黄芪ISSR-PCR反应体系的建立及优化-论文.pdf

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1、山西农业科学2014，42(1)：9-11JournalofShanxiAgriculturo]Sciencesdoi：10．3969~．issn．1002-2481．2014．01．03黄芪ISSR—PCR反应体系的建立及优化张茹，刘亚令，梁建萍，张鹏飞(1．山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801；2．山西农业大学园艺学院，山西太谷030801)摘要：为获得最优黄芪ISSR—PCR反应体系，以山西省浑源县官儿乡蒙古黄芪为试验材料，利用单因素试验法对反应体系中的4个因素(模板DNA，dNTPs，raqDNA聚合酶，ISSR引物)分别设置浓度梯度进行体系优化。结果

2、表明，20黄芪ISSR—PCR最优体系为：模板DNA质量浓度6．0ng／IxL，dNTPs浓度0．03mm0I／L，DNA聚合酶浓度0．05u／L，引物浓度O．80mmol／L。最后用不同产地的黄芪检测该体系，结果发现，PCR产物多态性良好。优化体系的确立为今后黄芪种质资源的分子评价奠定了技术基础。关键词：黄芪；梯度；ISSR；PCR中图分类号：$567．23+9文献标识码：A文章编号：1002—2481(2014)01—0009—03EstablishmentandOptimizationofISSR-PCRReactionSystemforAstragalusZHA

3、NGRuI,LIUYa-ling。，LIANGJian-ping，ZHANGPeng-fei(1．CollegeofLifeScience，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，China；2．CollegeofHorticulture，Shan~AgriculturalUniversity，Taigu030801，China)Abstract：TogettheoptimizationISSR-PCRreactionsystemofAstragalus，theISSR-PCRsystemthroughthesinglefact

4、orexperi—mentwasestablishedandoptimized．Theresultsshowthatthebestreactionsystemisa20txLvolumeISSR-PCRsystemwithDNAtern——plateof6．0ng／~L，dNTPsofO．03mmol／L，7DNApolymeraseof0．05u，L，primerof0．80mmol／Landtheannealingtemperatureof49oC．Finally．concludedtl1atthisoptimalsystemofISSR—PCRwasestabhs

5、hedsuccessfully撕ertestedusingtheAstragalusmem—branaeeusfromprovincesofHebei，Jilin，Heilongjiang,Shanxi，Inner-mongoulia，Shandong，Shaanxi，andGansu．Keywords：Astragalus；gradient；ISSR；PCR黄芪(RadixAstragali)是豆科(Leguminosae)黄切的关系。芪属(Astragalus)植物。中药材黄芪主要为蒙古黄芪本试验基于标准PCR反应体系，利用单因素(Astragalusmembran

6、aceus(Fisch．)Bge．var,Mongholi-试验法对其中的4个重要影响因子进行单一因子c(Bge．)Hsiao)和膜荚黄芪(Astragalusmem—浓度梯度试验，从而获得最优的ISSR—PCR体系组branaceus(Fisch．)Bge．)的干燥根}l1。作为我国最常用合，并用河北、吉林、黑龙江、山西、内蒙古、山东、陕的道地药材之一，黄芪有着悠久的药用历史，然而，西、甘肃8个地方的黄芪检测此最优体系的稳定性由于环境问题以及人为因素，造成野生黄芪资源急与实用性，旨在为进一步进行黄芪种质资源的保剧减少，现已被列为我国三级保护植物。为了更护、评价及黄芪品

7、种鉴定提供理论依据。。好地进行黄芪种质资源的保护，解决市场上黄芪品1材料和方法质参差不齐的问题，急需从分子水平对其进行深入地分析研究。1．1试验材料目前，ISSR(Inter-simpleSequenceRepeat)分子优化材料为山西省浑源县官儿乡蒙古黄芪。取标记技术已经被广泛应用于各种研究中，该技术有其幼嫩叶片，硅胶干燥保存。DNA用量少且质量要求低、产物多态性好、操作简验证材料所用黄芪采自于河北、吉林、黑龙江、单、重复性高、耗时少、成本低等优点[5-81。但是该技山西、内蒙古、山东、陕西、甘肃8个地区。取其幼嫩术产物的优良与体系内各