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1、重组人VEGF165蛋白在毕赤酵母中高效表达与多克隆抗体的制备王晓1二黄晓平r周宇「刁勇1②(1：华侨大学分子药物研究院，福建泉州362021；2：华侨大学生物医学学院，福建泉州362021)摘要：VEGF在大多数肿卿卩表达上调，是肿瘤新生血管生成最重要的细胞因子，临床上VEGF的抗体可以抑制肿瘤的发展。为深入研究VEGF165的生物活性及VEGF165抗体在肿瘤治疗屮的作用，本文构建pPIC9K-VEGF165分泌型载体，线性化后电击转化至G5/75(his4)中，经MD平板筛选出阳性表达菌株并进行PCR验证。
2、菌株发酵上清液经SephadexG・25,HeparinSepharoseFF和SephacrylS-100层析介质分离纯化，目的蚩白纯度达到95%,分子量约为24KD。重组人VEGF165蚩白能够诱导HUVEC细胞增殖、提高HUVEC细胞的活性。重组人VEGF165蛋白免疫小鼠，制备多克降抗体，间接ELISA法检测抗体效价达1：51200。重组人VEGF165蛋白的表达及多克隆抗体的成功制备为进一步探索VEGF165在肿瘤形成屮的作用以及VEGF165抗体治疗肿瘤的作用奠定了肚础。关键字：重组人VEGF165蚩
3、白；多克隆抗体；毕赤酵母；中图分类号：文献标志码：AHighlevelexpressionofrecombinanthumanVascularEndothelialGrowthFactor165proteininPichiapastorisandPreparationofVEGF165PolyclonalAntibodyWangXiao1,2,HuangXiao-ping1,2,ZhouYu1,2?DiaoYong1,2*(1instituteofMolecularMedicineHuaqiaoUniversit
4、y,Quanzhou362021:2:SchoolofBiomedicalSciencesHuaqiaoUniversity,Quanzhou362021)Abstract:Asthesinglemostpotentangiogenesisfactor,VascularEndothelialGrowthFactor(VEGF)weredetectedup-regulatedexpressioninmosttumors,andantibodiesofwhichwereshowntosuppresstumordeve
5、lopmentclinically.InordertostudythebiologicalactivityofVEGF165andtheeffectofVEGF165antibody收稿日期：通信作者：刁勇(1967年)，男，教授，主要从事新药研发、基因药物研%.E-mail:diaoyong@hqu.edu.cn基金项目：国家自然基金(No.81271691),国际科技合作项H(No.2011DFG33320),福建省科技重大项目(No.2013N5007),华侨大学校级基金(No.11HZR19)资助。tra
6、nsformedintoPichiapastorisstrainGSI15(his4)byelectroporation.ThepositivetransformantswereseperatedbyMDplatescreeningandconfirmedbyPCRreaction.Subsequently,therhVEGF165proteinwasobtainedbypurificationfromthesupernatantwithSephadexG-25、HeparinSepharoseFFandSeph
7、aciylS-100gelfiltrationchromatographwithmolecularweightof24kDandpurityof95%,showingbySDS-PAGE.Furthennore,therecombinantproteinwasfoundtohavehighpotencyofinducingHUVECcellproliferationandimprovingHUVECcellactivity・ThepolyclonalantibodygeneratedfromrhVEGF165im
8、munizedmouseexertsthetiterof1:51200byindirectELISAanalysis.ThesuccessfulexpressionoftherecombinanthumanVEGF165proteinandpreparationofVEGF165polyclonalantibodylaythefoundationforfurtherexp
