描述的一种来源于骨髓存在于外周血并且能够定

5、向分化为内皮细胞的前体细胞。EPCs具有增殖和修复能力，在机体血管组织损伤后，EPCs通过动员、迁移、归巢以及形成毛细血管网一系列过程，促进血管损伤部位内皮再生和修复。EPCs尚能分泌生长因子激活血管局部的成熟内皮细胞，进一步参与血管修复过程。目前随着人们生活方式的改变，糖尿病的发病率逐年上升，心血管并发症是糖尿病患者的主要死因。研究表明糖尿病患者EPCs数量减少、功能损伤与心血管并发症的发生和发展密切相关，EPCs数量减少和功能下降被认为是心血管疾病的标志。EPCs受多种因素的影响，肥胖、高血压、高血糖、脂代谢紊乱等患

6、者均存在EPCs数量减少及功能受损。Visfatin由脂肪细胞分泌。研究发现，visfatin在2型糖尿病患者和代谢综合征患者体内，尤其是有动脉粥样硬化病变的患者体内表达增强。在代谢相关疾病中visfatin水平变化导致炎症反应和血管内皮功能受损，其可能是动脉粥样硬化过程中影响炎症反应的关键环节。糖尿病患者存在EPCs功能受损，而visfatin是影响血管内皮功能的重要因素，我们前期研究发现visfatin能够损伤大鼠EPCs迁移、粘附功能，但具体机制不详。本研究从EPCs凋亡这一角度探讨visfatin损伤EPCs的具

7、体机制。目的：观察visfatin对EPCs凋亡的诱导作用，并探讨visfatin诱导凋亡的具体机制。方法：采用密度梯度离心法分离健康分娩妇女脐带血中的单个核细胞，接种到纤维连接蛋白（fiberprotein，FN）包被的培养皿中，经EMG-2MV（20%胎牛血清，1%青霉素链霉素双抗，0.04%氢化可的松，0.1%肝素，0.1%维生素C，50ng/ml胰岛素样生长因子1，10ng/ml表皮生长因子，50ng/ml成纤维细胞生长因子，50ng/ml血管内皮生长因子，10µg/ml纤维连接蛋白）重悬，在37℃、5%CO2、

8、湿度95%恒温培养箱培养。每天在1中文摘要倒置显微镜下观察细胞形态。培养第7天，采用流式细胞仪检测EPCs表面特异性抗原CD34与CD309表达，采用激光共聚焦显微镜鉴定EPCs特性。细胞经同步化处理后，第8天随机将EPCs分为visfatin不同浓度（0，50，100，150ng/ml）干预组与抑制剂组。Visfa