猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析.pdf

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1、中国畜牧兽医２０１７，４４（４）：１１７５－１１８１ＣｈｉｎａＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１－７２３６．２０１７．０４．０３３猪伪狂犬病病毒ｇＢ蛋白表达及免疫原性分析贾刚１，樊梅娜２＊，谷巍１（１．山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院，泰安２７１０００；２．泰安大凡神农制药有限公司研究院，泰安２７１０００）摘要：本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒（ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）ｇＢ蛋白的表达并分析其免疫原性，以ＰＲＶ病毒液为模板，设计特

2、异性引物，扩增大小为６１２ｂｐ的保守片段并测序，将其克隆到表达载体ｐＥＴ－２８ａ中，转化表达菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导表达、纯化得到目的蛋白，进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析验证并分析免疫原性。结果表明，表达的ｇＢ蛋白大小为３０ｋｕ，主要以包涵体形式存在，复性后浓度为１０６μｇ／ｍＬ，且具有良好的反应原性。应用市售试剂盒检测到样品中含１３份ＰＲＶ阳性血清和１６份阴性血清，利用检出的阳性血清，初步可建立以ＰＲＶｇＢ蛋白为包被抗原的ＰＲＶ抗体ＥＬＩＳＡ检测方法。关键词：猪伪狂犬病病毒；ｇＢ蛋白；原核表达；免疫原性中图分类号：Ｓ

3、８５２．６５文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－７２３６（２０１７）０４－１１７５－０７ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＰｏｒｃｉｎｅＰｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓＶｉｒｕｓｇＢＰｒｏｔｅｉｎ１，ＦＡＮＭｅｉ－ｎａ２＊，ＧＵＷｅｉ１ＪＩＡＧａｎｇ（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＢａｏｌａｉ－ｌｅｅｌａｉＢｉｏ－ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌＧｒｏｕｐ，Ｔａｉ’ａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴａｉａｎＤａＦａｎＳｈｅｎＮｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ．，Ｌｔｄ．，

4、Ｔａｉ’ａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｐｏｒｃｉｎｅｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ（ＰＲＶ）ｇＢｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｔｅｍｐｌａｔｅｏｆＰＲＶｐｒｅｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ａｎｄｔｈｅ６１２ｂｐｃｏｎｓｅｒｖｅｄｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ｔｈｅｎｉｔｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈ

5、ｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ－２８ａａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），ｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏａｎａｌｙｓｅｉｔｓｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｇＢｐｒｏｔｅｉｎｗａｓ３０ｋｕ，ｗｈｉｃｈｍａｉｎｌｙｅｘ－ｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｆｏｒｍｏｆｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙ，ａｎｄｔｈｅｃｏ

6、ｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｗａｓ１０６μｇ／ｍＬ，ｗｉｔｈｗｅｌｌｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．１３ＰＲＶｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍａｎｄ１６ｎｅｇａｔｉｖｅｓｅｒｕｍｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｕｓｉｎｇＥＬＩＳＡＫｉｔｏｎｓａｌｅ，ｕｓｉｎｇｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍ，ｔｈｅＰＲＶａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｉｎｉｔｉａｌｌｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｔｈｅＰＲＶｇＢｐｒｏｔｅｉｎａｓａｎｔｉｇｅｎｐａｃｋａｇｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅｐｓｅｕｄｏｒ

7、ａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ；ｇＢｐｒｏｔｅｉｎ；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ［５］伪狂犬病，又称Ａｕｊｅｓｚｋｙ’ｓ病，是一类由疱疹业最为严重的疾病之一，需要加以重视。病毒科α疱疹病毒亚科伪狂犬病病毒（ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓＰＲＶ作为一种猪疱疹病毒，基因组为双链线性ｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）引起的危害家畜及多种野生动物的急ＤＮＡ，其病毒粒子脂质囊膜由多达１６种糖蛋白组［１］［６］性传染病，主要感染猪等动物，可造成怀孕母猪流成。其中，ｇＢ蛋白是ＰＲＶ最主要的保护性抗原产或死胎，新生仔猪发热，出现神经

8、症状等，极大地蛋白，是ＰＲＶ复制、感染必不可少的囊膜组分，不［２－４］影响了中国养殖业的健康发展。该病传播快、传仅能够诱导宿主产生免疫应答，而且也是病毒入侵［７－９］播范围广、传播途径多、死亡率高，已成为危害养猪增殖和在细胞间传播的必需组分。ｇＢ基