参附注射液对人慢性髓性白血病细胞来源的树突状细胞诱导生成及功能的影响

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1、中文摘要参附注射液对人慢性位性白血病细胞来源的树突状细胞诱导生成及功能的影晌摘要目的:研究参附注射液(SFI)对慢性髓性白血病细胞(CML)来源的树突状细胞(DCs)诱导生成的影响。方法:用不同浓度的参附注射液(终浓度分别为:低浓度9.38mg/ml;中浓度37.50mg/ml,75mg/ml;高浓度150mg/ml,300mg/ml生药浓度)、粒一巨噬细胞集落因子(GM-CSF)/白细胞介素一4(1L-4)及GM-CSF/IL-4联合不同浓度SFI三种组合在体外诱导培养CML原代细胞及其细胞系K-562细胞株，获得DCs。倒置显微镜下动态观察DCs的形态变化

2、;流式细胞仪检测DCs表型(CD1a,CD80,CD83,14LA-DR)的表达率;同种混合淋巴细胞反应(allo-MLR)检测DCs刺激T淋巴细胞的增殖能力;ELISA法测定DCs培养_lt.清液中IL-l2的含量。结果1.形态观察:倒置显微镜下可见K-562细胞、CML细胞呈球形，悬浮生长，加入GM-CSF/IL-4培养后，两组细胞体积增大并增殖，培养14天左右时可见较多具有树突状突起的细胞。而单独应用不同浓度SFI培养的K-562细胞及CML细胞可见:高浓度SFI处理孔中细胞破碎死亡或增殖缓慢;中、低浓度SFI处理孔中细胞体积增大并增殖，但培养至14天均

3、未见具有树突状突起的细胞。不同浓度SFI联合GM-CSF/IL-4诱导培养的K-562细胞及CML细胞可见:高中文摘要浓度SFI处理孔中细胞破碎死亡或体积稍增大，但增殖缓慢，且树突状突起的细胞少见;中、低浓度SFI处理孔中细胞体积增大并增殖，培养10-12天左右时具有树突状突起的细胞比例明显增加，与其他组细胞相比，细胞生长良好。2.细胞表型观察:培养前K-562细胞、CML细胞的CDla,CD80,CD83,HLA-DR表达很低，以GM-CSF/IL-4诱导14天后细胞表型表达率均升高(K-562DCs分别为12.93%士3.52%,18.72%士4.42%,

4、20.29%士5.12%和21.65%士6.160/x;CMLDCs分别为12.35%士4.14%,18.42%士3.72%,21.29%士6.15%和23.55%士4.92%)。而单独以SFI诱导培养14天后细胞表型表达仍不高。以SFI/GM-CSF/IL-4诱导培养10-12天后，K-562DCs,CML-DCs表型的表达率呈双向变化，高浓度组表达率明显低于GM-CSFAL-4组和中、低浓度SFI/GM-CSF/IL-4组(P<0.01)。中浓度组表达率显著升高，其中以75mg/ml诱导组升高最明显(K-562DCs分别为26.69%士1.59%,29.5

5、7%士4.13%,34.78%士6.57%和34.56%士6.34%;CML-DCs分别为24.14%士3.09%,28.40%士3.33%,33.73%士6.10%和36.19%士4.58%)，显著高于其他各组(P<0.01)，且75m留mlSFI联合GM-CSFlIL-4使用时有很好的协同作用(P<0.01或P<0.05)。低浓度组表达率高于GM-CSF/IL-4组，但无统计学意义(P>0.05)。经统计学分析，K-562DCs和CML-DCs两组细胞表型表达率无显著性差异。3刺激同种异体T细胞增殖的能力:K-562细胞、CML细胞和75mg/mISFI组

6、仅有较弱的刺激T淋巴细胞增殖能力，且随着效应细胞数量的增加，刺激能力增强不显著，无2中文摘要直线相关关系(P>0.05);而GM-CSFAL-4组、SFI/GM-CSF/IL-4组诱导的细胞具有较强的刺激能力，且随着DCs数量的增加，刺激能力增强，呈显著正相关(p<0.01)o其中，SFI/GM-CSF/IL-4培养组中，高浓度组刺激能力明显低于GM-CSFAL-4组和中、低浓度SFI/GM-CSF/IL-4组(p<0.01)。中浓度组诱导刺激能力明显高于其他各组(p<0.01)，且75mg/mlSFI联合GM-CSF/1L-4使用时有很好的协同作用(p<0.

7、01)。低浓度组与GM-CSFAL-4组无显著差异(P>0.05)。经统计学分析，K-562DCs与CML-DCs两组细胞刺激T细胞增殖的能力无显著性差异(P>0.05).4.IL-12的分泌水平:不同组合条件下诱导培养的K-562DCs与CML-DCs均有不同程度IL-12的分泌，其中75m创mlSFI组IL-12含量低于GM-CSF/IL-4组。SFI/GM-CSF/IL-4组中IL-12含量呈双向变化，高浓度组明显低于GM-CSFAL-4组和中、低浓度SFI/GM-CSF/IL-4组(p<0.01)。中浓度组IL-12含量显著升高，以75mg/ml组升高

8、最明显(K-562DCs为218.36