课题3　分解纤维素的微生物的分离.pptx

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1、课题3分解纤维素的微生物的分离专题二：微生物的培养与应用一、基础知识（一）纤维素与纤维素酶1.纤维素(1)基本组成单位：。(2)含量：是地球上最丰富的类物质。(3)分布：是自然界中纤维素含量最高的天然产物。此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。葡萄糖多糖棉花2.纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种，至少包括三种组分，即、和。复合酶C1酶Cx酶葡萄糖苷酶(2)作用：纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素3.纤维素酶分解纤维素的实验：试管滤纸条缓冲液pH＝4.8纤维素酶(70～80U/mL)条件结果11cm×6cm10mL将两支试管固

2、定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h21cm×6cmmL111mL完全分解基本无变化实验组对照组Q、该实验是如何构成对照的？自变量、无关变量等4.纤维素分解菌的筛选(1)原理：纤维素被分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的______透明圈可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌纤维素分解菌(2)方法：刚果红染色法该方法可以通过________反应直接筛选。颜色刚果红：简称CR，一种染料；可与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发

3、生这种反应。二、实验设计土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落Q1.为获得纤维素分解菌，取样时应选择怎样的环境？1.土壤取样：在富含纤维素的环境中（如多落叶的腐殖土）寻找Q2.为什么要在富含纤维素的环境中寻找？有无其他方法？纤维素分解菌的含量相对较多土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落2.选择培养：（1）选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物；Q、为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而

4、那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制。1、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因是__________液体没有添加琼脂2、该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是：具有以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；（2）选择培养的成分：以纤维素为唯一碳源3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养的作用？应控制的变量是将__________改为_________。葡萄糖纤维素粉（3）选择培养的操作步骤：P29土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落

5、3、鉴别培养基：组分含量提供的主要营养物质CMCNa5～10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、特殊营养成分KH2PO40.25g无机盐琼脂15g凝固剂土豆汁100mL碳源上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL固体培养基土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落4.刚果红染色法：（1）方法一：培养微生物加入刚果红进行颜色反应操作过程：长出菌落的培养基覆盖CR溶液10-15min倒掉CR，加入NaCl10min倒掉NaCl，观察透明圈注意：CR不需要灭菌4.刚果红染色法：（1）方法二：刚果红灭菌培养基灭菌倒平板注意：刚果红、培

6、养基都需要先灭菌，后混匀长出菌落，出现透明圈接种混匀13染色法优点缺点方法一方法二颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。思考：这两种方法各有哪些优点与不足三、结果分析与评价对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。2、选择培养基是否筛选出菌落？如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。1、培养基的制作是否合格？四、课题延伸1、为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还

7、需要进行实验。2、纤维素酶的发酵方法有发酵和_____发酵。发酵产纤维素酶液体固体3、纤维素酶的测定方法：对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________含量进行定量测定。葡萄糖小结：本实验流程与课题2中的实验流程有哪些异同课题2：土样制成菌悬液稀释涂布在选择培养基上（尿素为唯一氮源）分离菌落，鉴定菌种本课题：土样制成菌悬液选择培养，增殖后稀释，涂布鉴别培养基（纤维素为唯一碳源）刚果红染色法，分离菌落，鉴定菌种（发酵产纤维素酶）尿素分解菌纤维素分解菌谢谢观看