西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究

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硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究张玉秀指导教师吕要斌专业学位农卟昆虫与害虫防治研究方向昆虫牛理生态学答辩日期二一三年五月 THEEFFICIENCYBYWESTERNFLOWERTHRIPS,FRANKLINIELLAOCCIDENTALISTRANSMITINGTOMATOSPOTTEDWILTVIRUSONDIFFERENTHOSTPLANTSByZhangYuxiuTheDissertationSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeMasterofScienceSupervisedbyProfessorLuYaobinDepartmentofEntomologyNanjingAgriculturalUniversityNanjing,210095,P.R.ChinaMay,2013 本研究由国家公益性行业科研专项项目编号：国家科技支撑计划课题项目编号：联合资助本研究工作在浙江省农科院“浙江省植物有害生物防控重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地”完成 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名：月上日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密‘请在以上方框内打“”)年月曰学位论文作者(需亲笔)签名：导师(需亲笔)签名：年月—日 目录目录摘要■第一章西花蓟马研究概况—、西花蓟马的分布二、西花蓟马的生物学特性及危害三、西花薪马的防治：植物检疫物理防治化学防治生物防治展望胃二章番茄斑萎騎研究概；兄一、病毒的分类二、寄主及危害结构检测四、传播媒介与防治措施、第三章技术在昆虫研究中的概况一、技术的发明二、技术旳适用范围三、皮形的生物学意义四、技术展望与前景第一章西花蓟马传毒效率的测定材料与方法供试昆虫供试病毒供试植株西花蓟马获毒西花蓟马传毒检测龍分析舰第二章分析非感毒西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为材料与方法供试材料刺吸电位波形记录方法 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑蒌病毒传播效率的研宄取食实验觀純西花莉马的刺探特征西花窗马的取食今于为西花菌马取食行为与寄主适宜性的关系西花莉马取食行为与病毒传播的关系西花蓟马实验中的改进问题第三章分析感毒西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为材料与方法佩材料刺吸电位波形记录方法取食实验籠统计分析结分析西花莉马的剌探特征西花莉马的取食行为感毒西花蓟马取食行为与病毒传播的关系西花莉马取食行为与寄主适宜性的关系第四章感毒(西花蓟马的提取与检測的特异性引物设计主要试剂和药品虞筋单头菌马提取一步法忙增合成凝胶电泳结鮮分析第五章全文总结与展望致維西花莉马传毒能力的測定分析非感毒西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为分析感毒西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为感毒西花蓟马的提取与检测主要创新点研究 目录教献接种缓冲液艦仪絲難攻读硕士学位期间发表论文情况致谢 摘要西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研宄摘要西花蓟马是一种重要的农作物害虫,并且是番祐斑萎病毒最有效的传播介体,每年可造成农作物巨大的损失。本研究采用叶碟实验法,观察西花蓟马在四种寄主植物(番茄、辣椒、曼陀罗、矮牵牛)上传播番茶斑萎病毒的效率；采用直流刺吸电位(技术记录分析了非感毒西花蓟马和感染番费斑萎病毒的西花蓟马在四种寄主植物(番茄、辣椒、曼陀罗、矮牵牛)上的取食行为,并利用法检測单头西花蓟马体内是否携带有番茄斑萎病毒；结果如下：可能有左右的西花蓟马可成功获取番茄斑萎病毒(并传播使寄主植物发病。而西花蓟马在四种不同寄主植物上传播番茄斑萎病毒的效率不存在显著差弄,说明感毒后的西花蓟马在不同适宜性的寄主植物上传播该病毒的效率是相似的。所以,西花蓟马传播番茄斑萎病毒的效率不会因为寄主植物种类的不同而有所差别。非感毒西花蓟马在四种寄主上取食行为的结果：(不同寄主之间的比较：西花蓟马在辣椒上产生的非取食刺探显著少于在其它寄主植物上的非取食刺探。雌虫在辣椒、番茄、曼陀罗和矮牵牛上的非取食刺探分别为次、次、次和次,雄虫在辣椒、番茄、曼陀罗和矮牵牛上的非取食刺探分别为次、次、次和次。西花蓟马在矮牵牛上的短取食剌探显著高于番茄,雄虫在番茄和矮牵牛上的短取食分别为次和次,雄虫在番茄和矮牵牛上的短取食分别为次和次。西花蓟马在矮牵牛上产生的长取食刺探少于在其它寄主植物上的长取食剌探。雌雄虫之间的比较：雖虫比雄虫产生更多的非取食刺探和短取食刺探,雄虫的长取食刺探显著高于雌虫。在矮牵牛上,雌虫的非取食剌探次数和非取食刺探总时间为雄虫的倍。在番茄上,雌虫的短取食次数和短取食总时间分别为雄虫的倍和倍；雄虫的长取食次数和长取食总时间分别为雕虫的倍和倍。由此可知,西花蓟马的取食行为与寄主适宜性之间无显著的相关性。感染番茄斑萎病毒的西花蓟马在四种寄主上的取食行为结果：(不同寄主之间的比较：西花蓟马在矮牵牛上和曼陀罗上的短取食显著高于其他寄主。雌虫在番茄、辣椒、曼陀罗和矮牵牛上的短取食次数分别为次,次,次和次。西花蓟马在矮牵牛上的长取食显著低于其他寄主。西花蓟马雌虫在番茄、辣椒、曼陀罗和矮牵牛上的长取食次数分别为次,次,次和次。(不同性别之间的比 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研宄较：雌虫比雄虫产生更多的短取食刺探,雄虫的长取食剌探显著高于雌虫。雌虫在番茄、曼陀罗和矮牵牛上的短取食次数均为雄虫的倍,在矮牵牛上的短取食总时间为雄虫的倍多。雄虫在曼陀罗和矮牵牛上的长取食刺探次数均为雌虫的倍,在番茄和矮牵牛上的长取食总时间是雌虫的倍和倍。由此,从取食行为方面解释了感毒的雄性西花蓟马比雄性西花蓟马的传毒效率高,且感毒后的西花蓟马的取食行为与寄主适宜性之间无显著相关性。关键词：西花蓟马；番茄斑萎病毒；直流刺吸电位技术；寄主植物；取食行为 ABSTRACTTHEEFFICIENCYBYWESTERNFLOWERTHRIPS,FRANKLINIELLAOCCIDENTALISTRANSMITINGTOMATOSPOTTEDWILTVIRUSONDIFFERENTHOSTPLANTSABSTRACT：,,,,,,, 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究,,,,,,,,,,： 上篇文献综述 上篇文献综述笫一章四花狗。研究概况第一章西花马研究概况一、西花莉马的分布莉马属于缓翅目(昆虫,分属锥尾亚目(和管尾亚目及个科,世界上己知记录的种类大约有种(,,而其中有的飼马种类会对农作物造成严重危害(,。目前在我国已有记录的莉马有属种之多(张维球和童晓立,。大多数莉马是植食性的,挫吸植物的汁液；另一部分是以真菌为食,喜食孢子和菌丝；极少部分是捕食性的,以捕食其他种类莉马、螨虫、烟粉及介壳虫为食(。随着商业贸易运输的发达,莉马通过活体植株、干草、木材及船舶航行带来的泥土碎石运输而广泛扩散传播(,。西花窗〗马又名苜猜莉马,其英文名为属于缀翅目(中锥尾亚目(莉马科(花蓟马属；张生芳和赖凡,。西花莉马最早于年在美国西部发现并报道,并于年在夏威夷岛爆发危害(,,其后扩散至新西兰(、墨西哥(,。伴随着花卉、蔬菜的国际运输,西花莉马入侵荷兰、法国、意大利、比利时等欧洲国家(；。年,在日本发现西花莉马(,年,扩散至韩国(,。现在西花蓟马己经扩散至全球大部分国家和地区,并成为一种世界性害虫在世界各地造成危害(；。如今,西花莉马的分布地区包括中国、韩国、日本、美国、加拿大、墨西哥、危地马拉、哥斯达黎加、多米尼加共和国、委内瑞拉、哥伦比亚、秘鲁、巴西、智利、阿根廷、厄瓜多尔、圭亚那、乌拉圭、挪威、瑞典、芬兰、爱沙尼亚、波兰、德国、法国、英国、西班牙、意大利、匈牙利、土耳其、立陶宛、希腊、爱尔兰、俄罗斯、阿尔巴尼亚、马其顿、保加利亚、罗马尼亚、比利时、荷兰、丹麦、波兰、斯洛伐克、斯洛文尼亚、克罗地亚、以色列、奥地利、瑞士、捷克、塞浦路斯、科威特、肯尼亚、津巴布韦、南非、斯威士兰、澳大利亚、新西兰。欧洲及地中海地区的植物保护组织(已将西花莉马定为级的检疫对象。年,西花莉马己经在中国大陆地区被列入植物检疫性害虫名单中,在年中国昆明国际花齐节上的緬甸盆景上检出(蒋小龙等,。年,在我国台湾地区首次在马来西亚切花上发现入侵害虫西花莉马,并将其列入检疫性害虫(吕荣章等,。年,西花蓟马在我国北京地区的温室大棚中首次发现并造成严重危害(张友军等,。从此,西花莉马在我国北京、云南、山东、贵州、河南、江苏、浙江等东部沿海花舟贸易地区扩散,而在浙江省多在花舟市场中发现(张友军等,；郑长英,李景柱等,吕要斌等,。戴霖等(首次通过 硕士学位论文西花劍马在不寄主植物上对番琉斑蒌病毒传播效率的研宄利用地理信息系统分析评估了西花蓟马在中国的潜在适生分布范围,其适宜定殖在°,°°范围内的华南、西南等地区,潜在适宜定殖在°,的我国西南、西北、华东、华中、华南及华北等绝大多数地区的个省自治区、直辖市。周卫川(的研究显示,我国的的地区为西花莉马适生范围,其中的部分为潜在危险区和高度危险区。由此可见,我国的大多数地区均是西花莉马的适宜分布区,因此,西花莉马在我国很可能发生大规模扩散,这样必定会对我国的农林经济生产造成严重的威胁。洲北英非洲南英洲太大利亚■图西花马在全球的分布(中国莉马网)红色区域表示西花前马的分布地区 上篇文献综述笫一章西花飼马研宄概况、參”一图我国西花莉马的发生分布情况(中国莉马网)地图来源：底图下载于国家基础地理信息系统(提供的地图数据。下图同。丨丨—‘‘■【■—■■■图西花马在我国的潜在适生区预测(中国莉马网) 硕士学位论文西花飼在不寄主植物上对番爺斑萎病毒传播效率的研究二、西花前马的生物学特性及危害西花莉马属于过渐变态类,需经过卵、一龄若虫、二龄若虫、三龄前期、四龄伪踊期、成虫六个发育阶段。西花莉马的卵通常为半透明、背形,长左右,宽左右。西花莉马雌虫的产卵器呈锅状,在植物组织上形成切口将卵产入其中,通常肉眼不可见。一龄若虫孵化后为半透明或白色,之后逐步转变为黄色、橙色、紫色和深红色。虫体包括头、胸、腹,胸节有节,腹节有节,胸部长有对足。二龄若虫为淡黄色,在其将要进入蛹期时通常会钻入寄主植物叶下或者土缝等遮蔽物中。西花莉马的三龄前踊期和四龄伪踊期为停止取食期,此时胸足己经发育完全。前踊的触角仍发育不完全,且具有翅芽。伪蛹经过前蛹说皮发育完成,此时已经具有发育完全的触角、伸长的胸足及扩展的翅芽,虫体与成虫大小相似。西花莉马的成虫虫体较纤细,腹面平滑,具有两对翅,且在翅的前缘和后缘长有缨毛。通常雌虫的虫体比雄虫大,而且有三种色型(灰色、黒色、褐色),而雄虫只有灰色。西花蓟马触角为节,单眼间具有根单眼鬃,每个复眼后具有根眼后鬃,且单眼鬃与眼后鬃的长度相似,前胸背板具有前角鬃和侧缘鬃且两者长度相等,腹部第节背部具有梳状后缘祁毛,末节端部雄性呈圆形,雌性呈圆锥形(朱秀娟,。一头雌虫一生中可产卵粒左右(,,取食花粉可以大大地提高其产卵量(,。西花飼马可以孤雌生殖,未交配的雌虫产卵解化出的子代为单倍体的雄虫,交配后的雌虫产卵孵化出的子代为二倍体雌虫。西花莉马的食性杂,寄主范围极其广泛,其寄主植物多达个科多种(农作物及花卉),主要有煎科、豆科、十字花科、菊科、葫卢科等(,,比如花生、豌豆、斧菜、胡椒、生菜、甘蓝、甜椒、辣椒、黄瓜、番煎等蔬菜作物；苹果、葡萄、疲萝等水果：菊花、玫瑰、凤仙花、天竺葵、矮牵牛、大岩桐、兰花、大丽花、櫻草、大丁草、非洲紫罗兰、马蹄莲、仙客来、秋海棠、金鱼草、唐菖蒲等花舟。西花莉马存在寄主谱扩张现象随着其向外扩散,寄主范围也在不断增加因此,可以说,一般的蔬菜花舟作物均可作为西花莉马的食物来源并经过适应成为其寄主。西花莉马是挫吸式口器,通过口针刺破植物表皮细胞,吸食植物汁液,导致细胞的大量死亡。西花莉马可以取食植物的叶、叶芽、花、花蕾、果等组织部位的汁液(。西花莉马刺吸取食可以造成嫩叶的畸形萎缩、发育迟缓,甚至会干枯调零,随着植物的生长,自下而上危害叶片,被取食过后的叶片上呈现白色斑点状伤痕,叶片银化,甚至可见西花莉马的黑色排泄物,严重时致使叶片皱缩,萎蔫,影响植物正常的光合作用及生长发育。西花蓟马对花粉的取食具有偏好性,危害花蕾可导致花瓣畸形卷皱,花森不能正常生长,严重时致使花朵不能正常开放；危害已经开放的鲜花后,会致使花瓣斑驳,花冠畸形,子房发育受阻,果实的产量和质量严重下降。西花莉马取食果实汁液时,会使果实褪色、黄化甚至变色,表面形成掩症,发生畸变,生长受阻, 上篇文献综述第一章西花飼马研究概况致使果实中所含有的营养和水分流失,从而降低果实的产量和质量,甚至有可能致使幼果脱落(,；赵成银等,。西花莉马不仅可以通过取食、产卵对寄主造成直接危害,还能传播多种植物病毒造成间接危害,；,西花蓟马可以传播多种植物病毒,造成农作物的减产和经济损失,其中主要包括番痴斑蒌病毒(、凤仙花坏死斑病毒(和番痴褪绿病毒(,等多种番痴斑萎病毒属的植物病毒(,；；。西花飼马是番莉斑蒌病毒最有效的传播介体,随着西花莉马的全球扩散传播,该病毒的发生和传播尤其严重。一般可以导致农作物严重减产损失,甚至有可能绝收(,。番痴斑萎病毒在世界各地受到广泛关注,属于世界十大农业病害之一,每年可造成全球的经济损失。由此可见,西花莉马传播病毒造成的危害远远大于直接危害。三、西花剪马的防治植物检疫西花莉马是一种外来入侵检疫性害虫,是通过大量的花齐蔬菜等活体植物寄主的运输调运而扩散传播的。所以,应该强化检疫,严格执行检疫制度,切断西花莉马的来源,控制其传播范围,严格防止西花萄马在我国的进一步的扩散。对于被检疫出的西花莉马虫源应予以高温或火烧进行彻底销毁。物理防治利用颜色诱杀西花葡马对蓝色、黄色和粉色均具有一定的趋向性,尤其对于蓝色趋性最强。利用这一点,我们可以制作并悬挂蓝色(波长粘虫板来诱杀和测报西花葡马,减少成虫基数和产卵量,控制成虫的扩散(龚佑辉等,张友军等,。也有研究表明,林茂牌黄色捕虫板与蓝色粘虫板(波长的诱虫量亦最为接近任洁等,。在西花莉马成虫盛期,这两种粘虫板在西花莉马的控制中均能取得良好的效果。利用植物诱虫诱虫植物其实是该害虫最为偏好性的寄主,利用这一特点,可以将害虫吸引至诱虫植物上,从而远离其他受保护植物。这种防治方法环保、简便、易于就地取材,而且效果非常明显高效。一般这种方法多用在一些园艺害虫的防治上(；,；,。有研究表明,开放的花朵对于西花莉马具有较强的吸引力。所以利用开放的黄色德兰士瓦雏菊或菊花 硕土学位论文西花夠马在不同寄主植物上对番痴斑蒌病毒传播效率的研宄可以大大吸引西花莉马成虫去取食(。其他有研究表明,西花莉马的适温范围°内,最适湿度为左右(李景柱等,；李景柱等,。过高的温度和湿度会使得西花莉马的活动受到极大的抑制,甚至会导致死亡(宁钦广和王鹏,。因此,可以釆用高温(°高湿对蔬菜定植之前的大棚进行闷棚消毒防控西花莉马(李景柱等,陈志杰等,。对于西花莉马的物理防治还应该应注意田间清洁与打扫,对于种植的农作物加以覆盖地膜,不仅可以对作物进行防冻保温,还可以防止西花莉马化踊进入土壤和和植物碎肩中越冬。其次,加盖防虫网亦可以控制西花莉马随风传播,从而有效地防控西花莉马。化学防治化学防治一直是害虫防治中效率较高、使用最多的防治方法。研究表明,经过多重筛选,确定乐斯本(、卩定虫脒、艾美乐(、除尽(、菜喜(、多杀菌素(、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(、阿维菌素、印楝素(可以作为有效防治西花莉马的田间用药(；肖长坤等,：吕要斌等,；张安盛等,。其中由微生物代谢物质制成的菜喜(,新型高效低毒生物杀虫剂印楝素(甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(以及阿维菌素(不仅对西花割马的防治效果强,而且对环境不会产生危害。尤其是菜喜(这类药剂高效安全,安全采收期只有特别适用于无公害蔬菜的生产(肖长坤等,。但是,由于西花飼马发育历期短,种群增长迅速,隐蔽性强,易产生抗药性,化学防治的效果不是很理想。为了防止西花莉马的抗药性的产生,各种药剂应交替轮换使用(沈宝明等,。生物防治化学防治虽然效果明显迅速,但是容易导致农药残留、环境污染、西花莉马的抗药性及伤害天敌等问题。所以,在化学防治中,配合使用生物防治显得十分必要。西花菊马的天敌种类较多,约有种,常见的有螨类、螗类、寄生蜂类、病原线虫及寄生性真菌等(潘志萍等,。捕食性癖类捕食西花飼马的觸类主要属于钝缓《类。目前应用广泛、研宄较多的有木槿真续、纯缓和黄瓜纯续赋(黄瓜新小缓螨)。在不同的环境情况下,可以利用不同种类螨防治西花莉马。对于龄的西花蓟马,可以米用黄瓜纯缓螨、巴氏純缓和高山小盲缓进行防治(,；张金平等,赵成银等,。对于钻入土壤进入化蛹期的西花蓟马,可以釆用土栖型的捕食性螨尖狭下盾螨和兵下盾赋进行防治(,。木槿真缓螨钝缓觸、瑞氏小盲、草地小盲缓在短日照的情况 上篇文献综述第一章西花飼马研究概况下完全非滞育,可以用于秋冬季温室种植中防治西花莉马(；。其中草地小盲缓螨对低湿环境较为敏感,所以对于西花飼马的防治效果会随着季节的变更而有所波动(,；。另外,对西花莉马具有较好的捕食效果的螨类还有加州钝缓螨左办、安德森钝绥螨、沃氏钝缓螨卵圆真缓螨、草莲真缓螨五、橘真缓螨五的、智利小植缓螨、芬兰真缓螨等(；方小瑞等,捕食性畴类捕食西花莉马的蝽类有许多,主要有淡翅小花蝽、南方小花蝽微小花鋳东亚小花畴、肩毛小花畴狡小花蝽、刺突小花鋳、异样小花畴无毛小花鋳、大臀小花畴、浅白翅小花蝽暗小花畴(、盲蝽、姬蝽、暗黑长脊盲蝽、小林原花蟮办张綺等,。国外对花畴类的研究较为成熟,已经将多种小花蝽应用于西花蓟马的防治。在我国东亚小花蝽的分布广泛,数量较多,国内对其的研究也相对较多。已有研宄表明,东亚小花蝽的若虫和成虫对西花莉马的成虫均具有较高的捕食潜能,对可有效控制西花莉马(张安盛等,张安盛等,。然而,这种捕食性的昆虫成虫之间的存在竞争现象。在西花葡马成虫密度相同的情况下,随着东亚小花鋳的数量的增加,其捕食量和捕食率会随之减少和降低(张安盛等,。利用东亚小花的捕食特性,在田间释放适当数量的东亚小花蝽可以将西花莉马有效地控制在经济阔值以内。我们可以将捕食性螨和花蝽结合起来,在田间同时释放这两类天敌,对西花菊马的防治会达到较为理想的效果。寄生蜂类西花莉马的寄生蜂天敌有多种,大多属于小蜂总科(潘志萍等,。寄生蜂大多通过产卵寄生在西花莉马的卵或若虫的体内,利用西花割马的营养养育子代。现今我们发现的西花莉马天敌寄生蜂类包括葱莉马姬小蜂、美洲莉马姬小蜂、麟斑薊马姬小蜂、淡红萄马姬小蜂、卢曼莉马姬小蜂、莎氏戈姬小蜂決、疑戈姬小蜂印度足栖姬小蜂、缨翅赤眼蜂名等,；。寄生性真菌类寄生性真菌是通过接触虫体体壁,从而使其感染病变来控制害虫。这类天敌对西花 硕士学位论文西花蘭马在不同寄主植物上对番痴斑萎病毒传播效率的研究莉马的防治效果明显,主要是由于其勒标专一、选择性较强。己知的西花菊马寄生性真菌有绿僵菌、球孢白僵菌、蜡阶轮枝菌、小孢新接合霉、多毛孢属、玫瑰色拟青霉、土壤放线菌等(,；。这些真菌类制成的生物农药既安全环保,防治效果又好。其中,以金龟子绿僵菌制成的生物制剂可以有效的防治各个虫态的西花莉马(,球抱白僵菌在西花莉马的生物防治中的应用也较多。分别由轮枝菌和土壤放线菌有氧发酵产物衍生制成的两种生物杀虫剂,选择性高,对西花莉马的防治效果可以达到,。病原线虫类病原线虫一般都是栖息于土壤中,因此,其主要是防治蛹期在土壤中栖息的西花莉马。常用的防治西花马的为尼氏莉马线虫和嗜菌异小杆线虫；这种防治方法在国外已经有所使用,但是在我国虽然也有大量生产线虫防治害虫,但是将病原线虫用于防治西花蓟马仍处于研宄技术方法阶段,并未得到生产应用。其他天敌类西花勤马的除了以上的天敌外,还存在其他的天敌种类,比如中华草岭的幼虫、捕虱管飼马决、塔六点马、蚁形隐翅甲乂等,；；张安盛等,将这些不同的天敌联合应用于防治西花莉马,既安全有效,又可以确保西花莉马不会产生抗药性。四、展望西花莉马从被发现有报道以来已经有多年的历史,国外对西花勤马的研究成熟而深入。从西花莉马入侵我国年间,我国科学家对西花莉马的研究也仅仅处于起步阶段。虽然西花莉马个体小,隐蔽性强,未在全国扩散开来,但是,我国大部分地区均属于西花菊马的适生区,其直接危害和传播病毒会给农业生产带来严重的危害。因此,我们应该对西花莉马提高警锡,加强检疫并积极研究开发其防治措施。 上篇文献综述第二章番筋斑赛病毒研究概况第二章番前斑萎病毒研究概况一、病毒的分类番前斑赛病毒属于布尼亚病毒科番前斑萎病毒属。布尼亚病毒科共有个属,其中有个属为动物病毒,而番前斑萎病毒属是该科唯一一个侵染植物的病毒属(洪健等,。番前斑萎病毒属共发现个种,其中确定种为个,暂定种为个(,。由于番燕斑萎病毒是番前斑萎病毒属中第一个发现的病毒种,所以以此来命名该属(,。二、寄主及危害番痴斑萎病毒自年在澳大利亚首次发现以来,己在世界范围内广泛分布,主要分布在热带、亚热带和温带地区,给世界农业生产造成了严重的经济损失(,。鉴于其危害严重,已经被列入世界十大危害最大的植物病毒(。该病毒的寄主范围广泛,可侵染个科,多种植物,包括烟草、花舟、蔬菜等园艺观赏植物和大多数农作物(。感染番筋斑萎病毒的植株的叶片会出现镶脉、叶脉坏死、死斑、同心环纹斑、叶片畸形、叶面皱缩,植株整体异常矮化等典型症状。不仅叶片上症状明显,花器上也会出现死斑,产生畸形花,莲杆和根部会出现坏死现象(刘雅捧等,。严重时会导致整株死亡,造成严重的经济损失。年,在我国成都的番痴上发现番煎斑萎病,年,在调查南方的花生病害时又发现引起的新的病害(许泽永等,。随后在四川的番琉和烟草上,内蒙古的甜菜上均有发现(季良,姚革,。年,番燕斑萎病毒在云南烟区已经广泛的分布并造成严重危害,局部地区的损失达到以上(张仲凯等,。三、结构与检测年,人们首次成功将从大丽菊中分离出,对的研宄也随之更加深入。番前斑妻病毒是一■种病毒,由和条单链组成。病毒粒子结构为直径的球形,外层覆膜包裹。和为双义。其中包含有个开放式阅读框(,一个编码非结构蛋白,一个编码前体糖蛋白和。亦包含有个开放式阅读框(,一个编码非结构蛋白,一个编码核壳体蛋白(。为负义含有一个大的开放式阅读框(,主要是编码依赖性聚合酶蛋白(蛋白)(。对于番莉斑萎病毒的检测,国内外己经研宄了多种方法。上世纪年代初,国外己经制备了的多抗血清,因此发展了检测该病毒的一系列方法。之后,等在此基础上又制备出了其单克隆抗体和酶联免疫反应的检测方法、。此后,随着分子生物学的发展,、实时焚光定量被 硕士学位论文西花飼马在不同寄主植物上对番筋斑赛病毒传播效率的研究用于检测,这些方法简单且灵敏度较高(扣,；。电镜也是检测的一种可靠方法。片段〗片段片段图番筋斑萎病毒基因组及其产物(洪键等,四、传播媒介与防治措施番痴斑姜病毒的危害遍布世界各地,是重要的世界经济作物的病毒群之一。番琉斑萎病毒的传播介体是釗马,目前已有报道的有西花莉马、花莉马、棉芽飼马￡、褐花菊马、佛罗里达花莉马尸首花莉马禾花莉马、烟莉马、棕黄莉马、■莉马、茶黄莉马及共种莉马,前种莉马己经进过证实和认可,其中,西花莉马是其最主要且有效的传播媒介昆虫(■：；；。随着西花莉马的传播危害,番痴斑萎病毒也随之危害加剧。目前,对于番痴斑萎病毒的防治没有直接有效的方法,通过切断病毒媒介这一途径是最根本的方法。防治西花莉马等传播媒介即可防治该病毒的传播和扩散。有研究表明,西花莉马的一龄若虫取食带病植株即可获毒,病毒随着植物汁液进入虫体中肠进行复制,获毒能力随着西花莉马年龄的增加而降低,踊期和成虫期不能获毒；二龄若虫和成虫可以传播病毒(。在成虫传毒过程中,从中肠上表皮组织进入中肠肌肉细胞和朝带,再进入唾液腺体,通过口针取食释放的唾液使病毒侵入寄主植物的细胞中(。等(认为西花莉马进行传播的必要条件是病毒必须到达唾液腺体中。而若虫最初的获毒量、中肠中的复制量以及病毒在莉马体内的循环受阻情况决定西花莉马传播的能力(,。五、展望目前,对于番莉斑萎病毒没有有效的防治手段,仍然主要依靠对其传播媒介的防治来达到对该病的防治效果。西花莉马是最有效的传播者。西花莉马在我国的北京、云南等地己经建立稳定种群,而且经过预测我国的大部分地区都是西花莉马的潜在适生区,所以,对于西花蓟马的扩散而带来的番戒萎病毒病需要给予足够的重视。通过 上篇文献综述第二章番痴斑萎病毒研究概况研究西花葡马的生活和取食习性,传毒机制,传毒效率,生理机制等方面,为番痴斑萎病毒的防治提供理论依据和参考。 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番莉斑赛病毒传播效率的研究第三章技术在昆虫研究中的概况一、技术的发明剌吸电位(技术是一种较为新型的技术。对于大型咀嚼式口器的昆虫的取食,我们易于通过观察植物的受损情况来间接判断昆虫的取食量,以及对植物的喜好度。而对于小型刺吸式昆虫取食过程则无从观察判断。年,美国加州大学昆虫学家和设计制作了世界上第一台监测取食行为的电生理仪器,用于观察剌吸式昆虫(极虫)在植物组织中的取食刺探行为(。但是由于仪器设计方面存在的缺陷和技术的缺乏,这种技术方法未能发展推广。经过多年,许多研宄者的努力研究和改进,的工作终于取得了巨大的成功,；,。他所设计的直流刺吸电位仪(采用直流回路系统和输入电阻,使之输出的波谱更加精准、细致,且重复性很高(。二、技术的适用范围理论上来说,技术适用于所有剌吸式昆虫的研宄,包括吸血昆(或蜱赎等与动物或人的关系的研宄。但是,由于技术和操作上的局限性,目前,这项技术仅应用于刺吸式昆虫与植物的关系方面的研宄,如同翅目和半翅目昆虫、植食性螨类、挫吸式口器昆虫莉马。技术目前应用于刺吸式昆虫研究的三个方面。第一,用于观察刺吸式昆虫的取食行为。用这种方法可以准确得知昆虫在记录阶段何时刺探,何时吸食食物,吸食持续时间,刺探次数,以及开始和结束的时间等方面的信息。这些信息可以直观的反映出西花飼马的取食行为。而且,鹿糖或水等人工词料也可以代替寄主植物用来进行昆虫记录(,。第二,用于研宄刺吸式昆虫的传播病毒的机制。有研宄表明,昆虫的某些取食波形情况的改变可以反映出其自身带毒情况及寄主植物的染毒程度(,。等的研宄表明,感毒的西花莉马雄虫的取食频率是健康西花莉马雄虫的倍,这也增加了其传毒机率。第三,可以研宄植物的诱导防御反应机理和植物对刺吸式昆虫抗性机制。通过记录的波形数据,得出昆虫在取食时各波形的顺序,持续时间,取食次数等信息。利用这些信息,我们可以推断出昆虫进食的时间段,对寄主的适应性及喜好程度等相关信息。从而可以从植物组织水平上说明其抗性或诱食方面的机制反应(,；；汤清波等,。三、波形的生物学意义植食性刺吸式昆虫根据取食植物部位的不同可以分为类：①吸食朝皮部：胸嘆亚目昆虫,如跑虫、粉風、介壳虫、鋳类等；②吸食木质部：头嘆亚目昆虫,如禅、叶赠等；③吸食叶肉：缓翅目莉马类,部分叶蜂类(汤清波等,。 上篇文献综述第三章技术在昆虫研究中的概况以极虫取食为例,各波形的生物学意义如下(雷宏和徐汝梅,。波：指口针未刺入植物时的电压状态波：口针接触刺探植物组织表面,频率不稳,幅度较大,一般为。此时伴随有水溶性唾液分泌(,。波：紧随波,口针位于表皮或叶肉组织,频率较慢。此时伴随有凝胶型唾液的分泌,可以形成保护口针的唾液鞘(,。波：是所有波形中最为复杂的波形。崎虫刺探食物,口计启动,位于叶肉细胞间隙或朝皮部蹄分子外部,是一种口针通道活动。波：反映了口针刺破细胞膜时所测的膜内外电势落差,是口针刺入叶肉细胞,吸食细胞内含物。：频率为指口针遇到机械阻力,是口针在细胞膜外的运动。波：频率稳定,口针刺入铺皮部蹄管,并将水溶性唾液注入蹄管中。波：口针从朝皮部蹄管中被动吸取汁液。波：频率为,是一种胞外水平的波形,口针到达木质部,并且在木质部中主动吸取汁液。其中波、波、波、波和波属于刺探路径阶段,和属于初皮部阶段,波属于木质部阶段。除了以上典型的几种波形外,一些刺吸式昆虫还存在其他波形。如温室白粉虱存在波和波,而锉吸式口器的莉马则存在波,波,波、波及波(胡想顺等,。波指刺探开始,波指头部重复性点头振动,波指上颖口针的插入,分泌唾液,细胞受损,波指摄取汁液,波至今仍无具体的生物学解释(,。四、技术展望与前景刺吸式昆虫的一些基本波形对应的行为虽然已经建立,但是,仍然存在一些波形的生物学意义不明的现象,有待于我们进一步的研宄与完善,如西花马的波(。昆虫的取食行为是一种复杂的行为,在取食不同寄主时有可能会出现不同的波形(胡想顺等,。技术采用金属丝粘连昆虫,虽然这些金属丝线足够细而轻巧,但它限制昆虫大范围地自由活动所以产生的波形不能正确反映自然状态下昆虫的取食活动(,。因此,需要加快研究和开发新技术新材料来取代这种金属线,这种技术的成功也会给大型昆虫的应用带来希望。技术已经应用于多种昆虫的剌探取食研究(罗晨等,,伴随着其他辅助研究及技术的不断完善,对于植食性昆虫的获毒、传毒、抗药性,植物的耐旱性、耐寒性、抗虫性以及防治策略等机制的研究将会更有成效。 下篇研究内容 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研究第一章西花前马传毒效率的测定西花莉马和番痴斑萎病毒(是两种世界范围内危害较大的昆虫和病毒,严重影响农作物的产量、质量和观赏经济价值(；。而且,西花莉马作为番燕斑萎病毒最主要的传播媒介这一特点将两者紧密的联系在一起(。所以,防治西花蓟马相当于防治番爺斑萎病毒。为明确西花莉马传播番琉斑赛病毒的能力和效率。本实验采用叶碟法,观察西花莉马在种寄主植物(番郝、辣椒、曼陀罗和矮牵牛)上的传毒效率的差异,从而明确寄主植物的改变对西花莉马传播有无显著的影响。这为西花莉马的防治及番痴斑奏病毒的发生和传播提供理论依据及参考价值。材料与方法供试昆虫西花莉马于年釆自北京,以四季豆作为寄主饲养于人工气候箱建立实验种群(图。西花蓟马已在室内连续词养代以上。饲养条件：温度为±,相对湿度为±,光照周期为。供试病毒番痴斑赛病毒(：从云南田间采集发病症状明显的辣椒果实,经过快速检测试剂检测之后,一部分置于冰箱保存,一部分通过摩擦接种在烟草枯斑寄主(三生烟)上分离病原,然后挑取单个枯斑转接于黄花烟上繁殖病毒,再将病毒接到健康曼陀罗植株(片真叶)上。供试植株健康植株的获得番煎品种为合作上海番痴研宄所,购于杭州市江干区杭丰蔬菜良种研宄所；辣椒品种为杭州鸡爪吉林早椒,购于杭州市江干区杭丰蔬菜良种研宄所；曼陀罗采于河南,自收种子；矮牵牛,购于杭州市江干区杭丰蔬菜良种研宄所。将上述植物种子分别播种于控温、控湿、无虫的玻璃温室中,温度±,相对湿度±,光照周期,自然光且辅以反射型日光色镝灯光(,培养健康植株,待长出片(矮牵牛为片)真叶时(约周)供试。培养植株所用营养土为珍珠岩(直径、泥炭、有机肥(苜蒂牛粪、經石按照体积比)的比例混合而成的。 下篇研究内容第一章西花铜马传毒效率的测定机械接毒植株的获得采用人工摩擦的方法接种番痴斑萎病毒。选取感毒症状明显的曼陀罗植株,剪取病毒叶片加入的接种缓冲液(,将叶片碾碎制成接种液。取健康曼陀罗植株(片真叶),在其顶端片真叶上面洒上金刚砂粉末(约目),利用棉签沾取配好的接种液沿着叶脉伸展的方向轻轻地摩擦叶片,约过后再用清水冲洗叶片表面,在±左右的环境下,约周即可观察到明显的发病症状。明显旳发病症状：叶片出现明显色斑,萎黄色伦纹和萎黄色镶嵌,生长受阻,并出现畸形,经过快速检测试剂盒检测确认其为发病植株。西花藓马获毒将感染病毒症状明显的曼陀罗和头左右健康的西花蓟马成虫一起置于纱罩笼子中(图。让西花莉马成虫取食感毒曼陀罗产卵天后,将曼陀罗从笼子中取出,去除西花蓟马成虫,在温室中放置天左右待卵孵化成一龄若虫。待一龄若虫在感染病毒的曼陀罗上取食天获毒以后,将获毒后的若虫收集至玻璃紅,用健康豆角饲喂。待到蛹期时,将西花蓟马放入装有滤纸片的离心管中单头饲养至成虫,用毛笔蘸水将滤纸片打湿,保持离心管中的环境湿润,使叶片保持新鲜。实验条件：温度为±,相对湿度为±,光照周期为。西花蓟马传毒待感毒西花莉马羽化一天后,单独分别饲喂健康曼陀罗叶碟、辣椒叶碟、番菊叶碟、矮牵牛叶碟图。一组处理为头成虫,每组次重复,共组处理。圆形叶碟直径为。将颜马取食后的叶碟放入漂浮在装有灭菌水的孔板中,每孔装有灭菌水,在°下漂浮天(图。将传毒后的莉马成虫收集存放于冰箱中,以便之后用于检测。天之后取出叶碟,用于检测。实验条件：温度为±,相对湿度为±,光照周期为。检测双抗夹心法试剂和药品特异性抗体球蛋白,酶标记结合抗体,包被缓冲液,封闭液,洗漆缓冲液(,常规提取液,,均购自安德珍生物公司(。双抗夹心法包被缓冲液来稀释特异性抗体球蛋白即一抗,特异性抗体包被液,在孔酶标板中每孔加入稀释后的一抗缓冲液°温育利用洗漆缓冲液在洗板机上洗板次,每次洗漆时间间隔为,最后将液体抽干；将每片叶碟加入丨常规提取液磨碎,离心取样品上清液,每孔加入丨,重复孔； 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番筋斑萎病毒传播效率的研究°温育过夜(至少重复步骤(用封闭液稀释酶标记结合抗体即二抗,酶标记结合抗体：封闭液,每孔中加入稀释后的二抗缓冲液°温育利用洗涤缓冲液在洗板机上洗板次,以确保完全将可移动的酶标记结合抗体洗涤干净,每次洗漆时间间隔为,最后将液体抽干；配制显色液：底物缓冲液中加入,每底物缓冲液中加入每孔加入显色液；将孔酶标板用锡箱纸包严,在黑暗环境中室温温育利用酶标仪读取下的吸光值若样品两孔的吸光值均大于阴性对照平均值阴性对照标准差,则该样品为阳性,否则即为阴性(,。数据分析每组处理头,次重复,共组处理。记录每组中检测成阳性的数量,阳性数量与总数的百分比即可作为传毒的能力。利用数据处理系统(唐启义,浙江大学昆虫研究所)进行数据的方差分析、多重比较(法,。数据统计分析过程中将阳性所占的百分比转换为反正弦平方根。结果与分析表是西花莉马在四种寄主植物上的传毒效率的比较。从表中可以看出,西花莉马在种寄主植物上的传毒能力不存在显著差异。西花莉马的传毒能力均小于。 下篇研究内容第一章西花莉马传毒效率的测定表西花菌马在四种寄主植物上的传毒效率均值土标准差±辣椒±曼陀罗矮牵牛同列不同字母表示差异显著(尸,法)。番痴、辣椒、曼陀罗和矮牵牛均属于莉科植物,是西花葡马不同适宜性的寄主。等(的研究表明,与辣椒相比,番琉为西花莉马的较适宜寄主。那么,从表可以看出,西花莉马在不同适宜性的寄主植物上传播的效率是相似的。讨论根据国外许多专家学者的研宄发现,有种莉马可以传播番痴斑奏病毒(,但经进过证实,西花葡马是番痴斑姜病毒的主要传播载体(,；；；。本研宄结果显示,可能只有左右的西花莉马在获取番痴斑萎病毒(后可成功传播使寄主植物发病。即说明,能够成功获毒并且成功传毒的西花莉马可能为左右。而不同的寄主植物之间发病的概率显示并无显著性差异,表明西花莉马在不同适宜性的寄主植物上传播该病毒的效率是相似的,并不会因为其对寄主植物的偏好性和适应性而有显著差别。所以,西花莉马传播番煎斑養病毒的效率可能不会因为寄主植物种类的不同而有显著差别。西花莉马是一种寄主范围很广的昆虫,其寄主包括各类蔬菜、花舟、水果等,甚至 硕士学位论文西花夠马在不寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研宄包括一些杂草。而本实验的四种寄主植物均属于筋科植物,并不能代表西花莉马所有的寄主种类,因此存在一些缺陷。在今后的实验中可以增加更多西花莉马的寄主植物种类,使结果更加全面完善,具有广泛的利用和参考价值,为莉马的防治提供有力的依据。图莉马的词养图西花前马获毒图西花莉马传毒 下篇研宄内容第一章西花别马传毒效率的测定爾图叶片漂浮 硕学位论文四花夠马在不寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研宄第二章分析非感毒西花莉马在四种寄主植物上的取食行为西花铜马属于缕翅目(,蓟马科花菊马属(最早于年在美国西部发现并报道年我国首次报道并在北京发生造成严重危害(张友军等,。作为一种世界性害虫,西花莉马的食性杂,寄主范围广,目前己知的寄主植物多达余种(多为农作物及花卉),而且其寄主植物种类还在持续增加(吕要斌等,。西花莉马的危害包括挫吸植物的垄、叶、花、果造成直接危害和传播番爺斑萎病毒属多种病毒造成间危害(：朱秀娟等,。西花莉马虽然寄主植物广,但对不同寄主植物的偏好性和适应性不同。己有研宄表明在豆科植物上,西花蓟马各虫态均偏好于四季豆(李景柱等,而在筋科植物上,各虫态的西花莉马偏好性为痴子番琉〉辣椒(钟锋等,。西花莉马的发育历期在四季豆上显著短于辣椒,在黄瓜上显著短于痴子(裴昌董和郑长英,。西花莉马雌虫对不同寄主的产卵选择性为部子黄瓜辣椒番莉,在不同寄主叶片上的产卵量也有差异,为甘蓝窝苣黄瓜大蒜(裴昌莹和郑长英,曹宇等,。有些昆虫的取食行为与其对不同寄主植物的适应性是相关的,如研究表明型烟粉風在甘蓝、西葫戸和辣椒上取食,从剌探幵始到第一个波出现时,在三种寄主植物上的非取食剌探时间存在显著差异,为甘蓝西崩卢辣椒,表明型烟粉風在种寄主上尝试性刺探时间存在差异；在甘蓝上第一次軔皮部持续吸食后的刺探次数显著低于在西葫声上的刺探次数,表明型烟粉对甘蓝的初皮部适应度大于对西葫戸的朝皮部(岳梅等,。这与型烟粉虱在甘蓝、西葫声和辣椒上的适合度为甘蓝西朝声辣椒的结果是一致的。棉嫁在黄瓜和马铃薯上的寄主转换时取食行为也不同,黄瓜上的棉极转到马铃薯上时出现了左右的波,但马铃薯上的棉畅转到黄瓜上后,其取食波仅占而寻食和刺探(波和波)占刘向东等,。此外媒介昆虫的取食行为与其传毒能力具有明显的相关性,植物病毒明显改变媒介昆虫的取食行为,从而增加媒介昆虫传播、扩散植物病毒的能力(；。西花蓟马是一种挫吸式昆虫,那么其在不寄主植物上的取食行为是否也同其对不同寄主植物的适应性相关？西花飼马在适宜寄主上的取食是否更多？西花飼马在不同寄主上传播植物病毒的能力是否与取食行为相关？本研究通过直流刺吸电位仪分析西花莉马在四种寄主植物番前、辣椒、曼陀罗、矮牵牛上的取食行为,以期为深入理解西花莉马对不同寄主植物的适应性和西花莉马在不同寄主植物上传播植物病毒的能力提供理论依据。 下篇研宄内容第二章分析健康西花莉马在四种寄主植物上的取食行为材料与方法供试材料供试昆虫详见第一章供试昆虫。选取羽化后第天的非感毒西花蓟马成虫供试。寄主植物健康番筋、辣椒、曼陀罗和矮牵牛,详见第一章,选取长出片(矮牵牛为片)真叶的健康植株供试。刺吸电位波形(记录方法采用四通道面板控制的直流电型(型)昆虫刺吸电位仪(,,进行取食行为观察。将一根细金丝线(长约直径的一头用银胶固定在莉马的背板上,另一端用银胶固定在一根细铜丝(长约的一端,铜丝的另一端用锡粘合在一根铜钉(长约直径上,最后将铜钉置于昆虫电极。实验时,先将西花莉马置于冰袋上,便于用银胶将其背板粘合在金丝线上。超细的金丝线既可导电,又可以使莉马在叶面上相对自由的移动。然后将粘合好的莉马置于平面上自由移动使其适应粘合的金线。随后,将长约的铜质棒状植物电极插入植株盆栽土壤中,再将粘好莉马的铜钉插在对应的插槽内,飼马置于健康植株顶端第片真叶的叶面上,使其可以相对自由地移动。实验条件为温：’相对湿度±采用约灯光光照强度,整个实验置于接地的法拉第金属笼中,以避免噪音干扰。采用软件(对蓟马取食行为进行实验记录。取食实验实验莉马为西花莉马成虫成虫,实验植株为曼陀罗(片真叶、番痴(片真叶、辣椒(片真叶、矮牵牛(片真叶)种不同植株。每种植株为一个处理。每处理株,分别记录头雌虫和头雄虫。实验时将莉马置于植株顶端第片真叶的叶片表面。每次实验记录为,每头莉马、每棵植株只可用于一次实验记录。数据统计分析采用软件对昆虫取食行为的数据统计分析。将每次记录的分为前和后两个时间阶段,在第一阶段即前随机选取,第二阶段即后随机选取进行数据分析。西花莉马在刺吸寄主植物时产生的波形主要包括四种：未刺探波(即,非取食刺探波短取食波(和长取食波(对每的数据主要统计非取食刺探波、短取食波和长取食波的次数和总持续时间。利用数据处理系统(唐启义,浙江大学昆虫研究所)对相同寄主上雌虫和雄虫之间相应参数比较进行检验 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番痴斑萎病毒传播效率的研究戶,对同一性别不同寄主植物之间相应参数比较进行方差分析,利用法进行多重比较分析(。数据统计分析过程中将次数转换为平方根,将时间转换为自然对数。结果分析西花薪马的刺探特征西花莉马取食过程中产生的不同类型的波形特征如图所示。非取食刺探波一般持续左右,由波开始,并伴随着不易区别的电压波动,此时西花莉马将口针刺入叶片表皮但并未摄取食物,对寄主植物细胞损害较小,因此对传毒具有重要意义。短取食波(和长取食波均为西花莉马的取食波,以波开始,然后是波(或,接着是波。短取食波(和长取食波主要通过和的比例来区分：一般；小于：为短取食波；：大于：则为长取食波。和可以根据不同频率发生的电压波峰和波谷来区别。的波峰和波谷的频率为的波峰和波谷的频率的波峰和波谷的频率为；,。短取食波和长取食波对于评价寄主植物对西花莉马的适宜性可能具有指导意义。 下篇研究内容笫二章分析健康四花莉马在四种寄主植物上的取食行为厂一」】——图西花马取食刺探过程的波形未取食刺探波由波开始。短取食波由波开始,接着为波,再过渡转换为波。长取食波由波开始,接着为波,再过渡转换为波。马口针未刺入植物时的电压基线。西花莉马的取食行为表和记录所有不同寄主植物上的非感毒西花莉马中种剌探波形的总刺探的次数和总持续时间,表和记录了每种刺探波形的平均时间。 CtOSoc^?JCOx>'i?g-2^f-：§；卜名“,口识占為,皆？；：笛°：？赚““耽薛震率翁—！毅七刮。截培搬—：：尿运§…蒙挥商赵■§§”一卷￡；二踢￡°：责麗虫完每篇謹■友親与 ?g?*?§§“‘―—§奇奈另工：：■§二￡？？°麗■轰§§妄議置■書§：；￡§言深謹爱思；§§；栅攝普】攝￡“樣栽§妹警￡§§——““藍§暴為‘―嫩§二运！芝；口￡■截《§、■°■§费寸它堯§ 硕士学位论文西花飼马在不同寄主植物上对番爺斑赛病毒传播效率的研宄表非感毒西花莉马雄虫在种寄主上的不同取食波形平均时间非取食刺探平均时间短取食平均时间长取食平均时间寄主植物番前±±±辣椒±±±曼陀罗±±士矮牵牛±±士西花蘇马的非取食剌探行为西花蓟马雌虫在辣椒上的非取食刺探次数显著少于曼陀罗,西花莉马雌虫在辣椒上的非取食刺探次数与番痴和矮牵牛上的非取食刺探次数相比差异虽然不明显,但远低于相应寄主上数值(表。西花莉马于不同寄主植物上的非取食刺总时间和平均时间没有差异(表、。雄虫在辣椒上的非￥食剌探总次数和时间显著低于番節(表,而在辣椒上非取食刺探平均时间显著高于番前表。西花莉马在辣椒上的尝试性刺探显著要少于番痴和曼陀罗,说明辣椒与番痴和曼陀罗相比,可能不是西花割马适宜寄主。在曼陀罗和矮牵牛上取食时,雌虫产生的非取食刺探显著多于雄虫(图、图说明雌虫可能比雄虫更加活跃,寻找食物更加频繁。西花莉马的短取食刺探行为西花葡马于不同寄主植物上的短取食行为明显不同(西花勤马雌虫在番痴上的短取食次数显著低于矮牵牛(表,而雄虫在番燕上的短取食次数和总时间都显著低于矮牵牛(表,跟番琉叶片相比,西花莉马肯能更偏好取食矮牵牛叶片。同一种寄主植物上雌、雄虫之间的取食行为存在较大差异,雌虫在番痴上的短取食次数和短取食总时间显著高于雄虫,分别为雄虫的倍和倍(图、图。雌虫在辣椒上的短取食次数显著高于雄虫,为雄虫的倍(图。说明在一些寄主植物上,雌虫比雄虫取食更多的汁液,相应破坏的寄主植物细胞更多,对寄主造成的直接损害可能更大。西花莉马的长取食剌探行为西花飼马于不同寄主植物上的长取食行为明显不同(。西花莉马雌 下篇研究内容第二章分析健康西花莉马在四种寄主植物上的取食行为虫在曼陀罗上的长取食次数和长取食总时间显著高于矮牵牛,而在辣椒上的长取食总时间和平均时间显著高于矮牵牛,都分别为矮牵牛上的倍(表、。西花莉马雄虫在番節上的长取食次数和总时间以及平均时间显著高于曼陀罗和矮牵半(表、。说明矮牵牛叶片可能并不适合西花蓟马的长取食刺探行为。雄虫在番莉上的长取食次数和长取食总时间以及平均时间均显著高于雌虫图、图、图。西花薪马的总取食行为西花莉马在四种寄主植物上虽然总刺探时间差异不显著,但雌虫在矮牵牛上的总刺探次数显著高于辣椒(表雄虫在番痴上的总刺探次数显著高于辣椒表。说明相对于辣椒叶片,番節和矮牵牛叶片的取食难度更大,可能需要剌探更多次数才能保证取食量。西花莉马雌虫在辣椒、曼陀罗和矮牵牛上的总刺探次数显著高于雄虫(图总剌探时间则无显著差异(图。而雌虫与雄虫在番痴上的总刺探次数无显著差异(图总剌探时间为雄虫显著高于雌虫(图。说明雌虫可能依赖增加刺探次数来增加取食,而雄虫则可能是依赖增加平均每次刺探的时间来增加取食。 硕学位论文西花飼马在不同寄主植物上对番莉斑萎病毒传播效率的研究■雌虫口雄虫丁■等幽■■了送§■§。—■—■—“丨■丨丨“；了§广—■■■；丁￡■■■『￡血番前辣椒曼陀罗矮牵牛图不同寄主植物上非感毒西花前马雌雄成虫不同类型波形取食次数的差异图中表示差异显著；表示无显著差尸检验。尸’以下各图同。 下篇研宄内容第二章分析健康四花别马在四种寄主植物上的取食行为■雌虫口雄虫丁丁丁“的”宏￡■■奶°厘丁———■￡丁宏—也。。丄”—‘―—”■——番痴辣椒曼陀罗矮牵牛印图不同寄主植物上非感毒西花莉马雌雄成虫不同类型波形取食时间的差异 硕士学位论文迎花勒马在不同寄主植物上对番筋斑萎病毒传播效率的研究■雌虫口雄虫丁！运■！§丁】。■■；“￡口￡一“￥°————番前辣椒曼陀罗矮牵牛图不同寄主植物上非感毒西花莉马雌雄成虫不同类型波形取食平均时间的差异讨论西花莉马取食行为与寄主适宜性的关系许多昆虫在适宜寄主上的生长发育要优于非适宜寄主,一方面是由于适宜寄主中的营养物质更有利于促进其的生长发育(,,另一方面是由于其在适宜寄主上的取食量要高于非适宜寄主(于飞等,刘晓等,而这些昆虫在适宜寄主上的较高取食量也直接导致其对适宜寄主的危害 下篇研究内容第二章分析健康西花刹马在四种寄主植物上的取食行为程度也要高于非适宜寄主(刘桂华和唐燕平,。等(的研宄表明,与辣椒相比,番煎为西花莉马的较适宜寄主。据此推测西花莉马在番前上的取食量应高于辣椒,但本研究结果表明西花莉马在番莉和辣椒上的短取食和长取食并不存在显著差异(表,这意味着西花莉马在番痴和辣椒上的食物摄入量是相似的,而番郁和辣椒中的营养物质组分及比例是有差异的(吴青君等,由此可以推断西花莉马在这两种适宜及非适宜寄主植物上生长发育的差异与其取食行为无关,而与寄主植物的营养相关。在自然种群中,西花割马之所以在适宜寄主上造成的危害要高于非适宜寄主,主要是由于适宜寄主中的营养物质有利于其种群的增长,进而导致在适宜寄主上造成更为严重的危害。西花莉马在番燕上的非取食剌探波显著多于辣椒(表是由于番節叶片表面的刚毛比辣椒多,增加了西花蓟马取食时的难度,进而增加了西花莉马尝试性的非取食刺探行为。西花莉马取食行为与病毒传播的关系西花莉马可以传播多种植物病毒,其中主要包括番痴斑萎病毒(、凤仙花坏死斑病毒和番痴極绿病毒(,等多种番筋斑萎病毒属■的植物病毒(；；；,而取食是病毒进行传播的先决条件。己有研究表明,病毒的传播完全依赖于病毒进入细胞,通过胞间连丝在细胞间进行扩散。西花莉马取食时对寄主植物会造成不同程度的破坏。非取食刺探是莉马口针插入叶片表皮,在此过程中会分泌唾液,但是寄主植物的大部分细胞不会被破坏,对寄主造成的危害较小；短取食刺探主要是将单个细胞内含物吸尽,造成细胞的严重破坏,对寄主造成的危害较大；长取食刺探是摄取未知物的更为复杂的取食行为(。而病毒的存活需要依赖活体细胞。因此,非取食刺探行为对莉马传播病毒非常有利,而短取食刺探行为对莉马传播病毒不利(,。本研究结果表明西花割马在辣椒上的非取食剌探远低于其他寄主植物上的非取食刺探(表、因此我们可推测,西花莉马在其他寄主植物上的传毒效率可能比在辣椒上高,实际结果有待进一步验证。西花莉马实验中的改进问题本实验采用的是植物叶片来研宄西花莉马的取食行为,但是,在自然条件下,西花莉马更喜欢取食花粉,而且花粉能够促进西花莉马的生长发育和繁殖；；。即使是同一种寄主的叶片,西花莉马对不同部位的叶片的喜好也有区别(裴昌宝和郑长英,而本研究中均用 硕士学位论文西花飼马在不同寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研究上端第二片叶,对此可能对西花莉马取食也有一定的影响。因此,在今后的实验中,我们可以进一步研究西花莉马对各寄主植物花粉及不同部位的取食行为,使得西花莉马在不同寄主上的取食行为研究更加全面。 下篇研宄内容第三章分析感毒(西花莉马在四种寄主植物上的取食行为第三章分析感毒(西花莉马在四种寄主植物上的取食行为番菊斑萎病毒(是世界十大病毒之一,每年可对世界各地的农业经济造成严重的损失。西花莉马是该病毒最主要的传播媒介。可以在西花菊马体内扩增繁殖,再通过西花莉马成虫的取食来传播扩散(,。那么感毒(西花飼马的取食行为是如何,对寄主的适应性是否与取食行为相关？本研究通过直流刺吸电位技术分析感毒西花莉马在四种寄主植物(番煎、辣椒、曼陀罗、矮牵牛)上的取食行为,以期为深入理解其对寄主的适应性提供理论依据。材料与方法供试材料供试昆虫将感染病毒症状明显的曼陀罗和头左右健康的西花莉马成虫一起置于纱罩笼子中(图。让西花莉马成虫取食感毒曼陀罗产卵天后,将曼陀罗从笼子中取出,去除西花蓟马成虫,在温室中放置天左右待卵孵化成一龄若虫。待一龄若虫在感染病毒的曼陀罗上取食天获毒以后,将获毒后的若虫收集至玻璃虹,用健康豆角饲喂。待到蛹期时,将西花莉马放入装有滤纸片的离心管中单头词养至成虫,用毛笔蘸水将滤纸片打湿,保持离心管中的环境湿润,使叶片保持新鲜。取成虫的西花莉马实验。实验条件：温度为±,相对湿度为±,光照周期为。寄主植物健康番燕、辣椒、曼陀罗和矮牵牛,详见第一章,选取长出片(矮牵牛为片)真叶的健康植株供试。刺吸电位波形(,记录方法详见第二章。取食实验详见第二章。将实验后的西花莉马单独收集起来,置于冰箱中,便于以后用方法进行病毒的检测。检测方法详见第四章。数据统计分析详见第二章。 志掛；：；寸一名口嫩本：二寡羞？°工)二§§致°°愈震璧瑕““揪含《。运寸寸二二胚帐雲二§：￡§牲：专丨担③“贫？■裏巧灵叫帐§念蓉§礙—醫§囊。。画§宅攝攝￡恶陌嚴帐细—猶親占 下篇研究内容第三章分析感毒(的西花飼马在四种寄主植物上的取食行为表感毒西花前马雌虫在种寄主上的不同取食波形的平均时间非取食刺探平均时间“短取食平均时间长取食平均时间寄主植物從±±±辣椒±±±曼陀罗±±±矮牵牛±±士 V3OSliti11psIIgIa2S^1W?)c芝—、§：■￡￡尤；§,：————思“§？‘”,§？运“親￡；§跑■：■§二雪“拖口參禅栽￡險签,§縱■磁；：带磨上§■冉§氏茨—；—胃；： 下篇研究内容第三章分析感毒(〉的西花莉马在四种寄主植物上的取食行为表感毒西花菌马雄虫在种寄主上的不同取食波形的平均时间短取食平均时间非取食刺探平均时长取食时丨司寄主植物番痴±±±辣椒±牡曼陀罗±±±牵牛±±±西花蓟马的非取食刺探行为感毒西花莉马雌虫在番痴和曼陀罗上的非取食刺探平均时间显著高于辣椒表。但是无论雌虫还是雄虫,在四种寄主植物上的非取食刺探总次数和非取食刺探总时间均无显著差异(表和。说明感毒的西花葡马在四种不同寄主植物上的尝试性刺探取食相似,不受寄主植物改变的影响。“在同种寄主植物上,西花菊马雌虫和雄虫的非取食剌探差异并不明显。尽管在番節和辣椒上,雄虫的非取食剌探平均时间显著高于雌虫(图但是其非取食刺探总次数和非取食剌探总时间并无显著差异(图、图。说明感毒的西花莉马雌虫与雄虫在同种寄主植物上的尝试性刺探取食相似。西花菌马的短取食剌探行为感毒西花蓟马于不同寄主植物上的短取食行为明显不同(。西花莉马雌虫在番莉上和辣椒上的短取食次数显著彳氐于曼陀罗和矮牵牛,而在矮牵牛上的短取食时间显著高于其他寄主植物(表。雄虫在番菊上的短取食次数显著低于曼陀罗(表。说明跟其他寄主植物叶片相比,感毒的西花莉马更偏好取食矮牵牛叶片。同一种寄主植物上雌、雄虫之间的取食行为存在较大差异。西花莉马雌虫在番節和曼陀罗上的短取食次数均显著高于雄虫,均为雄虫的倍左右(图雎虫在矮牵牛上的短取食次数和短取食总时间均显著高于雄虫,分别为雄虫的倍和倍(图、图。而雄虫在番節、辣椒和曼陀罗上的短取食平均时间均显著高于雎虫(图。说明在一些寄主植物上,感毒的西花莉马雌虫比雄虫取食更多的植物汁液,破坏的寄主植物细胞更多,对寄主植物造成的直接损害更大。 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番菊斑姜病毒传播效率的研宄西花莉马的长取食刺探行为感毒西花莉马于不同寄主植物上的长取食行为明显不同(。西花莉马雌虫在番燕和辣椒上的长取食次数、长取食总时间和长取食平均时间均显著高于矮牵牛,而在辣椒上的短取食次数显著高于曼陀罗(表、表。西花莉马雄虫在番痴和辣椒上的长取食总时间显著高于曼陀罗(表。说明番燕和辣椒叶片比曼陀罗和矮牵牛叶片更适合感毒的西花莉马的长取食刺探行为。西花莉马雄虫在曼陀罗和矮牵牛上的长取食次数显著高于雌虫,分别为雌虫的倍和倍(图。西花蓟马雄虫在番菊和矮牵牛上的长取食总时间和长取食平均时间均显著高于雌虫。(图、图。西花莉马旳总取食行为感毒西花蓟马雌虫在矮牵牛上的总刺探次数和总刺探时间显著高于番痴、辣椒和曼陀罗(表,而雄虫在番煎、辣椒、矮牵牛上的总刺探时间显著高于曼陀罗(表。说明相对于其他寄主植物叶片,矮牵牛叶片的取食难度更大,需要刺探更多次数才能保证取食量,而曼陀罗叶片则比其他寄主植物叶片更容易取食。西花莉马雌虫在番菊和矮牵牛上的总剌探次数显著高于雄虫(图总剌探时间则无显著差异(图。而雌虫与雄虫在辣椒上的总剌探次数无显著差异(图总剌探时间为雄虫显著高于雌虫(图。说明雌虫依赖增加刺探次数来增加取食,而雄虫则是依赖增加平均每次刺探的时间来增加取食。 下篇研究内容第三章分析感毒(的西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为■雌虫口雄虫—————錢■國———‘―————■■■栽〒番痴辣椒曼陀罗矮牵牛图不同寄主植物上感毒西花药马雌雄成虫不同类型波形取食次数的差异图中表示差异显著；表不无显著差检验。尸以下各图同。 硕士学位论文西花飼马在不寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研究■雌虫口雄虫——。°““““丁■■■■丨■————“—“」““——■—““—■番琉辣椒曼陀罗矮牵牛图不同寄主植物上感毒西花菌马雌雄成虫不同类型波形取食时间的差异 下篇研宄内容第三章分析感毒(的西花别马在四种寄主植物上的取食行为■雌虫□雄虫】一丁￥■■】■丁丁二〒—丁——■『丨■■」■■国！,■番痴辣椒曼陀罗矮牵牛图不同寄主植物上感毒西花荷马雌雄成虫不同类型波形取食平均时间的差异讨论感毒西花畜马取食行为与病毒传播的关系己有研宄表明,非取食刺探行为对莉马传播病毒非常有利,短取食刺探行为对传播病毒非常不利(,。本实验表明,不管感毒(西花莉马雌虫还是雄虫在四种不同寄主植物上的非取食刺探行为均无显著差异表、表。除在矮牵牛上雌虫的非取食刺探次数显著高于雄虫外,在其他寄主上,感毒西花莉马雌虫与雄虫的非取食刺探行为无显著差异(图、 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研究图,这与等(的研究结果是一致的。说明感毒后的西花割马在传播病毒方面的差异主要来源于短取食刺探行为的影响。从本实验结果中可以看出,雌虫的短取食显著高于雄虫(图、图因此破坏更多的寄主植物细胞,造成的直接伤害更严重。等(的研究表明雌虫在寄主植物上取食的范围小而集中,雄虫取食的范围大而扩散。这就导致了雌虫的非取食刺探中夹杂了更多的短取食,从而破坏了非取食刺探后的大多数植物细胞,对于病毒的成功扩散传播非常不利。因此,感毒后的西花莉马雄虫比雌虫的传毒效率更高,这与等(和等(的研究结果是一致的。而西花蓟马在矮牵牛上的短取食显著高于其他寄主植物(表,由此我们可以推断,与其他寄主植物相比,西花莉马在矮牵牛上传播番痴斑蒌病毒的效率可能最低。西花蓟马取食行为与寄主适宜性的关系等(的研究表明,与辣椒相比,番琉为西花莉马的较造宜寄主。而感毒西花莉马在这两种寄主植物上的取食行为均无显著差异,这与非感毒雄蓟马在番莉上的非取食刺探显著高于辣椒的结果不同。由此,我们也可以推测出感毒西花莉马雄虫的取食行为因为病毒的影响而改变。但是,感毒西花莉马对寄主植物的适应性与取食行为并无显著关系,这与非感毒西花蓟马的研宄结果是相似的。实验的改进问题本实验釆用的是携带的西花葡马进行实验,但是感毒西花菊马包含携带病毒并可以传播与携带病毒不能传播两种情况(,,这两种情况的西花蓟马的取食行为是否有差别？因此,在今后的实验中,我们可以进一步研宄这两种感毒西花莉马的取食行为。由于西花莉马的食性杂,寄主范围广,我们可以增加寄主类型,使得西花莉马在不同寄主上的取食行为研究更加全面具体,为今后研究西花葡马和番筋斑妻病毒的防治提供有效的理论基础。 下篇研究内容第四章感毒(西花马的提取与检测第四章感毒(西花马的提取与检测西花莉马是番痴斑萎病毒(最有效的传播媒介(,主要由于该病毒可以在西花莉马体内进行复制增殖(,。但是己有研宄表明,西花莉马一龄若虫取食感毒植株可以从寄主植物中获取该病毒(。但是这一方法并不能确保取食的每头西花莉马均可获得该病毒,的西花莉马若虫最高感毒效率雌虫为雄虫为。那么西花蓟马体积如此微小,如何确定头西花莉马成虫体内是否携带病毒？早期的国外学者采用间接检测法—叶碟法,通过西花莉马将获取的病毒传到叶碟上使其发病,从而利用来检测叶碟发病情况来确定该莉马是否带毒(。但是,另有研究表明,不是所有携带的西花莉马都可以成功使其取食的叶碟发病的,其传播效率不仅与其最初获毒量和体内复制数量有关,而且可能受到割马体内病毒循环的障碍物所影响(,。由于西花莉马自身体内缺陷、环境或叶片的因素,导致叶片没有发病或病毒含量微小而未被检测到,这种情况亦时有发生。所以需要建立一种直接而合适的检测方法来对携带的西花莉马进行确认。实验材料供试昆虫将感染症状明显的曼陀罗和头左右健康的西花蓟马成虫一起置于纱罩笼子中。让西花莉马成虫取食感毒曼陀罗产卵天后,将曼陀罗从笼子中取出,去除西花莉马成虫,在温室中放置天左右待卵孵化成一龄若虫。待一龄若虫在感毒的曼陀罗上取食天获毒以后,将获毒后的若虫收集至玻璃虹,用健康豆角饲喂直至成虫。实验条件：温度为±,相对湿度为±,光照周期为。的特异性引物设计根据上的蛋白基因设计两条特异性引物,由生工生物(上海)公司合成,引物序列如下：’和：扩增产物片段约为,；,。主要试剂和药品试剂(购自英雜捷基(上海)贸易有限公司；试剂盒,购自上海硕盟生物科技有限公司(酒精；氯仿混合物(氯仿：异戊醇琼脂糖,购自生工生物(上海)公司；购自生工生物(上海)公司；染色剂,购自生 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番痴斑姜病毒传播效率的研究工生物(上海)公司。实验方法单头莉马提取将单头获毒后的西花莉马置于的离心管中,加入适量的液氮,用微型小件研磨均勾,加入试剂,将样品室温放置。加入氯仿混合物(氯仿：异戊醇,震荡混勾后,将样品在条件下,离心将上清液移至另一离心管中(随后加入冷的异丙醇。室温温育后,再在°条件下,离心。弃上清,加入预冷的酒精(丨)洗漆,在；条件下,离心。弃酒精,在真空离心蒸发浓缩机中干燥处理,之后加入无菌水,在°条件下温育将提取得到旳立即进行或存于°冰箱中保存(,一步法广增合成将存于°冰箱的样品取出,在°条件下解冻。取灭菌后的离心管,按照以下体系混合加入各试剂和样品。体系：引物引物模板将配置好的体系的离心管置于仪中,按照反应程序进行扩增。程序反应条件：变性°；变性°,°°个循环；延伸凝胶电泳将反转录的在的琼脂凝胶下电泳。后,将琼脂胶在紫外光下观察扩增片段。测序将扩增的片段送至铀尚生物技术(上海)有限公司(进行检测。结果与分析经过扩增和电泳跑胶,得到的片段,如下图所示。 下篇研宄内容第四章感毒(西花飼马的提取与检测——图单头西花莉马病毒(检测：：单头西花马扩增片段。由图可知,中检测出的片段,经过钻尚生物技术(上海)有限公司(测序后,与进行比对,相似率均大于,可以确认为病毒。因此,我们可以确定,这头西花莉马成虫体内携带有病毒。讨论在国内外,检测单头昆虫(如飞風、赔虫、烟粉虱等)的或的技术己经非常成熟。但是由于西花飼马体积小,病毒含量相对小等特点,检测单头西花莉马中的病毒的方法仍然较少。目前只有国外拥有该技术,国内仍为空白。该技术对病毒在单头西花莉马体内的检测提供有力的参考,为以后病毒在西花莉马体内的传输、作用机制等研宄提供科学的方法依据。 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研究第五章全文总结与展望全文总结西花菌马传毒能力的测定本研究将一龄的西花莉马若虫取食番痴斑赛病毒叶片,并用健康叶片词养至成虫后,随机选取头成虫的西花莉马作为一组进行实验,重复组。釆用叶碟法,分别对健康番莉叶碟,辣椒叶碟,曼陀罗叶碟和矮牵牛叶碟进行传毒实验。然后利用方法检测叶碟的带毒率。叶片的带毒率即为西花蓟马的传毒效率。经过检测,西花割马在番痴、辣椒、曼陀罗及矮牵牛上的传毒效率率可能在之间,且在四种寄主上的传毒效率不存在显著差异。分析非感毒西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为本研宄利用刺吸电位技术对西花莉马在健康番菊、辣椒、曼陀罗及矮牵牛上的取食行为进行分析。己有研宄表明,番煎比辣椒更适宜西花莉马。而西花萷马在番莉和辣椒上的取食摄入并不存在显著差异,由此,我们推测,西花莉马在这两种适宜及非适宜寄主植物上生长发育的差异可能与其取食行为无关。分析感毒西花前马在四种寄主植物上的取食行为在本研究中,感毒后的西花莉马在番痴和辣椒上的取食行为并无显著差异。我推测,感毒后的西花莉马的取食行为与寄主适宜性可能无关。而雌虫与雄虫之间的非取食剌探无显著差异,而雌虫短取食显著高于雄虫,我们推测可能由于雌虫的短取食大量破坏了寄主植物的细胞导致雌虫比雄虫的传毒效率低。感毒西花菌马的提取与检测本研宄采用一步法对感毒(单头西花莉马进行病毒检测,成功地检测出了单头西花莉马体内的病毒,为国内单头西花薊马的检测填补了空白。主要创新点西花莉马是一种重要的蔬菜和花卉观赏植物的害虫,也是传播番節斑萎病毒的主要媒介昆虫。本研宄通过对感毒西花莉马在四种寄主植物上的传毒效率进行研究,利用刺吸电位技术,对非感毒西花莉马和感毒西花莉马的取食行为进行了分析。明确了非感毒西花莉马和感毒西花莉马的取食习性,为今后西花莉马与病毒互作方面的研宄提供依据和参考,从而能够找到更有效的防治西花莉马和番琉斑姜病毒的方法。本研宄通过—步法成功检测出单头西花莉马中的,为感毒西花莉马的检测提供了一种有效的方法。研究展望 下篇研究内容第五章全文总结与展望番痴斑萎病毒在西花割马体内影响了西花莉马的取食行为。在今后的研宄中,可以利用分子研宄方法,明确番前斑萎病毒作用于西花莉马的哪些部位,从而影响并改变了西花蓟马的取食行为。 硕士学位论文西花飼马在不同寄主植物上对番痴斑姜病毒传播效率的研究参考文献,,,—,—,机,,,,,,,,,,,—,,— 参考文献,,,,,,’,,,,,,,,,,,,, 硕士学位论文西花莉马在不同寄主植物上对番痴斑萎病毒传播效率的研究,,,,,】—,,,,,,,, 参考文献,,,—,,,—,,,、,,,,,,一,,,,,, 硕士学位论文西花飼马在不同寄主植物上对番痴斑赛病毒传播效率的研究’”,,,,,,,,,,,,—,,如,—,,,,’—,,—, 参考文献—,,,—,,,,,,,,,,,, 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究—’,,,狂,—,,,’—曹宇,郅军锐,孔译贤西花蓟马在种蔬菜寄主上的实验种群生命表生态学报,,陈志杰,李英梅,张锋,等警惕西花蓟马的发生及危害西北园艺‘ 参考文献戴霖,杜予州,张刘伟,等西花蓟马在中国的适生性分布研究初报植物保护,,方小瑞,吴伟南,刘惠,等以植绥螨防治入侵害虫西方花蓟马的研究进展中国植保导刊,,洪健,李德葆,周雪平植物病毒分类图谱北京：科学出版社胡想顺,刘小凤,赵惠燕刺探电位图谱(技术的原理与发展植物保护,,季良中国植物病毒志北京：中国农业出版社,蒋小龙,白岩,肖枢为中国昆明国际花卉节把关服务植物检疫,雷宏,徐汝梅一种研究植食性刺吸式昆虫刺探行为的有效方法昆虫知识,,李景柱,郅军锐,盖海涛寄主和温度对西花蓟马生长发育的影响生态学杂志,,李景柱,郅军锐,袁成明,等温度对西花蓟马生长发育的影响贵州农业科学,李景柱,郅军锐,郑珊珊西花蓟马对不同豆科蔬菜寄主的选择性贵州农业科学,’刘桂华,唐燕平锈色粒肩天牛与寄主树种关系的初步研宄林业科学,,刘向东,张立建,张孝羲,等棉蚜对寄主旳选择及寄主专化型研宄生态学报,,刘晓,孟玲,李保平豚草和苍耳上广聚萤叶甲的寄主选择和取食量比较生态学杂志,刘雅婷,郑元仙,李永忠,等番茄斑萎病毒在烟草植株上症状学特征中国农学通报,龚佑辉,吴青君,张友军,等西花蓟马的抗药性及其治理策略昆虫知识,,吕荣章,卢慧真,翁壹姿,等输入切花西花蓟马之检测概况及其应对措施农政与农情台湾吕要斌,贝亚维,林文彩,等西花蓟马的生物学特性、寄主范围及危害特点浙江农业学报,吕要斌,张治军,吴青君,等外来入侵害虫西花蓟马与防控技术研宄与示范应用昆虫学报 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究罗晨,岳梅,徐洪富,等技术在昆虫学研究中的应用及进展昆虫学报,宁钦广,王鹏外来入侵害虫西花蓟马防控取得新进展农药市场信息,潘志萍,吴伟南,刘惠,等入侵害虫西方花蓟马综合防治进展的概述昆虫天敌,,裴昌莹,郑长英西花蓟马在不同寄主植物上的发育历期青岛农业大学学报自然科学版裴昌莹,郑长英西花蓟马对不同蔬菜寄主的选择性研究中国生态农业学报,,任洁,雷仲仁,花蕾卡色对西花蓟马诱捕作用的研究中国植保导刊,沈宝明,符伟,刘勇,等室内药剂交替使用对西花蓟马抗药性发展的影响植物保护’汤清波,张大山,姬琨,等剌吸电位技术应用中的几个问题应用昆虫学报,吴青君,龚佑辉,徐宝云西花蓟马主要寄主植物可溶性糖和蛋白质含量测定中国蔬菜,肖长坤,郑建秋,师迎春,等防治西花蓟马药剂筛选试验植物检疫,,：许泽永,张宗义,陈金香番茄斑萎病毒广州分离物生物学特性研宄植物病理学报,姚革四川晒烟上发现番茄斑赛病毒中国烟草,,岳梅,罗晨,郭晓军,等型烟粉虱在甘蓝、西葫芦和辣椒上的刺吸取食行为于飞,曾鑫年,张帅,等取食量对昆虫生长发育影响的研宄广东农业科学,,周卫川,林阳武,翁瑞泉,等西花蓟马在中国的地理分布和年发生代数预测昆虫知识,,张安盛,李丽莉,于毅,等中华草蛉幼虫对西花蓟马若虫的捕食功能反应与搜寻效应植物保护学报,,张安盛,于毅,李丽莉,等东亚小花蝽成虫对入侵害虫西花蓟马成虫的捕食作用生态学报,张安盛,于毅,门兴元,等东亚小花蝽若虫对西花蓟马成虫的捕食作用昆虫天敌, 参考文献张安盛,于毅,李丽莉,等东亚小花蝽成虫对西花蓟马若虫的捕食功能反应与搜寻效应生态学杂志,张安盛,张思聪,李丽莉,等种环境友好型药剂对西花蓟马的室内毒力与田间防效植物保护,,张金平,范青海,张帆应用实验种群生命表评价巴氏新小绥螨对西花蓟马的控制能力环境昆虫学报,,张猗,王晶晶,李正跃,等西花蓟马天敌种类及主要种类的控害潜能植物保护,张生芳,赖凡西方花蓟马植物检疫,张维球,童晓立西双版纳管蓟马亚科种类及二新种记述(缕翅目：管蓟马科华南农业大学学报,,张友军,吴青君,徐宝云,等危险性外来入侵生物—西花蓟马在北京发生危害植物保护张友军,吴青君,徐宝云,等危险外来入侵生物—西花蓟马的分布现状与应急控制技术农业生物灾害预防与控制研究,张仲凯,方琦,丁铭,等侵染烟草的番煎斑萎病毒电镜诊断鉴定电子显微镜学报赵成银,何余容,吕利华,等西花蓟马的寄主、危害及防治措施广东农业科学,郑长英,刘云虹,张乃斧,等山东省发现外来入侵有害生物一一西花蓟马青岛农业大学学报,,钟锋,何余容,高燕,等西花蓟马对种茄科植物的选择行为江西农业大学学报,朱秀娟病毒诱导寄主反应对西花蓟马生物学特性的影响及机制研宄杭州：杭州师范大学朱秀娟,张治军,吕要斌寄主植物接种番茄斑萎病毒对西花蓟马种群的影响昆虫学报, 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑蒌病毒传播效率的研究附录接种缓冲液：：,加入,调节值至°保存。试剂盒快速检测试剂盒,购自安德珍生物公司(仪器设备智能生物人工气候箱：,杭州雪中炭恒温技术有限公司,可对温度、湿度和光照进行设定和控制；酶标仪：宝成生物公司；洗板机：,宝成生物公司；灭菌锅：,立式压力蒸汽灭菌锅,宁波江南仪器厂,上海申安医疗器械厂；生化培养箱：型,上海博迅实业有限公司医疗设备厂；电热鼓风干燥箱：,杭州雪中炭恒温技术有限公司,可调节温度。。真空浓缩器：型,,产自日本；仪器：,产自德国；电泳仪：型,北京市六一仪器厂；电子天平：,离心机：；移液枪：公司生产；超低温冰箱：,产自英格■,涡旋振荡器：华利达生产；磁力搅拌器：恒温磁力搅拌器,上海梅颖浦生产；酸度计：,。其他培养皿、研鉢、液氮、打孔器、滤纸、毛笔、帕拉膜、剪刀、镊子、孔酶标板、孔板、离心管、离心管架、组织研磨杵。 59 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究攻读硕士学位期间发表论文情况张玉秀,张治军,吕要斌利用技术分析西花蓟马在四种寄主植物上的取食行为浙江农业学报(已录用,待发表) 6X 硕士学位论文西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究致谢本论文是在导师吕要斌研宄员地悉心指导和关怀下完成的。在整个实验的选题,实验设计,数据分析和论文写作中,倾注了吕老师对学生大量的心血与关爱。科研实验的过程并不是一帆风顺的,在此过程中,吕老师从不吝啬于对学生的教导,帮我分析并找出实验出现问题的症结,努力引导我独立思考,自我分析,培养我对科研所需的专业素养。他渊博的知识,严谨的科研精神,无私的奉献品格深深的感染了我,让我终身受益。在此,我万分感谢吕要斌研究员对我的指导和栽培,我相信在此学习到的一切将会成为我今后工作和生活的指南针,指引我前进的方向。本论文是在浙江省农科院植物保护与微生物研究所农业经济作物虫害实验室完成的。特别感谢张治军老师给予的悉心指导和帮助,张老师对我严厉的要求和严谨的科研态度培养了我自主学习和思考的能力。同时要感谢实验室中贝亚维、黄芳、郦卫弟、林文彩、章金明和张蓬军老师对我学习和生活上的关心和帮助,让我感受到实验室大家庭中的温暖。感谢实验室里所有同学和朋友们对我的帮助和关爱,你们就像是阳光一样照亮了我研宄生生涯中的道路,有你们的陪伴,我才更加快乐,谢谢你们：祝晓云师姐、李晓星师姐、朱义勇师兄、刘敏、宋亮、卢欢欢、王飞飞师弟、张革伟师弟、廖倩师妹、杜亮师妹、李秀琼师妹以及所有帮助过我的人。时光飞逝,研宄生生涯即将结束,在这不长不短的三年里,我遇到了许许多多的人,有欢笑,有泪水,有烦恼,有忧愁,装点了我的人生,让我的生活丰富多彩。但是天下无不散的宴席,临别之际,更多的却是不舍和牵绊,在这里的生活的点点滴滴将会永远珍藏在我的记忆深处,成为我永久的财富。在我二十多年旳读书生涯中,家人一直是我坚强的后盾和永远的依靠,是我人生道路上前进的动力。毕业之际,我想特别感谢我的父母,感谢他们对我永恒的爱,无限的包容和无私的奉献。张玉秀年月