原料申报临床资料23号

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1、盐酸帕洛诺司琼申报临床技术资料致突变试验资料及文献资料XXX制药股份有限公司23-1摘要23-2沙门氏菌/哺乳动物微粒体培养致突变分析(AMES)试验和大肠埃希氏菌WP2uvrA凹复突变培养分析23-3中国仓鼠卵巢(CHO)细胞染色体畸变试验23-4帕洛诺司琼体内微核致突变分析试验23-5CH0/HGPRT致突变分析23-6大鼠肝细胞体外非常规DNA合成(UDS)试验23-7结论23-8参考文献23-1摘要在加或不加S9的条件下，小鼠体内微核试验、AMES试验、大肠埃希菌WP2uvrA冋复突变分析和屮国仓鼠卵巢HGPRT致突变分析屮帕洛诺司琼均未显示出明显的致突变性。但是，在不加S9代谢

2、活化系统的条件下，帕洛诺司琼呈浓度依赖性增加中国仓鼠卵巢细胞染色体畸变白分率；在加S9代谢活化系统的条件下，帕洛诺司琼的最高浓度650ug/ml明显增加屮国仓鼠卵巢细胞染色体畸变百分率，药物相关性畸变包括染色体和染色单体断裂、染色单体断片和外形交换。该试验呈阳性结果表明帕洛诺司琼在该体外试验为一致突变剂；大鼠肝细胞体外非常规DNA合成(UDS)试验中，大鼠单次静脉注射盐酸帕洛诺司琼7.5、15和30mg/kg,平均UDS净值没有增高，表明帕洛诺司琼在该试验中为一非致突变剂。23-2沙门氏菌/哺乳动物微粒体培养致突变分析(AMES)试验和大肠埃希氏菌WP2uvrA回复突变培养分析23-2-

3、1试验药物23-2-1T受试药物：帕洛诺司琼，批号PA15303-18o23-2-1-2阳性对照：2-硝基茹、2-氨基蔥、叠氮化钠、9-氨基叮碇和甲基甲磺酸。23-2-1-3代谢活化系统：来源于人鼠肝脏的用多氯联苯1245诱导的哺乳动物肝微粒体酶(S9)。23-2-2试验菌株：五种特殊的组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(TA-1535和TA-100用于检测碱基对置换型突变；TA-1537、TA-1538和TA-98主要用于检测移码突变)。23-2-3试验方法：通过五种特殊的组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌在加或不加S9的条件下接触帕洛诺司琼(375-6000ug/皿)来检测帕洛诺司琼潜在的致

4、突变性。分析基于这五种沙门氏菌经不同浓度梯度的致突变剂回复后所表现出来的组氨酸需要型或组氨酸缺陷烈特征。通过37°C培养72小时后计数每皿回变菌落数进行评价。WP2uvrA回复突变分析系统用于衡量在形成(邻)氨基苯甲酸Z前阻断色氨酸生物合成这一步骤从而将色氨酸缺陷型逆转为色氨酸需耍型的能力。发生色氨酸逆转是由于染色体上原始变异位点或其它地方发生变化引起原始变异受到抑制。因此，该回复特性对于碱基对置换型突变的检测是灵敏的。23-2-4结果：在帕洛诺司琼的剂量范围寻找研究中，采用0.3到5000ug/lllL的浓度。结果表明帕洛诺司琼的剂量在1000到5000ug/皿时，除毒性外，没有出现沉

5、淀。因此在致突变试验中帕洛诺司琼的剂量范围采用33-5000ug/皿。两种致突变分析的结果表明在加或不加代谢活化剂的条件下，帕洛诺司琼（33-5000ug/皿）对任何一种沙门氏菌属或人肠埃希氏菌的回复突变分析均不会引起阳性反应。相反，阳性对照2-硝基茹（lug/皿）、2-氨基蔥（用于沙门氏菌时为lug/皿，用TWP2uvrA分析时为lOOOOug/皿）、叠氮化钠（lug/皿）和9-氨基U丫喘（75ug/皿）及甲基甲磺酸（lOOOug/皿用于WP2uvrA分析）引起预期的回变菌落数增高。23-3中国仓鼠卵巢（CHO）细胞染色体畸变试验23-3-1试验药物23-3-1-1受试药物：帕洛诺司琼

6、。23-3-1-2阳性对照：阳性对照三乙基蜜胺（TEM）、环磷酰胺。23-3-1-3代谢活化系统：来源于大鼠肝脏的用多氯联苯1245诱导的哺乳动物肝微粒体酶（S9）。23-3-2测试系统：中国仓鼠卵巢（CHO）细胞染色体。23-3-3试验方法：制备中期染色体，染色后用于区别姊妹染色单体用于评价产生第一次、第二次和第三次分裂的中期细胞的百分率，以此评佔受试物对细胞周期动力学的影响。此外，进行不加S9活化系统直接接触帕洛诺司琼（86到355ug/ml）8小时后24小时和16小时取样的试验及加S9接触帕洛诺司琼（156到650ug/ml）2小时后14小时和12小时取样的试验，对中期CHO细胞样

7、本进行显微检查用于染色体畸变分析。23-3-4试验结果：以有丝分裂受到抑制作为毒性表现。剂量为355ug/ml吋，在加活化系统的条件下，大约72%的有丝分裂受到抑制；剂量为650ug/ml时,在不加活化系统的条件下，大约53%的有丝分裂受到抑制。在缺乏S9系统的条件下，151、201、267和355ug/ml这4个最高浓度组对染色体畸变有丝分裂的抑制率〈80%表明帕洛诺司琼在201、267和355ug/ml这几个浓度下明显增高细胞平