毕业设计（论文）-紫丁香issr-pcr反应体系优化研究

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1、（2011届）LiaoningNormalUniversity本科生毕业论文（设计）题B：紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究学院：生命科学学院专业：生物技术班级序号：3班5号学号：学生姓名：指导教师：2015年5月目IJg1.材料与方法1.1材料1.1.1试验材料1.1.2主要试剂与仪器1.2方法1.2.1紫丁香基因组DNA的提取及检测....1.2.2ISSR-PCR反应体系1.2.3ISSR-PCR反应体系退火温度的确定1.2.4ISSR-PCR反应程序1.2.5ISSR-PCR产物的电泳检测2•關2.1DNA模

2、板浓度对ISSR扩增效果的影响......2.2TaqDNA聚合酶量对ISSR扩增效果的影响2.3Mg2+浓度对ISSR扩增效果的影响2.4退火温度对ISSR扩增效果的影响2.5dNTPs浓度对ISSR扩增效果的影响2.6引物浓度对ISSR扩增效果的影响3.分析与讨论W,••3-•5-•5-•5-•5-•5-..-5-..-6-..-7-..-7-..-7-,••8-..-8-..-9-..-9--10-•11•-12--13--15--16-参考文献紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究中文摘要：以紫丁香为试验材料，采

3、用改gCTAB法提取基因组DNA，为了获得最佳的紫丁香ISSR-PCR反应体系，本试验利用梯度试验对ISSR-PCR扩增结果有影响的dNTPs的浓度、TaqDNA聚合酶量、Mg2+浓度、退火温度、模板浓度、引物浓度共6个因子进行摸索和优化。确定丫25pL时优化的反应体系:10>

4、SSR-PCR;体系优化OptimizationofISSR-PCRReactionSystemofNaturalSyringaoblateAbstract:UsingSyringaoblataasmaterial，genomicDNAofSyringaoblatawasextractedbymodifiedCTABmethod,foroptimizingISSR-PCRreactionsystemofSyringaoblate.gradienttestwasusedtoexploreandoptimizeofISSR-

5、PCR.systemwhichincludeddNTPsconcentration、TaqDNApolymeraseamount、Mg2’concentration、annealingtemperature、DNAconcentration、primerconcentration.Thetwenty-five(xLoptimizedreactionsystemcontainedlOxPCRbuffer(withoutMg2)2.5

6、jLnDNA1.0pL、dNTP0.2mmol/L、TaqDNApolymerase1.0

7、U、primer0.6mmol/L(siftfromUBCset.9)、Mg22.0mmol/L>annealingtemperature490C。Keywords：Syringaoblate;ISSR-PCR;optimizationofISSR-PCRreaction紫丁香(Syringaoblata)在棺物分类学上駡于被子梢物fj(Angiospermae)、双子叶植物纲(Dicotyledoneae)、捩花目(Contortae)、木犀科(Oleaceae)、丁香屌(Syringa)，俗称丁香、肀北紫丁香、百节、

8、紫丁白、情客、龙梢子，原产我W平北地区。紫丁香在中W已有1000多年的栽培历史，其花小芬芳，紫色、紫红色或蓝色，春季盛开时，硕大而艳丽的花序布满全株，观赏效果甚佳，足我W著名的观赏花木之一。同时，紫丁香还具有较高的药用价值，其鲜叶制成的溶液，对弗氏痢疾杆菌进行体外抑菌试验，效果较强，用于防治菌痢，既经济，乂便于推广。因此，应当加强对其种质资源、遗传多样性的保护，实现可持续地幵发利用。目前我W紫丁香的研究主要集屮于栽培、生理等方面，而分子生物学方面的研究少有报道，进行更为深入的基于分子生物学ISSR-PCR体系化的研究，有

9、很广阔的应用空间和实际意义，可以广泛应用在如植物品种鉴定保护、遗传基因定位、作图等方面，对保护遗传多样性以及进化有深远影响。目前我W紫丁香的研究主要集中于栽培、生理等，如:有关紫丁香幵花授粉的生物学特性、花粉生活力和贮藏特性［4］以及花粉挥发性物质［5］，国外有人对欧丁香进行过纟11培研究并在茎尖培养屮获得成功，W内