课题3　分解纤维素的微生物的分离 (2).pptx

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1、分解纤维素的微生物的分离纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。草食性动物肠胃中的共生微生物。除自然环境中存在分解纤维素的微生物外，在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？1.通过阅读纤维素与纤维素酶相关资料，结合教材内容，能够简述纤维素酶的种类及作用。2.通过认识从土

2、壤中分离出分解纤维素的微生物，能够说出这类微生物的应用。3.通过进行实际的实验操作，能够掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。教学目标一、纤维素与纤维素酶阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题：1.纤维素在生物圈的分布状况？纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。2.纤维素酶的组成及作用？纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即CX酶、C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解

3、成葡萄糖。阅读课本课本28页相关部分，回答下列问题：1.纤维素分解菌的筛选方法二、纤维素分解菌的筛选刚果红染色法：这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选2.纤维素分解菌的筛选方法的原理刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的透明圈。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落三、实验设计选择

4、纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。土壤取样取样的环境是怎样的，作出这种选择的理由是什么？1.选择培养的目的：选择培养参照课本29页旁栏中的比例配置，回答下列问题2.制备选择培养基增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物是液体培养基，原因是配方中无凝固剂有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖a.旁栏中

5、的配方是液体培养基还是固体培养基？b.这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？3.操作方法：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106梯度稀

6、释1.制备培养基:参照旁栏中的比例2.涂布平板：　　将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30℃倒置培养将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落挑选产生透明圈的菌落刚果红染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红思考：这两种方法各有哪些优点与不足？染色法优点缺点方法一方法二颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也

7、产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落（二）分离的结果是否一致设置对照，若对照的培养基在培养过程中无菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。如果不同，分析产生不同结果的原因。四、结果分析与评价本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量

8、的测定。分解纤维素的微生物的分离纤维素酶种类、作用、催化活力刚果红染色筛选原理实验设计土壤取样选择培养涂布培养纯化培养前置染色法后置染色法富含纤维素土壤增大分解菌含量染色鉴别分离出分解菌课堂小结1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是（）A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物